乙醇对结核分枝杆菌M_r 38000蛋白在大肠杆菌中可溶性表达的促进作用

目的:探讨乙醇促进结核分枝杆菌Mr38000蛋白 的可溶性表达,并获得可溶性的Mr38000重组蛋白.方法: 采用聚合酶链反应(PCR)从结核分枝杆菌H37Rv基因组中 扩增出Mr38000蛋白的编码基因,用限制性内切酶消化后插 入载体pGEX 4T 2中,将重组质粒转化大肠杆菌BL21,在乙 醇添加剂存在下,经IPTG诱导,表达GST 38融合蛋白;聚丙 烯酰胺凝胶电泳(SDS PAGE)分析融合蛋白的相对分子质量 及表达形式,免疫印迹法鉴定融合蛋白的活性.结果:经PCR 扩增后证实为Mr38000蛋白的基因,成功构建了具有正确基 因序列的重组表达载体,在大肠杆菌BL21中诱导表达融合蛋 白约占菌体总蛋白的18%.在乙醇存在下,可溶性目的蛋白的 表达量约是无乙醇时的5倍.结论:在原核表达中乙醇作为一 种添加剂可以促进结核分枝杆菌Mr38000蛋白在大肠杆菌 BL21中的可溶性表达.