IL-1β辅助小胶质细胞M1型活化的作用机制研究

目的探讨IL-1β辅助小胶质细胞M1型活化的作用和机制。方法将BV2细胞分为对照(Control)组、脂多糖(LPS)组、LPS+IL-1β组。Control组常规培养;LPS组用终浓度为1 mg/L的LPS处理;LPS+IL-1β组先用15μg/L的IL-1β预处理6 h,再用终浓度为1 mg/L的LPS处理。LPS的处理时间为24 h。酪氨酸激酶(JAK1)抑制剂IN-7处理的实验中,将BV2细胞分为LPS组、LPS+IL-1β组、LPS+IL-1β+IN-7组,其中LPS+IL-1β+IN-7组在IL-1β处理前6 h用0.5μmol/L IN-7预处理,阻断JAK1,其余处理同前。采用ELISA法检测培养基中IL-6、TNF-α、一氧化氮(NO)和前列腺素G2(PEG_(2))水平;免疫荧光染色观察BV2细胞中CD86的荧光强度;Western blot法检测M1型标志物单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)、趋化因子8(CXCL-8)的表达以及JAK1-信号转导及转录激活蛋白1(STAT1)信号蛋白JAK1、STAT1、磷酸化的JAK1(p-JAK1)、磷酸化的STAT1(p-STAT1)的表达。结果与LPS组比较,LPS+IL-1β组培养基中在3、6、12、18、24 h时IL-6、TNF-α、NO和PEG_(2)表达水平均上调(均P<0.05),细胞中CD86荧光强度上调(P<0.05),细胞中MCP-1、CXCL-8、JAK1、p-JAK1、p-STAT1蛋白表达水平均上调(均P<0.05)。而IN-7处理后,与LPS+IL-1β组比较,LPS+IL-1β+IN-7组培养基在3、6、12、18、24 h时IL-6、TNF-α、NO和PEG_(2)表达水平均下调(均P<0.05),细胞中CD86荧光强度下调(P<0.05),细胞中MCP-1、CXCL-8、JAK1、STAT1、p-JAK1、p-STAT1蛋白表达水平均下调(均P<0.05)。结论IL-1β可以通过激活JAK1-STAT1信号,进一步促进小胶质细胞M1型活化,这是神经炎症进展的机制之一。

柴胡皂苷D对脑出血大鼠神经保护作用的机制研究

目的评价柴胡皂苷D对脑出血大鼠神经元损伤的影响,并初步探讨其作用机制。方法SD大鼠通过尾状核注入尾静脉自体血建立大鼠脑出血模型,分为假手术组、模型组、柴胡皂苷D组(8 mg/kg)、Toll样受体4(TLR4)激活剂(RS09)组(25μg/只)、TLR4抑制剂(TAK-242)组(0.5 mg/kg)、柴胡皂苷D+TLR4激活剂组,每组20只。各组干预给药结束后,进行神经功能缺损评分;干-湿重法检测脑含水量;伊文思蓝法检测血-脑屏障通透性;取血肿周围组织,ELISA法检测凝血酶-抗凝血酶(TAT)复合物水平;HE染色及TUNEL染色检测神经元损伤及凋亡率;免疫荧光共定位法检测M1型激活小胶质细胞(标记抗体为CD11b)与小胶质细胞(标记抗体为Iba-1)共表达水平;Western blotting法检测IL-1β、IL-6、IL-10、TLR4、髓样分化因子88(MyD-88)、核转录因子-κB(NF-κB)、蛋白酶激活受体-1(PAR-1)、B类清道夫受体(CD36)表达水平。结果与假手术组相比,模型组EB含量、脑含水量、神经功能缺损评分、TAT复合物水平均明显升高,CD11b+Iba-1+水平、IL-10、CD36表达明显降低,TLR4、MyD-88、p-NF-κB/NF-κB、PAR-1蛋白表达明显升高(均P<0.05)。阻断TLR4活化及给予柴胡皂苷D干预处理,均可同等程度的改善脑出血大鼠病理症状,M1促炎相关因子IL-6、IL-1β表达明显下降,M2型抗炎相关因子IL-10、CD36表达明显升高(均P<0.05)。TLR4激活剂可明显削弱柴胡皂苷D的上述作用(P<0.05)。结论柴胡皂苷D可改善脑出血大鼠脑水肿、神经元炎性损伤凋亡等病理症状,且其改善作用可能与阻断TLR4通路介导的小胶质细胞M1型活化有关。

麻黄-甘草药对对脂多糖诱导的RAW264.7细胞的体外抗炎作用分析

目的:观察麻黄-甘草药对对小鼠单核巨噬细胞系RAW264.7细胞的增殖以及对脂多糖(LPS)刺激条件下对细胞分泌一氧化氮(NO),肿瘤坏死因子(TNF)-α和经典活化(M1)/替代活化(M2)炎症表型转化的影响。方法:利用噻唑蓝(MTT)比色法考察不同剂量的药对对RAW264.7细胞增殖的影响;药对干预脂多糖(LPS,1 mg·L-1)建立的细胞炎症模型,格里斯试剂法(Griess)法检测NO释放量,酶联免疫吸附法(ELISA)法检测上清中TNF-α的含量;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测药对对LPS刺激条件下RAW264.7细胞M1型巨噬细胞常见标志物一氧化氮合酶(iNOS),白细胞介素-6(IL-6),IL-1β及M2型巨噬细胞常见标志物IL-10,精氨酸酶1(ARG1)及甘露糖受体1(MRC1)基因的表达。结果:麻黄-甘草药对的剂量在100 mg·L-1及以下时对RAW264.7细胞增殖没有影响;与LPS组比较,剂量在25~100 mg·L-1的药对可以显著降低NO的含量(P<0.05,P<0.01),10~100 mg·L-1剂量下对TNF-α表达的抑制显著(P<0.05,P<0.01);50 mg·L-1的药对还可以显著降低M1型巨噬细胞标志基因iNOS,IL-6及IL-1β的表达(P<0.05,P<0.01),而对M2型巨噬细胞标志基因IL-10,ARG1,MRC1没有影响。结论:麻黄-甘草药对能够抑制LPS诱导的RAW264.7细胞炎症,其机制可能与抑制巨噬细胞向M1型方向的偏移,减少NO及TNF-α等炎症因子的分泌相关。

靶向干预巨噬细胞极化的矽肺治疗药物

矽肺是我国职业病中最常见、危害最严重的一类疾病,其发病机制与肺巨噬细胞密切相关。二氧化硅(SiO_(2))进入肺内被巨噬细胞吞噬后使巨噬细胞发生极化,极化后的巨噬细胞分为经典活化型巨噬细胞(M1)和选择活化型巨噬细胞(M2),它们分别通过复杂的调控机制释放各种炎性因子,最终导致肺纤维化。本文拟就巨噬细胞极化与矽肺纤维化的关系,以及靶向干预巨噬细胞极化的矽肺治疗药物进行综述,以期为深入探索矽肺纤维化的发病机制和寻找新的治疗方法提供理论依据。