枸杞槲皮素对金黄色葡萄球菌产β-内酰胺酶的抑制作用

【目的】探讨枸杞槲皮素对金黄色葡萄球菌产生的β-内酰胺酶的抑制作用机制,为临床研发β-内酰胺酶抑制剂提供基础依据。【方法】通过青霉素抑菌圈边缘试验筛选产β-内酰胺酶阳性菌株,通过药敏纸片法检测阳性菌株在32、64、128μg/mL枸杞槲皮素作用下对青霉素的敏感性变化;借助多功能酶标仪检测在32、64、128、256μg/mL枸杞槲皮素处理下青霉素含量的变化,并以此来评估枸杞槲皮素对β-内酰胺酶合成及在64、128、256μg/mL枸杞槲皮素作用下对β-内酰胺酶活性的影响。通过AutoDockTools 1.5.6软件对枸杞槲皮素与BlaZ蛋白进行分子对接,采用Discovery Studio 2019 Client软件对分子对接结果进行可视化分析。【结果】从36株金黄色葡萄球菌中共筛选出23株产β-内酰胺酶阳性菌株。药敏纸片结果表明,随着枸杞槲皮素浓度的升高,阳性菌株对青霉素的敏感性增加。多功能酶标仪检测结果表明,枸杞槲皮素可以抑制β-内酰胺酶的合成,并显著抑制β-内酰胺酶的活性(P<0.05)。分子对接结果表明,枸杞槲皮素通过与BlaZ蛋白Ω-loop区域内的保守残基Asn161以氢键结合,影响BlaZ蛋白与β-内酰胺类抗生素的结合。【结论】枸杞槲皮素可以减少β-内酰胺酶的合成,还可通过降低β-内酰胺酶的活性增强青霉素的抑菌作用,具有作为β-内酰胺酶抑制剂的潜在活性,为后续开发新型β-内酰胺酶抑制剂提供了参考依据。

枸杞叶HPLC特征图谱的研究

目的:采用HPLC法研究枸杞叶的特征图谱。方法:采用HPLC法,以槲皮素为参照物,色谱柱为Agilent 5TC-C _(18)(2)5μm,250 mm×4.6 mm,以甲醇-0.4%磷酸溶液为流动相,梯度洗脱,检测波长为360 nm,柱温为35℃。流速为1.0 mL/min。利用《中药指纹图谱相似度评价系统(2012年版)》对数据进行整理分析。结果:建立了枸杞叶的HPLC特征图谱,共确定7个特征峰,以槲皮素峰为参照(S),10批枸杞叶样品的相似度均>0.900。结论:该方法操作简便,专属性好,可为枸杞叶的质量标准研究和质量评价提供参考依据。

枸杞晒干过程中黄酮类化合物和苯丙氨酸解氨酶活性的变化

本实验在枸杞表面涂抹Na2CO3、Na2SO3溶液作为除蜡剂,以不涂抹除蜡剂为空白对照,研究晒干过程中总黄酮和苯丙氨酸解氨酶(phenylalanine ammonialyase,PAL)活性的变化,并利用高效液相色谱(high performance liquid chromatography,HPLC)法检测枸杞中山奈酚、芦丁和槲皮素含量的变化。对总黄酮含量和PAL活性、3种不同处理方式条件下3种黄酮类化合物含量之间进行相关性分析。结果表明:Na2CO3、Na2SO3和空白对照处理下的枸杞在晒干过程中PAL活性、总黄酮含量呈现持续上升的趋势,山奈酚、芦丁和槲皮素含量均呈现先增加后下降趋势;同一处理下的PAL活性和总黄酮含量变化呈显著极强正相关,山奈酚、芦丁和槲皮素含量变化呈正相关;除蜡剂影响同一干燥时间下PAL活性、总黄酮、山奈酚、芦丁和槲皮素含量的大小,并且其达到最高值的时间也受除蜡剂的影响。

高效液相色谱法同时测定枸杞中槲皮素、山柰酚和异鼠李素

建立了高效液相色谱同时检测枸杞中槲皮素、山柰酚和异鼠李素的分析方法。样品经过甲醇超声提取后,用甲醇-25%HCl水解1 h,采用Inertsustain C18色谱柱进行分离,以甲醇-0.4%H3PO4溶液（48∶52,V/V）为流动相,进行等度洗脱,流速为1.0 m L/min,二极管阵列检测器检测,检测波长为360 nm,柱温为40℃。槲皮素,山柰酚,异鼠李素在40 min内实现分离,并分别在0.053~21.2μg/m L,0.053~4.24μg/m L和0.046~3.72μg/m L范围内具有良好的线性关系,相关系数为0.9972~0.9992,测得槲皮素、山柰酚、异鼠李素的加标回收率为99.2%~103.1%,95.6%~101.8%,93.2%~109.1%;相对标准偏差分别为0.95%~2.8%,0.55%~2.3%,0.81%~2.4%。对槲皮素、山柰酚和异鼠李素的检出限分别为0.04,0.05,0.03 mg/kg。方法可用来测定枸杞中3种黄酮苷元的含量。

反相高效液相色谱法测定新疆枸杞叶茶中芦丁和槲皮素的含量

目的:采用反相高效液相法测定新疆枸杞叶茶中的芦丁和槲皮素的含量。方法:Kromasil C18色谱柱(4.6 mm×250mm,5μm),流动相甲醇-0.04%磷酸水溶液(用三乙胺调pH 3.0)(45∶55),检测波长360 nm,流速1.0 mL.min-1。结果:芦丁和槲皮素的线性范围分别在0.23～1.84μg和0.03～0.24μg,回收率分别为98.19%,97.98%。RSD分别为1.49%,2.25%。结论:本方法简便、可靠、重现性较好,为新疆枸杞叶茶的质量控制提供了快速、准确的测定方法。