Lyn激酶在伊马替尼耐药的慢性髓系白血病中的作用

本研究探讨Lyn激酶在伊马替尼耐药的慢性髓系性白血病(CML)中的作用。76例CML患者分为初治组、伊马替尼耐药组和伊马替尼治疗有效组,用Western blot方法检测CML患者骨髓单个核细胞中Lyn蛋白的表达水平,比较各组患者Lyn的表达差异,分析Lyn与临床特征、BCR/ABL融合基因和染色体的关系。结果表明,76例CML均表达Lyn;伊马替尼耐药组Lyn表达明显高于正常对照组、初治组及伊马替尼治疗有效组(P<0.05),初治组和伊马替尼治疗有效组的Lyn表达水平与正常对照组无明显差别(P>0.05)。Lyn表达水平与性别、年龄、平均血红蛋白水平、平均血小板计数、外周血幼稚细胞比例和脾脏大小无明显相关(P>0.05),但与初诊时外周血白细胞计数增高相关(P<0.05)。Lyn表达与BCR/ABL融合基因定量无明显相关性(P>0.05);10例伊马替尼耐药的CML中,1例患者存在t(6;22)和t(2;9)改变,与Ph染色体共存,其余9例患者仅存在Ph染色体改变。结论:CML患者和正常人骨髓细胞均表达Lyn,Lyn在伊马替尼耐药的CML中表达明显增高,Lyn高表达与CML患者初诊时白细胞计数明显增高相关。

Lyn激酶介导的信号途径与支气管哮喘气道黏液高分泌

支气管哮喘（简称哮喘）是一种以气道高反应、嗜酸性粒细胞（EOS）浸润为主要特征的气道慢性非特异性炎症性疾病。大量研究发现哮喘黏液高分泌与慢性炎症和气道重塑有关，杯状细胞增生和黏液高分泌是哮喘气道重塑的特征之一。

Lyn激酶对肺腺癌EGFR下游信号通路的调节作用研究

背景与目的:目前,酪氨酸激酶抑制剂(tyrosine kinase inhibitors,TKI)应用于存在表皮生长因子受体(epithelial growth factor receptor,EGFR)突变的患者虽然取得了重大突破,但大约70%的患者仍难以避免地出现TKI耐药,治疗效果不尽人意。本研究通过研究Lyn激酶对EGFR突变肺腺癌细胞株的调节作用,探讨Lyn激酶对EGFR下游信号通路的影响,以期寻找新的分子靶点,提高肺癌的临床诊治水平。方法:采用慢病毒转染方法构建Lyn激酶高表达的EGFR突变细胞株Hcc827(Hcc827-Lyn+/+),通过裸鼠荷瘤实验、MTT实验、克隆实验、侵袭实验及蛋白[质]印迹法(Western blot),检测高表达Lyn激酶的Hcc827细胞株移植于裸鼠皮下后的生长状况,以及Lyn激酶高表达Hcc827细胞株在体外培养时增殖、克隆、侵袭能力及EGFR下游信号通路相关蛋白的表达水平。结果:与Hcc827细胞株比较,Hcc827-Lyn+/+细胞株在裸鼠荷瘤实验中表现出更强的增殖能力,但各组荷瘤裸鼠均未见明显远处转移。体外培养时,Hcc827-Lyn+/+细胞株增殖、克隆及侵袭能力强于Hcc827细胞株。Hcc827-Lyn+/+细胞株EGFR及其下游PI3K/AKT、JAK/STAT信号通路相关蛋白表达上调。结论:Lyn激酶高表达能通过EGFR下游信号通路上调EGFR突变肺腺癌细胞株的增殖、侵袭能力。

Lyn激酶和内质网应激在过敏性支气管哮喘中的作用

支气管哮喘是多种细胞及细胞组分参与的气道炎症性疾病,主要以气道炎症和气道重塑、气道高反应性为特征;然而其发病机制十分复杂,本文对Lyn激酶和内质网应激在支气管哮喘的发病机制中的重要作用进行综述。

Lyn激酶在哮喘发病机制中的作用

支气管哮喘是一种由多种细胞和细胞组分参与的气道慢性炎症性疾病,以气道变应性炎症和气道高反应为其主要特征,随着病程的延长可引起气道不可逆性缩窄和气道重塑。支气管哮喘的发病机制迄今仍未完全阐明。目前研究发现,Lyn激酶在支气管哮喘发病过程中具有正面和负面调节细胞信号的双向作用。此外,Lyn激酶对支气管哮喘发作的强度和持续时间起着重要作用。本文就近年来Lyn激酶可能在支气管哮喘发病机制中的作用做一综述。

Lyn激酶介导Erk-sp1信号通路改善慢性阻塞性肺疾病的观察分析

目的探讨Lyn激酶对慢性阻塞性肺疾病(COPD)小鼠的作用及其可能机制。方法将C57BL/6j野生型小鼠与C57BL/6j Lyn^+转基因小鼠分别随机分为野生型对照组(WT组)、野生型模型组(WT+COPD组)、Lyn^+对照组(Lyn^+组)、Lyn^+模型组(Lyn^++COPD组),每组各8只小鼠。WT+COPD组与Lyn^++COPD组小鼠采用香烟熏吸加气道内注入脂多糖法进行COPD造模,60 d后采用肺功能检测仪记录小鼠相关肺功能指标,HE染色观察小鼠肺组织病理形态变化,ELISA法检测血清与肺泡灌洗液(BALF)中IL-1β、IL-6、IL-10与TNF-α的含量,Western blot检测肺组织中Erk-sp1信号通路相关蛋白表达水平。结果WT组与Lyn^+组小鼠肺组织无明显病变现象,WT+COPD组肺组织中肺泡结构破坏,出现大量炎性细胞浸润,Lyn^++COPD组小鼠肺组织的病变情况较WT+COPD组小鼠明显减轻。与WT组小鼠比较,WT+COPD组小鼠的Ri升高,Cdyn与FEV0.3%/FVC下降,血清和BALF中IL-1β、IL-6、IL-10、TNF-α的含量增加,肺组织中pErk、Erk、sp1蛋白水平增加,差异均具有统计学意义(P<0.05);与Lyn^+组比较,Lyn^++COPD组Ri升高而Cdyn、FEV0.3%/FVC下降,血清和BALF中IL-1β、IL-6、IL-10、TNF-α的含量增加,肺组织中pErk、Erk、sp1蛋白水平增加,差异均具有统计学意义(P<0.05);与WT+COPD组比较,Lyn^++COPD组Ri下降而Cdyn与FEV0.3%/FVC有所上升,IL-1β、IL-6、IL-10、TNF-α的含量降低,肺组织中pErk、Erk、sp1的蛋白水平降低,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论Lyn激酶通过抑制炎症反应来减轻小鼠COPD,其机制可能与Erk-sp1信号通路密切相关。

哮喘大鼠肺组织Lyn激酶mRNA和蛋白表达的检测及意义

目的探讨Lyn激酶在哮喘发病机制中的作用。方法通过卵白蛋白致敏的哮喘大鼠模型,分别采用免疫组化法及荧光PCR法检测肺组织Lyn激酶mRNA和蛋白的表达。结果哮喘组Lyn激酶mRNA和蛋白的表达水平显著低于对照组(P<0.01);地塞米松组Lyn激酶mRNA的表达量与哮喘组差异无统计学意义(P>0.05),且显著低于对照组(P<0.01);地塞米松组Lyn激酶蛋白显著高于哮喘组且显著低于对照组(P<0.05)。肺组织Lyn激酶mRNA和蛋白的表达水平呈显著正相关(n=24,r=0.58,P<0.01)。结论哮喘大鼠肺组织Lyn激酶的表达降低,Lyn激酶在哮喘的发病机制中可能起了抑制气道炎症的作用,Lyn激酶抑制炎症的功能可以被地塞米松调节。

人M-07e白血病细胞凋亡过程中激活Caspase-3引起的Bcl-2蛋白酶解与Lyn^(p53/56)激酶失活相关(英文)

人巨核白血病细胞系M 0 7e的生长严格依赖于GM CSF。在M 0 7e细胞 ,GM CSF受体 (GM CSFR)由两个亚基所组成 :低亲合力的配体特异的α亚基和一个磷酸化的 β亚基 ,后者与lynp53 56 酪氨酸蛋白激酶固定相连。本研究检测了lyn激酶在调节TGF β 1诱导的M 0 7e细胞凋亡过程中的作用。从培养液中去除rhGM CSF首先导致了lyn激酶活性受抑 ,接着发生细胞生长受阻和凋亡。M 0 7e细胞凋亡过程中伴随有大量Bcl 2和Bax蛋白分别被酶解为 2 2kD和 18kD的较小片段。应用特异性的抑制剂 ,发现上述Bcl 2蛋白的变化是循激活的caspase 3(CPP32 )途径发生的 ,后者在M 0 7e细胞中大量表达。Bax蛋白变化的机制尚不清楚。TGF β 1对rhGM CSF刺激的细胞生长具有抑制作用 ,促进M 0 7e细胞凋亡的机制与去除rhGM CSF所致相同 ,包括大量Bcl 2和Bax蛋白被特异酶解和lyn激酶失活。TGF β 1并不影响lyn蛋白和 β链的表达水平 ,也不阻止这两个信号传导元件的相互作用。研究结果表明 ,TGF β 1通过抑制GM CSFR相关的lyn激酶活性而抑制M 0 7e细胞生长并促进凋亡发生。本实验还表明激活的CPP32对Bcl 2蛋白的酶解是与细胞凋亡发生相关的一个自然过程 。

酪氨酸蛋白激酶Lyn对内质网应激的调节在慢性阻塞性肺疾病发病机制中的作用

慢性阻塞性肺疾病(COPD)是以小气道呼气受阻为主要特征的慢性进行性和致死性疾病,随着人口老龄化和空气污染加重,COPD造成的负担在未来几十年里将不断上升,对公共健康构成严重威胁。COPD的发病机制除了炎症细胞、蛋白酶-抗蛋白酶系统失衡、氧化应激、自身免疫机制及细胞衰老等,还存在一个影响COPD发病机制的重要因素——细胞凋亡。细胞凋亡有两种经典途径:传统的死亡受体途径和线粒体途径。此外,内质网应激凋亡途径也是COPD发病机制的重要内容。本文论述了非受体酪氨酸激酶Src家族成员Lyn激酶通过磷脂酰肌醇三激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)通路对内质网应激途径的调节在COPD发病机制中的作用。

人酪氨酸蛋白激酶Lyn的真核表达、纯化及鉴定

[目的]构建含人酪氨酸蛋白激酶Lyn基因的载体并进行真核表达、纯化和研究其对细胞增殖的影响。[方法]提取人Hela细胞总RNA,用RT-PCR方法获得Lyn基因并克隆至pcDNA3.1(-)载体。经双酶切、PCR和测序方法鉴定后,将重组质粒瞬时转染HEK 293T细胞表达目的蛋白,应用组氨酸标签镍离子螯合磁珠纯化融合蛋白,通过Western Blot检测蛋白的表达及纯化,并用CCK-8法检测过表达Lyn后细胞增殖能力的变化。[结果]成功构建真核表达质粒pcDNA3.1(-)-Lyn并进行瞬时表达和蛋白纯化,CCK-8法检测过表达Lyn的HEK 293T细胞的增殖能力显著性下降(P<0.01)。[结论]Lyn在HEK 293T细胞中成功瞬时表达及纯化,并可以使细胞的增殖能力受到明显抑制,为稳定表达和深入研究其生物学功能及作用机制奠定基础。

电针对荨麻疹大鼠皮下疏松结缔组织中肥大细胞Lyn、Syk表达的影响

目的:观察电针预处理对荨麻疹大鼠皮下疏松结缔组织中肥大细胞脱颗粒及其过程中酪氨酸激酶Lyn、脾酪氨酸激酶(Syk)表达的影响,探讨电针干预荨麻疹的潜在生物学机制。方法:32只SD大鼠随机分为空白组、模型组、电针组、阳性药物组,每组8只。除空白组外,其余3组大鼠均采用皮肤被动过敏反应(PCA)制备荨麻疹大鼠模型。电针组电针双侧"曲池""血海""足三里",疏密波,频率2 Hz/15 Hz,电流强度1 mA,每日1次,每次20 min,连续7 d;阳性药物组给予氯雷他定(1 mg×kg-1×d-1)灌胃,每日1次,连续7 d。各组大鼠完成PCA抗原攻击30min后取材进行指标检测。比色法检测大鼠致敏部位皮肤伊文斯蓝染料渗出量;HE染色法观察致敏部位皮肤组织形态改变;甲苯胺蓝染色法观察致敏部位皮下疏松结缔组织中肥大细胞脱颗粒情况;免疫组织化学法检测肥大细胞脱颗粒过程中Lyn、Syk蛋白的表达。结果:模型组大鼠致敏部位表皮层增厚,细胞排列层次紊乱,真皮层内可见大量炎性细胞浸润;阳性药物组、电针组致敏部位表皮层薄,细胞排列层次较清晰,炎性细胞浸润情况较模型组明显减轻。与空白组比较,模型组皮肤染料渗出量吸光度(OD)值、肥大细胞脱颗粒率、Lyn与Syk阳性表达均升高(P<0.01);与模型组比较,电针组和阳性药物组皮肤染料渗出量吸光度(OD)值、肥大细胞脱颗粒率、Lyn与Syk阳性表达均降低(P<0.01);与阳性药物组比较,电针组肥大细胞脱颗粒率显著升高(P<0.01)。结论:电针"曲池""血海""足三里"可通过调控荨麻疹大鼠肥大细胞脱颗粒,降低血管渗透性,发挥抗过敏作用,其机制可能与抑制肥大细胞Lyn、Syk蛋白表达有关。

针刺预处理对荨麻疹大鼠血清IgE及皮肤组织中磷酸化酪氨酸蛋白激酶表达的影响

目的:观察针刺预处理对荨麻疹大鼠血清IgE水平及背部待测区域皮肤组织肥大细胞脱颗粒,组胺和5-羟色胺含量,磷酸化酪氨酸蛋白激酶Lyn、Syk(p-Lyn、p-Syk)表达的影响,探讨针刺预防和治疗荨麻疹的作用机制。方法:SD大鼠随机分为正常对照组、模型对照组、阳性药物组、针刺组,每组10只。采用抗卵蛋白血清致敏建立大鼠荨麻疹模型。造模前14 d,阳性药物组大鼠予以氯雷他定灌胃(0.1 mg/100 g),针刺组给予针刺双侧"曲池""血海",留针30 min,每日1次,两组均连续干预14 d。用HE染色法观察大鼠皮肤组织形态变化;ELISA法检测血清总IgE水平;甲苯胺蓝染色法观察皮肤组织肥大细胞脱颗粒情况;免疫组织化学法检测皮肤组织组胺和5-羟色胺表达及p-Lyn和p-Syk的表达。结果:与正常对照组比较,模型对照组大鼠的表皮明显增厚,真皮肿胀,小血管炎性浸润严重,肥大细胞肿胀变形,边缘轮廓模糊,有颗粒脱出,血清IgE水平明显升高(P<0.05),皮肤组织组胺、5-羟色胺表达及p-Lyn、p-Syk表达明显增加(P<0.05)。与模型对照组比较,针刺组和阳性药物组大鼠的表皮略有增厚,真皮轻度水肿,偶有炎性细胞,肥大细胞脱颗粒现象减少,血清IgE水平明显降低(P<0.05),皮肤组织组胺、5-羟色胺及p-Lyn和p-Syk表达明显降低(P<0.05)。针刺组和阳性药物组各指标差异无统计学意义(P>0.05)。结论:针刺"曲池""血海"穴可以防治荨麻疹,抑制Ⅰ型超敏反应及肥大细胞脱颗粒,其机制可能与针刺对皮肤组织p-Lyn、p-Syk表达的调控有关。