不同信号分子参与M胆碱能受体激动剂对不同胚胎发育阶段小鼠心肌细胞起搏电流的调控(英文)

应用全细胞膜片钳技术,研究了M胆碱能对不同孕期的胚胎小鼠心肌细胞的起搏电流(If)的调节。我们发现,在胚胎发育的早期阶段,M胆碱能受体激动剂(muscarinicagonistcarbachol,CCh)明显抑制If,但在胚胎发育的晚期阶段,CCh对If的抑制作用消失。腺苷酸环化酶(adeinylatecyclase,AC)激动剂毛喉素Forskolin和非选择性磷酸二酯酶(PDE)抑制剂IBMX均可增强发育早期阶段和晚期阶段的If。但有趣的是,尽管Forskolin和IBMX可增加基础If,它们对CCh抑制的If的作用却大不相同。在胚胎发育的早期阶段,Forskolin不能拮抗CCh对If的抑制作用,但IBMX可以。在发育的中期阶段Forskolin可以拮抗CCh的抑制作用,但IBMX不可以。因此,我们推断,CCh可能是通过调控细胞内的CAMP水平来调节If的。但是在胚胎发育的早期阶段和中期阶段,CCh可能通过不同的信号转导通路来实现对胞内cAMP的水平调控。在发育的早期阶段,CCh主要是通过增强PDE的活性,加速cAMP的降解而实现对If的调控。而在发育的中期阶段,CCh则主要通过与AC耦联,抑制其活性,通过减慢cAMP的合成而实现对If的调控。

大鼠脑中M胆碱能受体的随龄性变化

为进一步探讨衰老过程中脑中Ｍ型胆碱能受体的随龄性变化，采用放射配基结合实验，检测了３，１２，２０，２５月龄Ｗｉｓｔａｒ大鼠脑组织中Ｍ胆碱能受体的最大结合容量（Ｂｍａｘ）和解离常数（Ｋｄ），结果如下：（１）４组大鼠脑组织中Ｍ受体的最大结合容量随年龄增长依次减少，各组间均有显著差异；（２）４组大鼠脑组织中Ｍ受体的解离常数随年龄依次减小，表明受体的亲和力逐渐升高。

烟碱对脑M胆碱能受体信息跨膜转导的调节

采用体外实验研究烟碱对大鼠脑Ｍ受体信息跨膜转导的调节作用．脑突触体以烟碱１．０μｍｏｌ·Ｌ－１预处理后，［３Ｈ］ｌ－二苯羟乙酸奎宁酯与Ｍ受体结合及解离动力学过程减慢．在溶脱的大脑皮层Ｍ受体与Ｇ蛋白复合体上，烟碱１．０μｍｏｌ·Ｌ－１可减慢［３５Ｓ］－腺苷５＇－［γ－硫］三磷酸与Ｇ蛋白的结合，并增强Ｍ受体与Ｇ蛋白之间的偶联关系．烟碱０．１～１０００μｍｏｌ·Ｌ－１既不影响纹状体腺苷酸环化酶的基础活性，也不影响氟化钠激活腺苷酸环化酶的作用．烟碱０．１～３０μｍｏｌ·Ｌ－１浓度依赖性地提高脑细胞内Ｃａ２＋浓度．据此提出烟碱对脑Ｍ受体信息跨膜转导系统有多点调节作用．

M胆碱能受体和GABAB受体在脊髓背角Ⅱ板层神经元上的表达

目的观察M胆碱能受体亚型M2和B型γ-氨基丁酸(GABAB)受体在脊髓Ⅱ板层神经元的表达情况。方法SD雄性大鼠,体重160～180 g,麻醉后快速取下L4-6脊髓,进行冰冻切片,M2受体和GABAB受体进行免疫荧光组化双重染色。结果在激光共聚焦显微镜下观察,在脊髓Ⅱ板层神经元上,表达有丰富的M2受体和GABAB受体,其中56.57%的神经元可同时表达2种受体。结论脊髓背角Ⅱ板层神经元可接受M胆碱能受体与GABAB受体的共调节。

烟碱对M胆碱能受体功能的调节及其分子机理

烟碱对Ｍ胆碱能受体功能的调节及其分子机理汪海（北京军事医学科学院毒物药物研究所，北京１００８５０）汪海，男，药理学专业。导师：刘传缋教授。论文答辩日期：１９９２年６月１５日，答辩委员会主席：陈先瑜教授胆碱酯酶抑制剂（Ａｎｔｉ－ＣｈＥ）中毒后，ＡＣｈ大...

脊髓背角M胆碱能和GABAB受体在糖尿病神经痛形成中的作用机制研究进展

脊髓背角作为中枢神经系统痛觉信息整合加工的重要部位,是接受和调控伤害性信息由外周向中枢传递的关键部位。背角浅层含有大量的谷氨酸能、胆碱能、GABA能及甘氨酸能神经元,这些神经元的轴突末梢及胞体上同时表达丰富的M胆碱能受体和GABAB受体,激活这些受体可调控兴奋性/抑制性神经递质的释放过程。而在糖尿病神经痛的形成过程中,

强啡肽对实验性神经细胞老化过程中M胆碱能受体位点数影响的研究

目的 探讨强啡肽 (DYN)对实验性神经细胞 M受体位点数的影响。方法 采用小鼠神经母细胞瘤细胞 (NBA2 )无血清培养建立神经细胞老化实验研究模型。以 M受体放射性配基分析术研究 DYN对实验性神经细胞的 M受体位点数的影响。结果 两种不同浓度的 DYN皆可使M受体位点数下降 (P<0 .0 1 ) ,以高浓度组更显著。结论 DYN使 M受体位点数下降的作用可能是延缓实验性神经细胞老化的机制之一。(最终浓度为 0 .1nmol/L) ,以测定非特异性结合。各管加入2 0 0 μl膜蛋白液 ,37℃振荡温育 4 0 min。冰冷缓冲液终止反应。6 9型纤维滤膜三层抽滤并淋洗 ,滤膜烘干 ,投入 5 ml闪烁液(含 0 .4 % PPO的三甲苯 )中 ,以 YSL- 76型液闪计数器做固相测定。1.8 数据处理 实验得到特异性结合的技术率 ,被测定效率除 ,等于特异性结合衰变率 ,再除以放射性配基活度 ,即等于特异性结合位点数〔7〕。采用 POMS方差分析 ,经 IBM微机处理数据。2 结果与讨论DYN对 NBA2 细胞 M胆碱能受体位点数的影响 ,见表 1。表 1 DYN对 M受体位点数的影响 (nmol/10 6 细胞 )组别 n M受体位点数 (x± s)BSD组 5 449.796± 356.730AID组 5 486.941± 2 4 7.1 65DYN- 7组 5 1 4 5.71 4± 77.82 61 )DYN- 8组 5 1 51 .873± 95.80 61 ) 注

神经生长因子及其两种脑内促生剂对老年大鼠脑内M胆碱能受体的影响

目的 观察神经生长因子 (NGF)及其两种脑内促生剂丙戊茶碱 (PPF)和左旋乙酰肉毒碱 (ALCAR)对老年大鼠脑中M胆碱能受体的影响 ,进一步探讨NGF抗衰老作用的途径和机制。 方法 采用放射配体结合实验检测经脑室注射NGF和分别口服PPF和ALCAR的老年大鼠 (2 4月龄 )脑组织中M胆碱能受体的数量和亲和力。 结果 脑室注射NGF和口服PPF的老年大鼠脑组织中M受体的结合容量 (Bmax)明显高于对照组 ;而AL CAR治疗组效果不明显。 结论 外源性NGF和PPF可使老年大鼠脑组织中M受体的数量增多 ,进而改善中枢胆碱能系统的功能。

M胆碱能药物对家兔虹膜M受体亚型的作用

目的比较不同的Ｍ受体激动剂或Ｍ受体亚型拮抗剂对［３Ｈ］ＱＮＢ与家兔虹膜中Ｍ受体竞争结合的影响。方法放射性配基受体结合试验。结果Ｍ受体激动剂和Ｍ受体亚型拮抗剂均可抑制［３Ｈ］ＱＮＢ与家兔虹膜中Ｍ受体的结合，呈剂量依赖性。激动剂对其抑制的强度依次为：丁公藤碱＞乙酰奎宁＞毛果芸香碱，亚型拮抗剂对其抑制的强度依次为：４ＤＡＭＰ＞ＰＺ＞ｇａｌａｍｉｎｅ。结论ｍ３受体亚型在兔缩瞳的药理作用中起重要作用。

M胆碱能受体阻断剂和β受体激动剂治疗哮喘的临床疗效观察

目的 观察M胆碱能受体阻滞剂与β受体激动剂在临床哮喘病症治疗中的应用与效果。方法 抽选我院于2012年2月~2014年3月收治的88例哮喘患者作为观察对象,随机将其分成甲乙两组各44例,分别给予其噻托溴铵与噻托溴铵＋沙丁胺醇药物应用,并对其治疗效果进行观察。结果 甲组治疗总有效率为77.27%,乙组的治疗总有效率为90.91%,两组比较,差异显著（P〈0.05）。同时,用药后,两组患者的肺功能均有所改善,且以乙组的改善程度更为显著（P〈0.05）。结论 针对临床上哮喘患者的实际情况,给予其M胆碱能受体阻断剂与β受体激动剂联合应用,可明显患者缓解的喘息症状,改善患者的肺功能,总体效果显著,值得临床大力推广。

梭曼对大鼠脑M胆碱能受体的直接作用

梭曼对大鼠脑Ｍ胆碱能受体的直接作用汪海刘传缋军事医学科学院毒物药物研究所北京１００８５０胆碱酯酶抑制剂（ＡｎｔｉＣｈＥ）通过抑制体内胆碱酯酶（ＣｈＥ）导致乙酰胆碱过度蓄积，激动Ｎ和Ｍ受体，介导严重的中毒症状。本研究室早在１９６３年发现，以丙氟磷完全地...

M_2和M_3型胆碱能受体在脾气虚大鼠小肠运动中的作用

目的:研究M2、M3型胆碱能受体表达与脾气虚小肠运动的关系。方法:20只SD大鼠按随机数字表法分为对照组和脾气虚模型组(模型组)各10只,模型组大鼠复制饮食不节加劳疲型脾气虚模型;小肠运动采用小肠推进率评价;ELISA法检测小肠组织Ach和c AMP含量,免疫组化法观察M2、M3型受体表达。结果:与对照组比较,模型组大鼠的小肠推进率显著下降,Ach含量无变化,M2受体表达明显上升,M3受体表达和c AMP水平显著下降。结论:脾气虚小肠运动减弱与M2、M3型受体表达异常有关。

毒蕈碱型胆碱能受体M3调控肝癌细胞侵袭转移的研究

目的探讨毒蕈碱型胆碱能受体M3(muscarinic cholinergic receptors 3,ChRM3)活化对人肝癌细胞侵袭、转移能力的影响及其分子机制。方法 Western blot检测两种人肝癌细胞株Hep G2和SMMC-7721中ChRM3受体的表达;采用氯贝胆碱(Beth)及达菲那新(UK88525)处理肝癌Hep G2和SMMC-7721细胞,分为空白对照组、Beth组、Beth+UK88525组、UK88525组,经处理48 h后,Transwell实验检测两种肝癌细胞经不同分组处理后侵袭、迁移能力的变化,Western blot检测各组细胞中上皮-间质转化(epithelial-to-mesenchymal transition,EMT)标志蛋白的表达及下游信号通路PI3K/Akt的变化;采用shRNA干扰质粒经Lipofectamine 2000TM转染肝癌细胞Hep G2以沉默ChRM3,分为空白对照组、Beth组、Beth+sh ChRM3组、sh ChRM3组,分别检测细胞的侵袭、转移能力及EMT、下游PI3K/Akt的改变。结果 Hep G2和SMMC-7721两种肝癌细胞中均有ChRM3受体的表达;Transwell实验显示:Beth单独处理组对肝癌细胞的迁移和侵袭有明显的促进作用,而UK88525能够抑制Beth对肝癌细胞迁移侵袭能力的促进作用(P<0.05);Western blot结果显示:Beth单独处理组能够上调EMT标志蛋白N-Cadherin和Vimentin,下调E-Cadherin的表达,UK88525处理后能够明显抑制Beth促进Hep G2细胞EMT的过程(解除Beth对Hep G2细胞EMT的促进过程),同时也能够抑制PI3K/Akt的活化(P<0.05);干扰质粒沉默ChRM3受体同样能够抑制Beth促肝癌细胞迁移、侵袭的作用,并且抑制Beth诱导的EMT和下游PI3K/Akt的活化(P<0.05)。结论 ChRM3活化能够通过PI3K/Akt信号通路促进肝癌细胞的侵袭和转移。

中国人HNPCC家系的临床特征及M3胆碱能受体基因(A)_8区突变检测

目的 :分析中国人遗传性非息肉病性大肠癌 (HNPCC)家系的临床特征并检测这些家系中 M3胆碱能受体基因 (A) 8区的突变情况。方法 :根据 2 0 0 3年 4月杭州会议制定的中国人 HNPCC家系标准收集 HNPCC家系共15个 ,分析其临床特征 ;提取先证者的外周血基因组 DNA,PCR扩增 M3胆碱能受体基因第 8外显子中一段长 15 3bp,包含有微卫星位点 (A) 8的基因片段 ,直接进行 DNA测序。结果 :15个家系共有恶性肿瘤患者 5 5例 ,其中大肠癌患者 4 1例 ,平均每个家系发生大肠癌 2 .73例 ,73%的大肠癌患者发病年龄 <5 0岁 ,5 1%的病灶位于近端结肠 ,4 0 %发生在直肠肛门 ,同时和异时多原发大肠癌总发生率为 12 % ,2 /3的家系属于 Lynch 型 ,共发生肠外恶性肿瘤 14例 (18个 ) ,其中胃癌最常见。 15例先证者外周血中无 1例检测到 M3胆碱能受体基因 (A) 8区的突变。结论 :M3胆碱能受体基因与中国人群中 HPNCC的发病可能无密切关系。中国人 HNPCC家系标准应在临床工作中推广应用 。

玉叶金花皂苷U对M胆碱能神经支配器官的影响

目的:研究玉叶金花皂苷U对M胆碱能神经支配器官(回肠平滑肌、瞳孔、唾液腺)的影响。方法:1用离体肌收缩力测量装置获取肌收缩力信息。分别往装置浴槽加入阿托品,使其终质量浓度为10 mg·L-1或玉叶金花皂苷U,使其终质量浓度分别为100,50,25 mg·L-1,10 min后开始累积加入溴化乙酰胆碱,观察药物对不同终浓度溴化乙酰胆碱引起肌收缩力的影响,重复试验10次。2小鼠分为正常组和5个造模型组,每组10只,模型组ip毛果芸香碱20 mg·kg-11次,造成M胆碱能神经兴奋模型,15 min后,给成模小鼠尾静脉注射阿托品2.5 mg·kg-1或玉叶金花皂苷U 10,5,2.5 mg·kg-1,并ig碳末悬液,测量ig碳末30 min后小肠碳末推进率。3小鼠分组、造模和给药方法同2,分别于给药后15,60,240 min,测量瞳孔直径和唾液腺分泌量。结果:玉叶金花皂苷U降低肠平滑肌收缩力,使溴化乙酰胆碱终质量浓度与肌收缩力之间的量-效反应曲线右移;玉叶金花皂苷U(5 mg·kg-1)组,小肠碳末推进为(64.20±10.14)%,较模型组降低;给药后15,60,240 min,瞳孔直径分别为(2.5±0.19),(2.2±0.18),(2.1±0.40)mm,较模型组扩大,唾液腺分泌量分别为(102.3±13.57),(90.2±20.51),(68.0±21.52)mg,较模型组减少(P<0.05)。结论:玉叶金花皂苷U能抑制M胆碱能神经兴奋。

核酸对肝纤维化大鼠肝组织中M1型胆碱能受体表达的影响

目的探讨核酸在CCl4诱导的肝纤维化模型中对肝脏中M1型乙酰胆碱受体的影响及其抗肝纤维化的可能机制。方法应用四氯化碳(CCl4)诱导大鼠慢性肝纤维化模型。将55只Wistar大鼠分为4组:正常对照(N)组10只?肝复乐胶囊对照(G)组15只?核酸(Z)组15只及模型(M)组15只。采用光镜观察肝组织病理学改变;运用免疫组织SP法?逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Western-blot方法检测各组肝组织M1型胆碱能受体(M1-AChR)不同水平的表达情况。结果核酸组、肝复乐胶囊对照组病理改变较模型组明显改善;免疫组织化学?RT-PCR?Western-blot三种不同层次水平的表达结果均表明核酸组和肝复乐胶囊对照组M1-AChR的表达较模型组显著降低(P<0.05)。结论核酸可降低肝纤维化肝组织中M1型乙酰胆碱受体的含量,可能主要通过调节肝纤维化大鼠肝脏中的M1型乙酰胆碱受体的含量而达到抗肝纤维化的作用。

帕金森病大鼠脚桥核中胆碱能M_2受体的表达变化及意义

目的通过免疫组织化学方法观察胆碱能M2受体在帕金森病(Parkinson's disease,PD)模型大鼠脚桥核(pedunculopontine nucleus,PPN)中的表达变化,探讨胆碱能M2受体在PD发病机制及病理生理改变中的作用。方法选用健康雄性SD大鼠16只,随机分为2组。取脑组织固定后作连续冠状冰冻切片。以鼠源M2单克隆抗体为一抗,采用免疫组化SP法,镜下控制显色。以阳性细胞计数及平均光密度为分析指标,对M2受体在PD模型大鼠PPN中的表达变化进行观察分析。结果对照组大鼠PPN部位及PD大鼠未损毁侧PPN部位均表达比较丰富的M2受体阳性细胞。PD大鼠损毁侧PPN部位M2受体阳性细胞明显稀疏。与对照组和PD大鼠未损毁侧相比有明显差异(P<0.05)。3组间阳性部位的表达强度无明显差异(P>0.05)。结论PD状态下PPN内存在表达M2受体的神经元变性死亡或受体脱失。而其余未发生变性死亡或受体脱失的M2受体阳性神经元其表达强度并不受影响。同时发现,影响PPN内M2受体阳性细胞变化的因素具有单侧性。

胆碱能M受体拮抗剂2β－（2－环戊基－2－羟基－2－苯基乙氧基）托品烷光学异构体的合成

以（１Ｓ）－（＋）－１０－樟脑磺酸－２Ｒ－和－２Ｓ－２－环戊基－２－羟基－２－苯基乙醇酯分别与１Ｒ，２Ｓ和１Ｓ，２Ｒ－托品醇反应，制备了四个不同构型的２β托品醚目标化合物．大鼠脑Ｍ受体结合试验表明，异构体之间活性差异显著，最大相差约２２０倍。当分子中季碳为Ｒ构型时，对活性影响最大。