基于加权基因共表达网络鉴定肾移植术后排斥反应中巨噬细胞M1亚型相关基因

目的鉴定肾移植术后排斥反应中巨噬细胞M1亚型表达的相关基因并构建风险模型预测移植肾存活。方法在基因表达综合(GEO)数据库下载肾移植术后的GSE36059及GSE21374数据集。GSE36059包括发生排斥反应和稳定移植物的样本,使用该数据集进行加权基因共表达网络分析(WGCNA)和差异分析筛选差异表达的巨噬细胞M1亚型相关差异表达基因(M1-DEG)。随后将GSE21374数据集(包含了移植物丢失的随访数据)按照7∶3拆分为训练集以及验证集,在训练集中使用最小绝对收缩和选择算法(LASSO)筛选变量构建多因素Cox模型,并评估模型预测移植物存活的能力。使用CIBERSORT分析高、低风险组浸润的免疫细胞的差异,并分析两组间人类白细胞抗原(HLA)相关基因的分布,基因集富集分析(GSEA)用于进一步明确高风险组中富集的生物学过程以及通路。最后使用数据库预测与预后基因互作的微小核糖核酸(miRNA)。结果在GSE36059数据集中,筛选得到14个M1-DEG。在GSE21374数据集中,使用LASSO-Cox回归筛选出Toll样受体8(TLR8)、Fcγ受体1B(FCGR1B)、BCL2相关蛋白A1(BCL2A1)、组织蛋白酶S(CTSS)、鸟苷酸结合蛋白2(GBP2)及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶招募域家族成员16(CARD16),基于这6个M1-DEG构建多因素Cox模型。风险模型在训练集中预测1年及3年移植物存活的受试者工作特征曲线下面积(AUC)分别为0.918和0.877,在验证集中预测1年及3年移植物存活的AUC分别为0.765及0.736。免疫浸润分析表明,高风险组静息及活化的CD4+记忆T细胞、γδT细胞、巨噬细胞M1亚型浸润增多(均为P<0.05)。高风险组HLAⅠ类基因表达上调。GSEA分析表明,高风险组免疫反应及移植物排斥反应富集。CTSS与8个miRNA相互作用、BCL2A1和GBP2与3个miRNA相互作用、FCGR1B与1个miRNA相互作用。结论本研究基于6个M1-DEG构建的预后风险模型对于预测移植肾存活具有良好的表现,可为早期对高风险受者干预提供依据。

脑震荡对大鼠脑内乙酰胆碱M1受体亚型的影响

脑震荡是轻型闭合性脑损伤，占颅脑外伤患者的75．5％～78．2％。脑震荡后主要表现为立即出现短暂性昏迷与记忆障碍，其中学习记忆能力的损害是最持久和对患者影响最重的症状之一。国内外对开放性脑损伤的认知行为机制方面进行了研究，发现存在有与损伤程度相关的乙酰胆碱受体的变化，但其机制至今还未阐明。本研究用免疫组织化学方法，探讨脑震荡鼠中枢乙酰胆碱M1受体（M1-R）蛋白表达的变化，以进一步探索脑震荡的神经生物学机制。

AML-M_1型患者TCR V_βT细胞家族表达抑制情况

目的 了解急性髓细胞白血病M1亚型 (AML -M1)患者TCRVβ亚家族T细胞的分布特点。 方法 采用RT-PCR扩增 8例M1患者外周血的单个核细胞的TCRVβ 2 4个亚家族基因 ,分析了其TCRVβ亚家族的利用情况。 结果 不同标本中可检测到 2～ 8Vβ亚家族的T细胞 ,不同患者中Vβ亚家族T细胞分布不尽相同。 结论 M1患者外周血TCRVβT细胞家族表达部分受抑制 ,提示患者细胞免疫功能的部分缺陷。

重组Klotho蛋白对骨髓来源M1型巨噬细胞向M2型巨噬细胞转变的影响

目的:探究重组Klotho蛋白对小鼠骨髓来源M1型巨噬细胞向M2型巨噬细胞表型转变的影响。方法:分离并鉴定小鼠骨髓来源性巨噬细胞,用巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)诱导骨髓间充质干细胞(BMSC)转变为巨噬细胞M0,流式细胞术和细胞免疫荧光鉴定细胞,普通光镜观察M0细胞形态。将成熟骨髓来源巨噬细胞细胞M0分成LPS组、LPS+Klotho组和空白组。LPS组用100 ng/mL LPS处理,LPS+Klotho组给与1μg/mL Klotho和100 ng/mL LPS+LPS共同处理。RT-qPCR检测巨噬细胞极化相关分子:M1亚型巨噬细胞相关标志物(IL-1β、IL-6、iNOS)mRNA和M2亚型巨噬细胞相关标记物(Arg-1、IL-10)mRNA表达。Western blotting检测iNOS、Arg-1蛋白表达水平,细胞免疫荧光检测细胞肿瘤坏死因子(TNF-α)和Arg-1蛋白含量。结果:流式细胞术显示骨髓巨噬细胞纯度为98.4%,光镜和细胞免疫荧光显示骨髓巨噬细胞呈现不规则形态。与空白组相比,LPS组IL-6、iNOS、IL-1β的mRNA和iNOS、TNF-α蛋白相对表达量明显提高(P<0.001)。而与LPS组相比,LPS+Klotho组降低M1亚型巨噬细胞标记物IL-6、iNOS、IL-1β的mRNA和iNOS、TNF-α蛋白相对表达量(P<0.001),显著提高了M2型巨噬细胞标志物Arg-1、IL-10 mRNA和Arg-1的蛋白的表达(P<0.001)。结论:重组Klotho蛋白可促进骨髓来源性巨噬细胞由M1表型向M2表型转变。

人脐血间充质干细胞对小鼠骨髓巨噬细胞M2亚型的转化作用

背景:间充质干细胞已经被用于多种疾病的治疗,且研究表明间充质干细胞可能是通过促进巨噬细胞向M2亚型转化来产生生物效应,但这种效应是否呈量效、时效关系及其转化效应是否需要细胞间直接接触尚不明确。目的:验证人脐血间充质干细胞对巨噬细胞M2亚型转化效应,并探讨人脐血间充质干细胞对巨噬细胞M2亚型转化效应的剂量与时间相关性。方法:从小鼠骨髓中提取单核细胞,采用巨噬细胞集落刺激因子诱导产生M0型巨噬细胞(F4/80+,CD11B+)。将M0型巨噬细胞以1×10^6/孔密度植入Transwell板或6孔培养板中,分别以不同密度(0,2×10^5,4×10^5)人脐血间充质干细胞在含有脂多糖(100μg/L)/干扰素γ(20μg/L)完全培养基中直接或间接共培养24,48 h。显微镜下观察巨噬细胞形态学改变,流式细胞仪检测M2型巨噬细胞(CD206+,CD11C-)占整体比例,ELISA检测细胞培养上清液白细胞介素10、白细胞介素6和白细胞介素1β水平。结果与结论:①与人脐血间充质干细胞共培养后,巨噬细胞触角伸长,呈长索状M2型细胞形态特征;②与人脐血间充质干细胞直接共培养、间接共培养24,48 h,M2型巨噬细胞百分比显著性增加(P <0.05);③人脐血间充质干细胞低浓度与高浓度组间比较,M2型巨噬细胞百分比差异无显著性意义;④直接或间接培养48 h的M2型巨噬细胞百分比均显著高于24 h,差异有显著性意义(P <0.05)。⑤人脐血间充质干细胞直接共培养、间接共培养上清中促炎性细胞因子白细胞介素6、白细胞介素1β水平显著减少,而抑炎性细胞因子白细胞介素10水平显著增加(P <0.05);⑥直接或间接共培养48 h抑炎性细胞因子白细胞介素10水平均较24 h显著上升(P <0.05);⑦结果表明,人脐血间充质干细胞与巨噬细胞直接与间接接触均促进巨噬细胞M2亚型转化,其转化效应有时效依赖性,而与细胞浓度无相关性。

放射自显影技术研究老年大鼠不同脑区M胆碱受体的变化

目的： 观察自然衰老大鼠不同脑区Ｍ 胆碱受体包括Ｍ１ 亚型受体的变化。方法： 采用放射自显影技术显示大鼠脑Ｍ 受体，并用图像分析仪进行灰度分析，以反映Ｍ 受体在不同脑区的相对定量分布。结果： 所得脑切片自显影灰度层次清晰，主要分布在大脑皮质，海马，纹状体等部位，非特异结合灰度很低，图像分析仪分别给出不同脑区的平均灰度值，老年鼠皮质，海马，纹状体部位的灰度显著低于青年鼠，Ｍ 受体分别降低２４８７ ％ ，１４１２ ％ ，１２７６ ％ （ Ｐ＜ ００５） ，Ｍ１ 亚型受体分别降低１５７８ ％ ，８６９ ％ ，１２３６ ％ （ Ｐ＜ ００１） 。结论： 以上３ 个重要脑区Ｍ

心脉隆注射液对大鼠脑缺血/再灌后小胶质细胞活化和不同亚型分化的影响

目的:研究心脉隆注射液(XML)对大鼠大脑中动脉阻塞/再灌注(MCAO/R)后小胶质细胞活化和不同亚型分化的影响。方法:建立大鼠大脑MCAO/R模型,于再灌1 h后给药,连续3次,每次间隔24 h。采用免疫荧光法观察XML对缺血半暗带区钙离子接头蛋白-1(Iba-1)阳性细胞(即激活的小胶质细胞)密度的影响,采用Q-PCR法测定XML对缺血半暗带区CD16和Arginase-1基因表达水平的影响。结果:与MCAO/R模型组相比,XML可显著减少MCAO/R大鼠缺血半暗带区增加的小胶质细胞密度,降低CD16基因表达水平,但不影响Arginase-1基因表达水平。结论:XML能降低缺血半暗带区小胶质细胞的激活,减少小胶质细胞向M1亚型的转化,而不影响其向M2亚型转化。

RAW264.7细胞M1/M2亚型的诱导和鉴定

目的诱导小鼠巨噬细胞RAW264.7分化为M1/M2亚型,并分别根据其标志物的表达情况进行鉴定。方法干预前一天以105个/ml密度铺好细胞,用不同浓度的IFN-γ+LPS干预,刺激分化为M1亚型;用不同浓度IL-4干预,刺激分化为M2亚型。分别于干预后12h提取细胞的总RNA。用realtime PCR方法对M1/M2亚型的标志物iNOS,CD86/MR(CD206),I型精氨酸酶(ArginaseI,Arg-I)进行mRNA水平表达量的鉴定,最终选择最合适的刺激浓度进行后续试验。结果 (1).不同浓度干预试剂刺激12h后,大剂量干预组RAW264.7的细胞状态差,死亡细胞数多,中小剂量组细胞状态良好,完全贴壁,但细胞的形态发生改变;(2).2.5ng/ml IFN-γ+200ng/ml LPS共同作用12h后,RAW264.7的iNOS和CD86表达量最高,较基础水平有明显差异;(3).10ng/ml IL-4作用12h后,RAW264.7的MR(CD206)和ArgI的表达量最高,较基础水平有明显差异。结论用适当浓度的IFN-γ+LPS/IL-4刺激RAW264.7细胞12h,可使其分化为M1/M2亚型。

胎鼠真皮间充质干细胞对小鼠巨噬细胞极化的影响

目的:探究胎鼠真皮间充质干细胞(Fetal mice dermal mesenchymal stem cells,FDMSCs)对M1/2型巨噬细胞极化的影响。方法:本研究提取FDMSCs,利用脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)、γ干扰素(Interferon-γ,IFN-γ)刺激RAW 264.7诱导为M1型巨噬细胞,利用白细胞介素4(Interleukin-4,IL-4)刺激RAW264.7诱导为M2型巨噬细胞,并建立了FDMSCs-RAW 264.7共培养体系。共培养24 h后,收集巨噬细胞,用实时定量PCR和流式细胞学检测M1/2型巨噬细胞特征性因子白细胞介素6(Interleukin-6,IL-6)、诱导性一氧化氮合酶(Inducible nitric oxide synthase,iNOS)、CD86、白细胞介素10(Interleukin-10,IL-10)、精氨酸酶1(Arg-1)、CD206的表达变化。结果:FDMSCs使M1型巨噬细胞表达的IL-6、iNOS、CD86减少,IL-10、CD206增多;使M2型巨噬细胞表达的IL-10、Arg-1、CD206表达增多,iNOS表达减少。结论:FDMSCs可以通过调控巨噬细胞极化来调控伤口愈合,对于探索FDMSCs在创面治疗过程中的免疫调节机制有积极意义。

巨噬细胞在急性呼吸窘迫综合征中的研究进展

急性呼吸窘迫综合征是导致危重患者高死亡率的一个重要原因。ARDS的病理生理基础是肺部炎症的急性发作,在炎症和随后的纤维增生阶段,从损伤到修复的转变是依赖于由免疫系统调节的一系列高度协调事件的活跃过程。肺泡巨噬细胞(alveolarmacrophage,AM)在ARDS炎症反应启动、维持和后续的组织修复中发挥了重要作用。不同炎症介质及细胞因子作用下AM可极化为功能完全不同的表型,分泌不同的细胞因子,介导促炎症或抑炎症反应。通过调节细胞信号传导和特征基因表达影响巨噬细胞M1/M2极化受到越来越多的关注。在这篇综述中,我们将讨论巨噬细胞的特征,ARDS中的巨噬细胞极化相关的信号通路,这将为ARDS的治疗策略提供新方向。

支气管肺发育不良患儿气管抽吸物单核细胞检测的临床意义研究

目的观察支气管肺发育不良(BPD)患儿气管抽吸物中单核细胞亚型的变化,借此探讨其与BPD的相关性。方法选取我院2018年1月至2019年6月需要机械通气治疗的呼吸窘迫综合征(RDS)早产儿62例,其中BPD组(氧依赖超过28天)24例,对照组38组。流式细胞仪检测患儿气管抽吸物中单核细胞亚型M1和M2所占的比例,ELISA法检测TNF-α、IL-1和IL-10表达。结果两组早产儿气管抽吸物中单核细胞比例差异无显著性(P>0.05),BPD组M1占7.65±1.28%,显著高于对照组的3.57±0.54%(P<0.01),BPD组M2占3.38±0.44%,显著低于对照组的7.35±1.32%(P<0.01)。BPD组早产儿气管抽吸物中TNF-α和IL-1表达显著高于对照组(P<0.01),BPD组IL-10表达显著高于对照组(P<0.01)。结论BPD患者单核细胞M1亚型比例显著升高,M2亚型比例显著减低。

青藤碱对LPS、IL-4诱导的小鼠RAW264.7巨噬细胞极化的影响

目的:探讨青藤碱(Sinomenine,SIN)对脂多糖(LPS)以及白细胞介素4(IL-4)诱导的RAW264.7细胞向M1、M2型极化的影响。方法:以LPS刺激RAW264.7细胞诱导M1型极化,IL-4刺激RAW264.7细胞诱导M2型极化;青藤碱作用于LPS或IL-4诱导的巨噬细胞后:用酶联免疫法(ELISA)检测不同诱导状态下RAW264.7细胞TNF-α和IL-10的分泌量;荧光定量PCR检测与巨噬细胞极化相关的精氨酸酶-1(Arg-1)、一氧化氮合酶(i NOS)、细胞因子信号转导抑制蛋白-2(SOCS2)和细胞因子信号转导抑制蛋白-3(SOCS3)的mRNA表达水平。结果:青藤碱能抑制LPS诱导下细胞TNF-α的分泌量,抑制细胞i NOS和SOCS3的mRNA表达水平的升高。青藤碱能抑制IL-4诱导下细胞IL-10的分泌量和Arg1的mRNA表达水平的升高,对IL-4诱导下细胞SOCS2的mRNA表达水平的升高没有明显影响。结论:青藤碱对LPS诱导下巨噬细胞向M1型极化具有抑制作用;对IL-4诱导下巨噬细胞向M2型极化具有抑制作用。青藤碱对M1/M2亚型的失衡具有调节作用,有利于维持其动态平衡。

间充质干细胞调控单核细胞/巨噬细胞介导炎症反应的研究进展

间充质干细胞(MSCs)对机体炎症反应具有重要的调控作用,其主要调控途径是影响参与炎症反应的免疫细胞增殖、分化和炎性因子分泌。单核/巨噬细胞是参与体内炎症反应的主要功能细胞,而MSCs可以通过前列腺素E2、吲哚胺-2,3双加氧酶、转化生长因子β、白细胞介素10等多种中间途径来调控单核/巨噬细胞在炎症反应中的表型和作用,将促炎的M1型巨噬细胞转化为抑炎的M2型。MSCs在心肌梗死、急性肺损伤、皮肤切口愈合、肾损伤等多种疾病模型中发挥着重要作用,从而为MSCs治疗多种炎性及自身免疫性疾病提供理论基础。

连翘提取物通过调节巨噬细胞凋亡和极化抑制LPS诱导的炎症作用

目的 研究连翘提取物(FSE)对脂多糖(LPS)诱导炎症的抑制作用,以及LPS诱导的RAW264.7细胞极化模型建立。方法 MTT法检测FSE和LPS对RAW264.7细胞的毒性作用;倒置显微镜检测不同浓度的FSE对LPS刺激后的细胞形态变化,酶标仪检测细胞上清液的一氧化氮(NO)生成量;荧光显微镜检测细胞内活性氧(ROS)和细胞凋亡的荧光强度;Real-time PCR法检测巨噬细胞中iNOS、TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-10、Arginase-1和CD206 mRNA的表达水平。结果 MTT结果发现FSE在50μg/mL浓度时无细胞毒性,LPS作用36 h时,不同浓度FSE对LPS刺激的细胞形态变化和NO生成有抑制作用,同时FSE可以抑制LPS刺激后活性氧(ROS)的减少和细胞的凋亡,Real-time PCR结果显示,用不同浓度(100、250、500、750 ng/mL)LPS处理细胞24 h,或者用500 ng/mL浓度的LPS处理细胞不同时间后,RAW264.7细胞M1型标记基因(TNF-α、IL-1β、iNOS、IL-6)mRNA的表达水平明显升高,RAW264.7细胞M2型标记基因(IL-10、Arginase-1、CD206)mRNA的表达水平明显降低;FSE可降低LPS诱导的M1型标记基因mRNA的表达水平,升高M2型标记基因mRNA的表达水平。结论 FSE可通过抑制RAW264.7细胞凋亡和促进RAW264.7细胞的极化来抑制LPS诱导的炎症反应。

S-亚硝基-N-乙酰-DL-青霉胺对RAW264.7巨噬细胞亚型分化的影响

目的:探讨S-亚硝基-N-乙酰-DL-青霉胺(SNAP)对巨噬细胞亚型分化的影响及其机制。方法:以RAW264.7巨噬细胞为研究对象,分为空白对照组、SNAP组、SNAP+PBA(4-苯基丁酸)组,采用不同浓度(30、100、300、400、500μmol/L)的SNAP或300μmol/L SNAP+20 mmol/L PBA对巨噬细胞进行干预24 h,应用RT-PCR法检测RAW264.7巨噬细胞亚型分化标志物M1(iNOS,CD86)、M2(Arg-I,MR)及CHOP mRNA的表达,应用Western blot技术检测iNOS及ERS通路中相关蛋白CHOP、P-PERK的表达。结果:与空白对照组比较,SNAP组iNOS、CD86、CHOPmRNA的表达均明显降低(P<0.05),Arg-ImRNA表达明显升高(P<0.05),而MR mRNA表达升高,但差异无统计学意义(P>0.05);与300μmol/L SNAP组比较,300μmol/L+PBA组iNOS、CHOP mRNA均无明显变化(P>0.05),CD86 mRNA升高,Arg-I、MR mRNA均明显降低(P<0.05)。SNAP组CHOP、iNOS、p-PERK蛋白表达均明显低于对照组(P<0.05),300μmol/LSNAP+20 mmol/LPBA组与300μmol/LSNAP组比较iNOS蛋白、p-PERK、CHOP蛋白表达升高(P<0.05)。结论:NO可能通过内质网应激机制抑制巨噬细胞向M1亚型分化。

小胶质细胞在病毒性神经炎症中的作用

小胶质细胞是中枢神经系统中固有的免疫细胞,它的存在为大脑提供了一个动态且高效的监控系统。越来越多的证据表明炎性小胶质细胞可能会引起组织损伤,破坏大脑正常的生理功能,诱使或加速大脑老化,导致神经退行性疾病的发生。很多病毒会感染大脑并影响小胶质细胞的功能,特别是慢性、持续的病毒感染会导致低水平的神经炎症,这可能会引起大脑老化,发生神经退行性疾病。这篇综述解释了各类噬神经病毒在小胶质细胞所介导的免疫应答反应中出现的神经认知功能缺陷和加速大脑老化、引起神经退行性疾病中的潜在作用。

枸杞子提取物对改善小鼠学习记忆影响

目的研究枸杞子提取物对自然衰老小鼠学习记忆影响及其机制。方法 60只12月龄雄性昆明小鼠,随机分4组:老年对照、枸杞子提取物高、中、低剂量组;另15只2月龄小鼠为成年对照组;0.1 ml/10 g灌胃给药17周;Morris迷宫测小鼠学习记忆能力,ELISA法测其海马毒蕈碱型乙酰胆碱受体M1(muscarinic acetylcholine receptor M1,M1R)含量。结果高、中、低剂量组定位航行第5 d潜伏期(37.51±9.47)、(38.13±11.81)、(41.07±8.85)s较老年对照(44.81±7.84)s明显缩短(P<0.05);3个给药组空间探索靶象限留时百分比(38.75±5.35)、(36.34±7.62)、(31.65±6.19)%及过台次数(3.89±0.47)、(3.51±0.28)、(3.09±0.63)次较老年对照(28.82±3.18)%,(2.13±0.32)次明显改善(P<0.05);3个给药组M1R浓度(1 325.81±327.76)、(1 219.35±307.49)、(1 137.84±339.63)pg/m L较老年对照(976.42±321.37)pg/m L明显提高(P<0.01)。结论枸杞子能改善衰老小鼠学习记忆能力并提高其海马内M1受体含量。

大黄素对LPS诱导小鼠巨噬细胞极化的影响

为研究大黄素(Em)对脂多糖(LPS)诱导的小鼠单核巨噬细胞系RAW264.7细胞向M1、M2型极化的影响。本研究设定RAW264.7细胞的LPS处理组、大黄素和LPS共同处理组和对照组,然后利用酶联免疫法检测各组细胞TNF-α、IL-12的分泌量;实时荧光定量PCR检测与巨噬细胞极化相关的精氨酸酶-1(Arg-1)、一氧化氮合酶(iNOS)、TNF-α、PPARγ的mRNA表达水平;Western-blot检测iNOS、TNF-α的蛋白表达。结果显示:LPS组与对照组比较其TNF-α、IL-12分泌增加,iNOS和TNF-α蛋白表达升高,表明细胞呈现M1型极化表型;大黄素能抑制LPS诱导的RAW264.7巨噬细胞分泌TNF-α和IL-12,抑制iNOS和TNF-α的mRNA及蛋白表达水平,具有促进IL-10、Arg-1、PPARγ基因mRNA水平升高的作用,使细胞表现为M2型极化表型。说明大黄素作为天然产物可能抑制LPS诱导的巨噬细胞向M1型极化作用,并促进M1表型巨噬细胞向M2表型极化,对于M1/M2亚型的失衡具有调节作用,有利于维持其动态平衡。