康柏西普联合眼底激光光凝治疗糖尿病黄斑水肿的临床效果及对M1型巨噬细胞促炎细胞因子表达的影响

目的康柏西普联合眼底激光光凝治疗糖尿病黄斑水肿(DME)的临床效果及对M1型巨噬细胞促炎细胞因子表达的影响。方法收集2019年1月至2022年1月解放军总医院第三医学中心接诊的95例DME患者的临床资料展开回顾性研究。根据治疗方法的不同将患者分为对照组(48例)和观察组(47例)。对照组接受眼底激光光凝治疗,观察组在对照组基础上接受康柏西普眼用注射液治疗。比较2组临床疗效、黄斑中心厚度(CMT)、最佳矫正视力(BCVA)、眼底出血面积、黄斑区荧光面积、M1型巨噬细胞促炎细胞因子表达量及血清血小板源性生长因子(PDGF)、血管内皮生长因子(VEGF)水平、不良反应总发生率。结果观察组总有效率高于对照组,差异有统计学意义[93.6%(44/47)比72.9%(35/48)](P<0.05)。治疗后2组CMT、眼底出血面积及黄斑区荧光面积均小于治疗前、且观察组小于对照组,BCVA均优于治疗前、且观察组优于对照组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。治疗后2组白细胞介素6、肿瘤坏死因子α、PDGF及VEGF水平均低于治疗前,且观察组均低于对照组[(82±19)ng/L比(150±25)ng/L、(7.2±1.0)ng/L比(10.9±2.4)ng/L、(3.6±0.4)ng/L比(6.3±0.9)ng/L、(93±16)ng/L比(157±20)ng/L],差异均有统计学意义(均P<0.05)。2组不良反应总发生率差异无统计学意义(P>0.05)。结论康柏西普联合眼底激光光凝可有效缓解DME患者黄斑水肿、视力减退等症状,抑制M1型巨噬细胞释放促炎因子,降低血清PDGF、VEGF水平,且治疗期间患者出现的不良反应较少,安全性可。

结直肠癌肿瘤微环境中M1型巨噬细胞的研究进展

结直肠癌的肿瘤微环境中存在多种类型免疫细胞,其中肿瘤相关巨噬细胞作为重要组成成分,可极化成M1、M2两种不同亚型。M1型巨噬细胞在肿瘤发展过程中主要发挥抑癌作用,M2型巨噬细胞则起促癌作用。高微卫星不稳定(high microsatellite instability,MSI-H)结直肠癌肿瘤微环境中M1型巨噬细胞明显高于微卫星稳定(microsatellite stabilization,MSS)结直肠癌,免疫治疗效果较好。本文主要就M1型巨噬细胞在结直肠癌中的研究进展进行综述,以期为MSI-H结直肠癌免疫治疗提供能多的理论依据和新思路。

木犀草素通过HIF-1α抑制糖酵解调控M1型巨噬细胞极化

目的基于低氧诱导因子1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)介导糖酵解途径研究木犀草素(luteolin)调控M1型巨噬细胞极化的分子机制。方法RAW264.7细胞随机分为对照组(M0)和脂多糖(LPS)联合干扰素γ(IFN-γ)诱导组(M1);之后将M1组分为Luteolin治疗组、2-DG(糖酵解抑制剂)组、Luteolin+2-DG组、Luteolin+DMOG(HIF-1α激活剂)组。Western blot检测iNOS、Arg-1和HIF-1α蛋白表达;流式细胞仪检测巨噬细胞亚型;ELISA检测细胞IL-6和IL-10浓度;Real-time PCR检测GLUT1、HK2、PFK1、PK和HIF-1αmRNA表达。结果与M1组比较,Luteolin治疗组以及Luteolin和2-DG共培养组糖酵解相关因子HIF-1α、GLUT1、HK2、PFK1和PK表达水平降低;细胞葡萄糖消耗增加、乳酸分泌量减少。M1型巨噬细胞标记物iNOS、CD86和IL-6表达降低,M2型巨噬细胞标记物Arg-1、CD206和IL-10表达增高。而DMOG能够逆转Luteolin上述作用。结论Luteolin通过调控HIF-1α诱导的糖酵解通路抑制M1型巨噬细胞极化。

构建M1型巨噬细胞相关lncRNA签名预测肿瘤免疫微环境

长链非编码RNA(lncRNA)被认为是肿瘤微环境和肿瘤免疫微环境中至关重要的分子。巨噬细胞作为免疫系统的重要成员,与M1型巨噬细胞功能相关的lncRNA依然需要进一步的探讨。本文基于肿瘤微环境中M1型巨噬细胞浸润程度高和低的队列样本的转录组差异构建了lncRNA签名。该lncRNA签名包含7个lncRNA∶LINC01494,ZDHHC20-IT1,LINC01450,LINC00871,EVX1-AS,KIF25-AS和AADACL2-AS1。这些lncRNA均在M1巨噬细胞缺乏型病人样本中高表达,表明它们在抑制巨噬细胞浸润和极化为M1亚型过程中的潜在作用,进而导致免疫排斥型的肿瘤微环境,而这已被证明与不良预后密切相关。该lncRNA签名不仅预测了不理想的临床预后,也与抗原处理和递呈障碍所导致的免疫抑制性环境相关。此外,我们也评估了该lncRNA签名在免疫检查点抑制疗法中的预测价值,这进一步丰富和增强了lncRNA在预测免疫治疗响应情况的价值。

牙龈蛋白酶对M1型巨噬细胞表达抑菌细胞因子的调控作用

目的:探讨牙龈蛋白酶对M1型巨噬细胞表达抑菌细胞因子的调控作用。方法:采用sheets改良法从Pg ATCC 33277培养物上清中制备牙龈蛋白酶,应用质谱法鉴定牙龈蛋白酶,底物发色法测定酶活性,鲎试剂检测牙龈蛋白酶中LPS残留量。体外细胞模型实验评价牙龈蛋白酶对大肠杆菌脂多糖(Ec-LPS)诱导的M1型巨噬细胞表达抑菌细胞因子的影响。实验分为3组:阴性对照组、Ec-LPS组和Ec-LPS+牙龈蛋白酶组,采用qRTPCR和ELISA法检测M1型巨噬细胞表达的抑菌细胞因子白细胞介素12(IL-12)、一氧化氮合酶(iNOS)和白细胞介素10(IL-10)在基因和蛋白水平的表达情况。结果:制备的牙龈蛋白酶为RgpA,活性20U/L,LPS残留量<0.01EU/mL。qRT-PCR和ELISA结果显示,与阴性对照组相比,Ec-LPS组IL-12和iNOS基因和蛋白的表达水平明显升高,IL-10的表达降低,即成功诱导M1型巨噬细胞,组间有显著差异(P<0.01);Ec-LPS+牙龈蛋白酶组IL-12、iNOS和IL-10基因和蛋白的表达较Ec-LPS组显著降低,但高于阴性对照组,组间有显著差异(P<0.01)。结论:牙龈蛋白酶具有抑制M1型巨噬细胞表达抑菌细胞因子IL-12、iNOS的作用。

绿原酸抑制糖酵解及脂肪酸代谢调控M1型巨噬细胞极化

目的:探讨绿原酸对脂多糖(LPS)和干扰素γ(IFN-γ)诱导的M1型巨噬细胞炎症反应的调控,并初步探索糖酵解及脂肪酸代谢在其中的作用机制。方法:THP-1细胞经佛波酯(PMA)处理24 h极化为M0型巨噬细胞;M1型极化组:经10 ng/ml LPS和20 ng/ml IFN-γ刺激48 h,M0型巨噬细胞极化为M1型巨噬细胞;绿原酸处理组:M1型巨噬细胞极化诱导开始时,分别加入50μg/ml、100μg/ml绿原酸培养48 h。倒置显微镜观察细胞形态的变化,实时荧光定量PCR检测M1型巨噬细胞极化和脂肪酸合成的相关基因:IL-6、TNF-α、环加氧酶2(COX-2)、CXC趋化因子配体-10(CXCL-10)、固醇调节元件结合蛋白-1(SREBP-1)、氧化物酶体增殖物激活受体-γ(PPAR-γ)的mRNA表达水平;微量法试剂盒检测糖酵解相关酶——己糖激酶(HK)、丙酮酸激酶(PK)、乳酸脱氢酶(LDH)活性。结果:M0极化为M1时,细胞伪足增多,呈梭形或不规则形,M1型极化相关基因IL-6、TNF-α、COX-2、CXCL-10和脂肪酸合成相关基因PPAR-γ、SREBP-1 mRNA表达水平明显升高,HK、PK、LDH活性增加;50μg/ml绿原酸处理组梭形细胞和伪足明显减少,其极化相关基因IL-6、TNF-α、COX-2、CXCL-10和脂肪酸合成相关基因PPAR-γ、SREBP-1的mRNA水平明显降低,HK、PK、LDH的活性下降,100μg/ml绿原酸处理较50μg/ml作用更强,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:绿原酸可能通过抑制巨噬细胞糖酵解和脂肪酸代谢途径,下调M1型巨噬细胞极化相关标志物的表达,调控M1型巨噬细胞炎症极化。

M1型巨噬细胞对小鼠膀胱癌MB49细胞活力、迁移、侵袭及凋亡的影响

目的:探究共培养体系下M1型巨噬细胞对小鼠膀胱癌MB49细胞活力、迁移、侵袭及凋亡的影响。方法:分别以0、50、100和200μg/L的脂多糖(LPS)刺激小鼠RAW264.7巨噬细胞24 h后,采用免疫荧光技术、Western blot及流式细胞术检测M1型巨噬细胞标志物CD86和诱导型一氧化氮合酶的表达情况。建立RAW264.7-MB49细胞共培养体系,分为MB49组、M0+MB49组和M1+MB49组,12 h后收集MB49细胞,CCK-8法检测各组MB49细胞活力,划痕实验和Transwell实验检测各组MB49细胞的迁移和侵袭能力,Hoechst 33258染色检测各组MB49细胞的凋亡情况,ELISA检测培养上清液中白细胞介素6(IL-6)浓度。结果:筛选出了诱导RAW264.7巨噬细胞向M1亚型极化的最佳LPS浓度和作用时间分别为100μg/L和24 h。与MB49组及M0+MB49组相比,M1+MB49组中MB49细胞的活力及迁移和侵袭能力均显著下降(P<0.05),凋亡细胞显著增多(P<0.05),培养上清液中IL-6浓度显著升高(P<0.05)。结论:在共培养体系中M1型巨噬细胞可抑制小鼠膀胱癌MB49细胞的活力、迁移和侵袭,并促进其凋亡。

2-DG抑制糖酵解和线粒体自噬调控M1型巨噬细胞极化

目的:研究2-脱氧-d-葡萄糖(2-DG)对M1型巨噬细胞炎症极化的调控作用,初步探索糖酵解及线粒体自噬在其中的作用机制。方法:将THP-1细胞分为3组:M0组[100 nmol/L佛波酯(PMA)刺激48 h极化为M0型]、M1组(M0组基础上用10 ng/mL LPS和20 ng/mL IFN-γ共刺激48 h诱导极化为M1型)、M1+2-DG组(M1组基础上加入10 mmol/L 2-DG)。实时荧光定量PCR(qPCR)法检测M1型巨噬细胞极化相关基因肿瘤坏死因子(TNF)-α、白介素(IL)-6、CXC趋化因子配体-10(CXCL-10)、环加氧酶(COX)-2mRNA表达水平,微量法酶活性试剂盒检测糖酵解限速酶己糖激酶(HK)、丙酮酸激酶(PK)和乳酸脱氢酶(LDH)活性。Western blotting法检测Beclin-1、PTEN诱导激酶1(PINK1)表达水平。并比较3组溶酶体、线粒体荧光信号强度及细胞内活性氧(ROS)含量。结果:与M0组比较,M1组TNF-α、IL-6、CXCL-10、COX-2mRNA表达水平明显升高,HK、PK和LDH活性增加,溶酶体荧光信号增强,线粒体荧光信号降低,细胞内ROS升高,线粒体自噬相关蛋白Beclin-1、PINK1表达升高(均P<0.05)。与M1组比较,M1+2-DG组TNF-α、IL-6、CXCL-10、COX-2mRNA水平明显降低,HK、PK和LDH活性下降,溶酶体荧光信号降低,线粒体荧光信号增强,细胞内ROS降低,Beclin-1、PINK1蛋白表达降低(P<0.05)。结论:2-DG可能通过抑制M1型巨噬细胞糖酵解和ROS产生,降低细胞线粒体自噬水平,下调M1型巨噬细胞极化相关标志物的表达,负调控M1型巨噬细胞炎症极化。

Notch信号通路配体DLL4通过促进M1型巨噬细胞分化加重糖尿病肾病免疫损伤

目的探讨Notch信号配体DLL4在糖尿病肾病中(diabetic nephropathy,DN)的作用及其相关作用机制。方法 24只雄性CD-1小鼠随机分为对照组(Control组)、糖尿病肾病组(DN组)、过表达DLL4组(DN+DLL4组)及空载体组(DN+V组)。DN组、DN+DLL4组及DN+V组小鼠通过腹腔注射链脲佐菌素(STZ)建立糖尿病肾病模型,并对DN+DLL4组与DN+V组小鼠经尾静脉注射pcDNA3.1 DLL4真核表达载体与pcDNA3.1空载体。于造模后12周收集相关标本。应用RT-PCR及Western blot检测各组小鼠中DLL4的mRNA及蛋白表达;应用免疫组化法检测DLL4的组织定位;利用化学分析仪器检测各组小鼠的血糖及24h尿蛋白水平;应用HE及PAS染色检测各组小鼠肾组织结构变化;透射电镜观察肾组织超微结构改变;利用Western blot检测各组小鼠肾组织中M1巨噬细胞型标记物iNOS与CD16/32及M2型巨噬细胞CD206的蛋白表达;细胞流式技术检测各组小鼠肾组织单核细胞中M1与M2型巨噬细胞所占比例。结果与Control组相比,糖尿病肾病小鼠中DLL4的m RNA及蛋白表达显著增加,而DN+DLL4组小鼠的DLL4表达水平显著高于DN组与DN+V组;免疫组化结果显示DLL4主要表达于肾组织的内皮细胞中;过表达DLL4能够显著促进糖尿病肾病小鼠的24h尿蛋白含量,但不影响小鼠的血糖浓度;过表达DLL4能够明显加剧糖尿病肾病小鼠的肾组织损伤,引起足细胞发生融合或断裂,加重系膜基质的沉积;过表达DLL4能够诱导巨噬细胞的M1型分化,增加M1标记性分子iNOS与CD16/32的蛋白表达。结论 Notch信号通路配体DLL4通过促进巨噬细胞的M1型分化加剧肾组织结构及功能的损害,最终加重糖尿病肾病的病理损伤。

基于TLR4/NF-κB/NLRP3信号通路探讨M1型巨噬细胞极化在肝硬化-肝性脑病发病中的研究进展

肝性脑病(HE)是失代偿期肝硬化患者一种严重的中枢神经系统并发症。而肝脏炎症反应则是肝性脑病患者病情恶化的重要原因,因此抑制肝脏炎症反应是治疗肝性脑病的有效途径之一。TLR4受体参与调节M1型巨噬细胞极化并促进炎症反应,NF-κB信号通路是参与炎症反应的重要通路,NLRP3炎症小体参与了巨噬细胞极化的过程。TLR4、NF-κB、NLRP3炎症小体三者组成了信号转导通路的上下游,TLR4可通过激活NF-κB/NLRP3炎症小体信号通路从而参与M1型巨噬细胞的极化。本文基于TLR4/NF-κB/NLRP3信号通路探讨肝脏M1型巨噬细胞极化产生的炎症因子在HE中的作用,为临床提供更明确的诊疗证据。

脂肪间充质干细胞促进M1型巨噬细胞向M2型巨噬细胞转化

目的探索脂肪间充质干细胞(ADSC)对M1/M2型巨噬细胞的影响以及ADSC能否促使M1型巨噬细胞向M2型巨噬细胞转化。方法利用脂多糖(LPS)、γ干扰素(IFN-γ)刺激J774.1巨噬细胞24 h诱导为M1型巨噬细胞,利用白细胞介素4(IL-4)刺激J774.1巨噬细胞24 h诱导为M2型巨噬细胞;将M1/M2型巨噬细胞分别与ADSC共培养24 h后,收集巨噬细胞和上清液,用实时定量PCR和ELISA检测巨噬细胞IL-6、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、诱导型一氧化氮合酶(i NOS)、CC趋化因子配体2(CCL2)、CD86、精氨酸酶1(Arg1)、甘露糖受体/CD206(MR/CD206)、IL-10、炎症区分子1(found in inflammatory zone 1,FIZZ1)、几丁质酶3样分子3(chitinase 3-like 3,即Ym-1)的变化。结果 ADSC使M1型巨噬细胞分泌的IL-6、TNF-α、i NOS、CCL2、CD86明显减少,Arg1、CD206、IL-10明显增加,且上清液中IL-6和TNF-α含量明显减少,CD206明显增加;使M2型巨噬细胞分泌的IL-6、TNF-α、i NOS、CD86明显减少,Arg1、CD206、FIZZ-1、Ym-1、IL-10明显增加,且上清液中IL-6和TNF-α含量明显减少,CD206明显增加。结论 ADSC抑制M1型巨噬细胞的特异性基因的表达,促进M2型巨噬细胞特异性基因的表达,并使M1型巨噬细胞向M2型巨噬细胞转化。

针刺对肥胖大鼠脂肪组织M1型巨噬细胞及IL-6表达的影响研究

目的:观察针刺对肥胖大鼠脂肪组织M1型巨噬细胞及IL-6表达的影响,探讨针刺治疗肥胖的分子作用机制。方法:将24只SD雄性大鼠随机分为正常组、模型组和针刺组,每组8只。予“双侧足三里、阴陵泉、丰隆、天枢、中脘及关元”等穴位针刺,30 min/次/d,每5 d暂停1次,共30 d,并记录每周体质量。治疗结束后,分离各组大鼠的肾周脂肪、肠周脂肪及附睾脂肪等内脏脂肪,并记录其湿重。采用蛋白质免疫印迹(Western Blot)技术检测各组大鼠脂肪组织中M1型巨噬细胞标志物诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)及IL-6蛋白的表达;HE染色观察各组大鼠附睾脂肪组织形态。结果:与正常组比较,模型组大鼠的体质量、内脏脂肪湿重、iNOS及IL-6蛋白的表达均显著升高,脂肪细胞平均面积增大,差异具有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。与模型组比较,针刺组大鼠的体质量、内脏脂肪湿重、iNOS及IL-6蛋白的表达均显著降低,脂肪细胞平均面积减小,差异具有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论:针刺能降低肥胖大鼠脂肪组织M1型巨噬细胞标志物iNOS及IL-6的表达,改善机体的慢性炎症状态,以达到降脂减肥的目的。

细胞外囊泡通过促进M1型巨噬细胞活化加重NASH进展

目的探讨脂肪变性肝细胞来源的细胞外囊泡(EV)对巨噬细胞活化的影响。方法选择SD大鼠予高脂肪高胆固醇(HFHCD)饮食构建非酒精性脂肪性肝炎(NASH)模型。用HE、油红O和Masson染色观察大鼠肝脏病变情况,免疫荧光染色检测肝脏M1型巨噬细胞活化。用棕榈酸(PA)诱导HepG2细胞为脂肪变性肝细胞,并用超速离心法提取其分泌的EV后进行鉴定,再用定量逆转录PCR(RT-qPCR)和流式细胞术检测EV对巨噬细胞的影响。结果大鼠肝组织HE、油红O和Masson染色结果显示NASH动物模型构建成功,免疫荧光染色检查证实HFHCD组肝脏CD68+CD86+细胞比例升高(P<0.05)。RT-qPCR显示PA组EV能促进M1型巨噬细胞标志物(IL-1β和IL-18)表达升高(P<0.001),流式细胞术显示PA组EV促进CD86+细胞比例增加(P<0.001),而EV抑制剂(GW4869)能阻断这种促进作用。结论脂肪变性肝细胞可通过EV促进M1型巨噬细胞活化加重NASH进展。

琥珀酸在M1型巨噬细胞中积累及其信号传递研究进展

巨噬细胞是机体重要的免疫细胞,在不同的病理条件下表现为不同的炎症表型,即M1型巨噬细胞(经典活化的巨噬细胞)和M2型巨噬细胞(替代活化的巨噬细胞)。在促炎表型M1型巨噬细胞中,琥珀酸大量堆积,并介导激活一系列炎症途径。本文综述了M1型巨噬细胞中,琥珀酸的来源及其病理作用,为研究琥珀酸及其介导的炎症途径提供理论支持。

牙周炎中M1型巨噬细胞与破骨细胞形成相关性研究

目的:探究牙周炎中M1型巨噬细胞与破骨细胞形成的相关性。方法:取2月龄C57BL/6J小鼠,丝线结扎建立右侧上颌牙周炎模型,左侧上颌作为自身对照。术后7 d收样,Micro-CT扫描分析牙槽骨吸收情况,苏木素-伊红(HE)、抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)、CD80和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)免疫荧光染色观察破骨细胞及M1型巨噬细胞数量及位置情况,实时定量RT-PCR检测白细胞介素(Il)-1β、Il-6、肿瘤坏死因子α(Tnf-α)、iNos等M1型巨噬细胞相关基因及破骨细胞相关免疫球蛋白样受体(Oscar)、基质金属蛋白酶9(Mmp9)、组织蛋白酶K(Ctsk)、Trap等破骨细胞相关基因表达,对M1型巨噬细胞与破骨细胞的相关基因表达、M1型巨噬细胞与破骨细胞的数量进行相关性分析,对M1型巨噬细胞与破骨细胞定位分布进行分析。结果:成功构建小鼠牙周炎模型,上颌牙周炎侧牙槽骨骨组织参数明显下降(P<0.05);牙周炎侧M1型巨噬细胞及破骨细胞数量明显增加(P<0.05);牙周炎侧Il-1β、Il-6、Tnf-α、iNos等M1型巨噬细胞相关基因及Oscar、Mmp9、Ctsk、Trap等破骨细胞相关基因表达较对照侧高(P<0.05);牙周炎中破骨细胞相关基因与M1型巨噬细胞相关基因表达水平呈显著正相关(P<0.05),M1型巨噬细胞数量与破骨细胞数量呈显著正相关(P<0.05);TRAP染色和iNOS免疫荧光共染结果显示,破骨细胞位于的牙槽骨表面周围有较多M1型巨噬细胞分布。结论:牙周炎时,M1型巨噬细胞和破骨细胞数量均显著增加,且呈显著正相关,牙槽骨周围的M1型巨噬细胞和牙槽骨表面的破骨细胞具有相邻的定位关系。

回阳生肌膏不同拆方对M1型巨噬细胞调控成纤维细胞分泌功能的影响

目的观察回阳生肌膏不同拆方益气温阳方和活血通络方对M1型巨噬细胞调控成纤维细胞表型的影响。方法用丙二醇甲醚醋酸酯(2-Acetoxy-1-methoxypropane,PMA)、脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)和干扰素γ(Interferon-γ,IFN-γ)刺激人单核细胞株(THP-1)转化为M1型巨噬细胞,分别加入不完全培养液、益气温阳方(4、0.8、0.16 mg/L)和活血通络方(32、6.4、1.28 mg/L)药物,24 h后收集培养上清液。依次将培养上清液加入到人成纤维细胞株(HSF),模型组加入M1型巨噬细胞上清液,益气温阳方、活血通络方分别加入高、中、低药物组M1型巨噬细胞上清液,空白组或对照组加入HSF细胞培养液。采用细胞计数试剂盒(Cell Counting Kit-8,CCK-8)方法观察细胞增殖情况;luminex法检测上清液中趋化因子2(C-C motif chemokine ligand 2,CCL2)、趋化因子7(C-C motif chemokine ligand 7,CCL7)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMPs)和基质金属蛋白酶抑制剂-1(tissue inhibitor of matrix metalloproteinase 1,TIMP-1)的含量;realtime-PCR法检测细胞内CCL2、CCL7、IL-6、MMPs、TIMP-1、Ⅰ型胶原蛋白基因α1(collagen typeⅠalpha gene,COL1A1)和Ⅲ型胶原蛋白基因α1(collagen typeⅢalpha gene,COL3A1)mRNA的表达。结果与模型组相比,益气温阳组和活血通络组各剂量组均可促进HSF细胞增殖;抑制HSF细胞炎症因子CCL2、CCL7、IL-6的分泌及其mRNA的表达(P<0.01);抑制HSF细胞基质金属蛋白酶1(matrix metalloproteinase 1,MMP-1)、基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase 2,MMP-2)、基质金属蛋白酶3(matrix metalloproteinase 3,MMP-3)的分泌及其mRNA的表达(P<0.01),促进TIMP-1的分泌及mRNA的表达(P<0.01),抑制MMP-3 mRNA的表达(P<0.01);促进HSF细胞COL1A1和COL3A1 mRNA的表达(P<0.01)。结论益气温阳方主要促进成纤维细胞增殖,抑制HSF细胞炎症因子和MMPs的分泌蛋白及mRNA的表达,促进基质金属蛋白酶抑制剂(tissue inhibitor of matrix metalloproteinases,TIMPs)的分泌和mRNA表达,以促使创面成纤维细胞活化,而活血通络方主要促进成纤维细胞胶原生成,促进其向肌成纤维细胞转化,两方相辅相成,共同促进创面愈合。

猪苓多糖对M1型巨噬细胞细胞因子表达的调节作用

目的通过诱导构建M1型巨噬细胞模型研究猪苓多糖对白细胞介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、诱导型一氧化氮合成酶(iNOS)和转化生长因子β(TGF-β)、IL-10 mRNA的表达影响,探讨猪苓多糖对巨噬细胞的免疫调节机制。方法实验分为空白对照组、γ干扰素(IFN-γ)诱导的M1型巨噬细胞模型组、猪苓多糖高中低剂量组,浓度分别为200μg/mL、100μg/mL、50μg/mL。用IFN-γ诱导RAW264.7巨噬细胞,用流式细胞术检测M1型巨噬细胞特异性指标CD16/CD32、CD86的表达,实时荧光定量PCR检测IL-1β、IL-10、iNOS、TNF-α、TGF-β的mRNA表达,观察不同剂量猪苓多糖对M1型巨噬细胞的影响。结果与空白组比较,IFN-γ的诱导RAW264.7巨噬细胞分化M1型巨噬细胞的特异性标志物CD16/CD32、CD86的表达明显升高。100μg/mL猪苓多糖组在3、6、9、12、24 h,IL-1β、iNOS、IL-10、TGF-β、TNF-α的mRNA表达升高,不同剂量猪苓多糖给药6 h后各因子的表达量升高(P<0.01)。结论 IFN-γ单独作用于巨噬细胞,可以有效的诱导RAW264.7巨噬细胞极化为M1型巨噬细胞;猪苓多糖促进M1型巨噬细胞IL-1β、iNOS、IL-10、TNF-α的mRNA表达。

没食子酸对M1型巨噬细胞极化的影响

目的:体外建立M1型巨噬细胞极化模型,探讨没食子酸(GA)对M1型巨噬细胞极化的影响。方法:选用8周龄C57BL/6雌性小鼠,取腹腔巨噬细胞进行体外原代培养,通过对细胞培养基进行不同的处理,将实验分为对照组(不做处理)、M1极化模型组[加入脂多糖(LPS,100μg·L^(-1))和干扰素γ(IFN-γ,20μg·L^(-1))诱导腹腔巨噬细胞M1型极化]和GA组[在M1极化模型组的基础上,加入GA(37.5 mg·L^(-1))与LPS和IFN-γ共处理腹腔巨噬细胞]。采用倒置显微镜观察细胞形态表现,Annexin Ⅴ-PE/7-AAD双染法检测各组细胞凋亡率,流式细胞术检测F4/80+iNOS+M1型巨噬细胞阳性表达率,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测各组细胞中诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和白细胞介素1β(IL-1β)mRNA表达水平。结果:倒置显微镜观察,对照组细胞主要呈圆形或椭圆形,M1极化模型组细胞主要表现为梭形;与M1极化模型组比较,GA组可见梭形细胞减少,圆形细胞增多。3组巨噬细胞凋亡率比较差异无统计学意义(P>0.05)。与对照组比较,M1极化模型组中F4/80+iNOS+M1型巨噬细胞阳性表达率升高(P<0.01),GA组中F4/80+iNOS+M1型巨噬细胞阳性表达率升高,但差异无统计学意义(P>0.05);与M1极化模型组比较,GA组中F4/80+iNOS+M1型巨噬细胞阳性表达率明显降低(P<0.01)。与对照组比较,M1极化模型组细胞中iNOS和IL-1βmRNA表达水平升高(P<0.01);与M1极化模型组比较,GA组iNOS和IL-1βmRNA表达水平明显降低(P<0.01),与对照组比较,GA组iNOS和IL-1βmRNA表达水平差异无统计学意义(P>0.05)。结论:GA对巨噬细胞凋亡无明显影响,但可抑制巨噬细胞向M1型的极化。

M1型巨噬细胞对慢性牙周炎模型小鼠免疫状态的影响

目的:探讨M1型巨噬细胞对牙龈卟啉单胞菌诱导的慢性牙周炎模型小鼠免疫状态的影响,阐明M1型巨噬细胞在慢性牙周炎中的作用。方法:10只7周龄C57BL/6雌性小鼠随机分为对照组(n=5)和慢性牙周炎组(n=5)。以牙龈卟啉单胞菌涂抹小鼠口腔建立慢性牙周炎模型。测量2组小鼠从釉牙骨质界(CEJ)到牙槽嵴顶(ABC)的距离,评价牙槽骨吸收情况;HE染色法观察2组小鼠牙周组织中炎性细胞浸润、结缔组织附着丧失和牙槽骨吸收情况;流式细胞术检测2组小鼠牙龈组织中F4/80^+iNOS^+M1型巨噬细胞百分率和细胞数;实时定量PCR法检测2组小鼠牙龈组织中M1型巨噬细胞相关因子iNOS mRNA表达水平。结果:与对照组比较,慢性牙周炎组小鼠CEJ至ABC的距离明显增加(P<0.01);与对照组比较,慢性牙周炎组小鼠牙龈结合上皮附着位于CEJ的根方,ABC吸收变平,可见破骨细胞和骨吸陷窝形成;慢性牙周炎小鼠牙龈组织中M1型巨噬细胞百分率和细胞数明显高于对照组(P<0.01);慢性牙周炎小鼠牙龈组织中iNOS mRNA表达水平高于对照组(P<0.01)。结论:在慢性牙周炎小鼠模型中,M1型巨噬细胞介导的免疫应答增强,M1型巨噬细胞参与慢性牙周炎的炎症反应和组织损伤。

M1型巨噬细胞糖代谢重编程机制及其在炎症启动中的关键作用

巨噬细胞是机体主要的炎症效应细胞,不仅是机体对抗感染的重要武器,而且与临床上大多数疾病的发生发展密切相关。正常细胞以葡萄糖氧化磷酸化途径代谢产能,在缺氧环境下则以糖酵解途径为主。而肿瘤细胞在氧气充足条件下也通过糖酵解代谢产能,这就是经典的Warburg效应理论。研究表明,M1型极化巨噬细胞可发生与肿瘤细胞类似的糖代谢重编程,表现为有氧糖酵解增强和氧化磷酸化减弱,而阻断糖代谢重编程可有效抑制炎症反应。近年来,免疫和代谢相关性研究成为学术界关注热点,并催生了免疫代谢学的概念,其中巨噬细胞与代谢的关联性研究也取得了丰硕成果。本文重点阐述了M1型极化巨噬细胞糖代谢重编程的可能机制,并分析了它在炎症启动调控中的关键作用,以期为临床上炎症相关疾病防治提供新策略。