M1巨噬细胞培养液对ER阳性乳腺癌细胞上皮-间质转换的影响及Calpain的介导作用

目的 探讨M1巨噬细胞对乳腺癌细胞上皮细胞-间充质转换(EMT)的影响及钙蛋白酶(Calpain)在其中的介导作用。方法 以人乳腺癌细胞系雌激素受体阳性(ER+)细胞MCF-7、T47D及雌激素受体阴性(ER-)细胞MDA-MB-231为模型细胞,实验分为MCF-7细胞及T47D细胞的RPMI-1640组(RPMI-1640纯培养基培养)、M1巨噬细胞条件培养液培养组(M1-CM组)、M1-CM+Calp组[M1-CM联合Calpain抑制剂Calpeptin(50μmoL/L)处理]、M1-CM+CI-Ⅲ组[M1-CM联合Calpain抑制剂Calpain inhibitorⅢ(50μmoL/L)处理],MDA-MB-231细胞的RPMI-1640组、M1-CM组;采用划痕实验和侵袭实验检测各组中MCF-7细胞、T47D细胞、MDA-MB-231细胞的迁移能力及MCF-7细胞的侵袭能力,采用qRT-PCR检测M0巨噬细胞、M1巨噬细胞趋化因子受体7CCR7、趋化因子配体10(CXCL10)及白细胞介素-12(IL-12) mRNA表达水平,采用Western blot实验检测MCF-7细胞、T47D细胞及MDA-MB-231细胞中上皮-钙黏素(E-cad)、纤连蛋白(FN)、波形蛋白(Vim)蛋白水平表达。结果 与RPMI-1640组相比,M1-CM组ER+细胞MCF-7及T47D迁移能力增强(P<0.05),MCF-7细胞侵袭能力增强(P<0.05);ER+细胞MCF-7及T47D E-cad蛋白表达水平下调,而FN、Vim表达上调(P<0.05),而ER-细胞MDA-MB-231中只有E-cad表达上调(P<0.05);与M1-CM组相比,ER+细胞MCF-7及T47D的M1-CM+Calp组、M1-CM+CI-Ⅲ组中M1-CM诱导的ER+乳腺癌细胞EMT效应被逆转(P<0.05)。结论 M1巨噬细胞条件培养液可以促进ER+细胞人乳腺细胞的EMT,但对ER-细胞EMT无明显影响,其促进ER+乳腺癌细胞EMT信号机制可能与Calpain通路有关。

M1巨噬细胞培养液经ERK/Notch1通路对MCF-7细胞EMT的影响

目的探讨M1巨噬细胞条件培养液对乳腺癌细胞上皮-间质转换(EMT)的影响、及EMK/Notch1通路在其中的介导作用。方法将MCF-7细胞分为RPMI-1640组(RPMI-1640纯培养基)、M1-CM组(M1巨噬细胞条件培养液)、M1-CM+DAPT组(M1-CM联合50μmol/L DAPT)及M1-CM+U0126组(M1-CM联合10μmol/L U0126),采用划痕实验和侵袭实验(Transwell)检测MCF-7细胞迁移和侵袭能力,采用蛋白印迹(Western blot)实验检测MCF-7细胞蛋白水平表达。结果与RPMI-1640组相比,M1-CM组MCF-7细胞迁移率及侵袭率均增加(P<0.05)、上皮标志物E-cad蛋白表达水平下调(P<0.05)、间质标志物FN及Vim蛋白表达水平上调(P<0.05);与M1-CM组相比,M1-CM+U0126组及M1-CM+DAPT组MCF-7细胞迁移率及侵袭率均降低、E-cad蛋白表达水平上调(P<0.05)、FN及Vim蛋白表达水平下调(P<0.05);与M1-CM组比较,M1-CM+U0126组Notch信号通路Notch1蛋白、其靶基因Hes1蛋白表达均被显著抑制(P<0.05),M1-CM+DAPT组ERK磷酸化未被抑制(P>0.05)。结论M1巨噬细胞条件培养液促进MCF-7细胞EMT,该效应可能与ERK/Notch1信号通路活动有关。

NecroX-5调节M1巨噬细胞极化减轻急性呼吸窘迫综合征肺损伤的机制

目的:探讨NecroX-5对脂多糖(LPS)诱导的急性呼吸窘迫综合征(ARDS)大鼠肺损伤的影响及机制。方法:将40只SD大鼠随机分为对照组、NecroX-5组、LPS组和NecroX-5+LPS组。采用尾静脉注射LPS诱导ARDS模型,NecroX-5组和NecroX-5+LPS组造模前7 d腹腔注射10 mg/kg NecroX-5。造模后24 h收集大鼠肺泡灌洗液(BALF),ELISA检测TNF-α、IL-6、IL-23、iNOS水平,HE染色检测肺组织病理变化,免疫组化染色检测肺组织CD68^(+)CD86^(+)表达,qPCR检测CD86、iNOS mRNA表达,Western blot法检测CD86、iNOS、HMGB1、RAGE蛋白表达。RAW264.7细胞随机分为对照组、NecroX-5组、LPS+IFNγ组和NecroX-5+LPS+IFNγ组,流式细胞术检测各组巨噬细胞极化情况,Western blot法检测HMGB1、RAGE蛋白表达。结果:与LPS组比较,NecroX-5+LPS组BALF中TNF-α、IL-6、IL-23、iNOS含量下降,肺组织损伤程度减小,CD68^(+)CD86^(+)阳性表达降低,iNOS、CD86 mRNA与蛋白表达量下降,HMGB1、RAGE蛋白表达下降(P<0.05)。与LPS+IFNγ组比较,NecroX-5+LPS+IFNγ组细胞F4/80+CD11b+CD11c+标记百分比下降,此外,HMGB1与RAGE蛋白表达下降(P<0.05)。结论:NecroX-5可能通过调节M1型巨噬细胞极化与HMGB1/RAGE表达,改善大鼠ARDS肺损伤。

猪苓多糖诱导M2亚型巨噬细胞向M1巨噬细胞转化

目的:研究猪苓多糖对IL-4诱导的M2亚型巨噬细胞膜表面分子的阳性表达率的影响和相关炎症因子的作用。方法:实验分为5组:空白对照组,模型组,猪苓多糖低、中、高剂量组(50、100、200μg/ml)。用20 ng/ml的IL-4诱导为M2亚型巨噬细胞,采用流式细胞术检测CD206、CD16/32阳性表达率,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测相关因子mRNA表达量,造模成功后予猪苓多糖干预M2亚型巨噬细胞,检测猪苓多糖对巨噬细胞膜分子的影响和相关因子的mRNA的影响。结果:IL-4可以稳定建立M2亚型巨噬细胞模型,猪苓多糖可以明显提高CD16/32、CD40的阳性表达率,并显著增加相关炎症因子的表达率。结论:猪苓多糖可以逆转M2亚型巨噬细胞为M1巨噬细胞,提高巨噬细胞的免疫功能。

miR-210通过MMP-2下调M2/M1巨噬细胞比例抑制肺癌细胞生长

目的研究miR-210通过MMP-2调控M2/M1巨噬细胞比例对肺癌细胞生长的影响及对相关机制进行初步探讨。方法将小鼠Lewis lung carcinoma (LLC)-1细胞皮下植入C57BL/6小鼠构建小鼠肺癌模型,荧光定量PCR检测miR-210表达。进一步取40只肺癌建模成功的小鼠,并随机分为4组:对照组小鼠尾静脉注射AAV9-Fugw腺相关病毒;AAV9-OE-miR-210组小鼠尾静脉注射AAV9-OE-miR-210腺相关病毒;AAV9-OE-MMP-2组小鼠尾静脉注射AAV9-OE-MMP-2腺相关病毒;AAV9-OE-miR-210+AAV9-OE-MMP-2组小鼠尾静脉注射AAV9-OE-miR-210和AAV9-OE-MMP-2腺相关病毒。所有小鼠注射腺相关病毒滴度为108TU,病毒注射时间为4周。检测4组小鼠肿瘤大小变化,WGA染色检测4组小鼠肺癌细胞大小变化。另外,取生长融合至80%的LLC1细胞,并随机分为2组:WT组转染包含野生型MMP-2 3’-UTR的构建物,Mut组转染突变型MMP-2 3’-UTR的构建物。细胞转染48 h后,荧光素酶实验检测miR-210和MMP-2(matrix metalloproteinases-2)的结合情况。另取生长融合至80%的LLC1细胞,并随机分为3组:对照组常规培养细胞,不给予任何特殊处理;miR-210 mimic组给予50μmol/L的miR-210 mimic药物刺激;miR-210 inhibitor组给予100μmol/L的miR-210 inhibitor药物刺激,以上细胞处理48 h后进行检测。荧光定量PCR检测小鼠肺组织中巨噬细胞M1型标志物白细胞介素IL-6和诱导型一氧化氮合酶iNOS的表达以及M2型标志物精氨酸酶Arg-1和白细胞分化抗原CD206的表达。结果荧光定量PCR实验显示,miR-210在小鼠肺癌组织中表达下调;肿瘤质量检测发现,肺癌小鼠尾静脉注射AAV9-OE-miR-210后肿瘤质量减轻,肺癌小鼠尾静脉注射AAV9-shmiR-210后肿瘤质量增加;WGA染色结果发现,肺癌小鼠尾静脉注射AAV9-OE-miR-210后肺癌细胞变小,肺癌小鼠尾静脉注射AAV9-sh-miR-210后肺癌细胞变大。荧光定量PCR结果发现,肺癌小鼠尾静脉注射AAV9-OE-miR-210后,小鼠肺组织中巨噬细胞M1型标志物白细胞介素IL-6和诱导型一氧化氮合酶iNOS表达升高,M2型标志物精氨酸酶Arg-1和白细胞分化抗原CD206表达明显降低;肺癌小鼠尾静脉注射AAV9-sh-miR-210后,小鼠肺组织中巨噬细胞M1型标志物白细胞介素IL-6和诱导型一氧化氮合酶iNOS表达降低,M2型标志物精氨酸酶Arg-1和白细胞分化抗原CD206表达明显升高。荧光素酶实验发现miR-210可以和MMP-2 3’-UTR区域结合。肿瘤质量检测和WGA染色发现,过表达miR-210可以逆转过表达MMP-2导致的肿瘤质量增加和肺癌细胞的变大。结论 miR-210通过调控M2/M1巨噬细胞比例抑制肺癌细胞生长。

ROCK1蛋白通过ROS调节M1巨噬细胞的极化

目的 分析Rho相关激酶(ROCK1)对巨噬细胞M1极化的影响。方法 巨噬细胞系THP1细胞接种于6孔板中,以每孔100 ng/ml终浓度的佛波酯(PMA)诱导48 h细胞贴壁,分化为M0巨噬细胞。向M0细胞的培养基中添加干扰素-γ(IFN-γ)20 ng/ml、脂多糖(LPS)100 ng/ml继续诱导48 h设为M1组;向M0细胞的培养基中添加IFN-γ20 ng/ml、LPS 100 ng/ml、ROCK1抑制剂Y27632 1μmol/L继续诱导48 h设为M1+Y27632组;添加等量的PBS 48 h设为对照M0组。观察THP1来源巨噬细胞向经典激活的巨噬细胞(M1)极化过程中的形态改变;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测各组白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、单核细胞趋化性蛋白1(MCP1)、CXC趋化因子配体16(CXCL16)和ROCK1 mRNA表达水平;Western blot检测ROCK1蛋白表达量;流式细胞术检测各组细胞表面M1型标志物CD86的表达及抑制ROCK1后各组细胞活性氧(ROS)的水平。结果 THP1巨噬细胞向M1极化过程中,M1组细胞比对照M0组伸出更多伪足。与对照M0组相比,M1组细胞IL-6和CXCL16的mRNA水平均显著增加(P<0.05);M1组细胞中ROCK1的蛋白和mRNA水平均显著增加(P<0.05)。检测添加ROCK1抑制剂Y27632后各组中促炎因子表达水平的变化,结果显示:与对照M0组相比,M1组中促炎因子IL-6、TNF-α、MCP-1、CXCL16的mRNA表达水平显著升高(P<0.05);M1+Y27632组IL-6、TNF-α、MCP-1、CXCL16的mRNA表达水平显著低于M1组(P<0.01)。流式细胞术检测结果显示,M1组中CD86阳性细胞的比例显著高于对照M0组(P<0.01),M1+Y27632组CD86阳性细胞的比例显著低于M1组(P<0.05);M1组细胞内的ROS水平较对照M0组显著上升(P<0.01),M1+Y27632组ROS的水平显著低于M1组(P<0.01)。结论 抑制ROCK1可能通过ROS抑制THP1巨噬细胞向M1的极化。

中药通心络胶囊对糖尿病足大鼠nephrin、podocin 水平、巨噬细胞M1表型及VEGF蛋白的作用

目的研究中药通心络胶囊对糖尿病足大鼠nephrin、podocin水平、巨噬细胞M1表型及血管内皮生长因子(VEGF)蛋白的作用。方法SPF级健康SD大鼠50只,随机抽取10只作为健康组进行对照,剩余40只进行糖尿病足模型建立,建模成功后40只大鼠按随机数字表法分为模型组,通心络低、中、高剂量组,每组10只,健康组、模型组给予2 ml生理盐水灌胃;通心络低、中、高剂量组分别给予通心络胶囊0.50、0.75、1.00 g/kg灌胃。苏木素-伊红(HE)染色观察大鼠肾组织病理形态,HE及Masson染色观察大鼠足部病理形态,RT-聚合酶链反应(PCR)检测Nephrin、podocin表达,多重免疫荧光检测伤口组织中M1型和M2型巨噬细胞数量,Western印迹检测细胞中VEGF、缺氧诱导因子(HIF)-1α蛋白表达水平,应用ImageJ 1.46医学图像分析糖尿病足大鼠溃疡面积。结果模型组肾小球萎缩,基底膜增厚,有炎性细胞浸润,足部炎症细胞较多,新生胶原纤维组织较薄,且排列疏松、不规律,管腔较少;与模型组相比,通心络低、中、高剂量组有所改善。与健康组相比,模型组nephrin、podocin、VEGF、HIF-1α水平显著降低;与模型组相比,通心络各剂量组nephrin、podocin、VEGF、HIF-1α水平显著升高,且以高剂量组效果最为显著(P<0.05)。与模型组相比,通心络低、中、高剂量组M1型巨噬细胞显著减少、M2型巨噬细胞数目显著增多(P<0.05)。结论通心络胶囊可促进VEGF/HIF-1α表达,使巨噬细胞向M1极化,从而促进创面愈合,提高nephrin/podocin表达水平,减轻由糖尿病足导致的肾脏负担。

巨噬细胞M1/M2型极化在不同肝病中的作用研究进展

巨噬细胞具有较强的可塑性与异质性,可针对不同信号刺激发生功能转化,如转化为经典激活M1型(即M1型极化)、选择性激活M2型(即M2型极化)等。巨噬细胞M1/M2型极化的途径较为广泛,涉及核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)/丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)信号通路、白细胞介素-4(interleukin-4,IL-4)/信号转导与转录激活因子6(signal transduction and activator of transcription 6,STAT6)信号通路、Notch信号通路、无翼样糖蛋白/β-连环蛋白(Wnt/β-catenin)信号通路等。同时,巨噬细胞M1/M2型极化可不同程度地受到外泌体、代谢物、非编码RNA、电刺激、益生菌等的功能调节,其失衡与不同类型肝病的发生、发展关系密切。该文通过对该极化的作用机制进行梳理,发现巨噬细胞M1型极化在肝组织损伤、炎症反应及纤维化进程中起助推作用,巨噬细胞M2型极化则相反;其中,肝癌作为慢性肝病的晚期阶段,以巨噬细胞M2型极化增强、巨噬细胞M1型极化受损为特征。因此,该文关注巨噬细胞M1/M2型极化在不同类型肝病中的作用,以期能更好地确立巨噬细胞亚群靶向疗法。

芍药甘草汤通过调节NDUFS1表达抑制巨噬细胞向M1极化缓解小鼠溃疡性结肠炎

目的本研究旨在探索并阐明芍药甘草汤(Shakuyakukanzoto,SKT)通过调节巨噬细胞的能量代谢和极化来改善小鼠溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)的可能作用机制。方法通过给予3%葡聚糖硫酸钠盐(dextran sulfate sodium salt,DSS)构建小鼠UC模型并通过灌胃SKT进行治疗。首先,对两个数据集GSE21157和GSE210415进行单细胞测序分析和代谢通路富集。其次,对UC小鼠腹腔巨噬细胞的提取和代谢组学验证。然后,根据标准逆方差加权两样本的单变量孟德尔随机化分析差异代谢物富集的通路和UC风险相关性。接着,分析在GSE128682和GSE102746数据集转录水平差异。最后,使用定量反转录PCR(qRT-PCR)、蛋白质印迹法(Western blot)和流式细胞术验证结果。结果苏木精-伊红(HE)染色结果显示,SKT可以显著缓解DSS引起的结肠损伤。单细胞测序分析在肠壁中发现了巨噬细胞、NK细胞、T细胞等10多种不同类型的细胞。在疾病组中,通过比较这两组数据发现,有49条主要涉及能量代谢的巨噬细胞代谢途径的活性显著上调。能量代谢组学中,治疗组与模型组,模型组与空白组分别鉴定了10种和18种显著上调和下调的差异表达代谢物,这些差异表达的代谢物主要与糖酵解和氧化磷酸化有关。根据标准逆方差加权两样本的单变量孟德尔随机化分析,预测糖酵解和氧化磷酸化相关基因泛醌NADH脱氢酶Fe-S蛋白1(recombinant NADH dehydrogenase ubiquinone Fe-S protein 1,NDUFS1)(OR:0.56,95%CI:0.48~0.98,P=0.000068)与UC风险降低相关。通过对两组数据集转录水平差异分析,与正常组相比,UC中NDUFS1的转录水平降低。qRT-PCR、Western blot和流式细胞术验证结果显示,SKT可以促进NDUFS1蛋白的表达,抑制巨噬细胞向M1型极化。此外,敲低/过表达NDUFS1可以影响SKT对巨噬细胞M1型极化的影响。结论SKT通过调节NDUFS1蛋白水平,抑制巨噬细胞向M1型极化,从而缓解小鼠UC。这些发现不仅揭示了SKT对UC的治疗机制,也为临床应用提供了新的理论基础。

巨噬细胞M1/M2型极化对糖尿病视网膜病变进程的影响及相关性分析

目的分析巨噬细胞(Mø)M1/M2型极化对糖尿病视网膜病变(DR)进程的影响,为临床治疗提供参考。方法选取2020年6月至2022年7月南华大学附属第二医院收治的97例DR患者(研究组)及同期105例单纯糖尿病(DM)患者(对照组)为研究对象,比较两组患者临床资料,分析Mø表型检测的诊断价值,以及M1/M2型Mø与炎症因子、血糖水平、氧化应激反应标志物、DR进程的关系。结果研究组患者M1型、M1/M2型Mø占比均大于对照组,M2型Mø占比小于对照组(均P<0.05);M1/M2型Mø>7.275时诊断DM患者发生DR的灵敏度为83.51%,特异度为77.14%,曲线下面积(AUC)为0.8655(P<0.05);研究组患者白细胞介素-4(IL-4)、转化生长因子-β(TGF-β)、超氧化物歧化酶(SOD)水平均低于对照组,肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、丙二醛(MDA)水平均高于对照组(P<0.05);研究组患者M1/M2型Mø与IL-4、TGF-β、SOD水平均呈负相关,与TNF-α、iNOS、空腹血糖(FBP)、餐后2 h血糖(2 hBP)、MDA水平呈正相关(均P<0.05)。结论DR患者Mø由M2型向M1型极化过程中炎性反应与氧化应激反应加重,升高血糖水平,加速DR的恶性病理发展。

M1型、M2型巨噬细胞极化相关因子在重度慢性牙周炎患者牙龈组织中的表达及其临床意义

目的探讨M1型、M2型巨噬细胞极化相关因子在重度慢性牙周炎(CP)患者牙龈组织中的表达及其临床意义。方法选取2018年10月—2021年6月柳州市人民医院收治的168例CP患者。根据病情严重程度分为轻度组、中度组和重度组,分别有27例、72例和69例。另选取同期该院53例牙龈组织健康者作为对照组。通过实时荧光定量聚合酶链反应检测研究对象牙龈组织中M1型巨噬细胞极化相关因子诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、信号传导及转录激活因子1(STAT1)及M2型巨噬细胞极化相关因子精氨酸酶1(Arg1)、STAT6的表达。分析不同人群牙龈组织中M1型、M2型巨噬细胞极化相关因子mRNA相对表达量,分析CP患者病情严重程度的影响因素,分析M1型、M2型巨噬细胞极化相关因子对CP患者病情严重程度的诊断效能。结果轻度组、中度组和重度组牙龈组织中iNOS、STATl、Arg1、STAT6 mRNA相对表达量较对照组高,中度组和重度组较轻度组高,重度组较中度组高。轻中度组与重度组性别、年龄、体质量指数、高血压、糖尿病、冠心病、高脂血症、吸烟史、饮酒史、偏侧咀嚼、巴氏刷牙、刷牙≥2次/d、刷牙≥3 min/次、夜磨牙症、血清钙、SBI、PLI比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。重度组TNF-β、IL-10、IL-17及iNOS、STATl、Arg1、STAT6 mRNA相对表达量高于轻中度组。多因素Logistic逐步回归分析结果显示:IL-10[OR=3.873(95%CI:1.594,9.412)]、IL-17[OR=4.267(95%CI:1.756,10.371)]及iNOS[OR=4.092(95%CI:1.684,9.944)]、Arg1[OR=3.651(95%CI:1.502,8.873)]、STAT6[OR=3.644(95%CI:1.499,8.856)]mRNA相对表达量是影响CP患者病情严重程度的危险因素(P<0.05)。受试者工作特征曲线结果显示,iNOS、Arg1、STAT6 mRNA联合预测CP患者病情严重程度的敏感性、特异性和曲线下面积最高,分别为81.16%(95%CI:0.696,0.892)、90.91(95%CI:0.830,0.955)、0.908(95%CI:0.854,0.963)。结论M1型、M2型巨噬细胞极化相关因子iNOS、Arg1、STAT6与CP患者病情严重程度有关,3者联合评估CP患者病情严重程度效能良好。

结核性胸膜炎患者胸腔积液M1/M2巨噬细胞比例与预后

目的分析结核性胸膜炎(tuberculous pleurisy,TP)患者单核细胞中M1/M2巨噬细胞比例与TP预后的关系。方法选取2019年6月至2022年12月浙江大学医学院附属第二医院临平院区诊治的TP患者206例,以单因素与多因素Logistic回归分析影响TP预后的危险因素,采用受试者操作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线评估M1/M2单核–吞噬细胞比例对TP预后不良的预测价值。结果Logistic分析显示,发病至就诊时间、感染耐药菌、ESR、M1及M2巨噬细胞表达水平、M1/M2巨噬细胞比例是影响TP患者预后不良的危险因素(P<0.05);M1及M2巨噬细胞表达水平预测TP患者预后不良的曲线下面积(area under the curve,AUC)分别为0.783、0.829,敏感度分别为70.45%、81.47%,特异性分别为79.62%、73.44%,M1/M2巨噬细胞比例预测TP患者预后不良的AUC为0.921、敏感度为92.59%、特异性为84.96%,均明显大于二者单独预测(P<0.05)。结论发病至就诊时间、感染耐药菌、ESR、M1及M2巨噬细胞表达水平、M1/M2巨噬细胞比例是影响TP患者预后不良的危险因素,其中M1/M2巨噬细胞比例对TP患者预后不良的预测价值较高。

康柏西普联合眼底激光光凝治疗糖尿病黄斑水肿的临床效果及对M1型巨噬细胞促炎细胞因子表达的影响

目的康柏西普联合眼底激光光凝治疗糖尿病黄斑水肿(DME)的临床效果及对M1型巨噬细胞促炎细胞因子表达的影响。方法收集2019年1月至2022年1月解放军总医院第三医学中心接诊的95例DME患者的临床资料展开回顾性研究。根据治疗方法的不同将患者分为对照组(48例)和观察组(47例)。对照组接受眼底激光光凝治疗,观察组在对照组基础上接受康柏西普眼用注射液治疗。比较2组临床疗效、黄斑中心厚度(CMT)、最佳矫正视力(BCVA)、眼底出血面积、黄斑区荧光面积、M1型巨噬细胞促炎细胞因子表达量及血清血小板源性生长因子(PDGF)、血管内皮生长因子(VEGF)水平、不良反应总发生率。结果观察组总有效率高于对照组,差异有统计学意义[93.6%(44/47)比72.9%(35/48)](P<0.05)。治疗后2组CMT、眼底出血面积及黄斑区荧光面积均小于治疗前、且观察组小于对照组,BCVA均优于治疗前、且观察组优于对照组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。治疗后2组白细胞介素6、肿瘤坏死因子α、PDGF及VEGF水平均低于治疗前,且观察组均低于对照组[(82±19)ng/L比(150±25)ng/L、(7.2±1.0)ng/L比(10.9±2.4)ng/L、(3.6±0.4)ng/L比(6.3±0.9)ng/L、(93±16)ng/L比(157±20)ng/L],差异均有统计学意义(均P<0.05)。2组不良反应总发生率差异无统计学意义(P>0.05)。结论康柏西普联合眼底激光光凝可有效缓解DME患者黄斑水肿、视力减退等症状,抑制M1型巨噬细胞释放促炎因子,降低血清PDGF、VEGF水平,且治疗期间患者出现的不良反应较少,安全性可。

METTL14通过PI3K/AKT/GSK3β/β-catenin信号通路调控巨噬细胞分化对宫颈癌细胞凋亡和增殖的影响

目的探讨METTL14通过调控巨噬细胞分化抑制宫颈癌病理性发展及相关机制。方法检测宫颈癌病变样本METTL14 m RNA和蛋白,以及IL-6、iNOS、Arg-1和CD206表达变化。PMA诱导THP-1细胞转化为巨噬细胞,慢病毒过表达或抑制METTL14表达,检测IL-6、iNO、Arg-1和CD206表达变化以及PI3K/AKT/GSK3β/β-catenin信号通路相关蛋白表达情况。随后加入PI3K/AKT/GSK3β/β-catenin信号通路激动剂和抑制剂,检测过表达或抑制METTL14后,巨噬细胞IL-6、iNO、Arg-1和CD206表达变化,并取其上清制成条件培养基,孵育Hela细胞,检测细胞凋亡和增殖情况。结果1)宫颈癌病变组织中METTL14 mRNA和蛋白表达降低(P<0.05),巨噬细胞M1型标志物IL-6和iNOS表达明显降低(P<0.05),而M2型标志物Arg-1和CD206表达明显升高(P<0.05)。2)巨噬细胞过表达METTL14后,IL-6和iNOS表达明显升高(P<0.05),而Arg-1和CD206表达明显降低(P<0.05),M1/M2比例升高;抑制METTL14表达后,M1型标志物降低(P<0.05),M2型标志物升高(P<0.05),M1/M2比例降低。3)巨噬细胞中转染OE-METTL14慢病毒组PI3K/AKT/GSK3β/β-catenin信号通路被抑制(P<0.05);加入PI3K/AKT激动剂后,M1型标志物降低而M2型标记物升高(P<0.05),M1/M2比例降低;OE-METTL14可逆转此趋势。Sh-METTL14慢病毒组PI3K/AKT/GSK3β/β-catenin信号通路被激活(P<0.05),加入PI3K/AKT抑制剂后,M1型标志物升高而M2型标记物降低(P<0.05),M1/M2比例升高;Sh-METTL14可逆转此趋势。4)取转染OE-METTL14慢病毒后的巨噬细胞上清培养Hela细胞,可见细胞凋亡明显增多(P<0.05),增殖明显减少(P<0.05)。Sh-METTL14组的Hela细胞则表现出细胞凋亡减少(P<0.05),增殖增多(P<0.05)。结论METTL14通过PI3K/AKT/GSK3β/β-catenin信号通路调控巨噬细胞分化可能有促进宫颈癌细胞凋亡,抑制增殖的作用。

结直肠癌肿瘤微环境中M1型巨噬细胞的研究进展

结直肠癌的肿瘤微环境中存在多种类型免疫细胞,其中肿瘤相关巨噬细胞作为重要组成成分,可极化成M1、M2两种不同亚型。M1型巨噬细胞在肿瘤发展过程中主要发挥抑癌作用,M2型巨噬细胞则起促癌作用。高微卫星不稳定(high microsatellite instability,MSI-H)结直肠癌肿瘤微环境中M1型巨噬细胞明显高于微卫星稳定(microsatellite stabilization,MSS)结直肠癌,免疫治疗效果较好。本文主要就M1型巨噬细胞在结直肠癌中的研究进展进行综述,以期为MSI-H结直肠癌免疫治疗提供能多的理论依据和新思路。

维生素A缺乏调节肺泡巨噬细胞M1极化在新生大鼠ARDS中的作用及其机制

目的 探讨维生素A缺乏(VAD)调节肺泡巨噬细胞极化在新生大鼠急性呼吸窘迫综合征(ARDS)中的作用及其机制。方法 将60只新生SD大鼠分为维生素A正常对照组(VAN ctrl组,n=10)、维生素A正常组(VAN组,n=10)、维生素A缺乏对照组(VAD ctrl组,n=10)、维生素A缺乏组(VAD组,n=10)、维生素A挽救对照组(VADR ctrl组,n=10)及维生素A挽救组(VADR组,n=10),其中,VADR ctrl及VADR组SD大鼠于生后第2天一次性给予腹腔注射25μg VA。6组新生大鼠分别予以脂多糖(LPS)建立ARDS新生大鼠模型并收集血清及肺组织标本。记录建模前各组新生大鼠的体重,采用May-Grunwald-Giemsa染色法检测肺泡灌洗液(BALF)中主要细胞数量,HE染色观察肺组织病理损伤情况,免疫荧光染色评估肺泡巨噬细胞极化情况,qRT-PCR、ELISA检测肺泡巨噬细胞极化下游标志物诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、IL-10、精氨酸酶1(Arg-1)等炎性因子的表达情况,比色法检测肺组织氧化应激标志物超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)含量,TUNEL检测细胞凋亡情况。结果 与VAN组新生大鼠比较,VAD组新生大鼠体重较轻、体格偏小、毛发稀疏,而VADR组新生大鼠体重、一般情况无明显变化;与VAD组比较,VADR组新生大鼠体重增加,毛发光亮。与VAN组比较,VAD组ARDS新生大鼠肺部损伤加重,BALF中主要细胞数量增加、肺泡巨噬细胞M1极化激活(P<0.05),M1极化标志物i NOS、IL-6、TNF-α、CD86表达水平明显升高(P<0.05),氧化应激标志物MDA含量增多(P<0.05),细胞凋亡增加(P<0.05),SOD活性降低(P<0.05),而IL-10、Arg-1水平差异无统计学意义(P>0.05);与VAN组相比,VADR组新生大鼠巨噬细胞M1极化及TNF-α、IL-6、SOD、MDA、IL-10、Arg-1水平等差异均无统计学意义(P>0.05);与VAD组比较,VADR组ARDS新生大鼠肺部损伤明显减轻,肺泡巨噬细胞数量及肺泡巨噬细胞M1极化减少(P<0.05),且M1极化标志物iNOS、IL-6、TNF-α、CD86表达水平降低(P<0.05),氧化应激标志物MDA含量及细胞凋亡减少(P<0.05),SOD活性增加(P<0.05)。结论 VAD可通过调节肺泡巨噬细胞M1极化,上调M1极化下游炎症标志物表达,增加肺部氧化应激及细胞凋亡,从而加重新生大鼠ARDS的肺部损伤。

木犀草素通过HIF-1α抑制糖酵解调控M1型巨噬细胞极化

目的基于低氧诱导因子1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)介导糖酵解途径研究木犀草素(luteolin)调控M1型巨噬细胞极化的分子机制。方法RAW264.7细胞随机分为对照组(M0)和脂多糖(LPS)联合干扰素γ(IFN-γ)诱导组(M1);之后将M1组分为Luteolin治疗组、2-DG(糖酵解抑制剂)组、Luteolin+2-DG组、Luteolin+DMOG(HIF-1α激活剂)组。Western blot检测iNOS、Arg-1和HIF-1α蛋白表达;流式细胞仪检测巨噬细胞亚型;ELISA检测细胞IL-6和IL-10浓度;Real-time PCR检测GLUT1、HK2、PFK1、PK和HIF-1αmRNA表达。结果与M1组比较,Luteolin治疗组以及Luteolin和2-DG共培养组糖酵解相关因子HIF-1α、GLUT1、HK2、PFK1和PK表达水平降低;细胞葡萄糖消耗增加、乳酸分泌量减少。M1型巨噬细胞标记物iNOS、CD86和IL-6表达降低,M2型巨噬细胞标记物Arg-1、CD206和IL-10表达增高。而DMOG能够逆转Luteolin上述作用。结论Luteolin通过调控HIF-1α诱导的糖酵解通路抑制M1型巨噬细胞极化。

金水六君煎对慢性阻塞性肺疾病小鼠模型巨噬细胞M1/M2表型分化的影响

目的:探讨巨噬细胞M1/M2表型分化在慢性阻塞性肺疾病(COPD)小鼠模型中的作用及金水六君煎的干预机制。方法:将32只SPF级ICR小鼠随机分为空白组、模型组、西药组、中药组,每组8只。除空白组外,其余各组通过熏烟方式制备COPD小鼠模型。空白组及模型组灌胃生理盐水,西药组及中药组灌胃相应药物。评估各组小鼠毛发、精神及体质量等差异,给药结束后检测肺功能评估COPD严重程度,采用HE染色观察肺组织病理改变,ELISA检测肺组织白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-8(IL-8)水平,采用流式细胞术、免疫荧光实验评估巨噬细胞M1/M2极化情况。结果:空白组小鼠肺组织完整,肺泡无明显破裂融合现象。模型组可见肺泡破裂融合,为明显的COPD肺组织征象。与模型组比较,中药组和西药组肺泡破裂融合现象明显减少。模型组小鼠每分钟通气量(MV)、吸气峰流量(PIE)、呼气峰流量(PEF)水平均低于空白组(P<0.05),肺组织IL-6和IL-8水平均高于空白组(P<0.05);中药组和西药组小鼠MV、PIF和PEF水平均高于模型组(P<0.05),肺组织IL-6和IL-8水平均低于模型组(P<0.05);中药组小鼠MV、PIF和PEF水平均高于西药组(P<0.05),肺组织IL-6和IL-8水平均低于西药组(P<0.05)。模型组小鼠肺组织CD68、CD206占比和CD206/CD68均高于空白组(P<0.05);西药组、中药组小鼠肺组织CD68占比低于模型组,CD206占比和CD206/CD68均高于模型组(P<0.05);中药组小鼠肺组织CD68占比高于西药组(P<0.05),CD206占比和CD206/CD68均低于西药组(P<0.05),提示经过治疗后,肺组织中巨噬细胞有向M2极化趋势。模型组小鼠肺组织CD86/CD163和CD86阳性比例高于空白组(P<0.05),提示巨噬细胞激活以M1极化为主。西药组与中药组小鼠肺组织CD86/CD163和CD86阳性比例低于模型组(P<0.05),CD163阳性比例高于模型组(P<0.05),提示巨噬细胞以M2方向极化趋势为主。结论:巨噬细胞M1极化在COPD小鼠模型中具有加重炎症症状的作用;金水六君煎可能通过抑制巨噬细胞向M1表型分化,促进巨噬细胞向M2表型分化,抑制炎症反应,起到治疗COPD的效果。

构建M1型巨噬细胞相关lncRNA签名预测肿瘤免疫微环境

长链非编码RNA(lncRNA)被认为是肿瘤微环境和肿瘤免疫微环境中至关重要的分子。巨噬细胞作为免疫系统的重要成员,与M1型巨噬细胞功能相关的lncRNA依然需要进一步的探讨。本文基于肿瘤微环境中M1型巨噬细胞浸润程度高和低的队列样本的转录组差异构建了lncRNA签名。该lncRNA签名包含7个lncRNA∶LINC01494,ZDHHC20-IT1,LINC01450,LINC00871,EVX1-AS,KIF25-AS和AADACL2-AS1。这些lncRNA均在M1巨噬细胞缺乏型病人样本中高表达,表明它们在抑制巨噬细胞浸润和极化为M1亚型过程中的潜在作用,进而导致免疫排斥型的肿瘤微环境,而这已被证明与不良预后密切相关。该lncRNA签名不仅预测了不理想的临床预后,也与抗原处理和递呈障碍所导致的免疫抑制性环境相关。此外,我们也评估了该lncRNA签名在免疫检查点抑制疗法中的预测价值,这进一步丰富和增强了lncRNA在预测免疫治疗响应情况的价值。

参莲提取物对M1巨噬细胞的影响

该实验探讨参莲提取物对动脉粥样硬化发展中的M1巨噬细胞的影响。MTT法检测参莲提取物对RAW264.7细胞的毒性作用;γ干扰素(IFN-γ)及脂多糖(LPS)诱导RAW264.7细胞成M1型巨噬细胞,然后加入高、中、低剂量的参莲提取物(50,25,12.5 mg·L-1)作用,流式细胞术检测M1巨噬细胞膜分子CD86的表达,RT-PCR法检测M1巨噬细胞中iNOS和TNF-αmRNA的水平,ELISA法检测M1巨噬细胞上清中IL-6和TNF-α的含量。结果发现IFN-γ及LPS能诱导RAW264.7细胞极化为M1型巨噬细胞,M1巨噬细胞膜分子CD86的表达、细胞中iNOS和TNF-αmRNA的表达以及细胞分泌的IL-6和TNF-α的含量均有显著性地提高;参莲提取物各剂量均可抑制M1型巨噬细胞膜分子CD86、细胞中iNOS及TNF-αmRNA的表达,降低细胞分泌炎症细胞因子IL-6及TNF-α的含量。通过以上研究表明IFN-γ及LPS能诱导RAW264.7细胞极化为M1型巨噬细胞;参莲提取物对M1型巨噬细胞有一定的抑制作用。