蚯蚓纤溶酶组分的分离纯化和分析

通过以大豆胰蛋白酶抑制剂为配基的亲和层析 ,从蚯蚓 (大平二号 ,即赤子爱胜蚓 )纯化出的纤溶酶是一组非均一的纤维蛋白水解酶 .经DEAE 纤维素离子交换和制备电泳进一步分离纯化 ,得到 12个单一组分 .这些组分的等电点 (pI)按照它们在聚丙烯酰胺凝胶电泳 (PAGE)图谱上的顺序从 4 0开始依次降低 ;SDS PAGE证明 ,除3、 4外 ,其余组分均只含一种多肽链 ,分子质量在 2 2～ 34ku之间 ;用shiff试剂和酚 硫酸染色 ,显示 1、 2、 6 5和 7是糖蛋白 ,其中 7的糖含量最高 ;以BAEE、ChromozymUK和ChromozymPL为底物测定 ,7的纤溶酶活性最高 .

蚯蚓纤溶酶基因P_(239)的原核表达、纯化及活性测定

通过RT PCR方法从蚯蚓 (Lumbricusbimastus)中获得蚯蚓纤溶酶基因 ,命名为P2 3 9,含有 85 2个核苷酸 ,成熟肽编码 2 3 9个氨基酸 ,通过Genbank序列同源性比较 ,与已知的蚯蚓纤溶酶有一定的同源性 ,为首次获得的新基因。随后构建了 pBV2 2 0 /P2 3 9重组质粒 ,在大肠杆菌DH5α中进行原核表达 ,再经亲和层析柱纯化复性 ,其产物经活性测定 ,确定不仅具有激酶作用 ,而且具有直接溶栓活性。

好食脉孢霉纤溶酶的纯化及体外纤溶活性研究

从公认安全真菌好食脉孢霉(Neospora sitophila)代谢产物中纯化了一种纤溶酶,纯化倍数为86.6倍,比活力为519.59 U/mg。该酶由两个分子量分别为30.0 kDa和15.5 kDa的亚基构成,是一种丝氨酸蛋白酶,能依次水解人血纤维蛋白原的Aα、Bβ和γ链,具有直接水解纤维蛋白以及激活纤溶酶原的双重功能。该酶不水解人血清白蛋白。结果表明,好食脉孢霉纤溶酶可能在治疗血栓中具有潜在的应用价值。

蚯蚓纤溶酶新组分的分离纯化及部分性质

采用以大豆胰蛋白酶抑制剂为配基的亲和色谱分离蚯蚓纤溶酶,以DEAE-纤维素-52离子交换柱色谱和制备电泳纯化各单组分。结果表明新组分8、9、10都是能水解纤维蛋白的糖蛋白。组分8是一种纤溶酶原激活剂,有2个亚基,Mr为25.5k和17.8k;组分9仅一条肽链,Mr为33.6k;组分10含有Mr为18.7k和10.9k的2个亚基。组分9、10均兼有纤溶酶原激活活性和直接纤溶活性。

榆干离褶伞溶栓酶的纯化及酶学性质研究

采用离子交换层析、凝胶过滤层析及快速蛋白液相色谱等蛋白质分离纯化技术,从榆干离褶伞菌丝体中纯化一种溶栓酶,并探讨各种因子对榆干离褶伞溶栓酶活性的影响,观察溶栓酶对纤维蛋白及纤维蛋白原的水解特征和酰胺水解活性。实验结果表明,其分子质量约为50 ku,该酶的最适pH和最适温度为pH 6.0,35℃,并对tPA底物S-2288最敏感。Mn^(2+)和Mg^(2+)激活酶活性,而Cu^(2+),EDTA对酶活有抑制作用。该酶不仅直接水解纤维蛋白,还可以水解纤维蛋白原。榆干离褶伞很有潜力成为治疗血栓的新的药物来源。

豆豉纤溶酶的研究进展

豆豉纤溶酶是由豆豉枯草芽孢杆菌分泌的一种具有强烈纤溶作用的丝氨酸蛋白酶。该文对豆豉枯草杆菌的筛选、发酵、酶的提取、活性测定、理化性质以及动物溶栓药效试验进行了综述。

白黄侧耳溶栓酶的分离纯化及特性分析

采用离子交换层析、凝胶过滤层析及快速蛋白液相色谱等蛋白质分离纯化技术,从白黄侧耳菌丝体中纯化一种溶栓酶,并进行酶学性质研究。实验结果表明,其分子质量约为18 ku,该酶的最适pH和最适温度为pH 7.0,40℃,并对糜蛋白酶底物S-2586最敏感。Co2+和Mg2+激活该酶活性,而Cu2+、EDTA对酶活有抑制作用。该酶不仅可直接水解纤维蛋白,还可以水解纤维蛋白原。

豆豉纤溶酶活性检测及其纯化研究

通过琼脂糖-纤维蛋白平板法测定收集到的豆豉中纤溶酶的活性,实验结果显示,采集于贵州南明蔡家关的豆豉样品DC-H8的纤溶酶活性最高,达到了285.759IU/mL。以该豆豉样品为研究对象,对其中的纤溶酶进行了纯化研究,实验确定的最佳纯化方案为:取一定体积的豆豉纤溶酶粗酶液,在低温(4℃)下,加入4%的活性炭粉末脱色35min;在分段盐析中,首先选择15%饱和度的硫酸铵除去杂蛋白,再用75%饱和度的硫酸铵使纤溶酶充分沉淀分离;最后用葡聚糖凝胶G-50层析分离纯化纤溶酶,收集具有较高纤溶活性的组分,得到了纯化的酶液。最终得到的豆豉纤溶酶酶液纯化倍数达到了27.74倍,活性回收率69.7%,比活力达到了13946.1IU/mg。

豆豉纤溶酶的研究进展

对豆豉枯草杆菌的筛选、发酵、酶的提取、活性测定、理化性质以及动物溶栓药效试验进行了综述。

豆豉溶栓酶提取纯化研究

对豆豉溶栓酶发酵液进行提取、脱色,盐析,超滤脱盐,冷冻干燥等纯化研究,制得的豆豉溶栓酶干品,其比活力为530.6U/mg,纯化倍数为11.0,活性回收率为65.7%。溶栓酶干品经Sephadex G-100柱层析,SDS-PAGE法测定分子量为31.0ku。

豆豉纤溶酶的研究进展

综述了含豆豉纤溶酶基因的枯草杆菌的筛选,酶的分离提取、酶学性质、活性测定,豆豉纤溶酶基因的克隆、表达以及动物溶栓药效试验的研究进展。

豆豉纤溶酶的研究进展

豆豉纤溶酶是从我国豆豉中分离得到的一种蛋白酶,具有良好的溶解血栓作用。文章综述了豆豉纤溶酶产生菌的菌种特性,酶的理化性质、发酵工艺、分离纯化、酶活测定、分子生物学及溶栓实验方面的研究现状,并对其应用和发展前景做了展望。

纤维蛋白溶解酶Ⅰ的纯化及其生物活性研究

以纤维蛋白粗酶液为原料,用硫酸铵沉淀分离、离子交换层析、凝胶过滤层析、凝胶电泳分析等方法分离纯化纤维蛋白溶解酶Ⅰ,通过SDS-PAGE电泳检测纯度,通过抗凝血、血凝块溶解、溶血、纤维蛋白溶解酶酶源的激活及水解实验探讨其生物活性。结果表明,纯化后的纤维蛋白溶解酶Ⅰ呈现单一条带,该酶具有体外溶栓、抗凝血、溶解血凝块、激活纤溶酶原和水解纤维蛋白原的作用。

中草药桃仁纤溶酶的亲和层析分离

目的分离出高效、特异、安全、不良反应较小的纤溶酶,为溶栓药物的研究奠定基础。方法利用硫铵沉淀法提取出桃仁纤溶酶,测定其比活力,并比较不同蛋白酶抑制剂对桃仁纤溶酶活性的抑制作用,采用亲和层析法对桃仁纤溶酶进行分离纯化。结果亲和层析法分离得到了纤溶酶活性单一组分,比活力为89.08 U.mg?1,比纯化前提高了7.37倍,该组分属于丝氨酸蛋白酶家族。结论利用大豆胰蛋白酶抑制剂作为配基,采用亲和层析法分离桃仁纤溶酶可以得到单一活性成分,且比活力相对提高。