枸杞多糖通过下调PD-L1表达抑制胆囊癌细胞增殖、侵袭及免疫逃逸的实验研究

目的探讨枸杞多糖(LBP)对胆囊癌细胞增殖、侵袭以及免疫逃逸的影响。方法QBC939和SGC-996胆囊癌细胞分为LBP组、Control组、LBP+pcDNA组和LBP+PD-L1组;将外周血单个核细胞(PBMCs)与植物血凝素(PHA)共孵育,记为PHA组,未共孵育的PBMCs记为NC组;上述各组QBC939和SGC-996细胞分别与PBMCs共孵育,分为PHA+Control组、PHA+LBP组、PHA+LBP+pcDNA组和PHA+LBP+PD-L1组。CCK-8、流式细胞术和Transwell实验分别检测细胞增殖、凋亡及侵袭能力;收集健康捐献者的外周血,采用Ficoll-Conray密度梯度法分离PBMCs,ELISA试剂盒检测PHA诱导的PBMCs中IFN-γ的释放。qPCR和Western blotting法检测程序性死亡配体1(PD-L1)的表达量。结果相较于Control组,LBP组QBC939和SGC-996细胞增殖(48.00±8.00 vs.100±9.17;39.67±4.51 vs.100±7.00)及侵袭(61.33±8.63 vs.110.33±12.50;51.00±8.00 vs.118.67±14.01)受到抑制,细胞凋亡率升高〔(21.10±2.03)%vs.(6.67±1.31)%;(24.30±2.11)%vs.(6.20±1.60)%〕,差异有统计学意义(P<0.05)。此外,与PHA组比较,PHA+Control组IFN-γ含量降低(2.37±0.15 vs.0.76±0.12,3.11±0.25 vs.1.04±0.19);相较于PHA+Control组,PHA+LBP组IFN-γ含量升高(1.84±0.12 vs.0.76±0.12,2.52±0.20 vs.1.04±0.19)。与Control组比较,LBP组QBC939或SGC-996细胞中PD-L1 mRNA(1.00±0.07 vs.0.30±0.08,1.00±0.09 vs.0.21±0.07)以及蛋白(1.00±0.11 vs.0.47±0.08,1.00±0.08 vs.0.32±0.07)含量显著降低(P<0.05)。相较于LBP+pcDNA组,LBP+PD-L1组QBC939或SGC-996细胞细胞活力增强〔(48.33±7.02)%vs.(86.00±6.56)%;(40.33±7.02)%vs.(79.33±7.03)%〕,细胞凋亡率降低〔(20.36±3.01)%vs.(13.30±2.01)%;(24.50±1.93)%vs.(14.30±1.77)%〕,以及细胞侵袭增强(56.67±10.01 vs.90.33±9.61;48.33±9.61 vs.95.67±9.50;P<0.05);与PHA+LPB+pcDNA组比较,PHA+LPB+PD-L1组PAH诱导的PBMCs IFN-γ释放显著降低(1.86±0.16 vs.0.77±0.12,P<0.05)。结论枸杞多糖通过下调PD-L1的表达抑制胆囊癌细胞增殖,侵袭以及免疫逃逸。

枸杞多糖对糖尿病周围神经病变大鼠PERK-CHOP通路及Bax、Bcl-2表达的影响

目的观察枸杞多糖对糖尿病周围神经病变(DPN)大鼠的保护作用,并通过PERK-CHOP信号通路探讨其作用机制。方法采用高脂高糖饲料+链脲佐菌素(STZ)腹腔注射法制备DPN大鼠模型,分别设立空白组、模型组、α-硫辛酸组、枸杞多糖低剂量、高剂量组,观察枸杞多糖对大鼠血糖、体质量的影响,HE染色观察大鼠坐骨神经病理学变化,透射电镜观察大鼠坐骨神经超微结构改变,Western-blot检测坐骨神经GRP78、PERK、p-PERK、CHOP及Bax、Bcl-2的蛋白表达,RT-PCR检测GRP78、PERK、CHOP的mRNA表达。结果经枸杞多糖低、高剂量组治疗后,血糖水平较模型组显著降低,体质量明显增高(P<0.05),大鼠坐骨神经病理损伤得到有效减轻,下调了坐骨神经中Bax及PERK-CHOP通路的蛋白和mRNA表达,同时上调了Bcl-2表达和Bcl-2/Bax比值(P<0.05)。结论枸杞多糖能够有效改善DPN大鼠血糖水平,减轻大鼠坐骨神经损伤,可能通过抑制PERK-CHOP通路激活所致的内质网应激(ERS)和细胞凋亡发挥作用,高剂量对多项指标的改善较低剂量更为明显。

枸杞多糖的分离纯化及其体外抗增殖和抗炎活性分析

研究不同枸杞(Lyciumbarbarum,Gouqi,GQ)多糖组分对苯甲酸雌二醇(Estradiol,E2)及黄体酮(Progesterone,P)联合诱导小鼠乳腺上皮细胞(HC11细胞)增殖的抑制作用的影响。通过水提醇沉及柱分离法获得不同组分;并对其分子量及体外抗增殖、抗炎症作用进行初步分析。结果显示,枸杞粗多糖通过DEAE-52离子色谱柱和Sephadex G-50凝胶柱洗脱出7种多糖组分,分别为GQ-01、GQ-02、GQ-03、GQ-04、GQ-05、GQ-06、GQ-07,其平均相对分子量分别为113 ku、<1 ku、367 ku、613 ku、81 ku、110 ku、<1 ku。选用不同浓度枸杞多糖(5、25、125、250、500、1000μg/mL)处理HC11细胞,发现250μg/mL(GQ-01、GQ-04及GQ-06)可显著抑制E2(25μg/mL)+P(250μg/mL)联合诱导的HC11细胞增殖活性,分别降低了28.13%、26.74%、30.83%(P<0.01);GQ-01及GQ-06可调节G0/G1与G2/M期转变而影响细胞周期的分布;与模型组相比,GQ-06可极显著抑制E2+P联合诱导雌激素受体(ERα)水平,降低了5.54%(P<0.01);GQ-04及GQ-06可显著抑制LPS诱导RAW264.7细胞的NO水平的产生,与模型组相比NO水平分别降低了13.43%、12.65%(P<0.05)。该研究表明,GQ-06可能通过影响细胞周期分布及抑制ERα的水平,从而抑制乳腺上皮细胞过度增殖;此外,还可抑制LPS诱导RAW364.7细胞中NO的释放,降低细胞的炎症反应。该研究将为功能性食品深度开发提供重要的理论依据。

有氧运动补充枸杞多糖通过调节Foxp3/RORγT平衡影响非酒精性脂肪肝大鼠的肠道免疫屏障功能

目的探讨有氧运动补充枸杞多糖对NAFLD大鼠肠黏膜免疫屏障的保护作用。方法选取健康8周龄SD大鼠46只,自适应喂养1周后,将大鼠随机分为2组,分别为对照组(n=11)和高脂组(n=35)。第12周末2组各随机选取3只大鼠,判断造模情况。第13周开始干预,高脂组随机分为4组(每组8只),高脂模型组(HFD组)喂养高脂肪饲料,枸杞多糖组(LBP组)喂养高脂肪饮食和枸杞多糖,有氧运动组(AE组)喂养高脂肪饮食并进行中强度有氧运动,枸杞多糖联合有氧运动组(LBP+AE组)喂养高脂肪饮食和枸杞多糖并进行中强度有氧运动,共干预9周。收集其结肠组织及血清,采用蛋白印迹法测定大鼠结肠组织中RORγT、Foxp3、STAT3、STAT5蛋白的表达情况;采用酶联免疫法(ELISA)检测大鼠血清中IL-17及SIgA的含量;采用AB-PAS染色,观察大鼠结肠组织切片中杯状细胞的变化。结果与对照组相比,HFD组的Foxp3蛋白的表达水平及Foxp3/RORγT显著降低(P<0.05);RORγT蛋白表达水平显著增高(P<0.05)。与HFD组相比,有氧运动补充枸杞多糖能够显著增加Foxp3蛋白表达水平及Foxp3/RORγT相对比值,降低RORγT蛋白表达水平。与对照组相比,HFD组的STAT3蛋白表达水平显著增高,LBP组、AE组以及LBP+AE组的STAT3蛋白表达较HFD组显著降低(P<0.05);HFD组的STAT5蛋白表达水平显著降低,且明显低于LBP组、AE组和LBP+AE组(P<0.05)。与对照组相比,HFD组中血清分泌性免疫球蛋白A(SIgA)含量减少,而LBP组、AE组及LBP+AE组血清中SIgA显著高于HFD组(P<0.05);AB-PAS染色结果显示,与对照组相比HFD组结肠杯状细胞数量明显减少,而LBP组、AE组及LBP+AE组中杯状细胞数量显著增加(P<0.05)。结论有氧运动补充枸杞多糖能够通过调节Foxp3/RORγT平衡,对NAFLD大鼠肠道免疫屏障功能发挥一定的保护作用。

枸杞多糖LBP2a的分离、纯化与结构特征

经提取、分离和纯化等一系列步骤得到枸杞多糖LBP2a,用SephadexG-200柱层析和SDS-不连续体系凝胶电泳法鉴定,LBP2a为分子量均一性组分,其分子量为77482。经分光光度法测得中性糖含69.3%、半乳糖醛酸含23.8%、蛋白质含5.3%,GC-MS法测定中性糖为鼠李糖:木糖:阿拉伯糖:甘露糖:葡萄糖:半乳糖(2.62:42.85:2.13:1.00:4.36:22.80)。红外光谱分析表明LBP2a有β异头碳糖基,β-消除反应前后紫外(240nm)吸收变化及氨基酸含量变化表明LBP2a中糖链和氨基酸间有Glycan-O-Ser连接方式。

枸杞甜菜碱含量测定方法的比较研究

通过比较分光光度法和高效液相色谱法测定枸杞甜菜碱含量,以确定适宜的甜菜碱含量测定方法。试验采用甲醇加热回流提取枸杞甜菜碱,分光光度法和NH2柱未经衍生高效液相色谱法分别测定甜菜碱含量。结果表明,NH2柱未经衍生高效液相色谱法快速、简便、重复性好,所测甜菜碱含量明显高于分光光度法。试验认为,NH2柱未经衍生高效液相色谱法能快速准确地测定枸杞甜菜碱含量,可用于枸杞的质量控制。

枸杞多糖对中波紫外线辐射后角质形成细胞炎症因子表达的影响

目的研究青海柴达木枸杞多糖(LBP)对中波紫外线(UVB)辐射后人永生化角质形成细胞(Ha Ca T细胞)白细胞介素1(IL-1)和白细胞介素6(IL-6)表达的影响。方法将体外培养的Ha Ca T细胞随机分成5组:空白对照组、UVB辐射组、低剂量枸杞多糖组、中剂量枸杞多糖组、高剂量枸杞多糖组,空白对照组不进行任何处理,UVB辐射组(30 m J/cm2照射40 min),低剂量枸杞多糖组(0.5 mg/m L,30 m J/cm2照射40 min),中剂量枸杞多糖组(1 mg/m L,30 m J/cm2照射40 min),高剂量枸杞多糖组(2 mg/m L,30 m J/cm2照射40 min),照射前枸杞多糖预处理12 h,酶联免疫吸附测定法(ELISA法)检测各组细胞及上清中IL-1和IL-6的水平。结果与空白对照组比较,UVB辐射组细胞中IL-1的水平无明显变化(P>0.05),IL-6的水平明显增高(P<0.05);上清中IL-1、IL-6水平明显提高(P<0.05)。与UVB辐射组比较,低中高枸杞多糖组无论是细胞中还是上清中IL-1、IL-6水平都明显降低(P<0.05)。结论青海柴达木枸杞多糖可降低UVB辐射后Ha Ca T细胞中炎症因子的合成及分泌,减轻紫外线辐射后引起的皮肤损伤。

9个枸杞品种叶光合气体交换参数与果实品质的对比分析

【目的】结合枸杞栽培品种之间光合参数和叶绿素荧光参数的差异性分析,对比研究了9个枸杞栽培品种间光合气体交换参数和内在品质差异。【方法】在田间试验条件下,试验采用随机区组设计,分别于7、8月晴天上午9:30-11:30之间测定光合及荧光指标,研究分析各供试品种间枸杞的内在品质,并分析其差异。【结果】以宁杞3号Pn、WUE、WUEi、PSⅡ最大光化学效率(Fv/Fm)和PSⅡ潜在活性(Fv/Fo)都显著高于其他8个供试品种,揭示了宁杞3号的光合能力和水分利用效率最强;并且进一步得出宁杞3号的多糖、总糖、黄酮、甜菜碱、类胡萝卜素含量都居于首位,其中甜菜碱的含量显著高于其他供试品种。其次为扁果枸杞、宁杞1号、宁杞4号、7号,再次为宁杞5号、0901、蒙杞1号,0702的光能利用率和果实品质较弱。【结论】结合各品种的光合气体交换参数及叶绿素荧光参数,进行不同枸杞栽培品种间的品质对比分析,得出宁杞3号、宁杞1号、宁杞4号、宁杞7号、扁果枸杞,这5个栽培品种非常适宜大面积推广种植;宁杞5号、0901可以作为辅助品种适当发展;而蒙杞1号、0702这2个品种不适宜发展种植。

枸杞多糖减轻ox-LDL诱导血管内皮细胞损伤的效应及分子机制研究

目的:研究枸杞多糖(LBP)减轻氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导血管内皮细胞损伤的效应及分子机制。方法:培养人脐静脉内皮细胞(HUVECs)并分为对照组(不含药物的DMEM处理)、ox-LDL组(含有150 mg/L ox-LDL的DMEM处理)、LBP组(含有150 mg/L ox-LDL及100 mg/L LBP的DMEM处理)、LBP+LY组(含有150 mg/L ox-LDL、100 mg/L LBP、20μmol/L LY294002的DMEM处理)。检测细胞活力、凋亡率、线粒体凋亡基因及PI3K/AKT通路基因的表达量。结果:ox-LDL组的细胞活力及细胞中Bcl-2、p-PI3K、p-AKT的表达量明显低于对照组,凋亡率及细胞中Bax、Caspase-3的表达量明显高于对照组(P<0.05);LBP组的细胞活力及细胞中Bcl-2、p-PI3K、p-AKT的表达量明显高于ox-LDL组,凋亡率及细胞中Bax、Caspase-3的表达量明显低于ox-LDL组(P<0.05);LBP+LY组的细胞活力及细胞中Bcl-2、p-PI3K、p-AKT的表达量明显低于LBP组,凋亡率及细胞中Bax、Caspase-3的表达量明显高于LBP组(P<0.05)。结论:LBP能够通过激活PI3K/AKT通路减轻ox-LDL诱导的血管内皮细胞损伤。

枸杞钙果复合运动饮料的研制

本文以枸杞、钙果、蔗糖和柠檬酸等为原料,通过单因素试验和L9(34)正交试验研究了枸杞钙果复合保健饮料的生产工艺。试验结果表明,钙果果汁的酶解条件为:果胶酶0.05%、酶解温度45℃、酶解时间4 h;枸杞汁的澄清剂为:添加0.07%的壳聚糖;最佳配方为枸杞汁添加量为35%、钙果汁添加量为30%、柠檬酸添加量为0.18%、蔗糖添加量为8%、氯化钠0.03%、维生素C 0.01%、维生素B10.004‰、维生素B20.003‰。该产品通过多次试验后送给营养学家以及运动员,受到一致的好评。

宁杞7号枸杞多糖提取工艺及其积累规律研究

[目的]优化宁杞7号枸杞多糖提取工艺,并对枸杞多糖积累规律开展系统性研究。[方法]以宁杞7号为试验材料,通过单因素试验和L9(34)正交试验设计,研究了超声波辅助复合酶(脂肪酶∶蛋白酶∶纤维素酶∶果胶酶=1∶1∶1∶1)提取枸杞多糖的工艺条件。[结果]以枸杞多糖提取率为评价指标,通过正交试验确定了最佳提取条件为料液比1∶40 g/mL,提取温度50℃,超声时间50 min,复合酶添加量0.7%。在此最佳条件下,枸杞多糖平均提取率为8.044%。同时,研究发现在枸杞果实逐渐成熟过程中,多糖含量变化表现为发育前期含量较低,于花后21 d后迅速增加,到成熟时达最大值。[结论]该研究为提高宁杞7号枸杞的利用效率、获得枸杞子最佳采收时期提供了一定的理论依据。

熟制过程对枸杞子挥发性成分的影响

本试验以普通干制枸杞为原料,通过三段式干制工艺制备熟制枸杞子,然后利用HS-SPME-GC-MS分析熟制枸杞子中的挥发性成分。结果表明,经过熟制的枸杞子果肉较柔软、厚实,味道酸甜,有独特的药香味,口感协调,颜色呈均一的棕黑色;熟制枸杞子的挥发性风味物质共有81种,酯类16种,醛类18种,酮类18种,醇类17种,呋喃类4种,酸类1种,酚类1种和烃类6种;与普通枸杞相比,熟制枸杞子中新产生了42种挥发性化合物,保留了39种,消失了39种;熟制枸杞子中醛类的相对含量为78.83%,比普通枸杞高25%左右,而酯类、酮类均低10%左右,醇类低5%左右;熟制枸杞子新产生了含量较高的3-甲基丁醛(33.84%)、糠醛(20.14%)和2-甲基丁醛(12.01%),为炮制药品中常见的焦香味物质,赋予了熟制枸杞子独特的药香气味。

枸杞多糖促进慢性溃疡性结肠炎活动期小鼠结肠组织Trek1的表达

目的研究枸杞多糖对慢性溃疡性结肠炎活动期小鼠模型结肠组织Trek1 mRNA和蛋白表达的影响。方法将18只小鼠随机分为正常组、造模组和治疗组,每组6只。正常组小鼠第1~25天给予蒸馏水饮用。造模组和治疗组小鼠为模拟慢性溃疡性结肠炎反复发作,第1~5、第11~15、第21~25天给予含2%葡聚糖硫酸酯钠盐的饮用,第6~10、第16~20天给予蒸馏水饮用。同时,治疗组小鼠在6~25天给予200 mg·(kg·d)^(-1)的枸杞多糖灌胃。各组小鼠于第26 d清晨处死。记录各组小鼠体质量、疾病活动指数(disease activity index,DAI)评分,实时荧光定量PCR和Western blot分别检测结肠中Trek1 mRNA和蛋白的相对表达量。结果实验第5、10、15、20、25天,造模组小鼠体质量均轻于正常组(P均<0.001),实验第15、20、25天,治疗组小鼠体质量较造模组增加(P均<0.05);实验第5、10、15、20、25天,造模组小鼠DAI评分均高于正常组(P均<0.001),实验第10、15、20、25天,治疗组小鼠DAI评分均低于造模组(P均<0.05);造模组小鼠Trek1 mRNA和蛋白相对表达量低于正常组,治疗组Trek1 mRNA和蛋白相对表达量高于造模组(P均<0.001)。结论枸杞多糖改善慢性溃疡性结肠炎活动期模型小鼠体质量减轻、腹泻及便血等症状,可能与其促进结肠组织Trek1表达有关。

枸杞多糖抗肿瘤作用及机制研究进展

枸杞作为我国传统的药食兼用的中药材,具有提高机体免疫功能、抗肿瘤、调节血脂、降血糖、保肝等作用。枸杞多糖作为其主要活性成分,研究价值和药用价值很高。就枸杞多糖的抗肿瘤作用及其作用机制研究进行综述,以期为枸杞多糖在临床抗肿瘤方面的应用提供理论依据。

新疆精河县经济林资源现状分析

掌握好经济林资源动态,对于指导区域林业生产、科学规划、合理经营具有重要的意义。利用遥感、地理信息系统和全球定位系统技术,结合实地调查,对精河县经济林资源树种、品种的面积进行了分析。结果表明:精河县经济林总面积7 210.71hm2,其中精河枸杞面积为7 043.08hm2,盛产期精河枸杞面积为3 140.96hm2。

采用HPLC指纹图谱技术及数据分析方法对不同产地枸杞进行质量评价研究

目的建立枸杞HPLC指纹图谱,利用LC-MS对主要共有峰进行鉴定,并对4个主产地的枸杞样品进行聚类分析和产地判别分析。方法采用Waters Atlantis T3 C18(5μm,10 mm×250 mm)色谱柱,流动相为乙腈-0.5%磷酸,梯度洗脱;利用中药指纹图谱相似度评价软件及SPSS 22.0软件对数据分别进行相似度评价、聚类分析、判别分析。结果选取12个批次的枸杞样品建立对照指纹图谱,各批次的相似度均大于0.9,可以用于枸杞质量评价。4个产地枸杞的对照指纹图谱彼此之间具有较高的相似度,其中宁夏和新疆的相似度最高为0.95,聚类分析也将两个产地的枸杞聚在一起。利用枸杞色谱图中共有峰的相对峰面积进行判别分析,获得了区分枸杞各产地的指标色谱峰,分别为峰2、峰8、峰18和峰20,该模型对另外隐去产地信息的12个批次的枸杞样品进行了预测,未知产地预测正确率为83.3%。结论本试验建立了枸杞对照指纹图谱,可以作为枸杞药材的质量评价方法。聚类分析及判别分析也取得了较好的结果,为枸杞的产地判别和质量评价提供了新的思路和模式。

枸杞叶黄酮微胶囊的制备及其贮藏稳定性研究

为改善枸杞叶黄酮提取物的溶解性和稳定性,以β-环糊精为壁材,采用包埋法制备枸杞叶黄酮微胶囊。通过单因素实验和Box-Be hnken响应面实验,优化得到枸杞叶黄酮微胶囊的最佳制备工艺条件为:芯壁比1∶13.47、搅拌温度51.18℃、搅拌时间30min、β-环糊精浓度5.61%,在此条件下制备的枸杞叶黄酮微胶囊的黄酮包埋率为78.40%;以枸杞叶黄酮的保留率为指标,研究了不同贮藏条件下枸杞叶黄酮微胶囊的稳定性,结果显示:在相同的温度、相对湿度、光照和氧气条件下,所制备的枸杞叶黄酮微胶囊较未包埋的枸杞叶黄酮提取物均具有较高的保留率,表明微胶囊化有效地提高了枸杞叶黄酮提取物的贮藏稳定性。

黑果枸杞优树选择初步研究

为选育黑果枸杞优树植株,以人工种植的黑果枸杞为研究对象,在大面积实地调查的基础上,根据黑果枸杞树形、枝条、花、叶、果实、抗病虫害状况等30个优树表型,经过2 a表型稳定性的观测,初步选出表型性状优良的黑果枸杞100株,采其果实。以高花青素为目标,根据药理作用相似相辅的原理,选择多酚、黄酮为辅助指标,利用各性状的均值、标准差和极差建立黑果枸杞优树综合评分法,复选出14株优等植株。指标间相关性分析表明花青素与黄酮含量呈极显著正相关(p<0.01);花青素与多酚含量呈显著正相关(p<0.05);黄酮与多酚含量呈弱相关。研究结果进一步说明花青素、黄酮、多酚作为优树选择指标的合理性,为建立黑果枸杞无性系苗圃、优树再复选提供了筛选依据。

枸杞多糖组成及含量测定方法的改进

分析当前通行的枸杞多糖含量测定方法,加以优化与改进。将枸杞多糖进行水解衍生化处理后用气相色谱法和高效液相色谱法测定单糖组成,根据组成结果判别枸杞多糖的真伪;在此基础上,根据各单糖组成物质的量比配制单糖混合溶液,用苯酚-硫酸比色法绘制标准曲线,建立枸杞多糖含量测定方法,测定枸杞多糖含量为30%,而仅以葡萄糖做标准溶液,用硫酸-苯酚法绘制标准曲线,枸杞多糖含量仅为14%。

颜色改变对中药枸杞品质影响的研究概况

枸杞子为茄科植物宁夏枸杞(Lyciumbarbarum L.)的干燥成熟果实,味甘、性平,具有滋补肝肾、益精明目、润肺止咳等功效。《神农本草经》将其列为药中上品,称其“久服,坚筋骨,轻身不老”。现代研究表明,枸杞具有增强机体的免疫功能、延缓衰老、降血糖、抗肿瘤等作用。由于枸杞鲜果无法长时间保存,故需“制干”。枸杞常见的干燥方式有晒干、冷冻干燥、热风烘干等,晒干时间长,易受天气等影响,冷冻干燥能量消耗大。因此,热风烘干是目前枸杞干燥主要采用的方式。在风干过程中,枸杞的颜色也会发生相应的变化,从而影响药材质量。