青光眼视神经M通路损害的研究进展

青光眼是一种以视神经萎缩和视野缺损为共同特征的疾病,为全球第一位不可逆致盲眼病。2013年在全世界40~80岁的人群中青光眼患病率为3.54%,预计到2020年青光眼患者数将达到7 600万, 2040年将达到11 180万,约60%青光眼患者分布于亚洲[1]。

黄颡鱼雌雄性的生理生化和mTOR信号通路基因表达分析

同龄的黄颡鱼(Pelteobagrus fulvidraco)呈现明显的两性生长差异,即雄性个体的体长、体重皆大于雌性个体。而mTOR信号通路在细胞生长、发育以及蛋白合成过程中起重要作用。为了了解黄颡鱼两性差异的营养生长机制与mTOR信号通路之间的关联性,本试验首先在生理生化特性方面对雌、雄黄颡鱼的肌肉营养成分进行了比较分析。结果表明,在雌、雄黄颡鱼的比较分析中,除了两者的水分、粗蛋白、粗脂肪含量差别不大以外,在矿物元素、氨基酸组成、蛋白的氨基酸组成和脂肪酸组成等方面,雌性黄颡鱼肌肉的营养品质相对雄性更优。针对mTOR信号通路主要基因开展实时荧光定量PCR分析,结果显示,除性腺组织外,AKT1、AKT2、AKT3、mTOR、S6KA、S6KB、4E-BP1基因在雄性黄颡鱼的肌肉、肝、肾和心脏组织中的表达均显著高于雌性,这可能与雌雄黄颡鱼生长差异有关。本研究为进一步探索黄颡鱼两性生长差异的分子机制奠定了试验基础。

布托啡诺调节FOXO3-FOXM1信号轴对骨肉瘤细胞生物活性和化疗药物耐药性的实验研究

目的探究布托啡诺(BUT)调节叉头框蛋白O3(FOXO3)-叉头框蛋白M1(FOXM1)信号轴对骨肉瘤细胞生物活性和化疗药物耐药性的影响。方法将2.0μmol/L顺铂(CDDP)处理的CDDP耐药MG-63细胞(MG-63/CDDP)分为对照组(MG-63/CDDP细胞用含0.05g/dl DMSO培养液处理)、BUT组(40μg/ml BUT处理MG-63/CDDP细胞)、JY-2组(用100μmol/L FOXO3-FOXM1抑制剂JY-2处理MG-63/CDDP细胞)和BUT+JY-2组(用40μg/ml BUT以及100μmol/L JY-2处理MG-63/CDDP细胞)。CCK8法检测MG-63/CDDP细胞活性;流式细胞术检测MG-63/CDDP细胞凋亡情况;Transwell法检测MG-63/CDDP细胞迁移、侵袭情况;Western blot检测自噬蛋白以及FOXO3-FOXM1信号通路相关蛋白表达。结果与MG-63细胞相比,MG-63/CDDP细胞IC50增加(20.56±2.52μmol/L vs 0.97±0.10μmol/L),差异具有统计学意义(q=19.017,P<0.05),筛选出较适浓度1μmol/L CDDP用于后续实验。与对照组相比,BUT组MG-63/CDDP细胞A值(0.43±0.05 vs 0.68±0.06),细胞迁移数量(63.63±7.58个vs114.56±10.57个)以及侵袭数量(43.38±4.58个vs 79.56±8.48个)、自噬相关蛋白Beclin1(0.31±0.05 vs 0.62±0.07)和微管相关蛋白轻链3(LC3)-II/I蛋白(0.51±0.08 vs 0.98±0.11)水平均下降(q=6.763~9.591,均P<0.05),凋亡率(28.57%±3.14%vs 8.67%±1.46%),FOXO3(0.72±0.08 vs 0.33±0.04),FOXM1(1.22±0.15 vs 0.70±0.08)蛋白水平均上升(q=14.077,10.681,7.493,均P<0.05),而JY-2组MG-63/CDDP细胞A值(0.99±0.13 vs0.68±0.06),细胞迁移数量(147.59±15.37个vs 114.56±10.57个)以及侵袭数量(111.83±12.58个vs 79.56±8.48个),Beclin1(0.94±0.11 vs 0.62±0.07),LC3-II/I蛋白(1.27±0.13 vs 0.98±0.11)水平均升高(q=4.171~6.012,均P<0.05),凋亡率(4.56%±0.86%vs 8.67%±1.46%),FOXO3(0.17±0.01 vs 0.33±0.04),FOXM1(0.46±0.03 vs 0.70±0.08)蛋白水平降低(q=5.941,9.505,6.881,均P<0.05),差异具有统计学意义。JY-2逆转了BUT对MG-63/CDDP细胞活性和化疗耐药性的有利影响。结论BUT可能通过激活FOXO3-FOXM1信号通路调节骨肉瘤细胞的细胞活性和CDDP耐药性。

脾气虚大鼠骨骼肌组织Ca^(2+)/CaM信号通路关键分子动态表达规律

目的观察脾气虚大鼠骨骼肌组织Ca2+/钙调蛋白(Ca M)信号通路中关键分子〔Ca2+〕i以及Ca M、钙调蛋白激酶(Ca MK)Ⅱ、pCa MKⅡ蛋白表达水平的变化。方法受试动物随机分为正常对照组,脾虚模型7、14、21 d组,每组12只。除正常对照组外,其余受试动物采用复合法(苦寒破气法、游泳力竭法及饥饱失常法)成功建立脾气虚证大鼠模型,在观测各组大鼠一般生存状态、胃肠转运功能和骨骼肌组织ATP酶活性的基础上,采用激光共聚焦技术检测骨骼肌组织细胞内〔Ca2+〕i浓度,蛋白免疫印迹技术检测骨骼肌组织Ca M、Ca MKⅡ和p-Ca MKⅡ的表达变化。结果与空白组比较,脾气虚大鼠随着造模时间的延长,胃残留率升高而小肠推进率下降(P<0.01);骨骼肌组织Na+-K+-ATPase和Ca2+-Mg2+-ATPase活性均降低(P<0.05,P<0.01);骨骼肌组织〔Ca2+〕i浓度和Ca M、Ca MKⅡ、p-Ca MKⅡ蛋白表达量显著降低(P<0.01);且脾虚模型7 d、14 d、21 d组之间比较,以脾虚21 d组变化更为显著。结论脾虚大鼠骨骼肌组织Ca2+/Ca M信号通路关键分子Ca M、Ca MKⅡ和p-Ca MKⅡ蛋白以低表达为主。

利拉鲁肽通过调控AMPK/mTOR自噬信号减轻糖尿病大鼠心肌炎症和氧化应激损伤

目的探讨利拉鲁肽(liraglutide,LRG)改善2型糖尿病(T2DM)大鼠心肌炎症和氧化应激损伤的可能机制。方法选取40只雄性SD大鼠,分为对照组(CON)、T2DM组、LRG组、LRG+AMPK抑制剂Compound C组(LRG+CC)。4周后,检测大鼠血糖、血脂;彩色多普勒超声检测大鼠心功能;TUNEL染色观察心肌细胞凋亡情况;Western blot检测心肌炎症、氧化应激、凋亡、自噬及AMPK/mTOR通路相关蛋白表达。结果LRG能降低T2DM大鼠高血糖、高血脂,改善心功能指标;LRG能降低T2DM大鼠心肌IL-6、TNF-α、IL-1β、NOX2、NOX4、cleaved caspase-3、Bax、p-mTOR/mTOR表达及MDA含量,增加Bcl-2、Atg5、Beclin-1、LC3-II/LC3-I、p-AMPK/AMPK表达及SOD、GSH活性,从而抑制心肌炎症、氧化应激和凋亡,并增强自噬,但使用AMPK抑制剂Compound C能够明显逆转LRG的作用。结论LRG可通过调控AMPK/mTOR自噬信号减轻T2DM大鼠心肌炎症和氧化应激损伤。

MFGE8在缺血性脑损伤中表达及对巨噬细胞极化的调控作用

目的探究蛋白质酪氨酸激酶2(MFGE8)在缺血性脑损伤(IBI)中的表达及对巨噬细胞极化的调控作用。方法ELISA检测缺血性脑卒中患者和大脑中动脉闭塞(MCAO)大鼠模型外周血中MFGE8蛋白表达;IF检测MCAO模型MFGE8在脑组织中的定位表达;流式细胞术检测脑组织巨噬细胞极化比例;采用稳转Mfge8的N2a神经元细胞(Mfge8CA)培养上清处理BV-2小胶质细胞,流式细胞术检测巨噬细胞极化比例;免疫印迹检测MFGE8、αv/β3-整合素、FAK、NF-κB、ERK1/2、Jnk1/2、p38、PI3K、AKT、m TOR蛋白表达。结果IBI患者和MCAO模型大鼠外周血中MFGE8含量明显低于对照组(P=0.0446,P=0.0259);MFGE8与神经元细胞标志(Neu N)高度共定位表达;MCAO模型大鼠脑组织中M1型(CD45+F4/80+i NOS+Arginase1-)巨噬细胞比例明显高于对照组(P=0.0004);M2型(CD45+F4/80+i NOS-Arginase1+)巨噬细胞比例明显低于对照组(P<0.0001);Mfge8CA组N2a神经细胞系培养上清处理的BV-2小胶质细胞M1型巨噬细胞比例明显低于野生组(WT,P=0.0230);M2型巨噬细胞比例明显高于WT(P<0.0001);Mfge8CA组BV-2小胶质细胞αv/β3-整合素、FAK、p-P85、P85、p-AKT(Ser473)、p-mTOR(Ser2481)和p-mTOR(Ser2488)蛋白表达明显高于WT组。Mfge8CA组BV-2小胶质细胞p-P65蛋白表达明显低于WT组。结论MFGE8高表达于IBI患者外周血,神经元细胞来源的MFGE8可能通过激活PI3K/AKT/m TOR信号促进BV-2小胶质细胞M2型巨噬细胞极化,并抑制M1型巨噬细胞极化。

肿瘤相关巨噬细胞M1型极化在肿瘤治疗中的作用研究进展

肿瘤相关巨噬细胞(tumor-associated macrophages,TAM)是一类在肿瘤微环境中存在的重要炎性细胞,在肿瘤微环境中主要表达M1和M2两种表型。研究发现通过给予新型免疫增强剂MBP、免疫调节剂部分多糖、Notch和PD-1/PD-L1信号通路抑制剂等,可有效地调控巨噬细胞表达M1型;还可给予小分子化合物伊马替尼、IL-6特异性抑制剂激活素A、HIV-1Nef蛋白等将M2型巨噬细胞逆转为具有抗肿瘤效应的M1型,从而发挥肿瘤治疗的作用。近年对TAM在肿瘤微环境的研究日益增多,并发现TAM的两种表型可相互逆转,且在肿瘤微环境中扮演着重要角色。论文主要就靶向巨噬细胞与肿瘤治疗的研究进展做一综述,探讨TAM是如何发挥肿瘤治疗作用的。

基于P-mTOR/mTOR通路探讨来曲唑片联合益母草颗粒对多囊卵巢综合征患者的作用及其机制研究

目的:基于磷酸化雷帕霉素靶蛋白(P-m TOR)/雷帕霉素靶蛋白(m TOR)通路探讨来曲唑片联合益母草颗粒对多囊卵巢综合征(PCOS)患者的作用及其机制研究。方法:选取2021年4月至2022年8月期间济南市第二妇幼保健院收治的142例PCOS患者,按照随机数字表法将患者分为对照组(接受来曲唑片治疗,n=71)和研究组(接受来曲唑片联合益母草颗粒治疗,n=71)。对比两组性激素指标、空腹血糖(FPG)、空腹胰岛素(FINS)、胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)、血清P-m TOR、m TOR水平。结果:两组治疗3个月后黄体生成素(LH)、雌二醇(E_(2))、睾酮(T)下降,促卵泡激素(FSH)上升,且研究组的LH、E_(2)、T低于对照组,FSH高于对照组(P<0.05)。两组治疗3个月后FPG、HOMA-IR、FINS下降,且研究组低于对照组(P<0.05)。两组治疗3个月后血清P-m TOR及m TOR水平下降,且研究组低于对照组(P<0.05)。结论:益母草颗粒、来曲唑片联合治疗可能通过调控P-m TOR/m TOR通路改善PCOS患者的性激素、血糖水平及胰岛素抵抗。

石斛灌胃对非酒精性脂肪肝小鼠肝细胞内脂肪过度沉积的改善作用及其机制

目的观察石斛灌胃对非酒精性脂肪肝(NAFLD)小鼠肝细胞内脂肪过度沉积的改善作用,并探讨其机制。方法取10只C57BL/6J雄性小鼠作为正常对照组,普通饲料喂养,剩余30只小鼠用高糖高脂饲料连续饲养12周,建立NAFLD模型后随机分成模型组、石斛低剂量组、石斛高剂量组,每组10只。石斛低剂量组、石斛高剂量组分别给予200 mg/(kg·d)、400 mg/(kg·d)石斛汤剂灌胃,模型组、正常组均灌服等体积生理盐水,连续灌胃14周。灌胃结束后,观察各组小鼠体形、体质量、腹围、皮毛光泽度及活动量等总体状态。灌胃结束后,各组小鼠禁食12 h,眼下静脉丛取血,采用生化测试试剂盒检测血清TG、TC、AST、ALT。灌胃结束后处死小鼠,取肝脏组织,伊红-苏木素染色后镜下观察肝脏组织病理。采用PT-PCR法检测各组小鼠肝脏组织中固醇调节元件结合蛋白(SREBP-1c)mRNA、脂肪酸合成酶(FAS)mRNA。采用Western Blotting法检测各组小鼠肝脏组织中p-mTOR蛋白。结果模型组小鼠体形明显大于正常组,体质量和腹围也较正常组明显增加,动作自如,但皮毛粗糙失去光泽且易脱毛。石斛低剂量组、石斛高剂量组小鼠活动量正常,活动灵敏,精神正常,皮毛光泽。正常组、石斛低剂量组、石斛高剂量组小鼠血清TG、TC、AST、ALT水平均低于模型组(P均<0.05)。模型组小鼠肝细胞肿大,脂滴较多,并有脂肪囊肿形成;石斛低、高剂量组小鼠肝脏中脂肪肝转态减轻。正常组、石斛低剂量组、石斛高剂量组小鼠肝脏组织中SREBP1c mRNA、FAS mRNA相对表达量均低于模型组(P均<0.05),且石斛高剂量组小鼠肝脏组织中SREBP1c mRNA、FAS mRNA相对表达量均低于石斛低剂量组(P均<0.05)。正常组、石斛低剂量组、石斛高剂量组小鼠肝脏组织中p-mTOR蛋白相对表达量均低于模型组(P均<0.05),且石斛高剂量组小鼠肝脏组织中pm TOR蛋白相对表达量低于石斛低剂量组(P均<0.05)。结论石斛灌胃可改善NAFLD小鼠的肝细胞内脂肪过度沉积,其机制可能与参与m TOR信号通路的调节有关。

模拟炮制及实验证据揭示知母盐炙后增强滋阴降火作用的机制

目的:研究知母盐炙后化学成分转化以及滋阴降火作用增强的机制。方法:首先采用HPLC法比较生知母和盐知母之间化学成分的差异,结合模拟炮制实验进行验证,阐明炮制引起的化学变化;其次建立甲状腺素诱导的大鼠肾阴虚模型,评价生、盐知母及增量成分芒果苷治疗肾阴虚的效果。采用Western Blot和RT-PCR检测药物对PI3K/AKT/mTOR信号通路的表达影响。结果:知母盐炙后新芒果苷含量下降,芒果苷含量升高;在模拟盐炙新芒果苷单体及饮片中均出现了芒果苷色谱峰,证明盐炙可促使新芒果苷向芒果苷转化;生知母、盐知母和芒果苷均可治疗肾阴虚证,但盐知母和芒果苷治疗肾阴虚证的效果明显优于生知母,证明芒果苷是知母发挥治疗肾阴虚作用的活性成分之一;生知母、盐知母和芒果苷均能上调肾阴虚证大鼠PI3K、AKT、mTOR mRNA和蛋白的表达,且芒果苷的作用明显优于生知母。结论:知母盐炙后芒果苷含量增加,并通过调控PI3K/AKT/mTOR信号通路增强知母对肾阴虚证的治疗作用。