免疫大鼠血清中抗β1、β3肾上腺素受体及M2乙酰胆碱受体抗体IgG亚类的分布

目的明确免疫大鼠血清中抗β1、β3肾上腺素受体及M2乙酰胆碱受体抗体的IgG亚类，为进一步研究此类抗体的作用机制提供实验依据。方法以合成的大鼠β1、β3肾上腺素受体和M2乙酰胆碱受体细胞外第二环肽段为抗原分别主动免疫Wistar大鼠，应用免疫球蛋白纯化技术特异性提纯其血清中IgG类抗体，应用BCA进行蛋白定量，调整血清中蛋白量一致，用SA—ELISA法检测抗β1、β3肾上腺素受体和M2乙酰胆碱受体抗体的IgG亚类。结果免疫组中属于IgG2a亚类的抗β1肾上腺素受体抗体的A值为（0．45±0．01），明显高于对照组（0．08±0．003，P〈0．05）；免疫组中属于IgG2b亚类的抗艮肾上腺素受体抗体的A值为（0．59±0．02），显著高于对照组（0．2±0．02，P〈0．05）；免疫组中属于IgG2a亚类的抗M2乙酰胆碱受体抗体的A值为（0．56±0．04），显著高于对照组（0．12±0．01，P〈0．05）。结论免疫大鼠血清中抗β1肾上腺素受体抗体和抗M2乙酰胆碱受体抗体主要属于IgG2a亚类，抗β3肾上腺素受体抗体主要属于IgG2b亚类。

隔姜灸对大鼠脊髓损伤后神经源性膀胱M2、M3乙酰胆碱mRNA及P2X3受体表达的影响

目的探讨隔姜灸改善脊髓损伤大鼠神经源性膀胱症状的作用靶点,为脊髓损伤神经源性膀胱患者临床干预提供理论基础。方法选取SD大鼠为实验动物,随机分组后,按照改良Allen′s法建立T 10脊髓损伤模型,根据评估标准,筛选符合脊髓损伤后神经源性膀胱标准的动物模型纳入模型组和隔姜灸组;假手术组仅切除T 10椎板,不破坏脊髓;各组均纳入10只SD大鼠。三组术后均给予抗感染、创口护理及Crede手法辅助排尿。隔姜灸组同时行隔姜灸治疗,即术后第1天开始,每日1次,每次每个穴位灸10 min,连续12 d。结果隔姜灸组治疗后嘌呤能P2X3受体的相对表达水平及M2、M3乙酰胆碱mRNA的相对表达水平显著高于模型组(均P<0.05)。结论隔姜灸治疗可提高脊髓损伤大鼠脊髓神经节嘌呤能P2X3受体及膀胱组织中M2、M3乙酰胆碱mRNA的表达水平,从而有利于改善神经源性膀胱功能障碍。

快速起搏心房对犬心房乙酰胆碱M2受体表达和cAMP含量的影响

目的探讨快速起搏心房对犬心脏乙酰胆碱M2受体表达和cAMP含量的影响。方法13只犬随机分为两组。在实验组犬左心房缝合电极连接刺激仪持续快速起搏,诱发出持续性房颤,制备犬慢性房颤模型,Western blotting检测实验组和假手术组乙酰胆碱M2受体表达,放射免疫法测定心房cAMP含量。结果实验犬在(25.2±5.2)d内均能诱发出持续超过24h的房颤,实验组M2受体蛋白的表达明显高于假手术组(0.52±0.05vs0.28±0.04,P<0.05),cAMP含量明显下降[(25.7±3.1)pmol/(mg·min)vs(64.8±4.7)pmol/(mg·min),P<0.01]。结论快速起搏心房能明显上调M2受体蛋白的表达,引起cAMP含量下降,表明房颤本身能引起心脏迷走神经的激活,从而有利于房颤的维持。

卡维地洛对高血压心脏病患者的M2-乙酰胆碱能受体自身抗体的影响

目的探讨卡维地洛对高血压心脏病患者的M2-乙酰胆碱能受体自身抗体的影响。方法 2011年1月至2012年1月期间,我院诊治的74例高血压心脏病患者,随机将其分为对照组(常规治疗)和观察组(对照组基础上,加用卡维地洛),平均随访半年,对两组患者的心功能,以及M2-乙酰胆碱能受体自身抗体的变化情况,进行观察和比较。结果与治疗前相比,治疗后两组LVEDD、LVESD、LVEF,以及心功能均有所改善。与治疗后对照组相比,观察组心功能分级、LVEDD、LVESD明显降低,而LVEF升高,血清中M2-乙酰胆碱受体自身抗体滴度明显降低,P<0.05,有统计学意义。结论 M2-乙酰胆碱受体与高血压心脏病的发病过程有着密切的联系,卡维地洛通过阻断M2-乙酰胆碱受体自身抗体对心脏的不利影响,发挥心脏保护作用。

快速起搏心房对犬心房乙酰胆碱M_2受体表达和cAMP含量的影响

13只犬随机分为实验组及假手术组两组。采用快速起搏心房制备犬持续性心房颤动(简称房颤)模型,实验犬在25.2±5.2天内均能诱发出持续超过24 h的房颤,实验组乙酰胆碱M2受体蛋白的表达明显高于假手术组,cAMP含量明显下降(P<0.05或0.01)。结论房颤本身能引起心脏迷走神经的激活。

有机磷类杀虫剂对毒蕈碱乙酰胆碱M_2受体磷酸化的影响

目的:研究有机磷类杀虫剂(OPs)对G蛋白结合受体激酶-2(GRK2)介导的毒蕈碱乙酰胆碱M2受体磷酸化的影响,进一步揭示有机磷类杀虫剂可能存在的其他作用途径。方法:利用亲和层析方法从猪脑中纯化毒蕈碱乙酰胆碱M2受体;将纯化的毒蕈碱乙酰胆碱M2受体,G蛋白结合受体激酶-2,[γ-p32]标记的ATP与不同浓度的对氧磷(PO)、氧毒死蜱(CPO)共同保温,聚丙烯酰胺凝胶电泳,凝胶片干燥后放射性自显影检测M2受体磷酸化结果。之后将干燥凝胶片中放射性标记的磷酸化M2受体蛋白带剪下,同位素液体闪烁计数器计数。结果:氧毒死蜱(CPO)完全抑制毒蕈碱乙酰胆碱M2受体的磷酸化,其IC50为70μM;毒死蜱(CPF)也抑制M2受体的磷酸化,而对氧磷(PO)与对硫磷(parath ion)不抑制M2受体的磷酸化。结论:不同的OPs对GRK2介导的毒蕈碱乙酰胆碱M2受体的磷酸化有完全不同的作用;毒死蜱阻断M2受体的磷酸化,提示OPs的毒性作用存在其他的可能作用途径。

某些有机磷杀虫剂影响乙酰胆碱M2受体磷酸化的实验研究

目的研究有机磷类杀虫剂(OPs)对G蛋白结合受体激酶-2(GRK-2)介导的毒蕈碱乙酰胆碱m2受体(mAChR2)磷酸化的影响,进一步揭示OPs可能存在的其他作用途径。方法将纯化的大鼠脑mAChR2,GRK-2,同位素磷32标记的三磷酸腺苷([γ-P32]ATP)与不同浓度的对氧磷(PO)、氧毒死蜱(CPO)和毒死蜱(CPF)共同保温,聚丙烯酰胺凝胶电泳,凝胶片干燥后放射性自显影检测mAChR2磷酸化结果。将干燥凝胶片中放射性标记的磷酸化mAChR2蛋白带剪下,同位素液体闪烁计数器计数。结果CPO抑制大鼠脑mAChR2的磷酸化,其IC50为70?mol/L;CPF也抑制mAChR2的磷酸化,而PO与对硫磷(PT)不抑制mAChR2的磷酸化。CPO和CPF并不抑制同样由GRK2介导的β2肾上腺素受体(β2-AR)的磷酸化。结论CPO和CPF选择性地抑制GRK-2介导的mAChR2磷酸化,而PO和PT无此效应。说明某些有机磷类杀虫剂可能存在其它作用靶分子。

对氧磷和氧毒死蜱对大鼠脑毒蕈碱乙酰胆碱M_2受体磷酸化的影响

目的研究有机磷类杀虫剂对氧磷(PO)和氧毒死蜱(CPO)对大鼠脑G蛋白偶联受体激酶2介导的毒蕈碱乙酰胆碱M2受体磷酸化的影响。方法制备亲和层析柱;利用亲和层析方法从大鼠脑中纯化毒蕈碱乙酰胆碱M2受体;将纯化的毒蕈碱乙酰胆碱M2受体或β2-肾上腺素受体、G蛋白偶联受体激酶-2、[γ-p32]ATP与对氧磷(PO)、氧毒死蜱(CPO)共同保温,聚丙烯酰胺凝胶电泳分离蛋白,放射性自显影检测M2受体磷酸化结果。结果氧毒死蜱完全抑制大鼠脑M2受体的磷酸化,其半数抑制浓度为(IC50)70μmol/L;对氧磷不抑制毒蕈碱乙酰胆碱M2受体的磷酸化;氧毒死蜱和对氧磷都不抑制β-肾上腺素受体的磷酸化。结论氧毒死蜱有选择性地抑制大鼠脑毒蕈碱乙酰胆碱M2受体的磷酸化,说明某些有机磷杀虫剂的毒性作用存在其他靶分子或作用途径。

激动剂和抑制剂影响m2毒蕈碱乙酰胆碱受体磷酸化的试验研究

目的 探讨受激活剂或抑制剂影响的G蛋白偶联受体激酶2（G-protein coupled receptor kinase 2,GRK2）介导的胆碱能m2受体磷酸化的调节机制.方法 本实验以纯化的大鼠脑毒蕈碱乙酰胆碱m2受体（muscarinic acetylcholine m2 receptor,mAChR2）为研究对象,观察氨甲酰胆碱、阿托品和肝素分别对m2受体磷酸化过程的影响.结果 显示氨甲酰胆碱明显增强m2受体的磷酸化,而阿托品或肝素（GRK2抑制剂）完全阻断了m2受体的磷酸化.m2受体的磷酸化是依赖激活剂作用发生的.结论 说明阿托品可以直接与m2受体结合.揭示了氨甲酰胆碱和阿托品等一些m2受体的激活剂及抑制剂对M2受体磷酸化的调节作用.

扩张性心肌病中β_1和M_2受体自身抗体的研究

近年来发现扩张性心肌病(DCM)中存在有β1、M2受体自身抗体,并认为它们参与了DCM的病理生理改变,本文从β1和M2受体自身抗体诱导细胞凋亡、对β1和M2受体激动效应、细胞跨膜电位及电流的影响、诱导心肌病理改变,以及对临床免疫抑制治疗、免疫吸附治疗DCM效果的临床意义、未来展望等作一综述。

血清M2-AAb、β1-ARAb水平与肥厚型心肌病患者左心功能的相关性研究

目的探讨肥厚型心肌病患者血清中M2乙酰胆碱能受体自身抗体(M2-AAb)、β1肾上腺素能受体自身抗体(β1-ARAb)水平与肥厚型心肌病患者左心功能的相关性。方法选取2017年1月至2019年3月于该院心血管内科住院接受治疗的126例肥厚型心肌病患者为肥厚型心肌病组,选取同期的107例体检健康者作为对照组。采用ELISA法检测肥厚型心肌病患者血清中M2-AAb、β1-ARAb水平;采用多普勒心脏超声检测左心功能各指标水平;分析肥厚型心肌病患者血清中M2-AAb、β1-ARAb水平的相关性;分析肥厚型心肌病患者血清中M2-AAb、β1-ARAb水平与左心功能指标的相关性。结果肥厚型心肌病组血清中M2-AAb、β1-ARAb水平明显高于对照组(P<0.05);两组左心室射血分数(LVEF)比较,差异无统计学意义(P>0.05)。肥厚型心肌病组左室舒张末期内径(LVD)、二尖瓣舒张早期血流速度峰值(E)/二尖瓣瓣环组织多普勒速度(E′)、左室舒张末期左心房容积(LAV)、左房容积指数(LAVI)明显高于对照组(P<0.05),E/二尖瓣舒张晚期血流速度峰值(A)低于对照组(P<0.05)。肥厚型心肌病患者血清中M2-AAb、β1-ARAb水平呈正相关;肥厚型心肌病患者血清中M2-AAb、β1-ARAb水平与LVD、E/E′、LAV、LAVI均呈正相关(P<0.05),与E/A呈负相关(P<0.05)。结论血清M2-AAb、β1-ARAb水平与肥厚型心肌病患者左心功能指标具有一定相关性。血清M2-AAb、β1-ARAb水平联合左心功能检测在肥厚型心肌病的早期诊断及病程评估中具有较高的应用价值。

有机磷杀虫剂对M2受体磷酸化的影响

目的研究有机磷类杀虫剂对G蛋白结合受体激酶2介导的毒蕈碱乙酰胆碱m2受体磷酸化的影响和可能存在的其他作用途径。方法将纯化的毒蕈碱乙酰胆碱m2受体,G蛋白结合受体激酶-2,[γ-p32]ATP与对氧磷(PO)、氧毒死蜱(CPO)共同保温,聚丙烯酰胺凝胶电泳分离蛋白,放射性自显影检测m2受体磷酸化结果。结果氧毒死蜱完全抑制m2受体的磷酸化,其半数抑制浓度为(IC50)70μmol/L;毒死蜱也抑制m2受体的磷酸化,而对氧磷与对硫磷不抑制m2受体的磷酸化。结论不同的有机磷杀虫剂对m2受体的磷酸化有完全不同的作用;毒死蜱阻断m2受体的磷酸化,提示有机磷杀虫剂的毒性作用存在其他途径。

有机磷类杀虫剂存在其他作用靶分子

目的:研究有机磷类杀虫剂对大鼠脑G蛋白偶联受体激酶2介导的毒蕈碱乙酰胆碱m2受体磷酸化的影响,揭示有机磷类杀虫剂存在的其他作用靶分子或作用途径。方法:制备亲和层析柱;利用亲和层析方法从大鼠脑中纯化毒蕈碱乙酰胆碱m2受体;将纯化的毒蕈碱乙酰胆碱m2受体或β-肾上腺素受体,G蛋白偶联受体激酶-2,[γ-p32]ATP与对氧磷(PO)、氧毒死蜱(CPO)共同保温,聚丙烯酰胺凝胶电泳分离蛋白,放射性自显影检测m2受体磷酸化结果。结果:氧毒死蜱完全抑制大鼠脑m2受体的磷酸化,其半数抑制浓度为(IC50)70μmol/L;对氧磷不抑制m2受体的磷酸化;氧毒死蜱和对氧磷都不抑制β-肾上腺素受体的磷酸化。结论:氧毒死蜱有选择性地抑制大鼠脑m2受体的磷酸化,说明某些有机磷杀虫剂的毒性作用存在其他靶分子或作用途径。

雌激素受体与M2mAchR在成年雌兔背根神经节中的共存

为检测成年雌兔背根神经节中是否存在雌激素受体(ER)与M2型乙酰胆碱受体(M2mAchR)的分布与共存,采用免疫荧光双标记染色法对ER与M2mAchR在背根神经节中的分布情况进行了研究。结果显示,在成年雌兔背根神经节中:(1) ER分布主要以神经元为主。其中,ERα主要表达于中小型神经元,而ERβ则多分布于大中型神经元。(2)相较ER而言,M2mAchR分布更为广泛,除神经元外,神经纤维等组织上也有弱阳性表达。(3)两种ER与M2mAchR均有共存现象,但共存情况存在差异,ERα/M2mAchR主要共分布于中小型细胞,ERβ/M2mAchR主要共分布于大中型神经元。结果表明,首先,雌激素具有通过影响背根神经节部分神经元的活动而实现对躯体内脏感觉活动间接调节的条件。其次,在此影响的机制中,雌激素除可以直接作用于神经元上的受体之外,还具有与共表达的M2mAchR交互作用而实现的条件。为研究雌激素影响神经系统调控活动的机制以及背根神经节的神经内分泌调节机制提供了重要的形态学依据。

迷走神经在生理性缺血训练改善心力衰竭大鼠心功能中的作用

目的:探讨生理性缺血训练(PIT)改善心力衰竭(心衰)大鼠心功能过程中迷走神经的作用及其发挥效应的分子生物学机制。方法:30只大鼠随机分为假手术组(SO组)、单纯心衰组(HF组)、生理性缺血训练组(PIT组)、乙酰胆碱M2受体拮抗剂组(M2R-组)及乙酰胆碱M2受体激动剂组(M2R+组),每组6只。SO组按照心衰大鼠模型建立步骤,将线穿过左冠状动脉前降支不结扎,不训练;HF组为心衰大鼠模型,不训练;PIT组在HF组基础上进行训练,每次缺血5min,再灌注5min,5次/天,5天/周,持续8周;M2R-组及M2R+组分别在PIT组基础上每天尾静脉注射乙酰胆碱M2受体特异性拮抗剂(0.5mg/kg,i.v.)及激动剂(0.2mg/kg,i.v.)。8周训练结束后,采用小动物二维超声系统检测心功能,Masson染色检测心肌梗死面积,qRT-PCR及Western Blot分别检测Bcl-2、Bax、MMP-9及TIMP-1的mRNA和蛋白表达水平,Ellman法检测乙酰胆碱酯酶活性,ELISA法检测去甲肾上腺素浓度。结果:8周训练后,PIT及M2R+组的左室射血分数(LVEF)、Bcl-2、Bcl-2/Bax的值及TIMP-1显著高于HF组和M2R-组(P<0.05);相反地,心肌梗死面积、Bax、MMP-9及MMP-9/TIMP-1的值则显著低于HF组和M2R-组(P<0.05)。PIT组、M2R组及M2R+组乙酰胆碱酯酶活性显著高于HF组(P<0.01),前者三组组间无显著差异(P>0.05)。与SO组相比,其余各组去甲肾上腺素浓度显著升高(P<0.01),但各组组间均无显著差异(P>0.05)。乙酰胆碱酯酶活性与Bcl-2/Bax及LVEF,Bcl-2/Bax与LVEF呈正相关,乙酰胆碱酯酶活性与MMP-9/TIMP-1,MMP-9/TIMP-1与LVEF呈负相关(P<0.001)。结论:PIT可以通过提高迷走神经活性,减少心肌凋亡,减轻心肌间质纤维化,从而抑制心肌重构,改善心衰大鼠的心功能,该保护过程由乙酰胆碱M2受体介导。