超声造影联合血清Ficolin-3,FOXM1对2型糖尿病下肢动脉病变的诊断价值分析

目的超声造影联合血清纤维胶凝蛋白-3(Ficolin-3)、叉头框蛋白M1(FOXM1)对2型糖尿病(T2DM)下肢动脉病变的诊断价值分析。方法选取2022年2月至2023年2月我院收治的T2DM患者114例,以下肢动脉血管造影检查为金标准,将患者分为下肢动脉病变组23例(病变组)和无下肢动脉病变组91例(T2DM组),另选取同期于本院进行体检的健康志愿者91例为对照组。对患者及健康志愿者进行血清Ficolin-3、FOXM1及超声造影检查;ROC曲线分析血清Ficolin-3、FOXM1对T2DM下肢动脉病变的诊断价值;采用四格表法分析血清Ficolin-3、FOXM1、超声造影及3项联合对T2DM下肢动脉病变的诊断价值。结果病变组、T2DM组血清Ficolin-3水平显著高于对照组,且病变组血清Ficolin-3水平显著高于T2DM组(均P<0.05);病变组、T2DM组血清FOXM1水平显著低于对照组,且病变组血清FOXM1水平显著低于T2DM组(均P<0.05);血清Ficolin-3诊断T2DM下肢动脉病变的曲线下面积为0.868,敏感度为86.96%,特异度为75.82%,最佳截断值为35.12μg/ml;血清FOXM1诊断T2DM下肢动脉病变的曲线下面积为0.854,敏感度为82.61%,特异度为78.02%,最佳截断值为0.57;血清Ficolin-3、FOXM1检查结果与金标准均具有中度一致性(Kappa=0.480、0.481,均P<0.001);超声造影检查结果显示,T2DM下肢动脉病变的阳性检出率为73.91%,与金标准具有较高一致性(Kappa=0.631,P<0.001);3项联合检测的敏感度、漏诊率均显著优于超声造影单独诊断,准确度显著优于Ficolin-3、FOXM1单独诊断,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论血清Ficolin-3、FOXM1联合超声造影检查在T2DM下肢动脉病变诊断中的应用价值较高,进一步提升了诊断的敏感度、准确度,减少了误诊率。

M2型丙酮酸激酶、缺氧诱导因子-1α在子宫内膜癌组织中的表达及与患者临床特征的关系

目的探讨M2型丙酮酸激酶(PKM2)、缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)在子宫内膜癌(EC)组织中的表达及与患者临床特征的关系。方法取41例EC患者的EC组织及相应癌旁组织和10例子宫内膜良性疾病患者的正常子宫内膜组织。采用免疫组化法检测PKM2、HIF-1α的表达情况。比较EC组织、癌旁组织及正常子宫内膜组织中PKM2、HIF-1α的阳性表达率及不同临床特征EC患者EC组织中PKM2、HIF-1α的表达情况。结果EC组织中HIF-1α的阳性表达率明显高于癌旁组织和正常子宫内膜组织,差异均有统计学意义(P﹤0.01)。p53突变型、分化程度为低分化EC患者EC组织中PKM2的阳性表达率分别明显高于p53野生型、分化程度为中高分化患者,差异均有统计学意义(P﹤0.01)。有脉管浸润的EC患者EC组织中HIF-1α的阳性表达率高于无脉管浸润患者,差异有统计学意义(P﹤0.05)。结论HIF-1α在EC组织中的阳性表达率较高。PKM2、HIF-1α表达与EC患者的临床特征有关,或可作为EC患者的有效治疗靶点。

过表达miR-124-1基因的骨髓间充质干细胞外泌体调控小胶质细胞M2型极化对脑卒中的影响

目的探讨骨髓间充质干细胞(bone marrow derived mesenchymal stem cells,BMMSCs)外泌体(exosomes,Exo)过表达miR-124-1基因(Exo/124-1)调控小胶质细胞(microglia,MG)的M2型极化对脑卒中的影响。方法分离培养大鼠BMMSCs,收集其Exo(BMMSCs-Exo),采用流式细胞术、Western blot与透射电子显微镜(transmission electron microscope,TEM)分别对其进行检测鉴定。30只大鼠简单随机分为假手术组(Sham组)、模型组(MCAO/R组)、Exo移植组(Exo组)、空病毒(Empty lentivirus,Elv)转染Exo移植组(Exo-Elv组)及Exo/124-1移植组(Exo/124-1组),每组6只。Sham组仅行假手术,其余各组均复制大脑中动脉栓塞/再灌注(middle cerebral artery occlusion and reperfusion,MCAO/R)模型。模型复制1 d与14 d后,各移植组动物于右侧脑室植入相应移植物,Sham组、模型组注入相同剂量生理盐水作对照。术后2 h及1、3、7、14、21、28 d,分别对各组动物行改良神经系统严重程度评分(modified neurological severity scores,mNSS)。三苯基四氮唑(triphenyl tetrazolium chloride,TTC)染色检测其梗死体积。在基因与蛋白水平分别检测各组28 d脑组织MG的M1型分子[肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)]、M2型分子(CD206)的表达情况。结果成功获取并鉴定了BMMSCs及其Exo。Exo/124-1显著表达miR-124-1。所有动物(假手术组除外)术后出现神经功能缺损。术后7~28 d,Exo/124-1组的mNSS明显低于MCAO/R组(P<0.05)与Exo组、Exo-Elv组(P<0.01);术后28 d,Exo/124-1组的脑梗死体积、TNF-α的表达明显小于MCAO/R组(P<0.01)与Exo组、Exo-Elv组(P<0.01),CD206的表达显著高于MCAO/R组(P<0.01)与Exo组、Exo-Elv组(P<0.01)。结论BMMSCs-Exo携带miR-124-1基因可能调控MG的M2型极化,抑制M1型介导的炎症反应,促进脑卒中大鼠神经功能的恢复。

溃疡性结肠炎患者结肠黏膜组织叉头框转录因子M1、核因子-κΒmRNA表达与病情严重程度关系研究

目的:探究溃疡性结肠炎(UC)患者结肠黏膜组织叉头框转录因子M1(FoxM1)、核因子-κΒ(NF-κΒ)mRNA表达与病情严重程度的关系。方法:选取活动期UC患者128例为活动期UC组、缓解期UC患者81例为缓解期UC组、结肠单发息肉切除术后肠镜复查正常者88例为对照组。以改良Truelove和Witts分型标准将活动期UC患者按病情严重程度分成活动期轻度组(53例)和活动期中度组(46例)和活动期重度组(29例)。荧光定量PCR法检测受试者结肠黏膜组织FoxM1、NF-κΒmRNA表达。比较对照组、缓解期UC组、活动期UC组和不同病情严重程度活动期UC患者FoxM1 mRNA、NF-κΒmRNA表达及改良Mayo评分。分析UC患者结肠黏膜组织FoxM1 mRNA、NF-κΒmRNA、改良Mayo评分的相关性,影响活动期UC患者重度病情发生的因素,FoxM1 mRNA、NF-κΒmRNA预测活动期UC患者重度病情发生的价值。结果:与对照组和缓解期UC组比较,活动期UC组结肠黏膜组织FoxM1、NF-κΒmRNA表达水平升高(均P<0.05)。与缓解期UC组比较,活动期UC组改良Mayo评分升高(P<0.05)。活动期轻度组、活动期中度组、活动期重度组结肠黏膜组织FoxM1 mRNA、NF-κΒmRNA表达水平及改良Mayo评分依次升高(均P<0.05)。UC患者结肠黏膜组织FoxM1 mRNA与NF-κΒmRNA表达呈正相关(P<0.05)。FoxM1 mRNA、NF-κΒmRNA与改良Mayo评分呈正相关(均P<0.05)。FoxM1 mRNA、NF-κΒmRNA、改良Mayo评分是活动期UC患者发生重度病情的危险因素(均P<0.05)。FoxM1、NF-κΒmRNA两项联合预测活动期UC患者发生重度病情的曲线下面积(AUC)高于FoxM1、NF-κΒmRNA各自单独预测的AUC(均P<0.05)。结论:FoxM1、NF-κΒmRNA在活动期UC患者结肠黏膜组织中呈高表达,且病情越重两者升高趋势越明显,可用于预测活动期UC患者重度病情的发生。

血清ESM-1、TuM2-PK联合结肠镜检查诊断早期结直肠癌的临床价值

目的:探讨血清内皮细胞特异性分子-1(ESM-1)、肿瘤M2型丙酮酸激酶(TuM2-PK)联合结肠镜检查诊断早期结直肠癌的临床价值。方法:纳入120例疑似结直肠癌患者,根据病理检查结果分为恶性组(n=52)、良性组(n=68),两组均行血清ESM-1、TuM2-PK检测及结肠镜检查,分析ESM-1、TuM2-PK单独及联合诊断结直肠癌的诊断效能。结果:恶性组血清ESM-1、TuM2-PK水平均高于良性组(P<0.05),结肠镜检查阳性率高于良性组(P<0.05);结肠镜阳性患者血清ESM-1、TuM2-PK水平均高于阴性组(P<0.05);ESM-1、TuM2-PK单独及联合诊断结直肠癌的敏感度与特异度分别为72.12%与69.12%、67.31%与63.24%、78.85%与66.18%,对应的曲线下面积(AUC)分别为0.79、0.75、0.83;以病理诊断为“金标准”,血清ESM-1、TuM2-PK联合结肠镜诊断结直肠癌的敏感度、特异度、准确度及Kappa值分别为98.08%、80.88%、88.33%、0.77。结论:血清ESM-1、TuM2-PK联合结肠镜对早期结直肠癌有较高的诊断效能,联合检测与病理检查有较好的一致性。

低氧通过HIF-1α介导Hepcidin mRNA的去甲基化修饰促进高原红细胞增多症的分子机制研究

目的:探讨HIF-1α和Hepcidin在高原红细胞增多症致病机制中的作用。方法:招募和测定高原红细胞增多症(HAE组)和同一高海拔地区健康个体(HH组),以及出生于同一高海拔地区并在超过2年的时间段居住于低海拔地区的健康个体(LH组)外周血血红蛋白浓度[Hb]、血红蛋白质量(Hbmass)、血容量和外周血O_(2)饱和度(SpO_(2))。ELISA法测定上述个体外周血清HIF-1α和Hepcidin的水平。体外低氧诱导HepG2细胞,实验分组为Control组和Hypoxia组,测定细胞中HIF-1α和Hepcidin mRNA和蛋白质表达水平。m6A含量分析、RNA免疫共沉淀法(RIP)、双荧光素酶报告基因分析法,mRNA稳定性分析法深入探讨HIF-1α对Hepcidin mRNA的m6A去甲基化修饰的分子机制。结果:与LH组相比,HH组[Hb]、Hbmass水平和血容量升高,SpO_(2)降低;与HH组相比,HAE组[Hb]、Hbmass水平和血容量升高,SpO_(2)降低(P<0.05)。与Control组相比,Hypoxia组HIF-1αmRNA和蛋白质相对表达水平升高,Hepcidin mRNA和蛋白质相对表达水平降低(P<0.05)。与Control组相比,Hypoxia组HepG2细胞的m6A(%)水平降低(P<0.05)。mRNA稳定性分析HepG2细胞中Hepcidin mRNA水平,与Control组相比,Hypoxia组Hepcidin mRNA相对表达水平降低(P<0.05)。双荧光素酶报告基因分析结果显示,与共转染了Hepcidin 3'-UTR和shRNA NT组的HepG2细胞相比,共转染了Hepcidin 3'-UTR和HIF-1αshRNA组的HepG2细胞相对荧光素酶活性升高(P<0.05)。RIP结果显示,与IgG组相比,FTO Ab组Hepcidin 3'-UTR富集水平升高(P<0.05)。结论:低氧上调HIF-1α介导Hepcidin mRNA的去甲基化修饰参与高原红细胞增多症疾病进展。

M1巨噬细胞培养液对ER阳性乳腺癌细胞上皮-间质转换的影响及Calpain的介导作用

目的 探讨M1巨噬细胞对乳腺癌细胞上皮细胞-间充质转换(EMT)的影响及钙蛋白酶(Calpain)在其中的介导作用。方法 以人乳腺癌细胞系雌激素受体阳性(ER+)细胞MCF-7、T47D及雌激素受体阴性(ER-)细胞MDA-MB-231为模型细胞,实验分为MCF-7细胞及T47D细胞的RPMI-1640组(RPMI-1640纯培养基培养)、M1巨噬细胞条件培养液培养组(M1-CM组)、M1-CM+Calp组[M1-CM联合Calpain抑制剂Calpeptin(50μmoL/L)处理]、M1-CM+CI-Ⅲ组[M1-CM联合Calpain抑制剂Calpain inhibitorⅢ(50μmoL/L)处理],MDA-MB-231细胞的RPMI-1640组、M1-CM组;采用划痕实验和侵袭实验检测各组中MCF-7细胞、T47D细胞、MDA-MB-231细胞的迁移能力及MCF-7细胞的侵袭能力,采用qRT-PCR检测M0巨噬细胞、M1巨噬细胞趋化因子受体7CCR7、趋化因子配体10(CXCL10)及白细胞介素-12(IL-12) mRNA表达水平,采用Western blot实验检测MCF-7细胞、T47D细胞及MDA-MB-231细胞中上皮-钙黏素(E-cad)、纤连蛋白(FN)、波形蛋白(Vim)蛋白水平表达。结果 与RPMI-1640组相比,M1-CM组ER+细胞MCF-7及T47D迁移能力增强(P<0.05),MCF-7细胞侵袭能力增强(P<0.05);ER+细胞MCF-7及T47D E-cad蛋白表达水平下调,而FN、Vim表达上调(P<0.05),而ER-细胞MDA-MB-231中只有E-cad表达上调(P<0.05);与M1-CM组相比,ER+细胞MCF-7及T47D的M1-CM+Calp组、M1-CM+CI-Ⅲ组中M1-CM诱导的ER+乳腺癌细胞EMT效应被逆转(P<0.05)。结论 M1巨噬细胞条件培养液可以促进ER+细胞人乳腺细胞的EMT,但对ER-细胞EMT无明显影响,其促进ER+乳腺癌细胞EMT信号机制可能与Calpain通路有关。

布托啡诺调节FOXO3-FOXM1信号轴对骨肉瘤细胞生物活性和化疗药物耐药性的实验研究

目的探究布托啡诺(BUT)调节叉头框蛋白O3(FOXO3)-叉头框蛋白M1(FOXM1)信号轴对骨肉瘤细胞生物活性和化疗药物耐药性的影响。方法将2.0μmol/L顺铂(CDDP)处理的CDDP耐药MG-63细胞(MG-63/CDDP)分为对照组(MG-63/CDDP细胞用含0.05g/dl DMSO培养液处理)、BUT组(40μg/ml BUT处理MG-63/CDDP细胞)、JY-2组(用100μmol/L FOXO3-FOXM1抑制剂JY-2处理MG-63/CDDP细胞)和BUT+JY-2组(用40μg/ml BUT以及100μmol/L JY-2处理MG-63/CDDP细胞)。CCK8法检测MG-63/CDDP细胞活性;流式细胞术检测MG-63/CDDP细胞凋亡情况;Transwell法检测MG-63/CDDP细胞迁移、侵袭情况;Western blot检测自噬蛋白以及FOXO3-FOXM1信号通路相关蛋白表达。结果与MG-63细胞相比,MG-63/CDDP细胞IC50增加(20.56±2.52μmol/L vs 0.97±0.10μmol/L),差异具有统计学意义(q=19.017,P<0.05),筛选出较适浓度1μmol/L CDDP用于后续实验。与对照组相比,BUT组MG-63/CDDP细胞A值(0.43±0.05 vs 0.68±0.06),细胞迁移数量(63.63±7.58个vs114.56±10.57个)以及侵袭数量(43.38±4.58个vs 79.56±8.48个)、自噬相关蛋白Beclin1(0.31±0.05 vs 0.62±0.07)和微管相关蛋白轻链3(LC3)-II/I蛋白(0.51±0.08 vs 0.98±0.11)水平均下降(q=6.763~9.591,均P<0.05),凋亡率(28.57%±3.14%vs 8.67%±1.46%),FOXO3(0.72±0.08 vs 0.33±0.04),FOXM1(1.22±0.15 vs 0.70±0.08)蛋白水平均上升(q=14.077,10.681,7.493,均P<0.05),而JY-2组MG-63/CDDP细胞A值(0.99±0.13 vs0.68±0.06),细胞迁移数量(147.59±15.37个vs 114.56±10.57个)以及侵袭数量(111.83±12.58个vs 79.56±8.48个),Beclin1(0.94±0.11 vs 0.62±0.07),LC3-II/I蛋白(1.27±0.13 vs 0.98±0.11)水平均升高(q=4.171~6.012,均P<0.05),凋亡率(4.56%±0.86%vs 8.67%±1.46%),FOXO3(0.17±0.01 vs 0.33±0.04),FOXM1(0.46±0.03 vs 0.70±0.08)蛋白水平降低(q=5.941,9.505,6.881,均P<0.05),差异具有统计学意义。JY-2逆转了BUT对MG-63/CDDP细胞活性和化疗耐药性的有利影响。结论BUT可能通过激活FOXO3-FOXM1信号通路调节骨肉瘤细胞的细胞活性和CDDP耐药性。

叉头盒蛋白M1联合白细胞介素-10对重症肺炎患者预后结局的预测价值分析

目的探究叉头盒蛋白M1(FOXM1)联合白细胞介素-10(IL-10)对重症肺炎患者预后结局的预测价值,为临床诊疗提供参考。方法选取2021年1月至2023年1月徐州矿务集团总医院收治的120例重症肺炎患者为肺炎组,另选取同期体检的100例健康体检者为健康组,收集两组患者临床资料进行回顾性分析。根据治疗28 d的预后结局将肺炎组患者分为死亡组(34例)和存活组(86例)。比较死亡组和存活组患者临床资料,采用多因素Logistic回归分析影响重症肺炎患者死亡的独立危险因素,比较肺炎组和健康组研究对象FOXM1、IL-10水平及肺功能指标,分析重症肺炎患者FOXM1、IL-10水平与肺功能指标的相关性,分析FOXM1、IL-10及两者联合检测对重症肺炎患者死亡的预测价值。结果两组患者性别、年龄、BMI比较,差异均无统计学意义(均P>0.05)。死亡组患者FOXM1、IL-10水平均高于存活组,PEF、FEV1、FEV1/FVC均低于存活组(均P<0.05)。多因素Logistic回归分析结果显示:FOXM1水平高、IL-10水平高、PEF低、FEV1低、FEV1/FVC低均为影响重症肺炎患者死亡的独立危险因素(均P<0.05)。肺炎组研究对象FOXM1、IL-10水平均高于健康组,最大呼气流量(PEF),第1秒用力呼气量(FEV1)、FEV1/用力肺活量(FVC)均低于健康组(均P<0.05)。重症肺炎患者FOXM1水平与PEF、FEV1、FEV1/FVC均呈负相关(r值=-0.365、-0.254、-0.175,均P<0.05)。重症肺炎患者IL-10水平与PEF、FEV1、FEV1/FVC均呈负相关(r值=-0.625、-0.481、-0.817,均P<0.05)。受试者操作特征(ROC)曲线分析结果显示:FOXM1联合IL-10预测重症肺炎患者死亡的曲线下面积(AUC)值为0.882,灵敏度为97.10%,特异度为68.60%,均高于两项单一检测。结论FOXM1水平高、IL-10水平高、PEF低、FEV1低、FEV1/FVC低均为影响重症肺炎患者死亡的独立危险因素,且FOXM1、IL-10水平与重症肺炎患者肺功能损伤程度密切相关,两者联合检测可用于预测重症肺炎患者的预后,临床应尽早对相关指标进行监测,以改善患者预后。

circFOXM1作为新型胃癌标志物调控胃癌发生、发展的机制研究

目的分析新型胃癌标志物环状叉头框蛋白M1(circFOXM1)在胃癌发生、发展机制中的调控作用。方法选取2022年1月至2023年4月该院肿瘤科收治的60例胃癌患者作为研究对象,检测其胃癌组织及癌旁组织中circFOXM1的表达水平。根据circFOXM1的表达水平,将60例患者分为circFOXM1高表达组和circFOXM1低表达组。比较circFOXM1高表达组和circFOXM1低表达组的临床病理资料(淋巴结转移、肿瘤侵袭深度和临床分期)。采用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)和免疫印迹法检测GES-1、HGC-27、BGC-823、MKN-45、MKN-1细胞中circFOXM1信使RNA(mRNA)、微小RNA(miR)-182-5p mRNA与母亲信号蛋白同源物7(SMAD7)mRNA及SMAD7蛋白的表达水平。体外培养MKN-45细胞,将其随机分为对照组、circFOXM1敲低组[转染circFOXM1小干扰RNA(siRNA)质粒]、circFOXM1过表达组(转染circFOXM1过表达质粒)、共转染阴性对照组(转染空载质粒和miR-182-5p抑制剂阴性对照)、circFOXM1敲低+miR-182-5p抑制剂组(转染circFOXM1 siRNA质粒和miR-182-5p抑制剂),分组转染后,采用实时荧光定量PCR和免疫印迹法检测各组MKN-45细胞circFOXM1 mRNA、miR-182-5p mRNA与SMAD7 mRNA及SMAD7蛋白的表达水平;采用Transwell侵袭及细胞划痕试验检测各组MKN-45细胞侵袭迁移情况;采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测各组MKN-45细胞增殖情况。取50只裸鼠随机分为对照小鼠组、circFOXM1敲低小鼠组、circFOXM1过表达小鼠组、共转染阴性对照小鼠组、circFOXM1敲低+miR-182-5p抑制剂小鼠组,每组10只。将各组MKN-45细胞接种在对应裸鼠右腋附近背部皮下构建胃癌移植瘤模型,饲养4周后检测各组移植瘤裸鼠MKN-45细胞增殖率、肿瘤体积及肿瘤质量。将MKN-45细胞随机分为野生miR-182-5p+空载组、野生miR-182-5p+circFOXM1过表达组、突变miR-182-5p+空载组、突变miR-182-5p+circFOXM1过表达组、野生SMAD7+miR-182-5p mimic阴性对照组、野生SMAD7+miR-182-5p mimic组、突变SMAD7+miR-182-5p mimic阴性对照组、突变SMAD7+miR-182-5p mimic组,再按照不同方式对各组MKN-45细胞进行转染。采用荧光素酶报告试验检测各组MKN-45细胞circFOXM1对miR-182-5p、SMAD7的靶向调控。结果circFOXM1低表达组有17例患者,circFOXM1高表达组有43例患者。circFOXM1低表达组和circFOXM1高表达组患者淋巴结转移、肿瘤侵袭深度和临床分期情况比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。MKN-45、HGC-27、BGC-823、MKN-1细胞中circFOXM1 mRNA、SMAD7 mRNA、SMAD7蛋白表达水平均高于GES-1细胞,miR-182-5p mRNA表达水平均低于GES-1细胞,差异均有统计学意义(P<0.05)。对照组circFOXM1 mRNA表达水平低于circFOXM1过表达组,高于circFOXM1敲低组和circFOXM1敲低+miR-182-5p抑制剂组,差异均有统计学意义(P<0.05);对照组miR-182-5p mRNA表达水平高于circFOXM1过表达组,低于circFOXM1敲低组,差异均有统计学意义(P<0.05);对照组SMAD7 mRNA及SMAD7蛋白表达水平低于circFOXM1过表达组,高于circFOXM1敲低组,差异均有统计学意义(P<0.05)。circFOXM1敲低组miR-182-5p mRNA表达水平高于circFOXM1敲低+miR-182-5p抑制剂组,SMAD7 mRNA及SMAD7蛋白表达水平均低于circFOXM1敲低+miR-182-5p抑制剂组,差异均有统计学意义(P<0.05)。对照组MKN-45细胞侵袭数、迁移率均高于circFOXM1敲低组,均低于circFOXM1过表达组,差异均有统计学意义(P<0.05)。circFOXM1敲低+miR-182-5p抑制剂组MKN-45细胞侵袭数、迁移率均高于circFOXM1敲低组,差异均有统计学意义(P<0.05)。circFOXM1敲低小鼠组MKN-45细胞增殖率低于对照小鼠组及circFOXM1敲低+miR-182-5p抑制剂小鼠组,肿瘤体积及肿瘤质量均小于对照小鼠组及circFOXM1敲低+miR-182-5p抑制剂小鼠组,差异均有统计学意义(P<0.05)。circFOXM1过表达小鼠组MKN-45细胞增殖率高于对照小鼠组、肿瘤体积及肿瘤质量均大于对照小鼠组,差异均有统计学意义(P<0.05)。野生miR-182-5p+circFOXM1过表达组相对荧光素酶活性低于野生miR-182-5p+空载组(P<0.05)。野生SMAD7+miR-182-5p mimic组相对荧光素酶活性低于野生SMAD7+miR-182-5p mimic阴性对照组(P<0.05)。结论敲低circFOXM1可经上调miR-182-5p而抑制表达SMAD7,从而抑制胃癌细胞增殖、侵袭、迁移及其体内肿瘤生长,可作为胃癌的新型标志物。

M_(99-1)引诱剂诱捕松墨天牛等松甲虫的研究

报道了松墨天牛成虫活动期间 ,在马尾松 -栎类次生混交林、马尾松 -湿地松人工林和黄山松天然林 3种不同林分中 ,应用 M99-1引诱剂诱捕钻蛀性松甲虫种类、主要钻蛀性松甲虫成虫种群数量及其比率和不同诱捕期松墨天牛雌成虫孕卵量及其比率的情况。研究结果显示 ,M99-1引诱剂诱获鞘翅目害虫达 2 6种 ,其中钻蛀性松甲虫达 14种 ,占诱获种类的 5 3.8%。马尾松角胫象、松墨天牛种群数量比率最高 ,分别达 5 7.3%～ 69.8%和 2 7.2 %～ 2 9.3%。 3种不同松林林分中 ,短角幽天牛、褐幽天牛、薄翅锯天牛等其它主要钻蛀性害虫的数量比率也较高。不同诱捕期松墨天牛雌成虫平均孕卵量及其比率 ,以活动前期 (6月下旬前 )为最高 ,分别达 16.9粒和 4 1.9%。

液相色谱-串联质谱法检测畜禽产品中维吉尼亚霉素M1和S1残留

建立了畜禽产品中维吉尼亚霉素M1和S1药物残留检测的液相色谱-串联质谱分析方法。样品以甲醇-乙腈溶液(1∶1,v/v)提取,上清液经0.01 mol/L磷酸二氢铵溶液稀释后,Oasis HLB固相萃取小柱净化,Luna C18色谱柱分离,以乙腈和含0.1%(体积分数)甲酸的5 mmol/L乙酸铵水溶液作为流动相进行梯度洗脱,电喷雾正离子模式电离(ESI+),多反应监测(MRM)模式检测,外标法定量。该方法对两物质线性范围均为0.15～10.0μg/L,相关系数r2均大于0.999;定量下限均为0.25μg/kg。在不同基质中,0.25、0.50、2.5μg/kg 3个添加水平的平均回收率范围为71.2%～98.4%,精密度范围为3.6%～15.4%。该方法具有快速简便、灵敏度高、准确性强等特点,适用于畜禽产品中维吉尼亚霉素的检测。

假单胞菌M18rsmA^-突变株的构建及其对Plt和PCA合成的区别性调控作用

假单胞菌 (Pseudomonassp .)M18是促进植物生长的根际细菌 ,能产生吩嗪 1 羧酸 (PCA)和藤黄绿菌素 (Plt)两种不同的抗生素抑制植物病原菌 ,保护植物免受病害。运用PCR方法 ,从M18基因组中 ,扩增出rsmA基因部分片段 ,并以该片段为探针 ,从M18的基因组柯斯文库中筛出阳性克隆 ,切取带有rsmA基因及两侧序列的 1 5kb片段 ,中间插入编码Kmr 的DNA片段 ,获得rsmA- 体外突变体。运用同源重组剔除技术 ,构建了M18菌株的rsmA突变株M18R- 。突变株M18R- 生物合成Plt的能力比野生型M18提高 4倍 ,但是 ,PCA产量仅为野生型的 2 0 %。研究结果表明 ,全局性调控基因rsmA可能通过不同的机制区别性地影响Plt和PCA的生物合成。

高效液相色谱法快速测定抗真菌制剂M18中的吩嗪-1-羧酸

建立了测定抗真菌制剂M18中吩嗪 1 羧酸的反相高效液相色谱方法。流动相为甲醇 5mmol/L磷酸缓冲液(pH 5 0 ) (体积比为 6 0∶40 ) ,流速为 1mL/min ,检测波长为 2 48nm ,线性范围是 5 0mg/L～ 5 0 0mg/L ,检测限是 30mg/L ,回收率为 97 5 3% ,RSD为 1 5 %。该方法具有快速、简便、灵敏。

高糖及糖基化终末产物对视网膜Müller细胞缺氧诱导因子-1α介导缺氧信号通路的影响

目的探讨高糖以及糖基化终末产物(advanced glycationend products,AGEs)对体外培养的视网膜Müller细胞低氧诱导因子(hypoxia-inducible factor,HIF)-1α介导缺氧信号通路的影响。方法采用改进的酶消化法培养新生5-7 d SD大鼠视网膜Müller细胞,纯化培养至第2代后,以2×106mL-1密度接种于48孔培养板中,根据培养液中葡萄糖及AGEs含量不同,分为正常组、模拟高糖组(葡萄糖终浓度为50 mmol·L-1)、低AGEs及高AGEs组(培养液AGEs终浓度分别为50 mg·L-1、100 mg·L-1),每组设6个复孔,干预48 h后,以ELISA法测定细胞培养上清液中HIF-1α、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)蛋白表达量以及脯氨酸羟化酶(proline hydroxylase domain,PHD)1、2、3的活性;以RT-PCR测定Müller细胞HIF-1αmRNA及VEGF mRNA相对内参的表达量。结果高AGEs组HIF-1α蛋白表达量为(3.248±0.404)μg·L-1,明显高于正常组的(2.577±0.158)μg·L-1及高糖组的(2.600±0.131)μg·L-1,差异均有统计学意义(均为P<0.05);低AGEs组HIF-1αmRNA相对表达量为3.205±0.865,明显高于高糖组的2.438±0.444及高AGEs组的1.935±0.191,差异均有统计学意义(均为P<0.05);正常组VEGF蛋白含量和VEGF mRNA的相对表达量分别为(532.249±19.922)μg·L-1和1.348±0.314,均低于高糖组的(566.661±24.979)μg·L-1和2.265±0.677、低AGEs组的(590.565±29.725)μg·L-1和2.001±0.574及高AGEs组的(593.646±16.339)μg·L-1和2.063±0.759,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。正常组PHD1活性为(99.969±11.066)μg·L-1,高于高糖组的(80.987±5.910)μg·L-1、低AGEs组的(88.809±6.303)μg·L-1及高AGEs组的(75.519±4.914)μg·L-1,而低AGEs组PHD1活性高于高AGEs组,差异均有统计学意义(均为P<0.05);PHD2活性正常组为(131.266±2.614)μg·L-1,低于低AGEs组的(142.896±8.323)μg·L-1及高AGEs组的(149.998±15.013)μg·L-1,差异均有统计学意义(均为P<0.05);PHD3在各组之间差异均无统计学意义(P=0.066)。结论 AGEs比高糖更能诱导视网膜Müller细胞HIF-1α的高表达,且HIF-1α的表达强度与AGEs浓度有关。

单核细胞趋化蛋白-1对前列腺癌PC-3M细胞生长的影响

目的探讨单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)对前列腺癌PC-3M细胞生长的影响。方法选取PC-3M细胞平铺于培养板24h,待细胞达到80%融合度时随机分为对照组、Si-scramble组、MCP-1组和Si-MCP-1组。对照组无特殊处置,MCP-1组加入MCP-150ng/ml,Si-scramble组和Si-MCP-1组分别转染pGCSi-scrambled质粒和pGCSi-mcp-1质粒,细胞处理后再培养24h,比较各组细胞迁移速率变化,72h时进行细胞抑制率检测以及应用流式细胞仪测定各组细胞凋亡率。结果细胞处理培养24h后,MCP-1组细胞迁移速率〔(13.4±3.21)μm/24h〕与对照组〔(7.3±1.24)μm/24h〕和Si-scramble组〔(5.7±1.73)μm/24h〕比较明显加快(P<0.05),而Si-MCP-1组的细胞迁移速率〔(2.1±0.92)μm/24h〕与对照组和Si-scramble组比较明显减慢(P<0.05)。72h后Si-MCP-1组细胞凋亡率可达(19.2±2.69)%,与对照组〔(5.3±0.35)%〕和Si-scramble组〔(5.4±0.35)%〕的细胞凋亡率比较凋亡率明显升高(P<0.05),MCP-1组细胞凋亡率为(3.2±0.42)%,与对照组和Si-scramble组比较凋亡率明显降低(P<0.05)。结论MCP-1对PC-3M细胞有促进增长和转移的作用,而pGCSi-MCP-1质粒可显著抑制肿瘤细胞的生长和转移。

TNF-α调控转录因子FoxM1在膀胱癌及腺性膀胱炎中的表达及意义

目的:研究TNF-α调控转录因子叉头框转录因子M1(FoxM1)在膀胱癌及腺性膀胱炎(CG)中的表达及意义。方法:选择本院2017年2月~2019年2月收治的膀胱癌患者30例进行研究,所有患者接受手术治疗,并于术后留取膀胱癌组织,同时取远离癌组织中心5 cm以上的组织作为正常膀胱组织。此外,选取同期于我院接受手术治疗的CG患者30例,术后均留取CG组织。将膀胱癌细胞株RT4、BIU87进行细胞培养,采用不同浓度TNF-α(0、1、5、10 nmol/L)对上述细胞系进行处理。分析不同膀胱组织中TNF-α、FoxM1表达情况,不同浓度TNF-α处理膀胱癌细胞系对FoxM1的表达影响,不同浓度TNF-α处理膀胱癌细胞系对cyclin B1以及cyclin D1的表达影响。结果:正常膀胱、CG、膀胱癌组织中TNF-α、FoxM1表达水平呈逐渐升高趋势,且经单因素方差分析发现:各组间对比差异有统计学意义(P<0.05)。0、1、5、10 nmol/L浓度的TNF-α处理膀胱癌细胞系后,FoxM1表达呈逐渐升高趋势,且经单因素方差分析发现:各组间对比差异有统计学意义(P<0.05)。0、1、5、10 nmol/L浓度的TNF-α处理膀胱癌细胞系后,cyclin B1以及cyclin D1的表达呈逐渐升高趋势,且经单因素方差分析发现:各组间对比差异有统计学意义(P<0.05)。结论:TNF-α可能通过调控转录因子FoxM1的表达,继而影响cyclin B1以及cyclin D1的表达,从而在CG的发生、发展过程中起着至关重要的作用,值得临床重点关注。

血清载脂蛋白M与1-磷酸鞘氨醇在细菌性血流感染中的表达及相关性研究

目的通过测定血清载脂蛋白M(ApoM)和1-磷酸鞘氨醇(S1P)在细菌性血流感染及不同感染程度中的表达,发现血清ApoM在细菌感染诊断、治疗及预后中的作用;为ApoM通过载脂蛋白M-1-磷酸鞘氨醇轴(ApoM-S1P)参与细菌感染的炎症反应提供实验室依据。方法收集成都中医药大学附属医院2018年9月~2019年2月细菌感染标本90例,测定血清ApoM和S1P在细菌感染中的表达,探讨血清ApoM与细菌感染的相关性及诊断效能,同时分析血清ApoM和S1P的相关性;根据细菌感染程度进一步分组,分别测定血清ApoM和S1P的表达水平,探讨血清ApoM与感染程度的相关性,并分析血清ApoM和S1P的相关性。结果细菌性血流感染组ApoM和S1P的检测结果分别为11.06±8.02μg/L和119.31±43.7ng/ml,明显低于对照组(25.43±7.05μg/L和192.97±41.74ng/ml),两组间差异有统计学意义(t=-4.716,5.045,均P<0.05),细菌性血流感染组的ApoM和S1P呈线性相关(r=0.774,P=0.00);随着感染程度的加重,ApoM和S1P的表达逐渐下调,在败血症、脓毒血症、严重脓毒血症和脓毒血症休克组中分别为18.08±1.58,11.63±4.85,9.32±6.58和7.95±2.7 μg/L,149.39±10.44,120.67±26.71,111.76±54.94和101.90±32.82 ng/ml,各组间差异均具有统计学意义(F=14.005,6.115,均P<0.05),S1P的表达与ApoM呈线形相关(各组pearson相关系数r=0.569,0.725,0.856和0.873,均P<0.05)。结论ApoM在血液细菌感染早期辅助诊断具有较高的诊断价值;ApoM可能通过ApoM-S1P轴并激活下游受体参与细菌感染的炎症反应,起着潜在的抗炎作用。

切除修复交叉互补基因1、核苷酸还原酶M1亚基和β-微管蛋白Ⅲ的表达对Ⅰ～Ⅲ期非小细胞肺癌术后辅助化疗疗效的预测意义

目的探讨切除修复交叉互补基因1(ERCC1)、核苷酸还原酶M1亚基(RRM1)和β-微管蛋白Ⅲ与接受不同辅助化疗方案的非小细胞肺癌患者预后的关系。方法回顾性分析2004年1月至2007年12月我院接受手术治疗且术后行辅助化疗的Ⅰ～Ⅲ期非小细胞肺癌病例。利用免疫组织化学法检测ERCC1、RRM1和β-微管蛋白Ⅲ的表达,分析所有患者的临床病理特征、治疗特征、分子特征与生存规律的关系。结果 ERCC1、RRM1和β-微管蛋白Ⅲ的高表达率分别为36.4%、43.7%和38.4%,三者表达程度无相关性,ERCC1(P=0.008)和RRM1(P=0.028)在腺癌中的高表达率显著低于非腺癌,而β-微管蛋白Ⅲ在腺癌中的高表达率显著高于非腺癌(P=0.001)。所有患者中位随访时间35.8个月,80例出现复发或转移,40例死亡,中位生存期未达到,中位无疾病生存期(DFS)为24.1个月。单因素分析显示男性(P=0.036)、临床分期早(P=0.001)及非腺癌(P=0.004)患者较女性、临床分期晚及腺癌患者中位DFS显著延长,而年龄、吸烟与否、化疗方案的类型及ERCC1、RRM1和β-微管蛋白Ⅲ的表达程度对DFS无影响。分层分析显示,RRM1高表达时,含吉西他滨方案组较其他方案组DFS有缩短的趋势(P=0.054);β-微管蛋白Ⅲ高表达时,紫杉类方案组较长春瑞滨和吉西他滨组DFS有缩短的趋势(P=0.076)。而在RRM1或β-微管蛋白Ⅲ低表达以及ERCC1不同表达程度层中,各化疗方案组对DFS的影响无差异。COX多因素分析显示,腺癌与否和临床分期是影响DFS的独立预后因素。结论对于接受手术治疗及术后辅助化疗的非小细胞肺癌患者,RRM1高表达者对吉西他滨耐药,而β-微管蛋白Ⅲ高表达者对紫杉类耐药,在耐药人群中使用其他方案似乎能给患者带来更多的生存获益。免疫组织化学法检测ERCC1、RRM1和β-微管蛋白Ⅲ的表达有助于筛选辅助化疗药物及预测化疗疗效。

呼吸道合胞病毒M_(2-1)基因表达对人肺腺癌PAa细胞生长的影响

探讨呼吸道合胞病毒(RSV)M2 -1基因在人肺腺癌PAa细胞的表达及对其生长的影响。重组真核质粒PXJ 4 1/M2 -1转染肺腺癌PAa细胞 ,应用RT PCR、Westernblot方法检测表达。通过MTT生长曲线、流式细胞光度术、细胞贴壁能力、集落形成、接种裸鼠等 ,观察PAa细胞体内外生长变化。结果显示 :①转染阳性重组子经双酶切及RT PCR扩增均可见目的区带 ;②Westernblot检测可见特异性条带 ;③PAa/M2 -1细胞S期下降 ,G2 /M期增加 ;贴壁能力下降 ,集落形成率增高 ,集落细胞数增多 ;④PAa/M2 -1细胞成瘤时间晚 ,但生长速度快 ,瘤组织由腺癌向鳞癌分化。提示M2 -1基因可能促进PAa细胞生长 。