Extraction of Herba Lycopi Polysaccharide and Study of Its Antioxidant Activity by Cellulase Method

[Objectives] To optimize the extraction process of Herba Lycopi polysaccharide by cellulase,and study its antioxidant activity.[Methods]The single factor test and orthogonal test were conducted to study the effect of p H,enzyme dosage,enzymolysis temperature and extraction time on the extraction of Herba Lycopi polysaccharide. And the test was done about its scavenging effect on DPPH radicals and superoxide anions,and the antioxidant activity was evaluated. [Results] The optimum extraction process by cellulase method was as follows: p H value of 7; enzyme dosage of 4 ml; enzymolysis temperature of 40 ℃; extraction time of 2. 5 h. The average extraction rate of Herba Lycopi polysaccharide was 10. 70%,and RSD was 0. 17%. The antioxidant activity test showed that Herba Lycopi polysaccharide had a significant scavenging effect on radicals. [Conclusions] Herba Lycopi polysaccharides had strong antioxidant activity,and could provide a scientific basis for the development and utilization of Herba Lycopi medicinal resources.

高效液相色谱法测定不同泽兰中咖啡酸的含量

目的:建立泽兰中咖啡酸的高效液相色谱含量测定方法,并对不同产地和采收时间的14个样品进行了定量分析。方法:用30%乙醇超声提取样品,采用Hypersil ODS2(4.6 mm×250 mm,5μm)分析柱,乙腈-0.2%磷酸溶液(11∶89)等度洗脱,于325 nm波长下检测。结果:10个产地中河北产泽兰咖啡酸含量最高;产于北京的5个不同采收时间的样品以8月样品含量高。结论:该方法灵敏快速,准确可靠,可用于泽兰的质量控制。

气质联用法分析泽兰不同部位挥发油的化学成分

目的:研究泽兰不同部位挥发油化学成分的差异。方法:水蒸气蒸馏法提取挥发油,利用GC-MS计算机联用仪定性分析,按峰面积归一化法求出挥发油中化学成分的百分含量。结果:从泽兰叶挥发油中共分离出63个峰,鉴定出48个化学成分,占其挥发油总量的94.31%;从泽兰茎挥发油中共分离出12个峰,鉴定出9个化学成分,占其挥发油油总量的89.33%。二者均含有反式石竹烯、石竹素、葎草烯环氧化物Ⅱ、Z,Z,Z-1,5,9,9-四甲基-1,4,7,-环十一碳三烯、法尼基丙酮、β-瑟林烯。结论:泽兰茎叶同用入药有其合理性。

泽兰有效成分对急性血瘀大鼠凝血功能和体外血栓形成的影响

目的:观察泽兰有效成分对急性血瘀模型大鼠凝血功能和体外血栓形成的影响。方法:大鼠注射盐酸肾上腺素同时配合冰水浴制作急性血瘀证模型。观察体外血栓长度、湿重和干重的变化,测定活化部分凝血酶时间(APTT)、凝血酶原时间(PT)、凝血酶时间(TT)和血浆纤维蛋白原含量(FIB)。结果:模型组血栓长度、湿重和干重均显著增加,泽兰中、高剂量组血栓长度明显缩短,湿重及干重明显减轻(P<0.05)。模型组APTT、TT和PT均显著缩短,FIB含量明显增加(P<0.05)。泽兰低剂量组PT明显延长(P<0.05);泽兰中、高剂量组APTT、TT和PT明显延长,FIB显著降低(P<0.05)。结论:泽兰有效成分能显著抑制急性血瘀证大鼠血栓的形成并调节其凝血功能。

超临界CO_2萃取与水蒸气蒸馏法研究泽兰中挥发性有机物

以超临界CO2萃取法(SFE)提取中药泽兰中的挥发性有机物,经气相色谱-质谱联用(GC-MS)分析,人工解析质谱图及计算机谱库检索相结合进行化学成分结构鉴定,用面积归一化法计算各组分的相对含量。SFE法提取的产率为0.78%,共鉴定75种挥发性化合物,主要成分为植醇、石竹烯氧化物、十六酸、亚油酸、葎草烯等,比文献报道的该挥发油成分多且含量差异较大,其中松香芹醇、蒲勒烯、马鞭烯酮、香芹酮、十六酸、亚油酸、葎草烯、十六酸乙酯、亚麻酸等多种成分未见报道。与水蒸气蒸馏法(SD)提取的泽兰挥发油进行比较,后者提取的产率为0.12%,从中鉴定出50种化合物,主要成分为石竹烯氧化物、柠檬烯、α-蒎烯、葎草烯、月桂烯等。SFE与SD得到的成分仅有31种相同,其它各不相同。

牡丹皮、忍冬藤及泽兰抗肿瘤作用的实验研究

采用具抗噬菌体作用的中草药牡丹皮、泽兰和忍冬藤进行小鼠体内抑瘤实验及体外杀瘤细胞实验 ,结果显示 :牡丹皮抑瘤率 >50 % ,IC50 为 3 8.4 0mg/L ,其 95%的可信限为 3 1 .1 9～ 4 7.2 9mg/L ;忍冬藤抑瘤率>3 0 % ,IC50 为 7.3 1mg/L ,95%的可信限为 4 .56～ 1 1 .71mg/L。泽兰抑瘤率 <3 0 % ,IC50 为 1 8.1 1mg/L ,95%的可信限为 1 1 .2 3～ 2 9.2 0mg/L ,说明牡丹皮及忍冬藤具有抗肿瘤作用。

高效液相色谱法同时测定泽兰中咖啡酸和迷迭香酸

建立了同时测定泽兰中咖啡酸和迷迭香酸的高效液相色谱测定方法，并对不同产地和采收时间的14个样品进行了定量分析。用体积分数为30％的乙醇超声提取样品，用Hypersil ODS2（4．6mm×250mm，5μm）分析柱；流动相：A：φ（甲酸）=0．75％的乙腈溶液，B：φ（甲酸）=0．75％的水溶液；梯度洗脱条件：0-5min，V（A）：V（B）=10：90；5-70min，V（A）：V（B）=10：90→V（A）：V（B）=55：45；检测波长325nm；流速1mL／min；柱温30℃。结果表明，产自河北、山东、江苏、江西、广西、湖北、湖南、安徽、甘肃、北京的10个样品中，以河北产泽兰咖啡酸和迷迭香酸质量分数最高；产于北京的5个不同采收时间的样品以8月样品质量分数高。该方法快速灵敏，准确可靠，可望用于泽兰的质量控制。

正交试验法筛选泽兰总黄酮及酚酸类成分的提取工艺

目的研究泽兰总黄酮及酚酸类成分的最佳提取工艺。方法以总黄酮及酚酸、咖啡酸含量为指标,采用L9(34)正交试验,考察提取溶媒、提取次数、提取时间、溶媒用量因素对提取的影响,确定泽兰最佳提取工艺。结果以15倍量的50%乙醇为溶媒,回流提取3次,每次2 h为最佳提取条件。结论本提取工艺方法简单、合理,是泽兰黄酮及酚酸类成分的最佳提取工艺。

泽兰中迷迭香酸含量测定方法学研究

目的:建立泽兰中迷迭香酸的含量测定方法,为《欧洲药典》泽兰专论的质量标准提供研究数据。方法:采用高效液相色谱法。基于样品提取和色谱条件的优化结果建立迷迭香酸的分析方法,同时对该方法进行系统的方法学验证,包括采用单变量分析(OVAT)进行方法的耐用性研究及按照《欧洲药典》的方法测定该色谱系统的滞留体积。结果:迷迭香酸检测质量浓度线性范围为5.02~60.30μg·m L^(-1)(r=0.999 9);加样回收率为95.5%~101.6%,RSD=2.1%(n=9);重复性、中间精密度、稳定性及耐用性试验的RSD均小于3.0%;该色谱系统滞留体积为2.4 m L。结论:该方法操作简单,重复性、准确度及耐用性良好,可作为泽兰中迷迭香酸的含量测定方法列入《欧洲药典》泽兰专论的质量标准草案。

泽兰对人冠状动脉平滑肌细胞增殖的影响

目的研究中药泽兰对人冠状动脉平滑肌细胞(HCASMC)增殖的影响。方法利用体外细胞实验,通过人碱性成纤维生长因子和人表皮生长因子刺激细胞增殖,随机分为空白组、不同浓度泽兰水提物(LLST)组(320μg/mL、640μg/mL、1 280μg/mL、2 560μg/mL、5120μg/mL)和不同浓度泽兰醇洗脱物(LLCX)组(40μg/mL、80μg/mL、160μg/mL、320μg/mL、640μg/mL)。采用MTT法和流式细胞术分别测定细胞OD值、G0/G1期、S期、G2/M期和apoptosis期细胞百分比,观察泽兰不同浓度药液对细胞增殖的影响。结果 MTT结果显示泽兰LLST和LLCX 10个剂量均可抑制细胞增殖(P<0.05)。细胞周期结果显示:泽兰LLST 320μg/mL、640μg/mL、1 280μg/mL浓度组和泽兰LLCX40μg/mL、80μg/mL、160μg/mL浓度组的G0/G1期细胞百分比较空白组增高(P<0.05);S期细胞百分比较空白组降低(P<0.05)。抑制增殖作用的最佳药物浓度分别为1 240μg/mL和160μg/mL。结论中药泽兰具有抑制HCASMC增殖的活性。

气质联用法分析佩兰和泽兰中挥发油的化学成分

目的:分析比较易混淆品佩兰与泽兰中挥发油的化学成分。方法:采用水蒸气蒸馏法提取佩兰与泽兰中挥发油,运用气相色谱-质谱联用对其化学成分进行分析和鉴定,用气相色谱面积归一化法测定各组分的相对百分含量。结果:经气相色谱-质谱联用技术,从佩兰中分离出44个峰,从泽兰中分离出45个峰,并且确认了所含的化合物。结论:报道了佩兰与泽兰中挥发油的化学成分,二者挥发油的主要成分和含量都有很大区别,因此在临床应用中应当加以区别。

顶空固相微萃取-气相色谱-质谱法测定泽兰中的挥发性成分

本文采用顶空固相微萃取-气相色谱-质谱法(HS-SPME-GC-MS)分离鉴定了泽兰中的挥发性成分,考察了HS-SPME的操作参数(纤维头、样品平衡时间、萃取温度、萃取时间和解吸时间),并与传统的水蒸气蒸馏法(SD)和超临界CO2萃取法(SFE)提取的挥发性成分进行了比较.HS-SPME法共鉴定了58种成分,占总成分含量的99.51%,主要成分为烯类;SFE法共鉴定了61种成分,占总成分含量的84.92%,主要成分为环己酮和烯的氧化物;SD法共鉴定了45种成分,占总成分含量的88.30%,主要成分为烯的氧化物.三种方法测得的挥发性成分差异较大,但是HS-SPME法作为一种简单的手段可以用于泽兰中挥发性物质的快速提取和分析.

RP-HPLC法测定泽兰中桦木酸的含量

目的：建立反相高效液相色潽法测定泽兰中桦木酸的含量.方法：采用AlltimaTM-C18（250 mm×4.6 mm,5μm）;以甲醇-0.2％磷酸水溶液=85：15进行等度洗脱,流速为1.0 mL/min,检测波长为202 nm,柱温为35℃.结果：桦木酸的线性范围为3.968～99.200 μg（r=0.997 3）,平均回收率为100.87％.结论：该方法结果准确、简便可行、重复性好,可为泽兰的质量控制提供依据.

补肾化瘀方对PCOS大鼠卵巢颗粒细胞CYP450表达的影响

目的观察补肾化瘀方对多囊卵巢综合征(PCOS)大鼠卵巢颗粒细胞CYP450蛋白表达的影响。方法运用补肾化瘀方对PCOS模型大鼠进行干预后,采用免疫组化法观察卵巢颗粒细胞CYP450的蛋白表达。结果模型组与正常组比较,卵巢颗粒细胞CYP450的蛋白表达在表达面积及表达强度上均低于正常组,差异具有统计学意义(P<0.01);补肾化瘀方中、高、低剂量组及妈富隆组用药后,卵巢颗粒细胞的CYP450的蛋白表达明显升高,差异具有统计学意义(P<0.01,P<0.05);其中补肾化瘀方中剂量对PCOS大鼠卵巢颗粒细胞CYP450的蛋白表达效果最佳。结论补肾化瘀方能增强PCOS大鼠卵巢颗粒细胞CYP450的蛋白表达,调节卵巢内分泌失调,改善PCOS高雄血症,逆转卵泡的发育异常,使排卵成功。

RP-HPLC法测定泽兰中木犀草素-7-0-β-D-葡萄糖苷的含量

目的建立反相高效液相色潜法测定泽兰中木犀草素-7-0-β-D-葡萄糖苷的含量。方法采用AlltimaTM—C18（250minx4．6mm，51．Lm）；以乙腈-0．2％磷酸水溶=20：80进行等度洗脱，流速为1．0ml／min，检测波长为350mm，柱温为35℃。结果木犀草素-7-0-β-D-葡萄糖苷的线性范围为0．412-10．30μg（r=0．9999），平均回收率为100．25％。结论该方法结果准确、简便可行、重复性好，可为泽兰的质量控制提供依据。

泽兰大孔树脂洗脱部位中原儿茶醛、咖啡酸和迷迭香酸含量的反相高效液相色谱法测定

目的建立同时测定泽兰中原儿茶醛、咖啡酸、迷迭香酸的高效液相色谱含量测定方法,并对泽兰大孔树脂洗脱部位中的这3种酚酸的含量进行了测定。方法采用Cadenza（5）CD-C18（250 mm×4.6 mm×5μm）分析柱;流动相为乙腈/水系统,两相均含有0.75%的甲酸,以有机相10%起始,保持5 min后,于17 min内线性变为13%,于27 min内线性变为18%,于47 min内线性变为23%,于65 min内线性变为55%;流速1.0 ml/min;柱温30℃;于325 nm,280 nm双波长下检测。结果原儿茶醛（280 nm）、咖啡酸（325 nm）和迷迭香酸（325 nm）分别在0.01~2μg、0.01~2μg和0.04~8μg内呈良好的线性关系。3个成分相应的富集部位含量分别达到原儿茶醛0.141%,咖啡酸1.092%,迷迭香酸11.101%。结论该方法灵敏快速,准确可靠,可用于对泽兰及其大孔树脂洗脱工艺过程进行质量控制。

泽兰化学成分反相高效液相色谱分离条件的优化

优化了泽兰V(乙醇)∶V(水)=70∶30提取物的分离条件。采用反相高效液相色谱法(RP-HPLC)考察了不同波长、酸抑制剂类型及其浓度、流动相梯度、进样量以及柱温对其分离效果的影响。确定其分离条件如下:Hypersil ODS2色谱柱(5μm,4.6 mm i.d.×250 mm);流速1.0 mL/m in;检测波长280 nm;流动相:(A)(甲酸)=0.75%的水溶液(以下简称为X%Y-水,其中X为数字,Y为水中的添加剂),(B)乙腈;梯度洗脱条件为:φ(B)=10%(5 m in)65 m inφ(B)=55%;进样量为20μL;柱温30℃。该方法获得的色谱图基线较平稳,分离度较高,能有效地对泽兰化学成分进行分析,可用于泽兰的质量控制。

两种泽兰酸性多糖的结构和生物活性

从泽兰中提取多糖组分,并评价其体外抗氧化活性和细胞免疫调节活性。通过DEAE-52纤维素柱层析和SephadexG-100柱层析从泽兰粗多糖中分离得到2个纯多糖,分别命名为LHPS1和LHPS5。采用物理化学方法和免疫学方法对LHPS1和LHPS5的结构和生物活性进行了研究。结果表明,LHPS1(1.13×10^(5) Da)和LHPS5(7.40×10^(4) Da)是由多种单糖和半乳糖醛酸组成的酸性多糖。总还原能力和1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH)自由基清除率测定结果表明,LHPS1和LHPS5具有显著的体外抗氧化活性。免疫实验分析结果表明,LHPS1和LHPS5能激活RAW264.7细胞促进肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)-α的产生,并促进脾淋巴细胞增殖。荧光免疫激活转运实验结果显示LHPS1和LHPS5能够通过激活RAW264.7细胞中的核因子κB(nuclear factor kappa-B,NF-κB)调节免疫应答。此外,抑制剂中和实验结果显示两种多糖可能通过结合细胞表面甘露糖受体激活巨噬细胞。LHPS1和LHPS5具有一定的体外抗氧化活性和细胞免疫调节活性,可用作抗氧化补充剂或免疫调节剂。

泽兰治疗PCOS排卵障碍之调经促孕理论及现代药理研究

对近年来泽兰治疗多囊卵巢综合征调经促孕作用及其相关药理作用机制进行统一论述。泽兰可通过活血利水调经、快气悦脾疏肝、补养气血等功效治疗多囊卵巢综合征排卵障碍引起的月经不调、不孕之症,具有良好临床疗效。泽兰现代药理作用主要为抗炎、抗氧化、改善微循环、降糖、降脂、保肝利胆、调节肠道菌群等,可针对多囊卵巢综合征排卵障碍慢性氧化应激、低度炎症状态、微循环障碍、胰岛素抵抗、肠道菌群紊乱等发病机制而起到治疗作用,为临床用药提供理论支持。

泽兰治疗肾病水肿的研究

瘀血是导致和加重肾病水肿的重要病理因素,瘀血阻滞,三焦气化不利,水道受阻,水液外溢肌肤可发为水肿,此即所谓血不利则化为水。化瘀利水是肾病水肿常用治法,泽兰,苦、辛,微温,归肝脾经,有活血祛瘀,利水消肿之效。临床在治疗肾病水肿时多选而用之,且常配伍泽泻、当归、川芎、益母草、大黄、佩兰、白术、黄芪、楮实子等以增其效。作者依据古今文献记载、名家经验及现代药理研究,将泽兰在肾病水肿中的运用进行了概述,对临床选药提供了理论支撑。