重组组织型纤维蛋白溶酶原激活剂静脉溶栓后不同时间加用替罗非班对急性缺血性脑卒中患者神经血管功能的影响

目的探讨重组组织型纤维蛋白溶酶原激活剂(rt-PA)静脉溶栓后不同时间加用替罗非班对急性缺血性脑卒中(AIS)患者神经血管功能的影响。方法选择2020年3月至2023年3月北京老年医院神经内科收治的120例AIS患者为研究对象,患者均经rt-PA静脉溶栓治疗。根据静脉溶栓治疗后加用替罗非班的时间将患者分为早期组(溶栓后6 h内,n=52)、中期组(溶栓后6~12 h,n=38)和晚期组(溶栓后12~24 h,n=30)。比较治疗前、治疗后3组患者神经功能[美国国立卫生院卒中量表(NIHSS)评分、改良Rankin量表(mRS)评分]、血管功能[血管性假血友病因子(vWF)、血管内皮细胞钙黏蛋白(VE-cadherin)、血栓调节蛋白(TM)]、炎症因子[高敏C反应蛋白(hs-CRP)、同型半胱氨酸(Hcy)、白细胞介素-1β(IL-1β)]水平,记录治疗期间不良事件发生率。结果治疗前,3组患者NIHSS、mRS评分比较差异无统计学意义(P>0.05);3组患者治疗后NIHSS、mRS评分显著低于治疗前(P<0.05);治疗后,早期组患者NIHSS、mRS评分显著低于中期组、晚期组,中期组患者NIHSS、mRS评分显著低于晚期组(P<0.05)。治疗前,3组患者vWF、VE-cadherin、TM水平比较差异无统计学意义(P>0.05);3组患者治疗后vWF、VE-cadherin、TM水平显著低于治疗前(P<0.05);治疗后,早期组患者vWF、VE-cadherin、TM水平显著低于中期组、晚期组(P<0.05);治疗后,晚期组患者vWF水平显著高于中期组(P<0.05),中期组与晚期组患者VE-cadherin、TM水平差比较异无统计学意义(P>0.05)。治疗前,3组患者hs-CRP、Hcy、IL-1β水平比较差异无统计学意义(P>0.05),3组患者治疗后hs-CRP、Hcy、IL-1β水平显著低于治疗前(P<0.05);治疗后,早期组患者hs-CRP、Hcy、IL-1β水平显著低于中期组和晚期组,中期组患者hs-CRP、Hcy、IL-1β水平显著低于晚期组(P<0.05)。治疗期间,3组患者症状性脑出血发生率比较差异无统计学意义(P>0.05);早期组患者再闭塞、心肺并发症发生率显著低于中期组、晚期组(P<0.05);中期组与晚期组患者再闭塞、心肺并发症发生率比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论rt-PA静脉溶栓后不同时间加用替罗非班后均可促进AIS患者神经功能、血管功能恢复,同时可抑制炎症反应,其中早期加用替罗非班效果最佳。

全层析法在由低温乙醇法组分Ⅲ沉淀制备人纤维蛋白溶酶原中的应用

目的确定以低温乙醇工艺的组分Ⅲ沉淀(以下简称FⅢ-P)为原料,用全层析工艺制备人纤维蛋白溶酶原(plasminogen,Pg)(以下简称FⅢ-P工艺)的可行性。方法用溶解缓冲液以不同稀释倍数和搅拌时间溶解FⅢ-P沉淀,检测溶解物中Pg的效价和抗原浓度,确定FⅢ-P的溶解和澄清条件;对FⅢ-P的溶解物进行前处理和亲和层析的预实验,通过观察层析过程判断FⅢ-P原料对亲和层析进行是否有影响,通过检测过程样品的血浆蛋白抗原浓度和Pg效价并计算Pg抗原回收率来评估亲和层析能否达到纯化Pg的目的。进行2批FⅢ-P全层析工艺(Pg亲和层析+SP层析,以下简称FⅢ-P工艺)的逐级放大研究,计算Pg比活性、步骤及总回收率、每吨血浆Pg产出量,通过与以血浆为原料的全层析工艺(以下简称血浆工艺)的数据进行比较来评估FⅢ-P工艺制备Pg的可行性。结果FⅢ-P用溶解缓冲液稀释10倍,搅拌1 h,室温10000×g离心15 min,上清用筛网初滤后再用8/0.8μm滤器澄清,最后用0.45/0.2μm滤器过滤后上样。预实验显示,以澄清过滤为起点到Pg亲和层析,Pg活性和抗原的步骤回收率分别为39.51%和108.64%,亲和层析后Pg的抗原浓度提高31.16倍,活性提高11.39倍,达到亲和层析纯化Pg的效果。两批逐级放大FⅢ-P工艺结果显示FⅢ-P工艺从血浆到SP层析的Pg抗原和活性总回收率分别为(45.76±1.10)%和(24.15±0.59)%,与血浆工艺相比总计损失了约1/3的抗原和约2/3的活性;SP层析洗脱液的Pg比活性为(4.68±0.25)U/mg,约为血浆工艺的一半,但是达到>4 U/mg的企业内部标准。FⅢ-P工艺的每吨血浆Pg抗原产出量为血浆工艺的68.73%,每吨血浆Pg活性产出量为血浆工艺的29.82%,基本达到FⅢ-P废物利用的目的。结论用全层析工艺从FⅢ-P中制备Pg的技术路线可行。

对氨基苯甲酰纤维蛋白溶酶原-链激酶激活剂复合物的新制法

合成了化学修饰剂 (对氨基苯甲酸对脒基苯酯盐酸盐 ) ,并通过透析法得到了 L ys-纤维蛋白溶酶原。提出了利用 L- L ysine Sepharose4 B柱以人纤维蛋白溶酶原、链激酶及化学修饰剂制备对氨基苯甲酰纤维蛋白溶酶原 -链激酶激活剂复合物 (APSAC)的新方法 ,本法的优点是 APSAC的收率及纯度均较高。

急性心梗患者溶栓治疗前后血浆纤维蛋白原、纤溶酶原和D-二聚体水平变化及临床意义

目的探讨急性心肌梗死(AMI)患者溶栓治疗前后血浆纤维蛋白原(Fib)、纤溶酶原(Plg)和D-二聚体水平变化,为AMI的治疗及预后判断提供依据。方法选择确诊为AMI患者93例,其中再通组77例,未通组16例;并选取同期非溶栓治疗的心肌梗死患者30例作为对照组。检测各组患者不同时间段血浆Fib、Plg和D-二聚体水平。结果 AMI患者溶栓治疗前Fib和D-二聚体水平高于对照组(P<0.05)。与溶栓前比较,AMI患者溶栓治疗6h后Fib和Plg水平明显降低(P<0.01),48h后基本恢复正常水平;AMI患者溶栓治疗6h后D-二聚体水平明显升高(P<0.01),7d后基本恢复正常水平。治疗前再通组与未通组比较,Fib、Plg和D-二聚体水平差异无统计学意义(P>0.05);溶栓治疗6h后,再通组Fib、Plg水平较未通组明显降低,D-二聚体水平明显升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论检测血浆Fib、Plg和D-二聚体水平的变化对AMI患者进行溶栓治疗效果监测具有重要的参考价值。

人纤维蛋白溶酶原中色氨酸残基的化学修饰

以N－溴代琥珀酰亚胺为修饰剂，对人纤维蛋白溶酶原（HPg）中色氨酸（Trp）残基的分布及其与酶活力的关系进行了研究，发现每个HPg分子有19个Trp残基，5个位于分子表面；有2个是快反应残基，其中1个是活性必需的氨基酸．酶被修饰后其荧光光谱及圆二色谱发生了变化．

人血纤维蛋白溶酶原K5环的基因合成、表达、纯化与活性鉴定

根据大肠杆菌遗传密码的偏爱性 ,人工合成人血纤维蛋白溶酶原 K5全基因 ,并在原核系统中以硫氧还蛋白融合蛋白的形式实现了高效表达 .重组蛋白通过 Ni2 +金属螯合层析得到初步纯化 ,通过肠激酶切割去除了融合标签 .应用鸡胚尿囊膜实验检测切割后的 rh K5的生物学活性 ,发现与对照组相比 ,rh K5能明显地降低血管管径、血管总面积以及血管总面积与视野面积的比值 ,表明切割后的产物具有显著抑制新生血管生成的生物学活性 .为进一步研究和开发抗血管生成药物奠定了基础 .

SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳纤维蛋白自显影法检测不同分子量的纤溶酶原激活剂

ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）纤维蛋白显影方法是经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ将不同分子量的纤溶酶原激活剂（ＰＡ）分开，然后再转溶纤维蛋白板使之产生溶带而检测ＰＡ物质活性及分子大小的方法。此法与Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹方法比具有检测更简便、灵敏、快速的特点，且是活性检测，但其分子量分析精度不如Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹法。本研究用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ纤维蛋白自显影方法对本室表达的重组组织型－ｐＡ（ｒｔ－ＰＡ）及突变体Ｎｌｌ７Ｑ／Ｎｌ８４Ｑ／△（Ｋ２９６——Ｇ３０２）及标准尿激酶（ＵＫ）和ｒｔ－ＰＡ进行了分析鉴定。

人纤维蛋白溶酶原的化学修饰

分别以乙基咪唑 (NAI)、 1 ,2 -环己二酮 (CHD)、碳二亚胺 (EDC)和氯氨 -T(Ch-T)作修饰剂 ,研究人纤维蛋白溶酶原 (HPg)中的酪氨酸、精氨酸、羧基和蛋氨酸残基对 HPg活性的影响 ,发现 HPg中的酪氨酸和精氨酸残基的修饰对 HPg活性影响不大 ,而羧基和蛋氨酸残基的修饰导致 HPg酶活性丧失 .按 Keech和Farrant动力学方法分析 ,得出有以两个羧基和一个蛋氨酸残基为 HPg活性的必需基团 。

乳中纤维蛋白溶酶及其酶原概述

叙述了乳中存在的纤维蛋白溶酶及其酶原与血液中的酶特性相似,在乳中与酪蛋白结合,并有较强的蛋白水解活性。探讨了该酶特性、存在形式及活性影响因素,最后对其活性测定作一介绍。

重组人组织纤维蛋白溶酶原激活剂联合人尿激肽原酶治疗急性缺血性脑卒中的疗效观察

目的观察重组人组织纤维蛋白溶酶原激活剂(recombinant tissue-type plasminogen activator,rt-PA)静脉溶栓联合人尿激肽原酶治疗急性缺血性脑卒中临床有效性和安全性。方法发病在4.5 h内接受rt-PA静脉溶栓治疗的急性脑梗死患者426例,随机分为重组人组织纤维蛋白溶酶原激活剂静脉溶栓联合人尿激肽原酶治疗组(A组,207例)和仅接受重组人组织纤维蛋白溶酶原激活剂静脉溶栓治疗对照组(B组,219例)。采用美国国立卫生研究院率中量表(NIHSS评分量表)在患者最初就诊时及治疗后对患者神经功能缺损情况进行评估。应用改良Rankin评分量表(mRS)评价患者出院3个月时远期预后情况。溶栓后24 h、7 d行多模式核磁检查(包括颅脑MRI、MRA、MR灌注,不能行颅脑MR检查患者行颅脑CT、CTA、CT灌注检查)并分析临床并发症的发生率。记录2组患者治疗前后血清中血管内皮生长因子(VEGF)及超敏C反应蛋白(hs-CRP)含量水平。结果治疗后2组NHISS评分较治疗前下降,但是A组结果显著优于B组,差异有统计学意义(P<0.05)。3个月随访时,A组神经功能预后良好129例(62.5%),B组患者为126例(57.4%),差异有统计学意义(P<0.05)。A组患者治疗后7 d发生颅内出血的有1例,B组有3例,均为非症状性颅内出血,2组差异无统计学意义(P=0.087)。A组患者接受治疗后VEGF水平显著升高,hs-CR水平降低,与B组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论重组人组织纤维蛋白溶酶原激活剂静脉溶栓联合人尿激肽原酶治疗可以显著改善患者预后,且不会增加不良事件发生率。提示重组人组织纤维蛋白溶酶原激活剂静脉溶栓联合人尿激肽原酶治疗急性缺血性脑卒中安全有效。

阻塞性睡眠呼吸暂停综合征患者纤维蛋白原Bβ448和纤溶酶原激活物抑制物-1 4G/5G基因多态性分析

目的 研究阻塞性睡眠呼吸暂停综合征 (OSAHS)患者纤维蛋白原 (Fg)含量与FgBβ448位点基因多态性及mRNA表达的关系 ,以及OSAHS患者纤溶酶原激活物抑制物 1(PAI 1 )活性 (PAI 1∶A)及含量 (PAI 1∶Ag)与PAI 1 4G/ 5G基因多态性及mRNA表达的关系。方法 依据睡眠呼吸监测的结果 ,将实验对象分为正常对照组与OSAHS组 ,分别测定其血浆Fg含量、PAI 1∶A、PAI 1∶Ag和FgBβ448位点、PAI 1 4G/ 5G基因多态性 (RFLP)及mRNA表达 (cDNA合成 )。结果 OSAHS患者FgBβ448位点A/A基因型出现频率显著低于对照组 ,A/L +L/L基因型出现频率显著高于对照组。不同基因型对FgmRNA表达有不同的影响 ,其中L/L基因型mR NA表达最高 ,其次为A/L基因型 ,A/A基因型mRNA表达最低。FgmRNA的表达量与血浆Fg水平呈显著正相关 ;OSAHS患者PAI 1 4G/ 4G +4G/ 5G基因型出现频率显著高于对照组。不同基因型对PAI 1mRNA表达的影响各异 ,其中 4G/ 4G基因型mRNA表达最高 ,其次为 4G/ 5G基因型 ,5G/ 5G基因型mRNA表达最低。FgmRNA的表达量与血浆PAI 1∶A及PAI 1∶Ag水平呈显著正相关。结论 OSAHS患者存在凝血系统功能亢进和纤溶系统功能降低 ,可能是其易于罹患心血管系统疾病的原因之一 ,但OSAHS与心血管疾病及其危险因素之间的相互关系尚待进?

人纤维蛋白溶酶原kringle5(K5)抑制小鼠肝癌的血管生成和肿瘤生长

【目的】体内、体外实验观察人纤维蛋白溶酶原kringle5(K5)对肝癌血管生成和肿瘤生长的影响。【方法】大肠杆菌中表达,组氨酸结合柱亲和层析、纯化获得K5蛋白,SDS-PAGE和Westernblot方法鉴定K5蛋白的表达;MTT法分析K5对牛视网膜毛细血管内皮细胞(BRCEC)和肝癌细胞株Bel-7402、HepG2增殖的影响;建立皮下种植肝癌鼠模型,瘤内注射K5,检测抑瘤率及肝癌组织微血管密度(MVD)。【结果】SDS-PAGE及Westernblot鉴定获得K5纯化蛋白;K5特异性地抑制BRCEC的增殖,IC50=160nmol/L,而对肝癌细胞株Bel-7402、HepG2的增殖无抑制作用;K5显著抑制小鼠肝癌生长,治疗组肝癌组织MVD明显低于对照组。【结论】K5抑制移植性小鼠肝癌血管生成和肿瘤生长,特异性抑制血管内皮细胞的增殖可能是K5抑制肝癌血管生成的主要机制。K5具有治疗肝癌的潜在临床价值。

抗生育药对大鼠培养颗粒细胞纤维蛋白溶酶原激活因子和孕酮分泌的影响

采用纤维蛋白铺盖和放射免疫方法研究了米非司酮 (RU486)和 18-甲基炔诺酮 (NG)对大鼠培养颗粒细胞纤维蛋白溶酶原激活因子和孕酮分泌的作用 ,结果显示 RU486和 NG能明显抑制培养细胞孕酮分泌 ,同时可拮抗人绒毛膜促性腺激素促进孕酮分泌的作用。但它们对颗粒细胞和卵母细胞分泌纤维蛋白溶酶原激活因子 (PA)的作用没有明显的作用 ,提示 RU486和 NG发挥抗生育作用主要是通过影响内分泌 ,而不是通过影响

重组组织型纤维蛋白溶酶原激活剂静脉溶栓治疗超早期脑梗死患者临床分析

目的:探讨rt-PA(重组组织型纤维蛋白溶酶原激活剂)治疗超早期脑梗死(<6h)的有效性和安全性。方法:对55例发病6小时以内的急性脑梗死患者进行分析,其中16例接受rt-PA静脉溶栓治疗。结果:两组治疗后NIHSS评分、Barthel指数、mRS评分比较差异有统计学意义。两组脑出血发生率差别无统计学意义。结论:符合溶栓治疗条件的超早期脑梗死患者,采用rt-PA治疗是安全有效的,能够改善神经功能,恢复生活能力。

紫外线照射对皮下瘀斑纤维蛋白溶酶原纤维蛋白原及抗凝血酶Ⅲ的影响

紫外线照射显著地促进外伤性瘀斑的吸收,经皮肤照射具有激活血中纤维蛋白溶解系统活性的作用。血液的凝血与纤溶是两组平衡的系统,当纤溶系统活性提高后,凝血系统的反应如何?对此,我们进行了有关因子测定,并观察了紫外线照射对动、静脉穿刺及抗凝治疗所致瘀斑吸收的影响。

灯盏细辛对犬急性心肌缺血时组织纤维蛋白溶酶原激活剂和纤溶酶原激活物抑制剂的影响

本实验观察灯盏细辛对犬急性心肌缺血早期组织纤维蛋白溶酶原激活剂(tPA)、纤溶酶原激活物抑制剂(PAI)的影响。结果表明:灯盏细辛能够明显抑制缺血后 PAI 浓度增高。与对照组和潘生丁比较,在缺血30min、60min、6h 时有显著性差异。随着时间延长,差异越来越显著,在缺血后6h 最明显(P<0.01)。另一方面,灯盏细辛还能够使 tPA 浓度维持相对恒定。在缺血后6h 时与对照组或潘生丁比较,有显著性差异。灯盏细辛对急性心肌缺血时 tPA、PAI 的影响可能是灯盏细辛抗心肌缺血的作用原理。