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动物RNA病毒检测关键试剂—反转录酶(M-MLV RTase)的制备
1
作者
牛建蕊
高志强
+4 位作者
蒲静
张伟
刘环
刘文晓
张鹤晓
《中国兽医杂志》
CAS
北大核心
2016年第11期26-28,共3页
反转录酶是动物RNA病毒分子诊断用到的关键试剂之一。为获得纯度高、活性高、制备简单经济的M-MLV RTase,本试验将M-MLV RTase的基因序列进行密码子优化,合成并构建表达载体。将表达载体转化到大肠杆菌E.coli Rosetta宿主菌种,经IPTG诱...
反转录酶是动物RNA病毒分子诊断用到的关键试剂之一。为获得纯度高、活性高、制备简单经济的M-MLV RTase,本试验将M-MLV RTase的基因序列进行密码子优化,合成并构建表达载体。将表达载体转化到大肠杆菌E.coli Rosetta宿主菌种,经IPTG诱导后实现M-MLV RTase的可溶性表达。利用Ni2+柱亲和层析纯化载有6x His标记的重组MMLV RTase,对重组酶进行Western Blotting试验,鉴定为M-MLV RTase。通过对动物流感病毒RNA的普通RT-PCR和荧光RT-PCR检测来评价重组酶的活性并估测其活性单位。将活性单位相当的重组酶和商品酶进行比较,结果显示,制备的重组酶活性高,对不同浓度病毒RNA的检测结果与商品酶相当。研制的M-MLV RTase可以用于动物RNA病毒的分子诊断。
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关键词
m-mlv
RTase
表达
纯化
RT-PCR
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职称材料
富勒烯(C_(60))对RNA逆转录的影响
2
作者
李佳
林燕
+3 位作者
陈敏杰
张捷
李正
梁勇
《江汉大学学报(自然科学版)》
2013年第6期66-71,共6页
目的:研究富勒烯(C60)对RNA逆转录(Reverse Transcription,RT)反应的影响。方法:以斑马鱼鱼肝mRNA为模板,在M-MLV逆转录酶作用下合成cDNA,并在RT反应体系中添加不同浓度的C60,分别研究C60对M-MLV逆转录酶和RNA构象的影响。结果:100μg/m...
目的:研究富勒烯(C60)对RNA逆转录(Reverse Transcription,RT)反应的影响。方法:以斑马鱼鱼肝mRNA为模板,在M-MLV逆转录酶作用下合成cDNA,并在RT反应体系中添加不同浓度的C60,分别研究C60对M-MLV逆转录酶和RNA构象的影响。结果:100μg/mL C60可显著抑制RT反应,抑制效应与C60浓度相关,但增加M-MLV逆转录酶量可以有效逆转C60对RT的抑制作用。C60与RNA在37℃避光孵育12 h后,C60可特异降解28S rRNA,同样具有浓度依赖性。结论:C60不仅可显著抑制M-MLV逆转录酶活性,而且对RNA也具有一定的损伤作用,C60具有潜在的基因毒性。
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关键词
富勒烯(C60)
逆转录
RNA
M—MLV逆转录酶
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职称材料
题名
动物RNA病毒检测关键试剂—反转录酶(M-MLV RTase)的制备
1
作者
牛建蕊
高志强
蒲静
张伟
刘环
刘文晓
张鹤晓
机构
北京森康生物技术开发有限公司
北京出入境检验检疫局
出处
《中国兽医杂志》
CAS
北大核心
2016年第11期26-28,共3页
基金
国家质检总局科技计划项目(2014IK232)
文摘
反转录酶是动物RNA病毒分子诊断用到的关键试剂之一。为获得纯度高、活性高、制备简单经济的M-MLV RTase,本试验将M-MLV RTase的基因序列进行密码子优化,合成并构建表达载体。将表达载体转化到大肠杆菌E.coli Rosetta宿主菌种,经IPTG诱导后实现M-MLV RTase的可溶性表达。利用Ni2+柱亲和层析纯化载有6x His标记的重组MMLV RTase,对重组酶进行Western Blotting试验,鉴定为M-MLV RTase。通过对动物流感病毒RNA的普通RT-PCR和荧光RT-PCR检测来评价重组酶的活性并估测其活性单位。将活性单位相当的重组酶和商品酶进行比较,结果显示,制备的重组酶活性高,对不同浓度病毒RNA的检测结果与商品酶相当。研制的M-MLV RTase可以用于动物RNA病毒的分子诊断。
关键词
m-mlv
RTase
表达
纯化
RT-PCR
Keywords
m-mlv
RTase
expression
purification
RT-PCR
分类号
S852.659.3 [农业科学—基础兽医学]
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职称材料
题名
富勒烯(C_(60))对RNA逆转录的影响
2
作者
李佳
林燕
陈敏杰
张捷
李正
梁勇
机构
江汉大学医学院
华中农业大学资源与环境学院
江汉大学光电化学材料与器件省部共建教育部重点实验室
出处
《江汉大学学报(自然科学版)》
2013年第6期66-71,共6页
基金
国家自然科学基金(20907017
20890112)
文摘
目的:研究富勒烯(C60)对RNA逆转录(Reverse Transcription,RT)反应的影响。方法:以斑马鱼鱼肝mRNA为模板,在M-MLV逆转录酶作用下合成cDNA,并在RT反应体系中添加不同浓度的C60,分别研究C60对M-MLV逆转录酶和RNA构象的影响。结果:100μg/mL C60可显著抑制RT反应,抑制效应与C60浓度相关,但增加M-MLV逆转录酶量可以有效逆转C60对RT的抑制作用。C60与RNA在37℃避光孵育12 h后,C60可特异降解28S rRNA,同样具有浓度依赖性。结论:C60不仅可显著抑制M-MLV逆转录酶活性,而且对RNA也具有一定的损伤作用,C60具有潜在的基因毒性。
关键词
富勒烯(C60)
逆转录
RNA
M—MLV逆转录酶
Keywords
fullerene (C60)
reverse transcription
RNA
m-mlv
reverse transcriptase
分类号
O635.1 [理学—高分子化学]
Q52 [生物学—生物化学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
动物RNA病毒检测关键试剂—反转录酶(M-MLV RTase)的制备
牛建蕊
高志强
蒲静
张伟
刘环
刘文晓
张鹤晓
《中国兽医杂志》
CAS
北大核心
2016
0
下载PDF
职称材料
2
富勒烯(C_(60))对RNA逆转录的影响
李佳
林燕
陈敏杰
张捷
李正
梁勇
《江汉大学学报(自然科学版)》
2013
0
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职称材料
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