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MAPK和MPF对小鼠受精卵有丝分裂期作用 被引量:7
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作者 穆润清 贺安宁 +1 位作者 王丽 于秉治 《中国公共卫生》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期594-595,共2页
目的探讨有丝分裂促进因子(MPF)和丝裂原活化的蛋白激酶(MAPK)在小鼠受精卵第一有丝分裂期(M期)中的作用及相互关系。方法分别用MAPK激酶特异性抑制剂(U0126)和MPF特异性抑制剂(roscovitine)抑制受精卵细胞MAPK和MPF的活性,通过同位素测... 目的探讨有丝分裂促进因子(MPF)和丝裂原活化的蛋白激酶(MAPK)在小鼠受精卵第一有丝分裂期(M期)中的作用及相互关系。方法分别用MAPK激酶特异性抑制剂(U0126)和MPF特异性抑制剂(roscovitine)抑制受精卵细胞MAPK和MPF的活性,通过同位素测定MAPK和MPF的活性变化,利用显微镜进行形态观察来判定MAPK活性变化对受精卵发育的影响。结果在受精卵第一次有丝分裂期,正常组小鼠受精卵MAPK和MPF的活性均有短暂升高。在U0126处理组,MAPK的活性受抑制会导致受精卵处于M期而不发生分裂,但MPF的活性未受到影响。在roscovitine处理组,MPF的活性受到抑制导致受精卵处于M期不发生分裂,此时MAPK不发生活化。结论MAPK和MPF的活化对于小鼠受精卵完成有丝分裂是不可缺少的,在有丝分裂期MPF参与MAPK的活化。 展开更多
关键词 特异性抑制剂(roscovitine) 有丝分裂促进因子 丝裂原活化的蛋白激酶(MAPK) 有丝分裂
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Wee1B蛋白S15位点突变抑制小鼠1-细胞期受精卵的发育 被引量:3
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作者 刘超 肖建英 +1 位作者 任丽莉 于秉治 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第1期52-59,共8页
为研究小鼠Wee1B蛋白S15位点磷酸化状态对小鼠1-细胞期受精卵发育的影响,构建pcDNA3.1/V5-His-TOPO-Wee1B-S15A(Ser突变成Ala)/D(Ser突变成Asp)突变体,体外转录成mRNAs.对小鼠进行超排卵后当晚与雄鼠1∶1合笼,第2 d早取受精卵后培养至S... 为研究小鼠Wee1B蛋白S15位点磷酸化状态对小鼠1-细胞期受精卵发育的影响,构建pcDNA3.1/V5-His-TOPO-Wee1B-S15A(Ser突变成Ala)/D(Ser突变成Asp)突变体,体外转录成mRNAs.对小鼠进行超排卵后当晚与雄鼠1∶1合笼,第2 d早取受精卵后培养至S期,显微注射Wee1B-WT(野生型)/KD(激酶失活型)-mRNAs和突变体Wee1B-S15A/D-mRNAs,观察其对受精卵发育、有丝分裂促进因子(MPF)活性及CDC2-pTyr15磷酸化状态的影响.结果表明,过表达Wee1B-WT和Wee1B-S15A/D可有效抑制受精卵有丝分裂进程,明显降低卵裂率.过表达模拟磷酸化的突变明显抑制MPF的活性,CDC2-pTyr15磷酸化状态和MPF活性变化相一致.因此,在小鼠1-细胞期受精卵有丝分裂过程中,PKA对小鼠Wee1B蛋白S15位点的磷酸化修饰是控制受精卵G2/M转换的重要方式. 展开更多
关键词 Wee1B 蛋白激酶A 有丝分裂促进因子 小鼠受精卵
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双丁酰环腺苷酸通过蛋白激酶Wee1B调控小鼠1-细胞期受精卵的发育研究 被引量:1
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作者 任丽莉 刘超 +2 位作者 刘乙蒙 张苧兮 肖建英 《中国现代医生》 2017年第22期34-38,F0003,共6页
目的 探讨蛋白激酶A(protein kinase A,PKA)激活剂双丁酰环腺苷酸(dual dibutyryl cyclic AMP,dbc AMP)调控蛋白激酶Wee1B蛋白对小鼠1-细胞期受精卵发育的影响,为进一步研究母源性因子Wee1B在早期胚胎发育过程中的作用提供理论基础。... 目的 探讨蛋白激酶A(protein kinase A,PKA)激活剂双丁酰环腺苷酸(dual dibutyryl cyclic AMP,dbc AMP)调控蛋白激酶Wee1B蛋白对小鼠1-细胞期受精卵发育的影响,为进一步研究母源性因子Wee1B在早期胚胎发育过程中的作用提供理论基础。方法将2 mmol/L dbc AMP作用于小鼠1-细胞期受精卵1 h,并显微注射Wee1Bm RNAs,实验分为未注射组、TE缓冲液注射组、Wee1B-WT/KD注射组、Wee1B-S15A/D注射组,继续在M16培养基中培养。相差显微镜下观察小鼠受精卵的形态变化和卵裂情况,放射自显影测定各期细胞有丝分裂促进因子(MPF)活性,Western blotting方法检测Wee1B蛋白的表达、CDC2-p Tyr15和Wee1B-p Ser15的磷酸化水平。结果小鼠受精卵在有dbc AMP存在时,G_1、S、G_2和M各细胞周期均检测到磷酸化的Wee1B表达,非磷酸化条带在G_2期和M期才能检测到;各组受精卵卵裂出现时间延迟,卵裂率显著降低;h CG注射后35 h内,MPF活性一直处于低水平,CDC2-p Tyr15磷酸化状态和MPF活性变化趋势相一致。结论dbc AMP激活PKA后,PKA磷酸化Wee1B蛋白的S15位点,Wee1B活性增加,阻滞受精卵分裂,本研究提示Wee1B蛋白的S15位点可能是PKA作用的生理靶点,可以更好地认识早期胚胎发育的分子事件。 展开更多
关键词 WeelB 双丁酰环腺苷酸 蛋白激酶A 有丝分裂促进因子 小鼠受精卵
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小鼠卵母细胞体内成熟过程中CDK1蛋白及其mRNA的动态变化
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作者 孙亚婷 贾瑶 朱爱珍 《生殖医学杂志》 CAS 2022年第11期1583-1587,共5页
目的 探讨小鼠卵母细胞体内成熟过程中细胞周期蛋白依赖性激酶-1(CDK1)蛋白和CDK1 mRNA表达的动态变化。方法 将6~8周龄SPF级ICR雌性小鼠68只随机分为4组,根据获取卵母细胞的时期分为GV组、GVBD组、MⅠ组和MⅡ组,每组17只。腹腔注射10 ... 目的 探讨小鼠卵母细胞体内成熟过程中细胞周期蛋白依赖性激酶-1(CDK1)蛋白和CDK1 mRNA表达的动态变化。方法 将6~8周龄SPF级ICR雌性小鼠68只随机分为4组,根据获取卵母细胞的时期分为GV组、GVBD组、MⅠ组和MⅡ组,每组17只。腹腔注射10 U孕马血清促性腺激素(PMSG)48 h后,颈椎脱臼处死法处死小鼠,获取GV期卵母细胞;注射PMSG 48 h后注射10 U人绒毛膜促性腺激素(HCG),分别于注射HCG后4 h、8 h和12 h后获取GVBD、MⅠ和MⅡ期卵母细胞。Western blot检测各阶段卵母细胞CDK1蛋白的表达,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测各阶段卵母细胞中CDK1 mRNA的表达,并采用Spearman相关分析检验CDK1 mRNA和蛋白表达的相关性。结果 Western blot结果显示,CDK1蛋白在GV、GVBD、MⅠ和MⅡ期卵母细胞均有表达,且随着卵母细胞的体内成熟,CDK1蛋白表达量持续增加(P<0.05)。qRT-PCR结果显示,CDK1 mRNA在GV、GVBD、MⅠ和MⅡ期卵母细胞均有表达;与GV期比较,GVBD期和MⅠ期CDK1 mRNA表达水平均显著下调(P<0.05),而MⅡ期CDK1 mRNA表达水平显著上调(P<0.05)。Spearman相关分析显示,卵母细胞体内成熟过程中CDK1蛋白与CDK1 mRNA表达的相关性较差(R=0.200)。结论 卵母细胞体内成熟过程中CDK1蛋白的增加并不完全是由转录水平的变化引起的,其他一些机制可能在转录后水平上影响CDK1蛋白的翻译。本研究为进一步深入探讨卵母细胞成熟的分子机制奠定了一定基础。 展开更多
关键词 小鼠 卵母细胞成熟 卵细胞成熟促进因子 细胞周期蛋白依赖性激酶-1
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CDC25B蛋白S149/S321位点突变对小鼠1-细胞期受精卵发育的影响 被引量:2
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作者 刘超 肖建英 +2 位作者 孙小涵 徐晓燕 于秉治 《生殖与避孕》 CAS CSCD 2012年第2期73-80,共8页
目的:研究小鼠CDC25B蛋白S149位点对小鼠1-细胞期受精卵发育的影响及S149位点与S321位点的关系。方法:构建pBSK-CDC25B-S149A和pBSK-CDC25B-S149A/S321A突变体,体外转录成mRNA;采用小鼠超排卵技术取G1期受精卵,显微注射CDC25B-WT-mRNA... 目的:研究小鼠CDC25B蛋白S149位点对小鼠1-细胞期受精卵发育的影响及S149位点与S321位点的关系。方法:构建pBSK-CDC25B-S149A和pBSK-CDC25B-S149A/S321A突变体,体外转录成mRNA;采用小鼠超排卵技术取G1期受精卵,显微注射CDC25B-WT-mRNA和突变CDC25B-S149A-mRNA、CDC25B-S149A/S321A-mRNA,观察其对受精卵发育、M期促进因子(MPF)活性及CDC2-pTyr15磷酸化状态的影响。结果:CDC25B-S149A-mRNA注射组受精卵卵裂率明显高于CDC25B-WT-mRNA注射组,MPF活性提前1 h达到高峰;而联合突变体CDC25B-S149A/S321A-mRNA注射组卵裂率又显著高于CDC25B-S149A-mRNA注射组。结论:在小鼠1-细胞期受精卵有丝分裂过程中,蛋白激酶A(PKA)对小鼠CDC25B蛋白S149位点的磷酸化修饰是控制受精卵G2/M转换的重要方式,并且S149位点与S321位点可能具有协同作用。 展开更多
关键词 CDC25B蛋白 蛋白激酶A(PKA) M期促进因子(mpf) 小鼠受精卵
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Identification of a novel resident centrosomal protein
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作者 CHEN Xiaobo WANG Yongchao +1 位作者 LI Yongzhe GUI Jingtao 《Chinese Science Bulletin》 SCIE EI CAS 2001年第1期21-26,共6页
One human autoimmune serum was identified to react with centrosomes by immunofluorescence. We applied the affinity purification of membrane-bound antibody technique and demonstrated that the antibodies present in this... One human autoimmune serum was identified to react with centrosomes by immunofluorescence. We applied the affinity purification of membrane-bound antibody technique and demonstrated that the antibodies present in this antiserum reacted with a 31/29 ku centrosomal antigen. Immunofluorescence showed that this antigen is located at cen-trosome in a cell-cycle independent manner, and thereby it belongs to the family of centrosomal residents. We then utilized this autoimmune serum and antibodies against centrin and gamma-tubulin to investigate changes of centrosome cycle kinetics during premature chromosome condensation (PCC) artificially induced in V79-8 cells. We show here that centrosomal proteins continue to express when cells are syn-chronized at G1/S boundary and S phase by Hydroxyurea (HU). During this tune, the addition of caffeine causes cells with unreplicated genome to go into mitosis, and induces the separation of the replicated centrosomes. These results suggest that the coordination of DNA 展开更多
关键词 human AUTOIMMUNE serum 31/29 KU ANTIGEN centro-some MITOSIS with unreplicated genome (MUG) MITOSIS promoting factor (mpf).
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