清肝利胆汤联合腹腔镜手术对急性胆囊炎患者的疗效及血清TnI、M-CSF水平的影响

【目的】探究清肝利胆汤联合腹腔镜手术对急性胆囊炎患者的疗效及血清肌钙蛋白I(TnI)、巨噬细胞集落刺激因子(MCSF)水平的影响。【方法】将80例急性胆囊炎肝胆湿热证患者随机分为手术组和联合组,每组各40例。手术组患者给予腹腔镜手术治疗,联合组给予清肝利胆汤联合腹腔镜手术治疗,连续服药2周。比较2组患者术后恢复情况(首次排气时间及发热症状、胃肠道症状、右上腹痛消失时间),观察2组患者治疗前后中医证候积分,血清TnI、M-CSF水平及氧化应激指标[皮质醇(COR)、超氧化物歧化酶(SOD)、活性氧(ROS)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)]的变化情况,并评价2组患者的临床疗效。【结果】(1)治疗2周后,联合组的总有效率为95.00%(38/40),手术组为75.00%(30/40),组间比较,联合组的疗效明显优于手术组(P<0.05)。(2)联合组患者的首次排气时间及发热症状、胃肠道症状、右上腹痛消失时间均低于手术组(P<0.01)。(3)治疗后,2组患者中医证候积分均较治疗前明显下降(P<0.01),且联合组的下降幅度明显优于手术组(P<0.01)。(4)治疗后,2组患者血清TnI、M-CSF水平均较治疗前明显下降(P<0.01),且联合组的下降幅度均明显优于手术组(P<0.01)。(5)治疗后,2组患者血清COR、ROS水平均较治疗前升高(P<0.01),血清SOD、GSH-Px水平均较治疗前下降(P<0.01),但联合组血清COR、ROS水平的升高幅度及血清SOD、GSH-Px水平的下降幅度均明显小于手术组(P<0.01)。【结论】清肝利胆汤联合腹腔镜手术治疗急性胆囊炎肝胆湿热证患者疗效确切,可有效降低患者血清TnI、M-CSF水平,减轻氧化应激反应,促进术后恢复。

小柴胡汤对CFA大鼠血清细胞因子TNF-α、IL-1β、IL-6、M-CSF作用的实验研究

目的基于治疗前后完全弗氏佐剂(CFA)大鼠血清细胞因子TNF-α、IL-1β、IL-6、M-CSF的表达,探讨小柴胡汤(XCHT)治疗类风湿关节炎的机制。方法动物实验将SPF级健康成年雌性Wistar大鼠应用弗氏完全佐剂和牛Ⅱ型胶原制备大鼠类风湿关节炎CFA动物模型。根据随机数字表,将大鼠随机分为正常组、模型组、XCHT低剂量组、XCHT中剂量组、XCHT高剂量组、雷公藤多苷组。造模后分别按照药物干预方案, 2 mL/次,日3次灌胃,实验观察大鼠一般状态、关节炎状态及酶联免疫吸附测定大鼠血清中细胞因子TNF-α、IL-1β、IL-6、M-CSF的含量。结果大鼠随着小柴胡汤剂量的增加,一般状态及关节炎状态改善。在血清炎性细胞因子TNF-α、IL-1β、IL-6、M-CSF检测方面,随着小柴胡汤剂量的增大,其表达逐渐降低,与模型组比较,小柴胡汤中及高剂量统计结果显示P<0.01,降低很显著。结论本研究显示小柴胡汤随着剂量的增加,可以改善CFA大鼠的一般状态及关节炎状态。小柴胡汤能够通过抑制炎性细胞因子TNF-α、IL-1β、IL-6、M-CSF的表达,抑制炎症反应,从而延缓骨破坏,为中药方剂治疗类风湿关节炎提供基础实验依据。

毛冬青甲素对兔颈总动脉球囊损伤后炎性因子IL-6和M-CSF的影响

目的:观察毛冬青甲素(Ilexonin,IA)对兔颈总动脉球囊损伤后炎性因子IL-6、M-CSF的影响,为冠脉内介入治疗提供实验依据。方法:日本大耳白兔30只,高胆固醇饲料喂养4周后随机分为3组(每组10只):对照组,右颈外动脉切开后直接缝合切口;球囊扩张组,右颈外动脉切开并内膜球囊损伤后缝合动脉与伤口;IA治疗组,操作同球囊扩张组,缝合切口后静脉给予IA。三组实验兔继续高胆固醇饮食4周。术前1d,术后1d、1周、2周、4周采集血清,放免法测定白细胞介素-6(IL-6)、巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)。取损伤血管段,病理观察动脉病理改变。结果:①球囊扩张组术后血清IL-6水平明显高于IA治疗组(P<0.05),且较IA治疗组恢复延迟;②IA治疗组术后血清M-CSF水平虽增高,但低于球囊扩张组(P<0.05),且恢复术前血清水平时间也较球囊扩张组明显提前(P<0.05);③血管内皮病理变化:颈动脉损伤后对照组内膜光滑,未见泡沫细胞;球囊扩张组内膜增厚,血管平滑肌细胞增生,可见较多泡沫细胞,管腔狭窄;IA治疗组较球囊扩张组泡沫细胞减少,管腔狭窄程度明显减轻。结论:IA能降低动脉内膜球囊损伤后炎性因子IL-6、血清M-CSF水平,并抑制被损伤内膜血管平滑肌细胞增生。

G(M)-CSF治疗放化疗引起的口腔黏膜炎的临床观察

目的:观察因接受同步放化疗而出现白细胞低下并同时伴有口腔黏膜炎的局部晚期头颈部肿瘤患者,在接受G(M)-CSF治疗以提升白细胞的同时,G(M)-CSF对口腔黏膜炎的治疗作用.方法:15例局部晚期头颈部肿瘤病人在接受同步放化疗中,当白细胞≤1.5×109/L并同时伴有Ⅲ～Ⅳ度口腔黏膜炎时,给予G-CSF(惠尔血)150～300μg/日或G(M)-CSF(生白能)200～300 μg/日,皮下注射,连用5～10 d.结果:所有病人的白细胞均提升至5.0×109/L以上,口腔黏膜炎1例痊愈(CR),8例好转(PR),6例稳定(NC),无1例进展(PD),总有效率(CR+PR)为60%.结论:G(M)-CSF在有效提升白细胞的同时,对同时伴有的口腔黏膜炎有明显的治疗作用.

过表达外源M-CSF促进MCF7细胞增殖

为探讨过表达外源巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)对细胞增殖的影响,将重组载体pCMV/cyto/myc-M-CSF转染MCF7细胞、G418筛选,RT-PCR、Western印迹和免疫荧光鉴定M-CSF的mRNA表达、蛋白表达及定位,通过计算细胞倍增时间、MTT法及反义寡核苷酸抑制实验分析M-CSF对细胞增殖的影响.结果表明,转染M-CSF的MCF7细胞过表达M-CSF mRNA及蛋白,并且定位表达于细胞质;与转染空载体及未转染M-CSF组细胞比较,转染M-CSF的MCF7细胞倍增时间明显缩短、增殖能力显著增强,M-CSF的特异性反义寡核苷酸能抑制转染M-CSF的MCF7细胞的增殖,且抑制率随着反义寡核苷酸浓度的增高而增强;以上结果提示,胞质过表达M-CSF可促进MCF7细胞的增殖.

M-CSF、GM-CSF诱导人源外周血单个核细胞来源巨噬细胞的不同极化和吞噬

目的观察人源外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMC)在体外培养诱导单核巨噬细胞时是否因刺激剂M-CSF、GM-CSF的不同而造成极化状态差异,并衡量极化状态差异是否伴有吞噬能力的改变,并寻找可能相关的免疫表型标记。方法取健康献血员新鲜外周白膜血,分离获得PBMC后,每一份PBMC都分为MCSF、GMCSF组,分别对应M-CSF或GM-CSF作为诱导剂。培养d7时用诱导得到的单核巨噬细胞分别和致敏红细胞、未致敏红细胞、血小板(Plt)以及葡聚糖-40(dextran-40)共孵育,模拟MMA(单核细胞单层实验),利用流式细胞仪观察吞噬结果。同时用流式分析2组细胞的CD11C、CD14、CD15、CD16、DR、CD32、CD32b、CD49f、CD54、CD64、CD68、CD86、CD163等免疫表型。所有得到的结果进行配对t检验分析差异。结果 MCSF、GMCSF组CD14+CD16+细胞占比分别为(62.6±33.7)%vs(22.8±15.6)%,CD163+CD14+细胞(29.7±18.7 vs 0.64±0.42), CD14 MFI 3 829±2 091vs464±101,(P均<0.05)。同时MCSF组伴随CD64+(45.7±25)%vs(24.5±19)%、CD32b+(59.5±22.4)%vs(27.5±11.8)%细胞占比增高,CD32+、HLA-DR+细胞数虽然无明显变化,但其MFI分别较GMCSF组增高和降低(MFI CD32 1 093±380vs530±179;MFI DR 1 034±290vs1 661±367)。同时发现MCSF组具有较强的吞噬力,对被吞物的吞噬力多数为Plt> Dextran-40>致敏RBC>非致敏RBC。结论证实了人源PBMC诱导的单核巨噬细胞在体外培养时同一起源样品也可因M-CSF、GM-CSF而促成不同极化方向, M-CSF促进M2型极化, GM-CSF促进M1型极化,并由此影响对致敏红细胞、血小板(Plt)以及葡聚糖-40的吞噬能力,因此在临床使用M-CSF、GM-CSF时需注意单核巨噬细胞的极化方向,采取更有利于患者治疗和临床实验的制品。

通脉液对冠状动脉粥样硬化性心脏病患者血清ET、IL-18、M-CSF的影响

目的:观察通脉液(黄芪、当归、川芎、丹参、地龙、石菖蒲、郁金和炒元胡)对冠状动脉粥样硬化性心脏病(CHD)患者血清内皮素(ET)、白细胞介素-18(IL-18)、巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)的影响。方法:将80例CHD心脾气虚兼痰瘀气滞证患者随机分为两组,治疗组40例,口服通脉液30mL,3次/d,疗程30d;对照组40例,口服麝香保心丸,2粒/次,3次/d,疗程30d。治疗前后采集空腹静脉血,测定血清ET、IL-18、M-CSF水平。结果:两组治疗后血清ET、IL-18、M-CSF水平显著降低(P<0.05),两组治疗后血清ET水平比较,有显著差异(P<0.05),血清IL-18、M-CSF水平比较,无显著差异(P>0.05)。结论:通脉液能降低CHD患者ET、IL-18、M-CSF水平,且无任何毒副作用。

子宫内膜异位症患者治疗前后血清hs-CRP、IL-6、IL-8和M-CSF测定的临床意义

目的:探讨了子宫内膜异位症患者治疗前后血清hs-CRP、IL-6、IL-8和M-CSF水平的变化及临床意义。方法:采用放射免疫分析和免疫比浊法对33例子宫内膜异位症患者进行了血清hs-CRP、IL-6、IL-8和M-CSF测定,并与35名正常健康人作比较。结果:在治疗前血清hs-CRP、IL-6、IL-8和M-CSF水平非常显著地高于正常人组(P<0.01),经系统治疗后3个月,则与正常人比较无显著性差异(P>0.05)。结论:检测子宫内膜异位症患者血清hs-CRP、IL-6、IL-8和M-CSF水平的变化对探讨其发病机理、预防和指导用药均具有重要的临床价值。

冠心病患者血清hs-CRP和M-CSF检测的临床意义

目的:探讨了冠心病患者血清超敏C反应蛋白(hs-CRP)和巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)检测的临床意义。方法:应用免疫比浊法测定hs-CRP、放免法测定M-CSF,对71例冠心病患者进行了测定,其中稳定型心绞痛35例,不稳定型心绞痛21例,急性心肌梗死15例,进行了血清hs-CRP和M-CSF水平的测定,并以35名正常健康人作比较。结果:冠心病患者血清hs-CRP和M-CSF水平明显地高于正常人组(P<0.01),急性心肌梗死组和不稳定型心绞痛组又高于稳定型心绞痛组(P<0.05),冠心病组血清hs-CRP、M-CSF水平与冠状动脉狭窄程度无明显的相关性(P>0.05)。结论:血清hs-CRP、M-CSF水平的变化与冠心病的发生、发展有关,但与冠状动脉狭窄程度无关。

骨巨细胞瘤瘤组织中M-CSF、TNF-α的检测及其意义

目的 :探讨细胞因子与骨巨细胞瘤局部溶骨的关系。方法 :通过ELISA法、Westernblot法和免疫组化法对 10例骨巨细胞瘤、5例骨肉瘤和 5例正常人血清进行了TNF -α和M -CSF表达及定位检测。结果 :骨巨细胞瘤组织TNF -α含量和M -CSF表达率明显高于骨肉瘤和正常人血清。TNF -α由骨巨细胞的部分单核基质细胞和多核巨细胞分泌 ;而M -CSF由部分单核基质细胞分泌 ,多核巨细胞则不表达。结论

骨皮质切开术辅助大鼠正畸牙移动中M-CSFmRNA,ANKLmRNA,OPGmRNA的研究

目的:观察M-CSF(巨噬细胞集落刺激因子),RANKL(核激活因子KB受体活化因子配体),Osteoprotegerin(骨保护蛋白)在大鼠骨皮质切开术辅助正畸牙移动过程中的表达情况。方法:选取健康雄性Wistar大鼠65只,60只大鼠随机分成3组:组Ⅰ:选择性骨皮质切开术组;组Ⅱ:传统牙齿移动组;组Ⅲ:混合组,剩余5只作为空白对照组(不作任何处理)。用镍钛螺旋拉簧施加约60g力近中移动上颌实验侧第一磨牙,在第一磨牙颊腭侧行打孔式骨皮质切开术,分别在加载第7、14、21、28、42d颈椎脱臼处死取材,应用SYBR Green实时荧光定量技术和MxPro-Mx3000P软件对取材进行分析。结果:组Ⅲ的破骨细胞主要调节因子和生化标记物:M-CSF(巨噬细胞集落刺激因子),RANKL(核激活因子KB受体活化因子配体)的表达与组Ⅰ和组Ⅱ相比增加,暗示组Ⅲ骨吸收活跃。组Ⅲ与组Ⅱ相比,呈现出独特的牙槽骨改建模式:藕联的RANKL和OPG促进牙槽骨改建。结论:正畸牙齿移动初期骨皮质切开术加速了牙齿移动,改变了早期骨代谢状态,破骨活跃,支持区域性骨代谢加速学说。

慢性前列腺炎患者治疗前后血清IL-6、IL-8和M-CSF测定的临床价值

目的:探讨慢性前列腺炎患者治疗前后血清IL-6、IL-8和M-CSF检测的临床意义。方法:应用放射免疫分析对33例慢性前列腺炎患者进行了治疗前后血清IL-6、IL-8和M-CSF检测,并与35例正常健康人作比较。结果:慢性前列腺炎患者在治疗前血清IL-6、IL-8和M-CSF水平非常显著地高于正常人组(P<0.01),经治疗2个月后与正常人组比较无显著性差异(P>0.05)。结论:检测慢性前列腺炎患者血清IL-6、IL-8和M-CSF水平的变化可作为病情及预后评价的重要指标。

M-CSF和RANKL体外诱导培养小鼠破骨样细胞及其骨吸收功能的动态观察

目的以巨噬细胞集落刺激因子(Macrophage colony-stimulating factor,M-CSF)和核因子κB受体激动剂配体(Ligand of receptor activator of NF-κB,RANKL)联合体外诱导小鼠骨髓干细胞分化为破骨样细胞,并对其骨吸收功能进行动态观察。方法分离小鼠四肢骨获取骨髓干细胞,以M-CSF和RANKL诱导培养,将盖玻片及骨磨片置入培养基内,在诱导培养的第3,6,9天分别对盖玻片行抗酒石酸酸性磷酸酶(The tartrate-resistant acid phosphatase TRAP)染色,观察细胞形态和染色情况,并计算破骨样细胞数量;同时对骨磨片进行骨吸收陷窝的观察。结果诱导培养3 d后出现含TRAP(+)颗粒的细胞,可见淡染单核和双核;诱导培养6 d后可见TRAP(+)细胞较诱导培养3 d时增多,仍以双核为主;诱导培养9 d后出现多核巨型TRAP(+)细胞,细胞核达到3个以上。并且随着诱导培养的时间延长,破骨样细胞数量逐渐增长。诱导培养第3,6天骨磨片上均未发现骨吸收陷窝,第九天出现不同形态的呈蓝紫色的吸收陷窝。结论 M-CSF和RANKL联合体外诱导小鼠骨髓干细胞形成破骨样细胞是一种有效的诱导培养方法,本实验在诱导培养第九天发现破骨样细胞具有骨吸收功能。

M-CSF在青少年特发性脊柱侧凸患者成骨细胞中的表达及意义

目的从成骨细胞(osteoblast,OB)水平探讨巨噬细胞集落因子(macrophage colony stimulating factor,MCSF)与青少年特发性脊柱侧凸(adolescent idiopathic scoliosis,AIS)患者骨量降低的关系。方法AIS患者27例,其中男25例,女2例;年龄12～18岁,平均14.9岁;Cobb角40°～94°,平均57.3°。将所有AIS患者分为两组:A组14例,为骨量正常患者;B组13例,为骨量减低患者。正常对照组8例(定为C组),年龄12～18岁,平均15.3岁。3组均采用双能X线吸收测量仪(dual-energy X-ray absorptiometry,DEXA)测量骨密度(bone mineral density,BMD),测量部位包括非优势侧股骨近端及腰椎。所有受试者术中取适量髂前上嵴的松质骨,运用植块法培养成骨细胞。培养至P3代后行表型鉴定,用RT-PCR检测AIS组和正常对照组中M-CSF mRNA的表达水平。结果B组中M-CSFmRNA的表达量均较A组(P<0.05)和C组高(P<0.05),A组与C组M-CSFmRNA的表达量无显著统计学差异(P>0.05)。结论M-CSF在OB水平mRNA表达强度的异常可能与AIS骨量降低的分子机制相关。

巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)融合EGFP真核表达载体的构建及表达

目的构建真核表达重组体pEGFP-M-CSF,并鉴定其在小鼠成纤维细胞NIH3T3细胞能否正确表达。方法PCR扩增M-CSF基因,定向克隆入带有EGFP报告基因的真核表达载体,构建真核表达重组体pEGFP-M-CSF,脂质体介导将pEGFP-M-CSF转染入NIH3T3细胞,以一步法RT-PCR检测其在NIH3T3细胞中的表达情况。结果双酶切及测序鉴定证明成功构建真核表达重组体pEGFP-M-CSF,并在NIH3T3细胞中成功地表达了融合荧光蛋白,RT-PCR检测结果显示RT-PCR扩增产物与M-CSF目的基因片段大小相符,确实源于重组质粒转录后的mR-NA。结论真核表达重组体pEGFP-M-CSF的成功构建及在体外真核细胞中有效表达,为进一步研究M-CSF在真核细胞中的信号调控奠定了一定的实验基础。

M-CSF对人卵巢颗粒细胞表达FSH与其受体的影响及相互作用研究

目的通过研究巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)对卵巢颗粒细胞表达卵泡刺激素(FSH)与其受体(FSHR)的影响及其与FSH之间的相互作用,探讨M-CSF在卵泡发育中的作用。方法体外培养人卵巢肿瘤颗粒细胞系COV434,分别给予不同浓度的M-CSF(0、5、10、25、50、100ng/ml)进行干预,24h后收取细胞和培养上清液,用荧光定量PCR法检测颗粒细胞内FSH受体表达量的变化,并用同法检测FSH对M-CSF及其受体M-CSFR的作用。用ELISA方法对上清液中细胞分泌的雌二醇(E_2)进行检测,观察M-CSF对颗粒细胞分泌E_2的影响。结果 M-CSF可使颗粒细胞FSHR的表达上升,呈剂量依赖性,当M-CSF浓度>10ng/ml时,上升更为明显(P<0.01);FSH可以提升M-CSF及其受体在颗粒细胞内的表达,但当FSH浓度过高时(>50ng/ml),此作用消失;M-CSF和FSH在体外条件下达到一定浓度后可以促进E_2的分泌。结论 M-CSF能够促进颗粒细胞表达FSH受体和分泌E_2,协助FSH发挥促卵泡发育的作用。

NIH3T3细胞核内过表达的M-CSF对细胞运动的影响

目的构建M-CSF细胞核内定位表达载体pCMV/M-CSF,探讨核内M-CSF对NIH3T3细胞运动的影响。方法采用PCR的方法扩增人M-CSF活性片段,将其插入核内真核表达载体pCMV/myc/nuc,构建重组体pCMV/M-CSF,经脂质体介导转染NIH3T3细胞,G418筛选后,用免疫细胞化学及Western blot鉴定其在真核细胞中的表达及定位分布,用细胞划痕实验测定M-CSF进入细胞核后对细胞运动能力的影响。结果限制性双酶切及DNA测序分析结果显示插入pCMV/M-CSF的片段为1400bp左右,与预期M-CSF分子大小相当。Western blot结果显示转染pCMV/M-CSF的NIH3T3细胞能稳定表达M-CSF蛋白;免疫细胞化学结果显示表达的M-CSF定位于NIH3T3细胞核。细胞划痕实验显示转染pCMV/M-CSF的NIH3T3细胞有较强的运动能力。结论成功构建M-CSF核内定位表达载体pCMV/M-CSF,核内M-CSF可加强NIH3T3细胞运动。

用于酵母双杂交的M-CSF诱饵载体的构建和鉴定

目的 构建用于酵母双杂交系统的结合域(bindingdomain ,BD)诱饵载体pGBKT7-M -CSF ,并检测其是否具有自身激活作用。方法 用PCR方法从M -CSFcDNA中扩增出M -CSF的胞外活性区,引入酶切位点SalⅠ、NcoⅠ,与pGBKT7载体连接起来,并检测pGBKT7-M -CSF在酵母双杂交系统3中的自激活作用。结果 成功构建了BD诱饵载体pGBKT7-M -CSF ,并证明其在酵母双杂交系统中无自激活作用。结论 pGBKT7-M -CSF可以用于酵母双杂交系统中,找出与M -CSF相互作用的分子。

支气管哮喘患儿治疗前后血清IL-6、IL-10和GM-CSF检测的临床意义

目的:探索了支气管哮喘患儿治疗前后血清IL-6、IL-10和GM-CSF水平的变化及临床意义。方法:应用放射免疫分析对33例支气管哮喘患儿进行了治疗前后血清IL-6、IL-10和GM-CSF测定,并与30名正常健康儿作比较。结果:支气管哮喘患儿在治疗前后血清IL-6、IL-10和GM-CSF水平均非常显著地高于正常儿(P<0.01),经治疗三个月后则与正常儿组比较无显著性差异(P>0.05)。结论:检测血清IL-6、IL-10和GM-CSF水平变化对支气管哮喘患儿的治疗、预后均具有重要的临床价值。

原因不明复发性流产患者Th1/Th2型细胞因子、M-CSF、封闭抗体检查价值分析

目的观察Th1/Th2型细胞因子、M-CSF(巨噬细胞集落刺激因子)、封闭抗体检查在原因不明复发性流产患者中的价值。方法临床资料采集2017年10月~2018年10月妇产科诊治的80例URSA患者(设观察组),另选取我院80例正常妊娠女性(设正常妊娠组),对两组Th1/Th2型细胞因子、M-CSF、封闭抗体进行检测,比较两组检测情况。结果观察组治疗后URSA的TNF-α(27.69±8.96)pg/mL、INF-γ(28.16±5.25)pg/mL、IL-2(25.76±8.56)pg/mL均高于正常妊娠组、治疗后正常妊娠水平,IL-4(2.19±0.86)pg/mL、IL-6(4.09±1.14)pg/mL、IL-10(1.35±0.33)pg/mL及M-CSF(89.77±8.68)pg/mL均低于正常妊娠组、治疗后正常妊娠水平,差异有统计学意义(P<0.05);观察组治疗前BA阳性率11.25%比正常妊娠组85.00%低,差异有统计学意义(P<0.05),观察组治疗后URSA的BA阳性率52.50%低于正常妊娠组85.00%、治疗后正常妊娠87.50%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论Th1/Th2型细胞因子、M-CSF、封闭抗体与原因不明复发性流产存在密切联系,其中Th1细胞因子表达高,Th2细胞因子及M-CSF表达性低,封闭抗体阳性率低时,易引起流产。