LPS诱导巨噬细胞M1型极化对肿瘤生长的影响

目的 研究脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导巨噬细胞M1型极化对肿瘤生长的影响。方法 将Balb/c雌性小鼠随机分为对照组和实验组。Renca细胞皮下建模,待肿瘤体积生长至50mm3时瘤旁注射生理盐水(100μl/只,1次/2d)或LPS(100μg/只,1次/2d),采用流式细胞术检测肿瘤相关巨噬细胞M1型极化水平。将小鼠肿瘤细胞系(ML-1、MC38、Renca)分成三组:空白组(完全培养基加入50%DMEM基础培养基)、对照组(完全培养基加入50%巨噬细胞培养基上清液)和实验组(完全培养基加入50%LPS预处理的巨噬细胞培养基上清液)。采用细胞计数试剂-8(cellcountingkit-8,CCK-8)实验检测肿瘤细胞增殖情况;采用流式细胞术检测肿瘤细胞周期及凋亡情况。结果 经LPS处理后肿瘤相关巨噬细胞M1型比例增多(P<0.001),从而增强其抗肿瘤功能;LPS诱导巨噬细胞M1型极化可显著抑制肿瘤细胞的增殖(Renca:P=0.023;ML-1:P=0.045);LPS诱导巨噬细胞M1型极化可引起肿瘤细胞周期G0/G1(MC38:P=0.011;ML-1:P=0.022)或S期(Renca:P=0.022)阻滞,进而抑制细胞分裂;LPS诱导巨噬细胞M1型极化可引起肿瘤细胞凋亡(Renca:P=0.04;ML-1:P=0.007)。结论 LPS可通过诱导巨噬细胞M1型极化发挥抗肿瘤功能。

M1型、M2型巨噬细胞极化相关因子在重度慢性牙周炎患者牙龈组织中的表达及其临床意义

目的探讨M1型、M2型巨噬细胞极化相关因子在重度慢性牙周炎(CP)患者牙龈组织中的表达及其临床意义。方法选取2018年10月—2021年6月柳州市人民医院收治的168例CP患者。根据病情严重程度分为轻度组、中度组和重度组,分别有27例、72例和69例。另选取同期该院53例牙龈组织健康者作为对照组。通过实时荧光定量聚合酶链反应检测研究对象牙龈组织中M1型巨噬细胞极化相关因子诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、信号传导及转录激活因子1(STAT1)及M2型巨噬细胞极化相关因子精氨酸酶1(Arg1)、STAT6的表达。分析不同人群牙龈组织中M1型、M2型巨噬细胞极化相关因子mRNA相对表达量,分析CP患者病情严重程度的影响因素,分析M1型、M2型巨噬细胞极化相关因子对CP患者病情严重程度的诊断效能。结果轻度组、中度组和重度组牙龈组织中iNOS、STATl、Arg1、STAT6 mRNA相对表达量较对照组高,中度组和重度组较轻度组高,重度组较中度组高。轻中度组与重度组性别、年龄、体质量指数、高血压、糖尿病、冠心病、高脂血症、吸烟史、饮酒史、偏侧咀嚼、巴氏刷牙、刷牙≥2次/d、刷牙≥3 min/次、夜磨牙症、血清钙、SBI、PLI比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。重度组TNF-β、IL-10、IL-17及iNOS、STATl、Arg1、STAT6 mRNA相对表达量高于轻中度组。多因素Logistic逐步回归分析结果显示:IL-10[OR=3.873(95%CI:1.594,9.412)]、IL-17[OR=4.267(95%CI:1.756,10.371)]及iNOS[OR=4.092(95%CI:1.684,9.944)]、Arg1[OR=3.651(95%CI:1.502,8.873)]、STAT6[OR=3.644(95%CI:1.499,8.856)]mRNA相对表达量是影响CP患者病情严重程度的危险因素(P<0.05)。受试者工作特征曲线结果显示,iNOS、Arg1、STAT6 mRNA联合预测CP患者病情严重程度的敏感性、特异性和曲线下面积最高,分别为81.16%(95%CI:0.696,0.892)、90.91(95%CI:0.830,0.955)、0.908(95%CI:0.854,0.963)。结论M1型、M2型巨噬细胞极化相关因子iNOS、Arg1、STAT6与CP患者病情严重程度有关,3者联合评估CP患者病情严重程度效能良好。

康柏西普联合眼底激光光凝治疗糖尿病黄斑水肿的临床效果及对M1型巨噬细胞促炎细胞因子表达的影响

目的康柏西普联合眼底激光光凝治疗糖尿病黄斑水肿(DME)的临床效果及对M1型巨噬细胞促炎细胞因子表达的影响。方法收集2019年1月至2022年1月解放军总医院第三医学中心接诊的95例DME患者的临床资料展开回顾性研究。根据治疗方法的不同将患者分为对照组(48例)和观察组(47例)。对照组接受眼底激光光凝治疗,观察组在对照组基础上接受康柏西普眼用注射液治疗。比较2组临床疗效、黄斑中心厚度(CMT)、最佳矫正视力(BCVA)、眼底出血面积、黄斑区荧光面积、M1型巨噬细胞促炎细胞因子表达量及血清血小板源性生长因子(PDGF)、血管内皮生长因子(VEGF)水平、不良反应总发生率。结果观察组总有效率高于对照组,差异有统计学意义[93.6%(44/47)比72.9%(35/48)](P<0.05)。治疗后2组CMT、眼底出血面积及黄斑区荧光面积均小于治疗前、且观察组小于对照组,BCVA均优于治疗前、且观察组优于对照组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。治疗后2组白细胞介素6、肿瘤坏死因子α、PDGF及VEGF水平均低于治疗前,且观察组均低于对照组[(82±19)ng/L比(150±25)ng/L、(7.2±1.0)ng/L比(10.9±2.4)ng/L、(3.6±0.4)ng/L比(6.3±0.9)ng/L、(93±16)ng/L比(157±20)ng/L],差异均有统计学意义(均P<0.05)。2组不良反应总发生率差异无统计学意义(P>0.05)。结论康柏西普联合眼底激光光凝可有效缓解DME患者黄斑水肿、视力减退等症状,抑制M1型巨噬细胞释放促炎因子,降低血清PDGF、VEGF水平,且治疗期间患者出现的不良反应较少,安全性可。

结直肠癌肿瘤微环境中M1型巨噬细胞的研究进展

结直肠癌的肿瘤微环境中存在多种类型免疫细胞,其中肿瘤相关巨噬细胞作为重要组成成分,可极化成M1、M2两种不同亚型。M1型巨噬细胞在肿瘤发展过程中主要发挥抑癌作用,M2型巨噬细胞则起促癌作用。高微卫星不稳定(high microsatellite instability,MSI-H)结直肠癌肿瘤微环境中M1型巨噬细胞明显高于微卫星稳定(microsatellite stabilization,MSS)结直肠癌,免疫治疗效果较好。本文主要就M1型巨噬细胞在结直肠癌中的研究进展进行综述,以期为MSI-H结直肠癌免疫治疗提供能多的理论依据和新思路。

木犀草素通过HIF-1α抑制糖酵解调控M1型巨噬细胞极化

目的基于低氧诱导因子1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)介导糖酵解途径研究木犀草素(luteolin)调控M1型巨噬细胞极化的分子机制。方法RAW264.7细胞随机分为对照组(M0)和脂多糖(LPS)联合干扰素γ(IFN-γ)诱导组(M1);之后将M1组分为Luteolin治疗组、2-DG(糖酵解抑制剂)组、Luteolin+2-DG组、Luteolin+DMOG(HIF-1α激活剂)组。Western blot检测iNOS、Arg-1和HIF-1α蛋白表达;流式细胞仪检测巨噬细胞亚型;ELISA检测细胞IL-6和IL-10浓度;Real-time PCR检测GLUT1、HK2、PFK1、PK和HIF-1αmRNA表达。结果与M1组比较,Luteolin治疗组以及Luteolin和2-DG共培养组糖酵解相关因子HIF-1α、GLUT1、HK2、PFK1和PK表达水平降低;细胞葡萄糖消耗增加、乳酸分泌量减少。M1型巨噬细胞标记物iNOS、CD86和IL-6表达降低,M2型巨噬细胞标记物Arg-1、CD206和IL-10表达增高。而DMOG能够逆转Luteolin上述作用。结论Luteolin通过调控HIF-1α诱导的糖酵解通路抑制M1型巨噬细胞极化。

基于TGR5介导的NLRP3炎症小体探讨芪参汤抑制巨噬细胞M1型极化改善非酒精性脂肪性肝炎的机制

目的:观察芪参汤对TGR5介导的NLRP3炎症小体的影响,从而明确其抑制巨噬细胞M1型极化改善非酒精性脂肪性肝炎的分子机制。方法:小鼠巨噬细胞RAW264.7随机分为空白组、模型组、芪参汤组、TGR5激动剂组和芪参汤+TGR5激动剂组。除空白组外,余下各组通过棕榈酸诱导构建巨噬细胞NLRP3活化模型,并给予相应的药物进行干预。分别采用酶联免疫吸附试验检测巨噬细胞上清中TNF-α、IL-6、IL-1β和CXCL2的含量,流式细胞术检测巨噬细胞极化标记分子CD86和iNOS的表达水平,Western blot检测TGR5/STAT1/STAT6信号通路和NLRP3炎症小体蛋白的表达丰度。结果:与空白组相比,模型组巨噬细胞TNF-α、IL-6、IL-1β、CXCL2的含量和CD86、iNOS阳性表达的巨噬细胞比例均显著增加,差异均具有统计学意义(P<0.01)。与模型组比较,芪参汤组TNF-α、IL-6、IL-1β、CXCL2的含量和CD86、iNOS阳性表达的巨噬细胞比例均显著降低,差异均具有统计学意义(P<0.01)。此外,与空白组相比,模型组巨噬细胞裂解液中NLRP3、Pro-IL-1β蛋白的表达和细胞上清液中Caspase-1 p10、p20及IL-1βp17蛋白的表达均显著增加,差异均具有统计学意义(P<0.01)。与模型组比较,芪参汤组巨噬细胞裂解液中NLRP3、Pro-IL-1β蛋白的表达和细胞上清液中Caspase-1 p10、p20及IL-1βp17蛋白的表达均显著降低,差异均具有统计学意义(P<0.01)。结论:参汤能够通过抑制TGR5/STAT1/STAT6信号通路抑制巨噬细胞NLRP3炎症小体的活化,从而抑制巨噬细胞M1型极化,改善炎症反应。

鸭坦布苏病毒感染诱导禽巨噬细胞M1型极化

鸭坦布苏病毒(DTMUV)自2010年4月暴发以来,给全球养鸭业带来了巨大的经济损失。巨噬细胞作为关键的免疫细胞,其不同功能的极化表型对宿主的免疫反应和抗微生物感染非常重要。禽巨噬细胞作为DTMUV感染的关键靶细胞,本研究通过荧光定量PCR、亚硝酸盐实验等对DTMUV感染禽巨噬细胞HD11后的极化表型进行分析。结果表明,DTMUV感染后能显著诱导HD11细胞发生M1型极化,刺激产生大量的促炎细胞因子。

构建M1型巨噬细胞相关lncRNA签名预测肿瘤免疫微环境

长链非编码RNA(lncRNA)被认为是肿瘤微环境和肿瘤免疫微环境中至关重要的分子。巨噬细胞作为免疫系统的重要成员,与M1型巨噬细胞功能相关的lncRNA依然需要进一步的探讨。本文基于肿瘤微环境中M1型巨噬细胞浸润程度高和低的队列样本的转录组差异构建了lncRNA签名。该lncRNA签名包含7个lncRNA∶LINC01494,ZDHHC20-IT1,LINC01450,LINC00871,EVX1-AS,KIF25-AS和AADACL2-AS1。这些lncRNA均在M1巨噬细胞缺乏型病人样本中高表达,表明它们在抑制巨噬细胞浸润和极化为M1亚型过程中的潜在作用,进而导致免疫排斥型的肿瘤微环境,而这已被证明与不良预后密切相关。该lncRNA签名不仅预测了不理想的临床预后,也与抗原处理和递呈障碍所导致的免疫抑制性环境相关。此外,我们也评估了该lncRNA签名在免疫检查点抑制疗法中的预测价值,这进一步丰富和增强了lncRNA在预测免疫治疗响应情况的价值。

Cl-amidine通过JAK3-STAT5抑制巨噬细胞M1型极化在强直性脊柱炎中的作用

目的 探究Cl-amidine对巨噬细胞M1型极化的影响以及其对强直性脊柱炎(AS)的临床指导意义。方法 选择60例AS患者,根据疾病活动度评分将患者分为低AS疾病组和高AS疾病组,同期纳入30例健康受试者作为对照组。EILSA检测三组人群血清PAD4、iNOS和骨形成指标BGP水平,皮尔逊相关系数分析肽酰基精氨酸脱亚胺酶4(PAD4)、一氧化氮合酶(iNOS)和骨钙素(BGP)的相关性;流式细胞术检测3组人群外周血M1型巨噬细胞(CD68^(+)CD86^(+))比例。培养THP-1单核细胞系,体外诱导为M1型巨噬细胞,期间加入Cl-amidine共孵育,分组为:M0组、M1组、M1+Cl-amidine组,Western blot检测各组细胞PAD4和iNOS蛋白表达水平。RNA-seq检测M1组、M1+Cl-amidine组细胞差异表达基因并进行KEGG分析,Western blot检测JAK3、p-JAK3、STAT5、p-STAT5蛋白表达水平。结果 与对照组相比,低AS疾病组PAD4、iNOS水平升高,BGP水平降低,M1型巨噬细胞比例升高;与低AS疾病组相比,高AS疾病组PAD4、iNOS水平升高,BGP水平降低,M1型巨噬细胞比例升高。PAD4水平与iNOS水平呈正相关,PAD4、iNOS水平与BGP水平呈负相关。与M0组相比,M1组PAD4和iNOS蛋白表达升高;与M1组相比,M1+Cl-amidine组有163个基因表达上调,272个基因表达下调。上调基因主要参与JAK-STAT信号通路。与M1组相比,M1+Cl-amidine组iNOS、p-JAK3/JAK3、p-STAT5/STAT5蛋白表达降低。结论 PAD4和M1型巨噬细胞水平与AS疾病程度呈正相关。PAD4抑制剂Cl-amidine可能通过JAK3-STAT5信号通路抑制巨噬细胞向M1极化,该作用机制有助于AS临床治疗的研究。

山药多糖促进小鼠巨噬细胞向M1型极化

目的考察山药多糖对小鼠巨噬细胞极化的影响。方法在体外实验中,将RAW264.7细胞与山药多糖共孵育24 h,采用MTT法检测细胞活性;利用Griess试剂盒检测NO分泌水平;采用CBA法检测细胞因子分泌水平;采用流式细胞术检测细胞表面MHC-Ⅱ类分子表达水平。在动物实验中,将Balb/c小鼠随机分为正常组、模型组、山药多糖低剂量组（50 mg/kg）和高剂量组（200 mg/kg）,每天灌胃给药1次连续15 d;第11~15天除正常组外,其余小鼠腹腔注射氢化可的松。末次给药第2天取脾和胸腺称质量,计算免疫器官指数;利用流式细胞术检测腹腔巨噬细胞MHC-Ⅱ类分子表达水平。结果山药多糖剂量低于500μg/ml时对RAW264.7细胞活性无显著影响,但可以促进细胞分泌NO和细胞因子IL-6、TNF-α、MCP-1,提高细胞表达MHC-Ⅱ类分子的水平。动物实验结果显示山药多糖可以恢复免疫抑制小鼠腹腔巨噬细胞MHC-Ⅱ类分子表达水平。结论研究表明山药多糖可以促进巨噬细胞向M1型极化。

拟南芥硫氧还蛋白M1型基因(AtTRX m1)与环境逆境之间的关系

硫氧还蛋白家族是约12 kD的小分子蛋白质,含有高度保守的活性反应位点WCG/PPC,催化硫醇—二硫键相互交换,调节细胞内的氧化还原作用。在本研究中,通过RT-PCR法获得目的基因拟南芥硫氧还蛋白M1型基因 (AtTRX m1, GenBank Accession No. At1g03680)。通过Northern杂交分析拟南芥悬浮细胞系在 100 mmol/L NaCl、10mmol/L NaHCO3、50μmol/L ABA、10mmol/L H2O2 等逆境处理下mRNA表达水平的变化和硫氧还蛋白 M1 型转基因植株对NaCl、NaHCO3盐及ABA逆境的抗性分析,表明硫氧还蛋白M1型基因与生物环境胁迫有一定的相关性,尤其是氧化胁迫,能够增强植物对逆境的耐受力。从而为进一步研究硫氧还蛋白基因家族与逆境之间的相关作用奠定了基础。

牛奶中TEM1型β-内酰胺酶免疫胶体金试纸条的研制

牛奶中存在的抗生素残留是影响牛奶安全的重要因素之一,其来源主要是奶牛养殖过程中使用的β-内酰胺类抗生素,如青霉素簇药物。近来出现了一种声称能分解抗生素的＂抗生素分解剂＂-TEM1型β-内酰胺酶。该酶能将青霉素类药物降解。

核酸对肝纤维化大鼠肝组织中M1型胆碱能受体表达的影响

目的探讨核酸在CCl4诱导的肝纤维化模型中对肝脏中M1型乙酰胆碱受体的影响及其抗肝纤维化的可能机制。方法应用四氯化碳(CCl4)诱导大鼠慢性肝纤维化模型。将55只Wistar大鼠分为4组:正常对照(N)组10只?肝复乐胶囊对照(G)组15只?核酸(Z)组15只及模型(M)组15只。采用光镜观察肝组织病理学改变;运用免疫组织SP法?逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Western-blot方法检测各组肝组织M1型胆碱能受体(M1-AChR)不同水平的表达情况。结果核酸组、肝复乐胶囊对照组病理改变较模型组明显改善;免疫组织化学?RT-PCR?Western-blot三种不同层次水平的表达结果均表明核酸组和肝复乐胶囊对照组M1-AChR的表达较模型组显著降低(P<0.05)。结论核酸可降低肝纤维化肝组织中M1型乙酰胆碱受体的含量,可能主要通过调节肝纤维化大鼠肝脏中的M1型乙酰胆碱受体的含量而达到抗肝纤维化的作用。

七氟醚可抑制氧化型低密度脂蛋白诱导巨噬细胞M1型极化

目的探究七氟醚通过JAK3/STAT5信号通路对氧化型低密度脂蛋白(oxidized low-density lipoprotein,Ox-LDL)诱导巨噬细胞M1型极化的影响。方法酶联免疫法检测细胞培养液上清中肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、转化生长因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)和白细胞介素-10(interleukin-10,IL^(-1)0)的水平,Westernblot检测诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)和精氨酸酶1(Arginase 1,Arg1)的表达。结果与对照组相比,Ox-LDL组巨噬细胞中i NOS蛋白的表达和培养液上清中TNF-α和IL-6的水平增加(P<0.05),而细胞中Arg1蛋白的表达水平和培养液上清中TGF-β和IL^(-1)0的水平降低(P<0.05),p-JAK3/JAK3和p-STAT5/STAT5的比值增加(P<0.05);与Ox-LDL组相比,Ox-LDL+Sevoflurane组的巨噬细胞中iNOS蛋白的表达和培养液上清中TNF-α和IL-6的水平降低(P<0.05),Arg1蛋白的表达水平和培养液上清中TGF-β和IL^(-1)0的水平升高(P<0.05),p-JAK3/JAK3和p-STAT5/STAT的比值降低(P<0.05);与Ox-LDL组相比,Ox-LDL+HY-P1061组巨噬细胞中iNOS蛋白的表达和培养液上清中TNF-α和IL-6的水平升高(P<0.05),Arg1蛋白的表达水平和培养液上清中TGF-β和IL^(-1)0的水平降低(P<0.05);与Ox-LDL+Sevoflurane组相比,Ox-LDL+Sevoflurane+HY-P1061组巨噬细胞中i NOS蛋白的表达和培养液上清中TNF-α和IL-6的水平升高(P<0.05),而细胞中Arg1蛋白的表达水平和培养液上清中TGF-β和IL^(-1)0的水平降低(P<0.05)。结论七氟醚抑制Ox-LDL诱导的巨噬细胞M1型极化,其机制可能与JAK3/STAT5信号通路的失活相关。

肝细胞生长因子活化JAK2/STAT3通路促进巨噬细胞M1型向M2型极化

目的研究肝细胞生长因子(HGF)通过Janus激酶2/信号转导和转录激活因子3(JAK2/STAT3)信号通路促进巨噬细胞M1型向M2型极化及其可能机制。方法以正常RAW264.7巨噬细胞为M0对照组;干扰素-γ(IFN-γ)和细菌脂多糖(LPS)诱导的RAW264.7巨噬细胞(M1型)为M1组;不同浓度HGF(5、10、20 ng/ml)干预巨噬细胞M1型为5M1组、10M1组、20M1组;用50μmol/L JAK2特异性阻断剂(AG490)与10 ng/ml HGF共同干预巨噬细胞M1型为AG490+10M1组。CCK8法检测HGF对巨噬细胞增殖的影响。应用Griess reagents试剂盒检测各组培养上清液中亚硝酸盐浓度(NO%)。Western blot法检测各组M1型标志物一氧化氮合酶(iNOS)、白细胞介素-6(IL-6)和M2型标志物精氨酸酶Ⅰ(ArgⅠ)、白细胞介素-10(IL-10)以及JAK2/STAT3信号通路JAK2、P-JAK2、STAT3、P-STAT3的蛋白表达。结果 HGF对巨噬细胞无明显增殖作用。Griess reagents试剂盒检测结果显示,与M0或HGF各干预组相比,M1组培养上清液亚硝酸盐浓度(NO%)明显增高;与M1组相比,HGF各干预组培养上清液亚硝酸盐浓度(NO%)明显降低,并呈剂量依赖性(P<0.05)。Western blot结果显示,与M0组相比,M1组iNOS、IL-6蛋白表达明显增加,ArgⅠ、IL-10蛋白表达显著减少(P<0.05)。与M1组相比,HGF各干预组iNOS、IL-6蛋白表达呈剂量依赖性减少,ArgⅠ、IL-10蛋白表达呈剂量依赖性增加(P<0.05)。与M0或M1组相比,HGF各干预组JAK2/STAT3通路蛋白磷酸化表达呈剂量依赖性增加(P<0.05)。与10M1组相比,AG490+10M1组M2表型相关蛋白ArgⅠ表达明显下降(P<0.05)。结论 HGF通过活化JAK2/STAT3信号通路促进巨噬细胞M1型向M2型极化。

牙龈蛋白酶对M1型巨噬细胞表达抑菌细胞因子的调控作用

目的:探讨牙龈蛋白酶对M1型巨噬细胞表达抑菌细胞因子的调控作用。方法:采用sheets改良法从Pg ATCC 33277培养物上清中制备牙龈蛋白酶,应用质谱法鉴定牙龈蛋白酶,底物发色法测定酶活性,鲎试剂检测牙龈蛋白酶中LPS残留量。体外细胞模型实验评价牙龈蛋白酶对大肠杆菌脂多糖(Ec-LPS)诱导的M1型巨噬细胞表达抑菌细胞因子的影响。实验分为3组:阴性对照组、Ec-LPS组和Ec-LPS+牙龈蛋白酶组,采用qRTPCR和ELISA法检测M1型巨噬细胞表达的抑菌细胞因子白细胞介素12(IL-12)、一氧化氮合酶(iNOS)和白细胞介素10(IL-10)在基因和蛋白水平的表达情况。结果:制备的牙龈蛋白酶为RgpA,活性20U/L,LPS残留量<0.01EU/mL。qRT-PCR和ELISA结果显示,与阴性对照组相比,Ec-LPS组IL-12和iNOS基因和蛋白的表达水平明显升高,IL-10的表达降低,即成功诱导M1型巨噬细胞,组间有显著差异(P<0.01);Ec-LPS+牙龈蛋白酶组IL-12、iNOS和IL-10基因和蛋白的表达较Ec-LPS组显著降低,但高于阴性对照组,组间有显著差异(P<0.01)。结论:牙龈蛋白酶具有抑制M1型巨噬细胞表达抑菌细胞因子IL-12、iNOS的作用。

绿原酸抑制糖酵解及脂肪酸代谢调控M1型巨噬细胞极化

目的:探讨绿原酸对脂多糖(LPS)和干扰素γ(IFN-γ)诱导的M1型巨噬细胞炎症反应的调控,并初步探索糖酵解及脂肪酸代谢在其中的作用机制。方法:THP-1细胞经佛波酯(PMA)处理24 h极化为M0型巨噬细胞;M1型极化组:经10 ng/ml LPS和20 ng/ml IFN-γ刺激48 h,M0型巨噬细胞极化为M1型巨噬细胞;绿原酸处理组:M1型巨噬细胞极化诱导开始时,分别加入50μg/ml、100μg/ml绿原酸培养48 h。倒置显微镜观察细胞形态的变化,实时荧光定量PCR检测M1型巨噬细胞极化和脂肪酸合成的相关基因:IL-6、TNF-α、环加氧酶2(COX-2)、CXC趋化因子配体-10(CXCL-10)、固醇调节元件结合蛋白-1(SREBP-1)、氧化物酶体增殖物激活受体-γ(PPAR-γ)的mRNA表达水平;微量法试剂盒检测糖酵解相关酶——己糖激酶(HK)、丙酮酸激酶(PK)、乳酸脱氢酶(LDH)活性。结果:M0极化为M1时,细胞伪足增多,呈梭形或不规则形,M1型极化相关基因IL-6、TNF-α、COX-2、CXCL-10和脂肪酸合成相关基因PPAR-γ、SREBP-1 mRNA表达水平明显升高,HK、PK、LDH活性增加;50μg/ml绿原酸处理组梭形细胞和伪足明显减少,其极化相关基因IL-6、TNF-α、COX-2、CXCL-10和脂肪酸合成相关基因PPAR-γ、SREBP-1的mRNA水平明显降低,HK、PK、LDH的活性下降,100μg/ml绿原酸处理较50μg/ml作用更强,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:绿原酸可能通过抑制巨噬细胞糖酵解和脂肪酸代谢途径,下调M1型巨噬细胞极化相关标志物的表达,调控M1型巨噬细胞炎症极化。

日本血吸虫高迁移率族蛋白B1诱导小鼠RAW264.7巨噬细胞M1型极化

通过分析日本血吸虫高迁移率族蛋白B1(Schistosoma japonicum high mobility group protein B1,SjHMGB1)刺激的巨噬细胞的表型相关分子的表达情况,研究SjHMGB1诱导巨噬细胞向M1型极化的功能。分别用LPS及IFN-γ和IL-4诱导小鼠RAW264.7巨噬细胞成M1型和M2型作为阳性对照组,以SjHMGB1诱导的巨噬细胞为实验组。分别利用Griess法、FCM、RTPCR和酶活性检测巨噬细胞中iNOS、CD16/32、ArginaseⅠ、CD206等主要标志分子。结果与空白对照组相比,SjHMGB1刺激组和M1型阳性对照组巨噬细胞NO分泌显著增加,精氨酸酶活性变化不显著,M2型巨噬细胞呈现相反的表型。流式结果显示SjHMGB1刺激组和M1型阳性对照组的巨噬细胞诱导型一氧化氮合成酶(iNOS)和CD16/32表达上调,而CD206变化不明显。RT-PCR结果显示SjHMGB1蛋白刺激组和M1型阳性对照组的巨噬细胞iNOS表达上调,而arginaseⅠ和CD206变化不明显;M2型巨噬细胞arginaseⅠ表达水平明显升高,CD206表达上调。结果表明SjHMGB1能够诱导巨噬细胞往M1型巨噬细胞分化。

810nm弱激光对M1型骨髓源性巨噬细胞的作用及其机制

目的 :体外建立M1型骨髓源性巨噬细胞(bone marrow derived macrophage,BMDM)-弱激光照射模型,探讨弱激光照射对M1型BMDM炎症因子分泌的影响及其可能机制。方法:体外分离BALB/c小鼠BMDM,应用巨噬细胞集落刺激因子(macrophage colony-stimulating factor,M-CSF)条件性培养基培养,流式细胞术检测巨噬细胞标志物F4/80的表达,确定所获得细胞为纯度较高的BMDM。应用脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)刺激24h诱导原代BMDM向M1型BMDM方向极化。将细胞随机分为弱激光治疗(low level laser therapy,LLLT)组和对照组,LLLT组采用810nm波长激光照射,光斑面积4.5cm2,照射功率密度2m W/cm2,照射持续440s,最终获得照射能量为4J,对照组置于暗箱,不进行照射。应用CCK8实验测定细胞活性,RT-PCR检测肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素1β(interlukin-1β,IL-1β)及诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthases,i NOS)的m RNA表达情况,ELISA检测TNF-α及IL-1β蛋白分泌,Western blot测定i NOS和M1型巨噬细胞极化的重要转录因子核因子-κB p65(nuclear factor-kappa B,NF-κB p65)的表达。组间比较采用独立样本t检验,P<0.05为差异有统计学意义。结果:LPS刺激后,使用弱激光照射的M1型BMDM细胞活性显著提高,升高至对照组的2.313±0.630倍(P<0.05)。LLLT组IL-1βm RNA表达为0.586±0.145,对照组为1.000±0.022,两组比较有统计学差异(P<0.05);LLLT组TNF-α的m RNA表达为0.862±0.152,对照组为1.000±0.082,两组比较无统计学差异(P=0.082);LLLT组i NOS的m RNA表达为0.720±0.039,对照组为1.000±0.024,两组比较有统计学差异(P<0.05)。对照组TNF-α为270.478±26.831pg/ml,LLLT组为209.365±5.600pg/ml,两组比较有统计学差异(P<0.05);对照组的IL-1β为98.941±12.430pg/ml,LLLT组为77.076±2.023pg/ml,两组比较有统计学差异(P<0.05)。对照组的i NOS蛋白表达为1.005±0.075,LLLT组为0.210±0.010,两组比较有统计学差异(P<0.05);对照组NF-κB p65蛋白表达为1.006±0.260,LLLT组为0.428±0.169,两组比较有统计学差异(P<0.05)。结论:810nm LLLT M1型BMDM可抑制其炎性因子IL-1β及i NOS的m RNA表达,下调炎性因子IL-1β及TNF-α的分泌,降低M1型BMDM表面标志物i NOS的表达,同时显著下调M1型巨噬细胞经典极化转录因子NF-κB p65的表达。810nm LLLT可调控M1型巨噬细胞的极化状态,抑制其炎性因子分泌,该调控作用和其下调M1型巨噬细胞经典极化转录因子NF-κB p65有明显相关性。

M1型巨噬细胞对小鼠膀胱癌MB49细胞活力、迁移、侵袭及凋亡的影响

目的:探究共培养体系下M1型巨噬细胞对小鼠膀胱癌MB49细胞活力、迁移、侵袭及凋亡的影响。方法:分别以0、50、100和200μg/L的脂多糖(LPS)刺激小鼠RAW264.7巨噬细胞24 h后,采用免疫荧光技术、Western blot及流式细胞术检测M1型巨噬细胞标志物CD86和诱导型一氧化氮合酶的表达情况。建立RAW264.7-MB49细胞共培养体系,分为MB49组、M0+MB49组和M1+MB49组,12 h后收集MB49细胞,CCK-8法检测各组MB49细胞活力,划痕实验和Transwell实验检测各组MB49细胞的迁移和侵袭能力,Hoechst 33258染色检测各组MB49细胞的凋亡情况,ELISA检测培养上清液中白细胞介素6(IL-6)浓度。结果:筛选出了诱导RAW264.7巨噬细胞向M1亚型极化的最佳LPS浓度和作用时间分别为100μg/L和24 h。与MB49组及M0+MB49组相比,M1+MB49组中MB49细胞的活力及迁移和侵袭能力均显著下降(P<0.05),凋亡细胞显著增多(P<0.05),培养上清液中IL-6浓度显著升高(P<0.05)。结论:在共培养体系中M1型巨噬细胞可抑制小鼠膀胱癌MB49细胞的活力、迁移和侵袭,并促进其凋亡。