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CRISPR/Cas9技术在组蛋白去甲基化酶Kdm^(2)b基因大片段敲除小鼠模型构建中的应用
1
作者
陈素珠
笪琳萃
+3 位作者
黄志清
巍巍
黄鹏宇
郑备红
《山东医药》
CAS
2021年第27期47-50,共4页
目的观察CRISPR/Cas9技术在组蛋白去甲基化酶Kdm^(2)b基因大片段敲除小鼠模型构建中的应用效果。方法首先,在Kdm^(2)b基因第7个外显子的5’端和第9个外显子的3’端各设计两个向导RNA(sgRNA),分别插入PX459载体构建重组质粒;将四种sgRNA...
目的观察CRISPR/Cas9技术在组蛋白去甲基化酶Kdm^(2)b基因大片段敲除小鼠模型构建中的应用效果。方法首先,在Kdm^(2)b基因第7个外显子的5’端和第9个外显子的3’端各设计两个向导RNA(sgRNA),分别插入PX459载体构建重组质粒;将四种sgRNA的重组质粒两两组合(sgRNA3-1和sgRNA5-1、sgRNA3-1和sgRAN5-2、sgRNA3-2和sgRNA5-1、sgRNA3-2和sgRAN5-2),然后转染入小鼠NIH3T3细胞,筛选出sgRNA3-2和sgRAN5-2为Kdm^(2)b基因敲除的最佳组合。对3~6周龄C57BL/6母鼠进行诱导排卵,使之与公鼠交配,授精成功后处死母鼠,取出受精卵,放入培养液中培养。最后,利用细胞质显微注射技术在小鼠原核期胚胎中注射sgRNA3-2、sgRAN5-2和Cas9的mRNA,将存活的胚胎移植到假孕母鼠输卵管壶腹部。待小鼠出生1周左右,剪取尾尖,用酚/氯仿法抽提尾尖中的基因组DNA,并进行琼脂糖凝胶电泳及基因测序;纯合子小鼠在出生4周后,观察其表型。结果最终获得13只小鼠。经过基因鉴定,Kdm^(2)b基因大片段缺失的纯合子小鼠1只,杂合子小鼠3只,另外9只Kdm^(2)b基因未见改变;纯合子小鼠鼠尾组织中Kdm^(2)b基因中的外显子7至外显子9基因序列缺失。纯合子小鼠在初生4周后,出现卷尾。结论应用CRISPR/Cas9技术成功构建了去甲基化酶Kdm^(2)b基因大片段敲除的小鼠模型。
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关键词
CRISPR/Cas9技术
组蛋白去甲基化酶
Kdm^(
2
)
b
基因
基因敲除小鼠
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职称材料
题名
CRISPR/Cas9技术在组蛋白去甲基化酶Kdm^(2)b基因大片段敲除小鼠模型构建中的应用
1
作者
陈素珠
笪琳萃
黄志清
巍巍
黄鹏宇
郑备红
机构
福建省妇幼保健院福建医科大学附属医院生殖医学中心
出处
《山东医药》
CAS
2021年第27期47-50,共4页
基金
福建省自然科学基金资助项目(2018J1233)
福建省自然科学基金资助项目(2019J01511)
国家重点研发计划项目(2018YFC1002105)。
文摘
目的观察CRISPR/Cas9技术在组蛋白去甲基化酶Kdm^(2)b基因大片段敲除小鼠模型构建中的应用效果。方法首先,在Kdm^(2)b基因第7个外显子的5’端和第9个外显子的3’端各设计两个向导RNA(sgRNA),分别插入PX459载体构建重组质粒;将四种sgRNA的重组质粒两两组合(sgRNA3-1和sgRNA5-1、sgRNA3-1和sgRAN5-2、sgRNA3-2和sgRNA5-1、sgRNA3-2和sgRAN5-2),然后转染入小鼠NIH3T3细胞,筛选出sgRNA3-2和sgRAN5-2为Kdm^(2)b基因敲除的最佳组合。对3~6周龄C57BL/6母鼠进行诱导排卵,使之与公鼠交配,授精成功后处死母鼠,取出受精卵,放入培养液中培养。最后,利用细胞质显微注射技术在小鼠原核期胚胎中注射sgRNA3-2、sgRAN5-2和Cas9的mRNA,将存活的胚胎移植到假孕母鼠输卵管壶腹部。待小鼠出生1周左右,剪取尾尖,用酚/氯仿法抽提尾尖中的基因组DNA,并进行琼脂糖凝胶电泳及基因测序;纯合子小鼠在出生4周后,观察其表型。结果最终获得13只小鼠。经过基因鉴定,Kdm^(2)b基因大片段缺失的纯合子小鼠1只,杂合子小鼠3只,另外9只Kdm^(2)b基因未见改变;纯合子小鼠鼠尾组织中Kdm^(2)b基因中的外显子7至外显子9基因序列缺失。纯合子小鼠在初生4周后,出现卷尾。结论应用CRISPR/Cas9技术成功构建了去甲基化酶Kdm^(2)b基因大片段敲除的小鼠模型。
关键词
CRISPR/Cas9技术
组蛋白去甲基化酶
Kdm^(
2
)
b
基因
基因敲除小鼠
Keywords
clustered regularly interspaced short palindromic repeats/CRISPR-associated proteins 9(CRISPR/Cas9)technology
histone
demethylase
s
Kdm^(
2
)
b
gene
gene knockout mice
分类号
R394 [医药卫生—医学遗传学]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
CRISPR/Cas9技术在组蛋白去甲基化酶Kdm^(2)b基因大片段敲除小鼠模型构建中的应用
陈素珠
笪琳萃
黄志清
巍巍
黄鹏宇
郑备红
《山东医药》
CAS
2021
0
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