地参多糖的制备及其对高糖诱导大鼠肾小球系膜细胞的影响

目的:探讨地参多糖不同醇沉组分的制备工艺,考察其对高糖诱导大鼠肾小球系膜细胞(HBZY-1)的影响。方法:地参水提液经脱蛋白、大孔树脂柱层析分离,得地参粗多糖,对地参粗多糖进行分级醇沉获得待测组分,以高糖诱导HBZY-1为模型细胞进行体外活性测试。结果:得到的3个不同醇沉组分(LLP-30%、LLP-60%、LLP-90%)在0.25~4.00 mg/mL浓度下,对正常HBZY-1细胞均无毒性;LLP-60%、LLP-90%对高糖诱导HBZY-1细胞的增殖具有显著抑制作用(P<0.01),且能促进细胞超氧化物歧化酶含量上升,丙二醛和活性氧含量降低。结论:地参多糖组分的提取和分离制备工艺切实可行,其中活性组分LLP-90%不仅含量最高,而且抑制高糖诱导HBZY-1细胞的增殖及缓解细胞氧化应激效果最为显著,为地参作为糖尿病肾病功能性食品开发提供基础。

野生地参多糖对四氧嘧啶致糖尿病小鼠血糖和血脂的影响

为了研究野生地参多糖对四氧嘧啶(ALX)致糖尿病小鼠血糖和血脂的影响,利用四氧嘧啶(ALX)建立糖尿病小鼠模型,分别灌胃低(100 mg/(kg.d))、中(200 mg/(kg.d))、高(400 mg/(kg.d))剂量地参多糖溶液及阳性对照药盐酸苯乙双胍,正常对照组及糖尿病模型对照组则给等体积生理盐水。结果表明:连续给药14 d后,地参多糖对正常小鼠血糖无明显影响,100、200和400 mg/(kg.d)地参多糖均能明显降低ALX所致糖尿病小鼠高血糖,与糖尿病模型对照组相比,P<0.01;同时,相同剂量的地参多糖还能极显著降低ALX致糖尿病小鼠血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)(P<0.01)。中、高剂量地参多糖使糖尿病小鼠血清高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)显著回升(P<0.05),但低剂量地参多糖对糖尿病小鼠血清HDL-C则无明显影响(P>0.05)。地参多糖能明显降低ALX致糖尿病小鼠高血糖及高血脂。

响应面法优选泽兰多糖的大孔吸附树脂纯化工艺

目的:考察8种大孔吸附树脂D3520、H103、HPD-100、HPD-700、AB-8、HPD722、S-8、HPD-600对泽兰多糖的纯化效果,以Box-Behnken法优化最佳大孔吸附树脂的最优纯化工艺.方法:以多糖保留率、脱色率、脱蛋白率的加权综合评分为指标,考察大孔树脂、洗脱流速、上样浓度、洗脱剂用量对纯化结果的影响,通过Box-Behnken设计建立响应面模型来优选大孔树脂泽兰多糖的工艺参数.结果:优选的泽兰多糖的大孔树脂纯化工艺为:取HPD-100大孔吸附树脂,泽兰多糖的上样质量浓度为0.03 g/mL,洗脱流速为1.1 mL/min,洗脱体积为40 mL,以此优选工艺纯化后,多糖保留率69.21%,脱色率60.24%,蛋白脱除率75.67%.结论:泽兰多糖的纯化工艺稳定可靠,HPD-100大孔吸附树脂纯化工艺效果良好,适合工业化生产.

地参多糖对D-半乳糖所致衰老小鼠的抗氧化作用研究

[目的]研究地参多糖(LLP)对D-半乳糖所致衰老小鼠的抗氧化作用。[方法]取昆明种小白鼠50只,随机分为5组。除正常对照组外,其余各组每天于颈背皮下注射D-半乳糖80 mg/kg,连续42 d,造成亚急性衰老模型。在注射D-半乳糖的同时,试验组每天分别灌胃给予地参多糖(LLP)300、200和100 mg/kg,正常对照组及模型对照组给予等量生理盐水。末次给药12 h后,分离血清及肝组织,分别测定各组小鼠衰老相关生化指标。[结果]LLP能拮抗D-半乳糖所致的小鼠衰老,使小鼠血清及肝组织SOD和GSH-Px活性明显回升,MDA的水平下降。[结论]LLP具有一定的抗氧化和抗衰老作用。

泽兰多糖超声提取工艺的优化

目的:运用正交试验设计优化泽兰多糖的超声提取工艺,为泽兰多糖的开发提供理论基础。方法:以泽兰多糖提取率、多糖含量为双重指标,考察温度、时间、料液比、功率对提取结果的影响,通过正交实验设计来优选超声提取泽兰多糖的工艺参数。结果:优选的泽兰多糖的超声提取工艺为:超声功率为560W,温度60℃,时间20 min,料液比为30倍,多糖提取率可以达到2.31%。结论:本研究得到的泽兰多糖超声提取工艺科学稳定,具有先进性,值得进一步推广应用。

PMP柱前衍生化HPLC法测定地参多糖的单糖组成

采用1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(1-phenyl-3-methyl-5-pyrazolone,PMP)试剂柱前衍生结合高效液相色谱法同时测定地参多糖中的8种单糖组分。样品经石油醚脱脂、超声提取、Sevage试剂除蛋白,无水乙醇沉淀制得多糖溶液,然后加入2 mol/L三氟乙酸,在110℃下水解5 h,得到单糖溶液,最后加入0.5 mol/L PMP-甲醇溶液在70℃水浴中衍生1 h,进行测定。结果表明,地参多糖主要由甘露糖、鼠李糖、葡萄糖醛酸、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖和岩藻糖组成,在各自质量浓度范围内线性关系良好(r≥0.9995),平均回收率为82.58%~108.71%,检出限为0.16~0.85μg/m L,各单糖组分平均物质的量比为:1.00∶0.60∶0.54∶5.15∶266.53∶890.11∶4.12∶1.05,其中半乳糖的平均质量分数为120.446 mg/g、葡萄糖的平均质量分数为35.306mg/g,为地参中单糖主要成分。主成分分析表明,地参单糖含量的高低在我国地域上呈现出北方>南方>西南的趋势。该方法操作简便,灵敏度高,衍生物质稳定性好,重复性好,实用可靠,适用于地参多糖中单糖成分分析和含量测定,可为地参药材的质量控制提供参考。

不同种源地参在宁波地区的适应性及多糖含量比较研究

对引种到浙江省宁波市的5个地参种质进行生态适应性、根茎产量及根茎多糖含量的比较研究,以期筛选出适应性强、根茎产量高、多糖含量高,适合宁波及周边地区种植的优良种质。研究结果表明,来自江苏徐州和山东泰安的地参生长适应性强;来自山东泰安和四川成都的地参根茎产量较高;而来自江苏徐州和广西钦州的地参多糖含量最高,品种最好。综合所有指标,筛选出种源为江苏徐州、广西钦州的地参为宁波地区推广种植的优良种质。

地参多糖抗氧化活性的研究

采用水提醇沉法提取2个采收地3个采收期的地参多糖,并采用硫酸-苯酚法测定其多糖含量;通过DPPH自由基清除活性、FRAP和对亚硝酸盐的清除作用评价了地参多糖的抗氧化活性。结果表明,地参多糖得率范围为28.40 g/100 g^42.20 g/100 g,且随着采收期的延后,呈现先升高后降低的趋势;地参多糖含量范围为16.95 g/100 g DW^31.61 g/100 g DW,且在整个采收过程中,不同采收地的地参其多糖含量变化不同;地参多糖具有较强的抗氧化活性,对DPPH自由基的清除率范围为68.34%~76.38%,铁还原抗氧化能力范围为122.75μmol Fe(II)/g^239.00μmol Fe(II)/g,对亚硝酸盐的清除率范围为58.82%~87.37%;且同一抗氧化体系中,不同采收地的地参在整个采收过程中其抗氧化活性的变化不同;不同采收地的地参,在不同的抗氧化体系中,随着采收期的延后其变化也不同。

响应面法优化滇产地参多糖的提取工艺及其抗氧化活性研究

研究旨在探究滇产地参多糖的最佳提取工艺及其抗氧化活性。以多糖得率为考察指标,采用热水浸提乙醇沉法提取地参多糖。基于单因素试验结果,采用响应面法优选地参多糖的提取工艺,探讨地参多糖的抗氧化活性。结果显示,滇产地参多糖的最佳提取工艺参数为液料比20 mL/g,浸提温度70℃,浸提时间3 h,浸提次数3次,在此条件下,地参多糖的得率达到(31.69±0.78)%。滇产地参多糖对DPPH自由基和ABTS自由基均具有较好的清除作用。研究表明,试验得到的地参多糖提取工艺稳定可行,地参多糖具有较好的抗氧化活性。

响应面法优化地参多糖大孔树酯脱色工艺及其抗氧化活性研究

目的:考察大孔树酯用量、脱色温度和脱色时间对地参多糖的脱色率和保留率的影响。方法:在单因素试验的基础上,以多糖脱色率和保留率2个指标的综合评分作为响应值,响应面法优化大孔树酯脱除地参多糖色素的工艺,并探究地参多糖的抗氧化活性。结果:地参多糖大孔树酯最佳脱色工艺为质量浓度6mg/mL的地参多糖溶液100mL,添加充分溶胀的大孔树酯3g,脱色温度45℃、脱色3h、脱色1次。在此条件下,多糖脱色率为82.64%,多糖保留率为72.06%,综合评分82.15,与理论综合评分(83.34)的相对误差为1.43%。当地参多糖质量浓度为0.5mg/mL时,对ABTS自由基的清除率达到44.28%。结论:响应面试验优化得到的地参多糖大孔树酯脱色工艺稳定可行,地参多糖具有较好的抗氧化活性,可作为天然抗氧化剂开发利用。

地笋多糖抗氧化性能的研究

实验采用地笋为原料,微波法对地笋总多糖进行提取,然后以地笋多糖溶液为样液,用维C作对比,测定其清除二苯代苦味酰肼(DPPH)和超氧阴离子自由基能力、总抗氧化性能力及水杨酸体系清除羟自由基能力。实验结果表明,地笋多糖对羟自由基、二苯代苦味酰肼(DPPH)和超氧阴离子自由基能力均有一定的清除能力,而且随着多糖浓度的增加不断升高。因此具有一定的药用价值。

地笋多糖提取及体外抗氧化性

为了优化微波辅助法提取地笋多糖的工艺条件及研究提取物的体外抗氧化性,采用单因素结合正交试验优化了地笋多糖的提取条件并对提取物清除·OH,O_2^-,DPPH自由基的能力进行研究。结果表明:液料比是影响提取率的主要因素,其次是提取温度,最佳组合为A2B2C3,即取地笋样品,按40:1(mL:g)的液料比,在80℃下微波提取8 min,最终地笋多糖提取率的平均值为57.89%。对地笋多糖的体外抗氧化性进行探讨的结果显示,地笋多糖样品液对·OH,O_2^-,DPPH自由基均有清除作用。

地参多糖的提取工艺研究

目的:开发利用地参中的多糖的价值。方法:采用无水乙醇回流脱脂,热水浸提法提取地参水溶性多糖。对提取时间、提取温度、料水比以及提取次数分别进行了单因素试验和L9(34)正交试验。结果:确定地参多糖最佳提取工艺条件为提取温度80℃,提取料水比1∶15,提取时间3 h,提取1次。结论:该方法操作简便、提取迅速、并能获得含量较高的多糖成分,在该工艺条件下地参多糖得率为16.8%。

苯酚-硫酸法与蒽酮-硫酸法测定地参多糖的比较研究

苯酚-硫酸法和蒽酮-硫酸法是测定多糖含量的常用方法,运用这2种方法测定地参中多糖的含量,比较2种方法的优劣,发现苯酚-硫酸法较优,并对苯酚-硫酸法做更深入的优化试验。在单因素试验结果的基础上,选取苯酚用量、硫酸用量、加热时间3个因素进行响应面优化试验,得出最佳试验条件为苯酚用量0.8 mL、硫酸用量3.5 mL、加热时间9 min。利用该条件对地参多糖进行测定,得出地参多糖含量的平均值为14.41%,相对标准偏差为2.76%,表明苯酚-硫酸法稳定可靠,更能准确测定地参中多糖的含量。

高效液相色谱法分析地瓜儿多糖的单糖组成

研究分析地瓜儿多糖的单糖组成。采用水提醇沉法提取地瓜儿多糖,用三氟乙酸水解多糖成单糖,单糖产物经衍生化试剂1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)柱前衍生化后,利用高效液相色谱法分析单糖的PMP衍生物。结果表明,地瓜儿多糖由甘露糖(Man)、鼠李糖(Rha)、葡萄糖醛酸(GlcUA)、半乳糖醛酸(GalUA)、葡萄糖(Glc)、半乳糖(Gal)、木糖(Xyl)和阿拉伯糖(Ara)8种单糖组成,是一种酸性杂多糖,其中以半乳糖、葡萄糖和半乳糖醛酸为主,为进一步开发利用地瓜儿这一新的野菜资源提供了科学依据。

地参多糖提取工艺研究

以地参多糖得率为指标,采用苯酚-硫酸法定量多糖含量,通过单因素实验和正交实验考察料水比、水浴温度、提取时间、提取次数等因素对地参多糖得率的影响.结果表明,最佳提取工艺为:料水比1∶300,提取温度100℃,提取时间1.5h,提取3次,该条件下地参多糖的得率为3.64%.

响应面法优化地参多糖提取工艺及其抗氧化活性分析

目的优化纤维素酶协同超声辅助提取地参多糖的工艺参数,并分析其抗氧化性。方法在单因素试验基础上,以液料比(A)、纤维素酶用量(B)、超声功率(C)、超声温度(D)为自变量,以地参多糖提取量(Y)为响应值,采用4因素4水平的响应面分析法优化地参多糖提取工艺,同时测定地参多糖对DPPH自由基的清除能力。结果纤维素酶协同超声辅助提取多糖的最佳工艺条件为:液料比60 mL·g^(-1)、纤维素酶用量3.6%、超声功率300 W、超声温度30℃、超声时间40 min,在此条件下,地参多糖提取量为(378.56±1.346)mg·g^(-1),与预测值(381.68 mg·g^(-1))接近。地参多糖对DPPH自由基有较强的清除能力,且随多糖质量浓度的增加而逐渐增强;地参多糖质量浓度为0.420 mg·mL^(-1)时,清除率为91.36%。结论采用响应曲法优化的多糖提取工艺参数准确可靠,可用于地参多糖提取;地参多糖具有较强的体外抗氧化能力。

地参多糖对非小细胞肺癌A549细胞抗肿瘤作用及机制

目的:观察地参多糖(LLP)的体外抗肿瘤活性及机制。方法:细胞增殖与活性检测(CCK-8)法检测LLP(0,5,10,15,20 g·L^(-1))对A549细胞不同作用时间(24,48,72 h)的增殖抑制作用;采用细胞划痕,transwell实验检测LLP(10,20 g·L^(-1))作用24,48 h后A549细胞的迁移侵袭能力;碘化丙啶(PI)单染法检测LLP(10,20 g·L^(-1))对A549细胞周期的影响;异硫氰酸荧光素(Annexin V-FITC)/PI凋亡试剂盒检测LLP(10,20 g·L^(-1))诱导A549细胞的凋亡作用;实时荧光定量聚合酶链式反应(Realtime PCR)检测LLP(10,20 g·L^(-1))对A549细胞中半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-3(Caspase-3),半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-8(Caspase-8),半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-9(Caspase-9),细胞周期依赖性激酶-1(CDK-1),细胞周期蛋白B(1 Cyclin B1)mRNA表达的影响;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测LLP对A549细胞中Caspase-3,Caspase-8,Caspase-9,B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)相关X蛋白(Bax),CDK-1,细胞周期依赖性激酶4(CDK-4),细胞周期依赖性激酶-6(CDK-6),Cyclin B1,细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)蛋白表达的影响。结果:与空白组比较,LLP组A549细胞的增殖、迁移和侵袭能力均降低(P<0.05,P<0.01);DNA合成准备期/DNA合成前期(G0/G1期)比例升高(P<0.05);凋亡率升高(P<0.05,P<0.01);Caspase-3,Caspase-8,Caspase-9 mRNA表达水平升高(P<0.05,P<0.01),CDK-1,Cyclin B1 mRNA表达水平降低(P<0.05,P<0.01);Caspase-3,Caspase-8,Caspase-9,Bax蛋白表达水平升高(P<0.05,P<0.01),Bcl-2,CDK-1,CDK-4,CDK-6,Cyclin B1,Cyclin D1蛋白表达水平降低(P<0.05,P<0.01)。结论:LLP可抑制A549细胞的增殖,使其周期阻滞在G0/G1期,同时可能包含DNA合成后期/DNA分裂期(G2/M期),并通过线粒体凋亡途径和死亡受体途径诱导细胞凋亡。