ICSI周期中人类MⅡ卵子形态对胚胎发育的影响

目的探讨胞浆内单精子注射技术(ICSI)中MⅡ卵子的形态及其影响因素以及卵母细胞形态学特性对其后胚胎质量的影响。方法选择江西省妇幼保健院辅助生殖中心2011年5月-2012年2月所有需行ICSI治疗的患者,共54个周期,采用常规超促排卵长方案,获得了812个MⅡ卵子,将其分成A组:正常卵子形态组;B组:卵子胞浆外异常组;C组:卵子胞浆内异常组;行ICSI操作后对D2-D3卵裂期胚胎进行评估,分别比较3组的受精率、卵裂率、胚胎质量,由此评估人类MⅡ卵子形态的异常是否对胚胎发育有显著性的影响。结果⑴A、B、C 3组间的卵子受精率、卵裂率均无显著的统计学差异(P>0.05)。A组正常形态的卵子的优质胚胎形成率显著高于B组(84.9%vs 51.8%,P<0.05)和C组(84.9%vs 44.9%,P<0.05)。⑵卵母细胞受精率降低与第一极体异常、卵周间隙增大和卵胞浆内出现空泡相关联。卵子胞浆内异常与卵母细胞发育能力低下相关。⑶原核的形态受到大的卵周间隙、扩散的胞浆内粗颗粒和/或出现中心颗粒区的影响。⑷形态异常的卵子,发育为低质量的胚胎的概率更高,尤其是卵子胞浆内异常组卵子,与其它形态学异常的特征相比,其优质胚胎率有显著性降低。(OR2.26,95%CI 1.25-4.08)。⑸根据每个卵子异常形态特点获得的优势比来达到至少一种结局,计算出MⅡ卵子形态学(MOMS)评分。MOMS与女性的年龄、基础FSH值和临床结局有显著的相关性。结论⑴ICSI的结局与获得卵子的质量密切相关。⑵行ICSI之前的卵母细胞形态学评估有助于确定卵子具有更高的发育潜能。⑶将卵子、受精卵、胚胎的形态学特性与胚胎的评分系统相结合,有助于选择优质胚胎进行移植。⑷本研究由于样本量较小,MⅡ卵子的形态学特征是否对胚胎种植率和临床妊娠率有显著性的影响仍不明确。

GMP玻璃化冷冻对水牛MⅡ期卵母细胞冷冻损伤和体外发育能力的影响

将体外成熟(IVM)24h的水牛卵母细胞随机分成对照组、冷冻剂毒性试验组、GMP玻璃化冷冻组,研究玻璃微细管法(GMP)冷冻对水牛MⅡ期卵母细胞冷冻损伤和体外受精后发育能力的影响。结果表明:冷冻剂毒性试验组的存活率显著高于GMP玻璃化冷冻组;在透明带消化时间上,冷冻剂毒性试验组和GMP玻璃化冷冻组显著高于对照组。在单精入卵率上,冷冻剂毒性试验组和GMP玻璃化冷冻组显著低于对照组;在无精子入卵率上,冷冻剂毒性试验组和GMP玻璃化冷冻组与对照组差异显著;而多精入卵率3组间差异不显著。卵母细胞冷冻后进行体外受精,3组之间的2-细胞率,8-细胞率和桑椹胚率差异均极显著。表明冷冻剂和GMP玻璃化冷冻均会引起水牛MⅡ期卵母细胞透明带硬化,降低精子穿透率和其体外受精的发育能力。

人MⅡ期卵母细胞极体及原核期形态分级对预测胚胎发育潜能的研究

目的对人MⅡ期卯母细胞的第一微体和D1双原核期的原核、核仁及胞浆进行形态分级，以预测胚胎发育潜能。方法以2009年6月-2012年6月在广西医科大学第一附属医院生殖医学研究中心接受卵胞浆内单精子硅微注射（ICS1）助孕治疗的269对不育夫妇（共269个移植周期）为研究对象。对所有获得的MⅡ期卵母细胞第一极体进行形态观察和分级，同时将D1双原核期的受精卵进行形态分级，分别比较其受精率、卵裂率、优质胚胎率、胚胎种植率及临床妊娠率。结果根据所移植的胚胎来自不同级别第一极体的MⅡ期卵和不同原核等级分为B组和C组，分别为102例和98例，其余为A组（69例）。移植来源于1～2级第一极体的MⅡ期卵母细胞且D1双原核期为Z1～Z2级的胚胎其受精牢、卵裂牢、种植率、优胚率及临床妊娠率均较高。结论人MⅡ期卵母细胞第一极体和D1双原核期受精卵的等级越高，胚胎发育的潜能就越好。从而提高ICSI的胚胎种植率及临床妊娠率。

MⅡ期卵子分级对卵母细胞胞浆内单精子注射临床妊娠率的影响

①目的 从MⅡ期卵子的第一极体、卵周隙和胞浆形态三方面综合探讨卵子质量对卵母细胞胞浆内单精子注射 (ICSI)后胚胎种植率、临床妊娠率的影响 ,从而将卵子质量作为胚胎移植选择优质胚胎的重要依据。②方法 对ICSI中去除颗粒细胞后的MⅡ期卵子在光镜下从第一极体、卵周隙和胞浆形态三方面按形态综合表现进行分级。分别比较由各级卵子发育来的胚胎种植率和临床妊娠率。③结果 移植全部由Ⅰ级卵子发育来的胚胎组与移植由至少含有 1个Ⅰ级卵子发育的胚胎组比较 ,胚胎种植率和临床妊娠率差异有显著性 (χ2 =4 .2 9、5 .4 0 ,P <0 .0 5 )。移植全部由Ⅰ级卵子发育来的胚胎组与全部由异常形态卵子发育来的胚胎组相比 ,胚胎种植率和临床妊娠率比较差异有极显著性 (χ2 =11.2 2、15 .10 ,P <0 .0 1)。④结论 根据MⅡ期卵子的第一极体、卵周隙及胞浆形态三方面综合因素进行的卵子分级方法可预测ICSI后胚胎种植率以及临床妊娠率。胚胎移植时选择Ⅰ级卵子发育的优质胚胎进行移植 ,可获得较高的胚胎种植率和临床妊娠率。

IVF周期中MⅡ末期卵子形态与胚胎发育潜能的关系

目的:探讨IVF周期中MⅡ末期卵子形态与胚胎发育潜能的关系。方法:收集IVF周期中受精后5～6h脱颗粒细胞MⅡ末期卵子,依据透明带、卵泡浆及两极体形态在光镜下对排出两个极体的卵子进行形态评分分级(Ⅰ～Ⅲ级),统计不同分级组间的高评分原核形成率、卵裂率、优质胚胎率及临床妊娠率和种植率,分析卵子形态与受精及胚胎发育潜能的关系。结果:形态评分较高的卵子与形态评分较低的卵子间受精率和卵裂率均无显著差异(P>0.05),但优质胚胎率显著增高(P<0.05);随着移植胚胎中由高形态评分卵子发育而来的胚胎数目增多,周期临床妊娠率、种植率显著增高(P<0.05)。结论:IVF周期中,早期脱颗粒细胞后MⅡ末期卵子形态对受精率及卵裂率没有影响,但可预测早期胚胎质量及妊娠结局。

卵母细胞MⅡ率对ICSI受精及胚胎发育的预测价值

目的分析卵母细胞MⅡ率对卵胞质内单精子显微注射技术(ICSI)受精及胚胎发育的预测。方法选取我院在2018年12月至2020年5月之间收治的患者30例,患者均使用了GnRH-a促排卵的ICSI治疗形式。患者组别划分以卵母细胞MⅡ率为基准,其中A组患者MⅡ率> 90%,B组患者MⅡ率高于80%~90%,C组患者MⅡ率高于70%~80%,D组MⅡ率高于50%~70%,E组MⅡ率于10%~50%。以上5个小组每组患者数据均为6例。将A组患者相关诊疗数据作为基准数据,对比另外四组在诊疗之后的受精率、2PN受精率、卵裂率、2PN卵裂率、优胚率等相关数据的变化趋势,进而比较分析其中差异。结果 A组患者相关诊疗数据作为基准数据,对比另外四组在诊疗之后的受精率、2PN受精率、卵裂率、2PN卵裂率、优胚率等相关数据的变化趋势,进而比较分析其中差异计算与对比能够看出,患者的受精率、2PN受精率、卵裂率、2PN卵裂率、优胚率与卵母细胞MⅡ率之间呈现正相关关系,随着卵母细胞MⅡ率提升,受精率、2PN受精率、卵裂率、2PN卵裂率、优胚率也呈现较好的发展趋势。受精率降低的原因基本上与2PN受精率的降低具有直接关系,各个组别的患者受精率并不存在明显差异。结论 ICSI周期中,卵母细胞MⅡ率与受精及胚胎发育情况具有十分密切的关系,在卵母细胞MⅡ率不断下降的情况下,受精率、卵裂率、优胚率也会随之下降。其中值得注意的一点是在卵母细胞MⅡ率<70%的情况下,受精情况、胚胎发育情况均有显著下降。

用小鼠单个MⅡ卵和2-细胞期胚胎构建cDNA文库

阶段特异性cDNA文库的构建和筛选是一种分离和克隆早期胚胎特异表达基因的有效方法.本研究利用小鼠单个MⅡ卵母细胞及发育至2-细胞的胚胎分别构建了cDNA文库.滴度分别为:6.5×106、7.2×107,基因片段平均长度为250-1500bp并用β-actin验证了文库的可靠性.这种利用单胚胎构建cDNA文库的方法,不仅解决了胚胎研究材料受限制的问题,而且在材料的发育时间上更加精确,更能反映胚胎发育的规律,是研究早期胚胎发育基因表达以及克隆胚胎发育相关基因的一种有效手段.

冷冻对人类MⅡ期卵子超微结构及发育潜能的影响

目的:探讨人类MII期卵子冷冻后超微结构及发育潜能的变化。方法:通过体外成熟的方法,将获得的GV期和MI期卵子培养成MII期卵子,将其中优质的MII期卵子(n=64)随机分成两组:未冷冻组(n=28)和冷冻组(n=36)。将未冷冻组的卵子再随机分为两亚组,一组(n=23)予体外受精,观察其受精率及优质胚胎率;另一组(n=5)直接用透射电镜观察超微结构。冷冻组解冻后将存活的卵子(n=26)再随机分为两亚组,一组予体外受精(n=21),观察受精率及优质胚胎率;另一组(n=5)用透射电镜观察优质的MII期卵子的超微结构。结果:解冻后的MII期卵子皮质颗粒和线粒体发生改变,其发育潜能降低(P<0.05)。结论:冷冻对MⅡ期卵子的超微结构及发育潜能有影响。

3300mⅡ型综合体能考核项目特点及强度初探

在3300 mⅠ型综合体能考核基础上,完成了3300 mⅡ型综合体能考核项目的设置,该项目是以班为单位进行考核,突出了动作协调和集体意识,检验全班的整体力量耐力。通过对全程心率的监控可以看出,该项目对心血管系统提出了很高的要求。

玻璃化冷冻对哺乳动物MⅡ期卵母细胞表观遗传学的影响

玻璃化冷冻作为一种操作简单、成功率高的细胞保存方式具有诸多优点,广泛应用于农业、医学、生物等领域。但相较于新鲜卵母细胞,玻璃化冷冻后的卵母细胞仍存在许多问题,如玻璃化冷冻后的卵母细胞妊娠率和产活仔率低于新鲜的卵母细胞、基因表达异常等。表观遗传学是研究基因在核苷酸序列不发生改变的情况下基因表达的可遗传变化的一门学科。表观遗传修饰在不改变DNA序列的情况下使基因和环境之间产生相互作用。在体外胚胎生产过程中,外界环境因素会对表观遗传修饰造成影响。作者从表观遗传学方面综述了玻璃化冷冻对哺乳动物MⅡ期卵母细胞DNA和全基因组甲基化、组蛋白甲基化和乙酰化、磷酸化及泛素化、基因印迹、microRNA的影响,以及玻璃化冷冻MⅡ卵母细胞后表观遗传修饰的改变对转录过程中基因的表达影响,为揭示并调控玻璃化冷冻卵母细胞后表观遗传修饰事件、进一步提高玻璃化冷冻后卵母细胞的质量提供参考。

水牛GV期和MⅡ卵母细胞中脂肪含量及分布模式研究

【目的】探讨水牛GV期未成熟卵和MⅡ期成熟卵母细胞中脂肪的含量及分布状态,为研究脂肪在水牛卵母细胞体外成熟过程中的作用及卵母细胞体外成熟体系的优化提供参考。【方法】从南宁市某屠宰场收集水牛卵巢并采集卵丘卵母细胞复合体,其中一部分复合体用于收集GV期未成熟卵母细胞,另一部分经体外成熟22～24 h后,获得MⅡ期成熟卵母细胞。之后把GV期和MⅡ期的卵母细胞放入含有10μg/m L Nile red的染色液中,室温黑暗环境中染色4～5 h后,在荧光显微镜下观察,拍照。根据所得照片观察卵母细胞中脂肪分布模式,同时借助Image J软件计算荧光强度,以荧光强度来计算卵母细胞中脂肪含量。【结果】MⅡ期卵子中脂肪含量显著低于GV期脂肪含量(66. 63±1. 197 vs. 70. 81±1. 328,P <0. 05)。GV期和MⅡ期卵母细胞中脂肪各类分布模式没有统计学上的差异(外围分布:3. 148±2. 298 vs. 5. 342±3. 858;半均匀分布:30. 85±4. 042 vs. 35. 70±4. 265;均匀分布:66. 00±3. 257 vs. 60. 60±3. 933,P> 0. 05)。【结论】从GV期未成熟卵母细胞到成熟MⅡ期卵母细胞成熟过程中,水牛卵子内脂肪含量显著降低,而卵母细胞成熟前后脂肪分布模式没有发生改变,多数以均匀分布模式为主。

基于微量RNA高通量测序技术的牦牛MⅡ期卵母细胞转录组研究

旨在现有高通量测序的基础上,建立一种针对牦牛卵母细胞等微量样本的RNA高通量测序方法,为进一步研究牦牛卵母细胞的转录组学提供基础。以微量MII期牦牛卵母细胞RNA(10ng)作为研究样本,应用SMART cDNA PCR扩增技术对样本进行富集并构建测序文库,再应用改进的RNA高通量测序技术对其进行高通量测序分析。经Illumina-Solexa深度测序后,得到了一个包含47 619 254条测序序列,4Gb大小数据量的微量MII期牦牛卵母细胞测序文库。质量控制(Quality control,QC)及基本结果分析表明测序文库质量良好。基因组比对分析显示,共有15 626个牦牛基因被映射。此外,还获得了7 348个新的转录本。GO分类注释结果显示,共有13 795个比对上的基因参与了生物过程、细胞组分及分子功能3大主要类别。进一步富集分析显示,分别有333 134及113个GO类别在上述3大类中得到富集。KEGG通路分析结果显示,共有13 496个比对上的基因参与了258条通路,其中101条通路得到有效富集。本研究以牦牛卵母细胞为样本成功建立了一种起始RNA量可低至10ng的微量转录组测序方法。该研究结果为进一步研究牦牛基因组提供了基础,同时也为研究牦牛MII期卵母细胞的分子机理提供了新的视角。

冷冻保护剂和细胞松弛素B对猪MⅡ期卵母细胞冷冻效率的影响

为了评价冷冻保护剂和离心处理对猪MⅡ期卵母细胞冷冻效率的影响,本试验研究了2种不同冷冻保护剂(乙二醇、二甲基亚砜和蔗糖混合物,EDS;乙二醇、丙二醇和蔗糖混合物,EPS)对猪MⅡ期卵母细胞冷冻效率的影响,以及细胞松弛素B和离心极化处理对猪MⅡ期卵母细胞冷冻效率的影响。结果表明:用EPS和EDS作为猪MⅡ期卵母细胞冷冻保护剂,冻融后其成活率差异并不显著。用不同浓度CB处理猪MⅡ期卵母细胞,7.5μg/mL的处理组冻融后成活率显著高于对照组(P<0.05)。猪MⅡ期卵母细胞经7.5μg/mL CB和离心极化双重处理,冻融后成活率显著高于CB单处理组和对照组,且3组间差异显著(P<0.05)。表明CB和离心极化处理都能改善MⅡ期猪卵母细胞冷冻效率,但它们作用机制还有待于进一步研究。

生长激素促排卵方案用于卵巢低反应患者IVF-ET助孕期间对HCG日E_(2)水平、获卵数及MⅡ卵数的影响

目的 探讨生长激素(GH)促排卵方案用于卵巢低反应(POR)患者体外受精-胚胎移植(IVF-ET)助孕期间对人绒毛膜促性腺激素(HCG)日雌二醇(E_(2))水平、获卵数及MⅡ卵数的影响。方法 选取2019年2月至2022年2月于南充市中心医院接受IVF-ET的120例POR患者作为研究对象,抽签随机分为观察组和对照组,各60例。对照组采用常规促排卵方案,观察组在对照组基础上加用GH。比较两组临床相关指标、HCG日内膜厚度及激素[黄体生成素(LH)、卵泡刺激素(FSH)、E_(2)]水平、周期取消情况及优胚率、妊娠率。结果 观察组获卵总数、正常受精数、MⅡ卵数、胚胎移植数均高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。两组HCG日内膜厚度比较,差异无统计学意义(P>0.05)。观察组HCG日E_(2)水平高于对照组,FSH、LH水平低于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。两组卵子早排、未获卵、无可用胚胎情况比较,差异无统计学意义(P>0.05)。观察组周期取消率(15.00%)显著低于对照组(33.33%),差异具有统计学意义(P<0.05)。两组优胚率与妊娠率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 POR患者通过促排卵方案行IVF-ET助孕时添加GH可提高HCG日E_(2)水平,增加获卵数和MⅡ卵数,改善部分IVF-ET结局。

关于MⅡ型瓦斯压力测定仪煤层测压的应用研究

为进一步改进胶囊封孔在实际测压中的应用效果,利用MⅡ型瓦斯压力测定仪技术在金星煤矿对将要揭露的石门周围进行原始压力测定,与水泥砂浆封孔测压进行了对比,对测定结果进行了总结分析,并对MⅡ型瓦斯压力测定仪进行了优化建议。

联碱Ⅱ过程母液换热流程及MⅡ管流程改造

简单介绍了为解决3#结晶器投量小及2#结晶器投量温度高的问题而进行的母换流程改造,重点介绍了因AⅡ温度不到位对碳化生产的多重影响而进行的MⅡ管流程改造。

TBLMⅡ系列低压脉冲布筒滤尘器

该设备为圆筒切向进气，初清效果好。减轻过滤负荷：无油低压气泵。低噪、低温、无污染；一阀（脉冲阀）一袋（过滤袋），清灰效果好。设备阻力小；一阀（电磁阀）多控，电路简化、工作稳定、调整保养方便。

聚合三氯化铝作为MⅡ溶液沉降剂的研究

考察聚合三氯化铝作为沉降剂其对MⅡ溶液浊度的影响,通过试验发现聚合三氯化铝浓度为13%,加入量在0.3 mL,即MⅡ溶液与聚合三氯化铝=500∶1时,沉降效果最佳。将聚合三氯化铝、聚丙烯酸钠、聚丙烯酰胺进行沉降试验对比,考虑到工业成本等影响,聚合三氯化铝效果好于聚丙烯酸钠和聚丙烯酰胺。