鸡胚骨骼肌组织M-CAT结合因子的初步鉴定

采用偶联ＣＡＴＴＧＣＴ寡核苷酸的ＤＮＡ亲和层析柱从发育１３ｄ鸡胚骨骼肌核抽提物中分离到两种核蛋白．ＳＤＳ－ＰＡＧＥ结果表明，被ＤＮＡ亲和柱滞留的两种核蛋白分子量分别为３０ｋＤ和３２ｋＤ．凝胶阻滞结合竞争分析显示，纯化的核蛋白可与Ｍ－ＣＡＴ共有序列ＣＡＴＴＣＣＴ特异结合．Ｓｏｕｔｈｗｅｓｔｅｒｎ印迹技术确定仅３０ｋＤ分子可直接识别、结合ＣＡＴＴＣＣＴ元件，但３２ｋＤ分子却不能．结果提示，３０ｋＤ分子为依赖ＤＮＡ的Ｍ－ＣＡＴ结合因子。

发育阶段M-CAT结合因子的组织分布及表达动力学

采用胶阻滞和ＤＮＡ蛋白质印迹技术分析了鸡胚和雏鸡发育不同阶段骨骼肌、心肌、胗、肝和脑组织核抽提物中ＭＣＡＴ结合因子（ＭＣＢＦ）与含ＣＡＴＴＣＣＴ、ＣＡＴＴＧＣＴ核心序列的寡核苷酸的相互作用．胶阻滞实验结果表明，被检的五种组织均有ＭＣＢＦ结合活性存在，但结合模样不完全相同；两寡核苷酸探针与同一骨骼肌核抽提物结合模样也不相同．采用两寡核苷酸为探针对五种组织核抽提物进行ＤＮＡ蛋白质印迹分析均检出一分子质量约３０ｋｕ核因子，提示３０ｋｕ核因子是存在于五种组织中的普遍因子，该因子可直接或以同二／多聚体结合ＣＡＴＴＣＣＴ、ＣＡＴＴＧＣＴ序列，属ＭＣＢＦ结合活性的基本组成成分．除普遍因子外，胶阻滞分析结果不排除各组织存在的特异因子通过蛋白质蛋白质相互作用、与３０ｋｕ因子形成杂聚体结合ＤＮＡ的可能性．骨骼肌组织３０ｋｕ因子在胚胎发育１８天前表达，出生后消失．

鸡烟碱样乙酰胆碱受体γ亚基启动子中的M-CAT结合特性(英文)

鸡骨骼肌烟碱样乙酰胆碱受体 ( ACh R)γ亚基基因启动子含有几个 M- CAT元件 ,为γ亚基基因表达其全能活性所必需 .为探索 M- CAT元件结合功能特性 ,分析了 γ亚基启动子近转录起始点 - 67/ - 61位的 M- CAT元件与核因子的相互作用 .突变及结合试验证明 ,M- CAT核心序列结合几种测试组织中的核蛋白产生高迁移的 DNA-蛋白质复合物 ;侧翼序列结合肝以外的几种组织不同的核蛋白质 ,产生低迁移的 DNA-蛋白质复合物 .Southwestern印迹 ( DNA印迹 )技术在 1 3d鸡胚所有被检测的组织核抽提物中只检出了 30 k D的核蛋白 .结果提示 ,30 k D因子在多种组织普遍表达 ,可直接以单体或同质二聚体形式结合 M- CAT元件 ;而结合侧翼序列的不同组织因子结合DNA时可能需依赖普遍表达的 30 k D因子的存在 .

鸡胚不同发育阶段M-CAT结合因子结合作用

为进一步了解Ｍ－ＣＡＴ结合因子在骨骨各肌发育中的作用，本实验以９、１１、１３、１５、１８ｄ鸡胚及出生、出生二周雏鸡骨骨各肌核抽提物为研究对象，采用ＧｅｌＳｈｉｆｔＡｓｓａｙ测定人工合成Ｍ－ＣＡＴ寡核苷酸与鸡核抽提物的相互作用。结果显示核抽提物中的Ｍ－ＣＡＴ结合因子在鸡胚第９天已存在，１３ｄ达高峰，出生后不能检测。说明Ｍ－ＣＡＴ结合因子在骨骨各肌发育早期发挥作用。

M－CAT盒在鸡AchR γ－亚基基因转录激活中的作用

原代培养鸡胚肌细胞瞬时转染结合氯霉素乙酰基转移酶水平测试表明：鸡ＡＣｈＲγ－亚基基因缺失近起始点一对Ｅ盒（ＣＡＮＮＴＧ）的－２０４／－５０片段与含Ｅ盒的－２０４／＋３６片段一样，均可独立激活ｔｋ启动子的转录活性，证明了该片段的增强子样作用，利用鸡胚肌肉核抽提物与－２０４／－５０片段进行胶阻滞分析，检出了明显的迁移位移条带的发生；迁移条带不仅可被未标记的－２０４／－５０片段消除，而且还可被含Ｍ－ＣＡＴ盒（ＣＡＴＴＣＣＴ）的２３ｂｐ寡核苷酸竞争阻断，说明胶阻滞分析中出现的迁移条带系由核内因子特异结合－２０４／－５０片段中的Ｍ－ＣＡＴ序列所致，上述结果证明，Ｍ－ＣＡＴ盒对鸡ＡＣｈＲγ－亚基基因－２０４／－５０片段的转录激活功能起作用。

不同评价指标在慢性阻塞性肺疾病患者综合评估中的应用

目的应用圣乔治呼吸问卷(SGRQ)、慢性阻塞性肺疾病临床呼吸问卷(CCQ)、慢性阻塞性肺疾病临床测试量表(CAT)、改良英国医学研究理事会呼吸困难指数(m MRC)与6分钟步行试验(6MWT)评价慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者健康状况、呼吸困难程度和运动耐力,并分析其评分结果与COPD患者肺功能参数第1秒用力呼气末容积占预计值百分比(FEV1%pred)的相关性,探讨其在临床中的应用价值。方法 2014年5—10月苏州大学附属第三医院呼吸内科对常州市永红及魏村地区进行COPD流行病学调查,根据纳入与排除标准筛选出90例COPD患者。对患者进行SGRQ、CAT、m MRC、CCQ、BODE指数评分及6MWT、肺功能检查,综合分析各评分系统之间以及各评分系统与患者肺功能气流受限严重程度的相关性;并将COPD患者按照性别、年龄、有无合并症等进行分组,观察各评分系统用于不同COPD人群的差异性;对患者进行综合评估,了解综合评估COPD患者严重程度的意义。结果90例患者SGRQ总分为(21.9±14.4)分,CAT评分为(17.0±5.9)分,m MRC评分为(1.3±1.2)分,6MWT为(390.7±86.2)m,BODE评分为(2.6±1.7)分。不同性别、年龄、有无吸烟史患者FEV1%pred、CAT评分、m MRC评分、CCQ评分、SGRQ评分、6MWT比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。有合并症、年加重次数≥2次的COPD患者FEV1%pred、6MWT均分别低于无合并症、年加重次数<2次者,CAT评分、m MRC评分、CCQ评分、SGRQ评分均分别高于无合并症、年加重次数<2次者,差异有统计学意义(P<0.05)。不同GOLD分级患者体质指数(BMI)、SGRQ评分、CAT评分、m MRC评分、CCQ评分、6MWT及年加重次数比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。COPD患者肺功能(FEV1%pred)与CAT评分、m MRC评分、CCQ评分、SGRQ评分、BODE呈负相关(r=-0.338、-0.703、-0.529、-0.852、-0.837,P<0.01);与呼气峰流速(PEF)、6MWT及BMI呈正相关(r=0.869、0.572、0.322,P<0.01)。使用CAT评分和m MRC分级对COPD患者进行综合评估,结果显示,对于高风险患者两种评估方法得到的评估结果一致(Kappa=0.438,P<0.001),对于低风险患者两种评估方法得到的结果存在显著差异(P<0.05)。本研究也使用CCQ评分对入选患者进行综合评估,结果显示其在低风险患者中与使用CAT评分分组较一致(Kappa=0.753,P<0.001)。结论四种呼吸问卷(SGRQ、CAT、m MRC、CCQ)、6MWT、BODE均与肺功能(FEV1%pred)显著相关,可以将其作为肺功能检查的补充,在COPD的临床管理工作中有一定的应用价值。

鸡转录增强因子-1相关基因cDNA片段的克隆及其在发育过程中的表达

目的 :克隆转录增强因子 1(transcriptionenhancerfactor 1,TEF 1)相关基因 (relatedTEF 1,RTEF 1) ,检测鸡发育过程RTEF 1基因的表达及组织分布。方法 :从 13d鸡胚骨骼肌mRNAs经RT PCR方法扩增RTEF 1的编码序列 (cDNA) ,将其克隆到 pGEM和 pUC载体并进行核苷酸序列分析。采用RT PCR技术检测鸡胚发育第9天至雏鸡孵出后 6周的骨骼肌组织中RTEF 1基因的表达 ,并测试其在 13d鸡胚和出生后 1d雏鸡的骨骼肌、心肌、脑、肝和胗等 5种组织中的存在。结果 :克隆序列分析结合GenBank检索表明 ,所克隆的cDNA片段 ( 90 0bp)与cTEF 1A序列仅相差两个碱基。应用RT PCR技术在鸡胚发育 9d至出生后 6周雏鸡的骨骼肌组织均检出了RTEF 1基因的表达 ;13d鸡胚和出生后 1d雏鸡的骨骼肌、心肌、脑、肝和胗等 5种组织中均有TEF 1相关基因的转录。结论 :克隆的cDNA片段属多种组织普遍存在的cTEF 1A。与先前检测的M CAT结合因子发生规律 (在两周前表达 )不同 ,cTEF 1A在鸡胚发育的第 9天至出生后

LTE-eMTC关键技术及部署方案研究

LTE-eMTC作为低功耗广覆盖蜂窝物联网技术之一,相比NB-IoT具有语音、移动性、低时延等技术特征,适用于可穿戴设备、POS机消费、工业智能等中低速率物联网业务应用需求。首先介绍了LTE-eMTC 3GPP R13、R14版本的标准进展情况,对LTE-eMTC关键技术原理进行详细分析,包括基于覆盖增强技术,终端节电、移动性管理等,最后,针对LTE-eMTC的无线网组网方案和物联网专用核心网建设方案,给出了相关部署建议。

猫嗅球外丛层和僧帽细胞层年龄相关形态学变化

分别用Nissl法及免疫组织化学ABC法标记青、老年猫嗅球中嗅觉二级神经元和外丛层胶质细胞,显微镜下观察其分布并计数,对嗅觉二级神经元胞体直径和外丛层厚度进行测量,比较其年龄相关性变化,研究神经元与胶质细胞之间的关系,探讨老年性嗅觉功能衰退的相关神经机理。结果显示,老年猫嗅觉二级神经元胞体直径和分布密度均有不同程度的显著性下降(P<0.05);外丛层厚度变化不明显(P>0.05);外丛层胶质细胞特别是星形胶质细胞显著性增生(P<0.05)。表明在衰老过程中嗅觉二级神经元有丢失,并呈现功能下降,可能是老年性嗅觉功能衰退的原因之一。同时外丛层胶质细胞增生以进一步保护神经元,延缓其衰老。

沿海双向声传播测流研究与实验

2009年3月10-11日,用沿海声层析仪在我国台州大陈岛近海进行了一次双方向声传播测流实验。采用5 kHz的10阶M序列信号,利用GPS时钟进行异地时间同步,完成了水下信号的发射和接收,实现了双向声传播时间的精确测量。2个声传播站位间距为11km,实验历时26h。与此同时,在2个声传播站位间还进行了6次温度、盐度和流速的断面走行观测。2个站接收到的信号的信噪比达到了180以上,由双向声传播时间差得到的测线间的平均流速显示了典型的半日潮的变化。声传播观测所得的平均流速与声学多普勒流速剖面仪(ADCP)断面走行观测结果基本一致,两者之差的平均值为0.04m/s。

含CATTGCT与含CATTCCT核心序列的两种寡核苷酸结合反应特性不完全相同

目的：比较含ＣＡＴＴＣＣＴ、ＣＡＴＴＧＣＴ核心序列的两种寡核苷酸与鸡骨骼肌核因子的结合反应，分析ＭＣＡＴ结合活性在鸡发育过程中的表达规律。方法：采用含ＣＡＴＴＣＣＴ或ＣＡＴＴＧＣＴ核心序列的不同寡核苷酸与发育阶段骨骼肌核抽提物进行胶阻滞实验及竞争反应。结果：胶阻滞实验显示各阶段鸡胚骨骼肌核抽提物与含ＣＡＴＴＣＣＴ核心序列的寡核苷酸形成Ｌ、Ｈ两条ＤＮＡ蛋白质阻滞条带，条带于出生后减弱，２周消失；含ＣＡＴＴＧＣＴ核心序列的寡核苷酸与第９～１３天鸡胚肌核抽提物结合反应形成Ｌ′、Ｍ′及Ｈ′３条阻滞带，出生后２周仍检出１条近似Ｍ′带的结合活性带；前者结合反应可被含ＣＡＴＴＧＣＴ核心序列的寡核苷酸和鸡乙酰胆碱受体γ亚基基因２０４／５０片段（含ＣＡＴＴＧＣＴ）竞争消除，但后者结合反应却不能被含ＣＡＴＴＣＣＴ核心序列的寡核苷酸完全竞争。结论：两种寡核苷酸除结合共同因子外，不排除特异因子的结合。胶阻滞差异可能与核心序列或侧翼序列不同有关；发育过程存在ＭＣＡＴ结合因子同工型的置换。

褪黑素对高糖诱导白内障形成抑制作用的实验研究

目的:观察褪黑素(melatonin,MLT)对高糖诱导体外培养兔晶状体白内障形成的抑制作用。方法:选取发育正常的兔晶状体,随机分为3组:A组空白对照组、B组高糖处理组、C组实验组(在高糖处理的基础上加MLT,浓度为50μmol/L)。观察不同培养时间(48,72,96h)各组晶状体混浊程度。通过黄嘌呤氧化酶法测定超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD);化学比色法测定过氧化氢酶(catalase,CAT);硫代巴比妥酸法测定丙二醛(malondialdehyde,MDA),观察不同时间各组晶状体的生物化学变化。结果:晶状体混浊情况:培养96h后,A组晶状体无明显变化,晶状体完全透明为80%,Ⅱ级混浊为20%;B组晶状体混浊逐渐加重,晶状体Ⅳ级混浊为20%,Ⅴ级混浊为80%;C组晶状体完全透明为60%,Ⅱ级混浊为40%。晶状体生化指标的测定:C组兔晶状体组织中的SOD,CAT含量高于B组(P<0.01),C组兔晶状体组织中MDA含量低于B组(P<0.01)。结论:MLT可抑制高糖诱发的兔晶状体的氧化损伤,延缓和减轻高糖诱导的兔白内障的发生和发展。

镉与萘单一和复合作用对穗花狐尾藻生长的影响

研究了镉、萘单一和复合作用对穗花狐尾藻生理指标的影响.结果表明,穗花狐尾藻中叶绿素含量随着处理浓度的增大而减小;丙二醛(MDA)的含量和过氧化氢酶(CAT)的活性随着镉、萘浓度的增加呈现先增加后减小的趋势.

电针刺激猫“足三里”的脊髓突触变化的实验形态学研究

为了探讨针刺镇痛的神经形态学基础,在猫的“足三里”穴,电针刺激30分钟(电压16.5V频率180次/分)后,电镜观察了支配“足三里”的初级传入纤维在腰髓后角(L7)Rexed Ⅰ—Ⅵ层的M(monosynaptic)型神经终末及其突触变化,并与正常超微结构进行了比较。在用WGA—HRP追踪支配“足三里”初级传入纤维在脊髓内分布的实验中,看到细纤维的神经终末分布在后角背外删Ⅰ—Ⅲ层,粗纤维的大型终末分布在Ⅳ—Ⅵ层。超微结构的改变主要有 1、球形突触小泡向活性带集中。2、突触小泡全量减少。3、出现大量糖原颗粒、溶酶体和空泡。在支配“足三里”初级传入纤维的M型终末中这些改变有的可出现一种,有的同时出现几种。这些改变具有可塑性,容易恢复。变化出现的原因可能是突触活性增强,产生疲劳、乏氧、贫血、低营养等造成的。与此同时还观察到来自后根的M型终末上有与之形成轴—轴突触的p型抑制性终末,终末内有椭圆形小泡向活性带集中,活性带较正常显著增厚,这些事实意味着突触前抑制增强,抑制其兴奋性,这可能是产生针刺镇痛效果的形态学基础之一。

M-Enk在猫背根节切除后脊髓Ⅱ板层的表达

目的探讨猫脊髓背根神经节切除后,甲硫胺酸脑啡肽(M-Enk)在脊髓后角Ⅱ板层内的表达变化及M-Enk异类终末。方法10只成年雄性猫,在腹腔内注射麻醉下行腰1到骶2(L1～S2)单侧脊髓背根节切除术,建立猫背根节全切模型,术后分为急性组5只,存活2周,慢性组5只,存活2个月,观察到期后,动物心内灌注固定处死,取L6节段脊髓,采用免疫组化染色方法检测手术侧和对侧脊髓Ⅱ板层内M-Enk的表达,电镜下观察M-Enk异类终末。结果光镜下M-Enk阳性染色主要分布于脊髓Ⅱ板层的外侧份,成颗粒状和线条状,急性组手术侧与对侧非手术侧阳性染色无明显差异,慢性组两侧阳性染色均减弱,手术侧约强于对照侧。电镜下,在慢性组手术侧Ⅱ板层脊髓中,观察到简单终末,发现了M-Enk阳性非典型复合终末(ACT),它们较小,外观上呈圆形或椭圆形,多与两个突触后成分形成联系,突触活性带形较平直或向外凸,突触内含均匀清亮小泡或致密核心小泡。结论M-Enk在猫脊髓背根节切除后主要在脊髓Ⅱ板层外侧表达,M-Enk阳性ACT可能是脊髓背根节全切后的一种代偿终末。

一种基于智能瞄具的抗干扰“猫眼”目标探测方法

目前的“猫眼”目标激光主动探测系统尽管发射功率大,探测距离远,但普遍存在质量较大、灵活性差的缺点。为增强灵活性,减少作战反应时间,确保对目标发现即摧毁,可在步枪智能瞄具中集成小功率“猫眼”目标主动探测系统,与现有系统形成优势互补。由于智能瞄具搭载了小型激光测距仪及CMOS图像传感器,因此本文根据其硬件特点,设计了一种利用小功率激光器发射伪随机编码激光脉冲序列、CMOS传感器同步采集数据,通过相关运算提取目标信息的抗干扰“猫眼”目标探测方法,并进行了理论分析与实验验证。实验结果表明,该方法具有较强的稳定性和抗干扰能力,能够使智能瞄具在较复杂的背景中发现“猫眼”目标。

益气扶正平喘化痰中药颗粒配方联合穴位贴敷干预社区慢性阻塞性肺疾病慢性稳定期的研究

目的:观察益气扶正平喘化痰中药颗粒配方联合穴位贴敷干预社区慢性阻塞性肺疾病慢性稳定期的临床疗效。方法:采用随机、双盲、对照研究。收集社区慢性阻塞性肺疾病慢性稳定期患者281例,随机分成治疗组与对照组。治疗组在常规西药治疗基础上予益气扶正平喘化痰中药颗粒配方联合穴位贴敷干预,对照组在常规西药治疗基础上予安慰剂中药颗粒配方联合安慰剂穴位贴敷。干预24周后比较两组症状评分、CAT评分、急性加重次数、呼吸困难指数、肺功能的变化。结果:治疗后,两组症状评分均下降,差异有统计学意义(P<0.05);治疗后比较,治疗组症状评分低于对照组(P<0.05);治疗组CAT评分下降,差异有统计学意义(P<0.05),对照组CAT评分下降,但差异无统计学意义(P>0.05),治疗后比较,治疗组CAT评分低于对照组(P<0.05);治疗组急性发作次数减少,差异有统计学意义(P<0.05),对照组急性发作次数减少,但差异无统计学意义(P>0.05),治疗后比较,治疗组急性发作次数低于对照组(P<0.05);治疗组呼吸困难评分降级,差异有统计学意义(P<0.05),对照组呼吸困难评分降级,但差异无统计学意义(P>0.05),治疗后比较,治疗组呼吸困难评分等级低于对照组(P<0.05);两组肺功能均有所改善(P<0.05),治疗后比较,治疗组肺功能优于对照组(P>0.05)。结论:益气扶正平喘化痰中药颗粒配方联合穴位贴敷干预可降低社区慢性阻塞性肺疾病慢性稳定期患者症状评分、CAT评分、急性发作、呼吸困难指数,改善肺功能。

猫感染鼠疫菌后F1抗体及其IgM变化与在监测中的应用前景分析

目的观察猫接种鼠疫菌后鼠疫F1抗体及其免疫球蛋白M（IgM）变化，探讨Fl抗体及IgM在动物鼠疫监测中的意义。方法猫3只，在猫背部采用多点皮下注射法接种鼠疫菌，于接种后3～521d，定期股静脉采血，酶联免疫吸附试验（ELISA）夹心法检测鼠疫F1抗体，捕获法检测鼠疫IgM。结果猫接种鼠疫菌后第3天，F1抗体及IgM出现弱阳性反应，平均滴度分别为1：22伽和1：2^0.33。鼠疫F1抗体滴度，第4天升高到1：2^5.33，第97天达到高峰，为1：29”，第521天仍保持在1：2^5.33；IgM滴度，第7～10天出现高峰，为1：2^12.00，其后快速降低，第30天后降到阳性反应标准以下。结论ELISA夹心法检测猫鼠疫F1抗体，可追溯较长时间的动物鼠疫流行，适用于鼠疫疫源地调查；捕获法检测猫鼠疫IgM，单份血清可判定早期动物鼠疫。两种方法同步检测F1抗体及IgM，判定动物感染鼠疫的时间可精确到3～7d。

mMRC评估和CAT评分评估慢性阻塞性肺疾病患者病情严重程度的临床效果

目的分析改良呼吸困难指数(m MRC)评估和慢性阻塞性肺疾病评估测试量表(CAT)评分评估慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者病情严重程度的临床效果。方法选择2014年4月至2015年6月接受诊治的75例COPD稳定期患者作为研究对象,分析m MRC评估、CAT评分与COPD病情严重程度的相关性。结果 m MRC评估级别、CAT评分分值均与COPD患者病情严重程度存在显著相关性。结论 m MRC评估、CAT评分均可反映COPD患者病情的严重程度,两者均与COPD患者病情严重分级存在密切联系。