重组LysargiNase蛋白酶的表达纯化及其在蛋白质组学层面的分析

在蛋白质组学中,胰蛋白酶具有最优秀的酶切特异性及最广泛的应用,然而胰蛋白酶在特定研究中作用仍然有限。作为胰蛋白酶镜像酶,LysargiNase能够特异性切割蛋白质或多肽中赖氨酸与精氨酸位点的氨基端肽键,被认为具有部分替代胰蛋白酶的潜力。为系统分析LysargiNase在蛋白质组学中的应用价值,本研究设计出带有His-tag标签的重组质粒,并在原核表达系统中顺利表达出重组LysargiNase蛋白酶,经测试具有预期活性及酶切特异性。将重组LysargiNase与胰蛋白酶的酶切结果进行对比,显示两种蛋白酶的酶切结果存在很高的互补性,LysargiNase酶能够提高胰蛋白酶酶切的鉴定序列覆盖度。对比重组LysargiNase与两种商品化产品的酶切效率,结果显示3种蛋白酶的性能相近,乙酰化样品的酶切位点识别特异性极高。此外,综合评价几种化学修饰对LysargiNase酶切效率的影响,发现酶原水平的双甲基化修饰与活化水平的乙酰化修饰均能够提高LysargiNase的酶切效率。