分泌抗急性非淋巴细胞白血病M_2型单克隆抗体细胞株的建立及其特异性

应用细胞杂交瘤技术建立了分泌抗急性非淋巴细胞白血病M_2型单克隆抗体1D_1、1C_2和1D_6细胞株,连续传代11个月,稳定地分泌单克隆抗体。用间接免疫荧光方法检测,这三株细胞分泌的单克隆抗体与急性非淋巴细胞白血病M_2型病人的白血病细胞呈阳性反应;与急性非淋巴细胞白血病M_1、M_3、M_4、M_5型病人白血病细胞呈阴性反应;与慢性粒细胞白血病、慢粒急变,急性淋巴细胞白血病病人白血病细胞呈阴性反应;与正常人白细胞也呈阴性反应,说明建立的细胞株分泌的单克隆抗体具有型的特异性。

猪圆环病毒2型Cap蛋白的原核表达及其单克隆抗体制备

为了制备猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2,PCV-2)Cap蛋白单克隆抗体,试验将Cap基因克隆至原核表达载体pET-28a(+)上并转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中,将获得的重组表达菌pET28a-Cap/BL21(DE3)用IPTG进行诱导后表达重组蛋白,利用His标签对表达的重组蛋白进行纯化;将纯化后的重组蛋白于皮下免疫Balb/c小鼠,免疫结束后测定免疫小鼠血清效价,当小鼠血清抗体效价达到1∶100000时进行细胞融合;采用有限稀释法进行亚克隆,筛选能够稳定分泌抗体且抗体效价高的阳性杂交瘤细胞株,鉴定杂交瘤细胞株抗体亚类,并选择1株抗体效价最高的细胞株再次注射到小鼠腹腔中(5×10^(5)个/只),取腹水采用亲和层析法对单克隆抗体进行纯化;采用间接ELISA方法测定单克隆抗体效价并检测其特异性,分别采用Western-blot和间接免疫荧光试验检测单克隆抗体的反应性。结果表明:PCR扩增得到大小为708 bp的Cap基因,经双酶切与测序验证后,成功构建重组表达质粒pET28a-Cap;重组表达菌pET28a-Cap/BL21(DE3)经诱导后表达的重组蛋白可与His标签抗体发生特异性反应,纯化后的重组蛋白在预期位置(31.7 ku)出现清晰的单一条带;共筛选出8株能够稳定分泌抗体且抗体效价高的阳性单克隆细胞株(1E5、2A9、3C6、4B3、5F7、6D11、7A2、8G1株),抗体亚类鉴定均为IgG1亚类。其中7A2株抗体效价最高,用于单克隆抗体的制备;间接ELISA方法证实7A2株单克隆抗体仅与PCV-2 Cap蛋白发生反应,与猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)、猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)、猪瘟病毒(Classical swine fever virus,CSFV)、猪细小病毒(Porcine parvovirus,PPV)和猪伪狂犬病病毒(Porcine pseudorabies virus,PRV)不发生反应;Western-blot和间接免疫荧光试验均证实PCV-2 Cap蛋白可被7A2株单克隆抗体特异性识别。说明本试验成功制备出具有高纯度、强特异性、良好反应性的PCV-2 Cap蛋白单克隆抗体。

抗猪圆环病毒2型Cap蛋白单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

本试验旨在为PCV2的快速诊断提供技术手段。用纯化的原核表达的重组猪圆环病毒2型(PCV2)Cap蛋白(pET-Cap)免疫BALB/c小鼠,通过杂交瘤技术获得了2株能够稳定分泌抗pET-Cap抗体的杂交瘤细胞株3D5和5C5。经建立的间接ELISA试验检测3D5、5C5细胞上清效价分别为1∶2048、1∶1024;诱生腹水的效价分别为1∶204800、1∶102400,杂交瘤染色体数目分别为95条、96条。Western blotting结果表明,2株单抗能与病毒发生特异性反应。传代培养20代,3个月内复苏冻存3次,3D5、5C5能够稳定分泌抗体。

利妥昔单抗联合环磷酰胺、泼尼松对特发性膜性肾病患者肾功能及血清抗M型磷脂酶A2受体抗体水平的影响

目的:探讨利妥昔单抗联合环磷酰胺、泼尼松对特发性膜性肾病(IMN)患者肾功能、血清抗M型磷脂酶A2受体(PLA2R)抗体水平等的影响。方法:选取2020年6月~2022年12月期间某院诊治的64例IMN患者作为研究对象,采用随机数字表法分为对照组和观察组,每组32例。所有患者均接受控制血压、调脂、抗凝等常规治疗,对照组患者在常规治疗基础上加用醋酸泼尼松片、注射用环磷酰胺,观察组患者在对照组治疗基础上加用利妥昔单抗注射液。比较两组患者血清白蛋白、血脂指标[总胆固醇(TC)和甘油三酯(TG)]、血清抗PLA2R抗体水平、肾功能指标[血清肌酐(Scr)、血尿素氮(BUN)]、24h尿蛋白定量(24hpro)及不良反应发生情况。结果:治疗后,两组患者血清白蛋白水平均升高(P<0.05),且观察组高于对照组(P<0.05);TC、TG水平均降低(P<0.05),且观察组低于对照组(P<0.05);血清抗PLA2R抗体水平均降低(P<0.05),且观察组低于对照组(P<0.05);Scr和BUN水平均降低(P<0.05),且观察组低于对照组(P<0.05);24hpro均降低(P<0.05),且观察组低于对照组(P<0.05)。两组患者不良反应发生率比较无统计学差异(P>0.05)。结论:利妥昔单抗联合环磷酰胺、泼尼松治疗可提高患者血清白蛋白水平,调节血清抗PLA2R抗体及血脂水平,改善患者肾功能,且不会增加不良反应的发生风险。

M型磷脂酶A2受体在原发性膜性肾病中的诊断价值及其血清抗体水平与预后的关系

目的探讨M型磷脂酶A2受体(PLA2R)对原发性膜性肾病(PMN)的诊断价值,及其血清抗体水平与疗效的相关性。方法选取上饶市人民医院2021年9月至2022年12月收治的80例PMN患者作为PMN组,另选取同时期收治的37例继发性膜性肾病(SMN)患者作为SMN组,检测两组患者肾组织中PLA2R的表达,比较组间差异。检测PMN患者的血清PLA2R抗体表达情况,分析阳性患者的血清PLA2R抗体水平随着治疗进行与24 h尿蛋白、血清白蛋白(Alb)、血肌酐(SCr)水平的相关性。结果PMN组的肾组织PLA2R阳性率高于SMN组,差异有统计学意义(P<0.05)。受试者特征曲线(ROC)分析显示,肾组织PLA2R表达诊断PMN的敏感度为81.25%、特异度为91.89%,ROC曲线下面积为0.866,具有较高的诊断效能。血清PLA2R抗体阳性的PMN患者的抗体水平与疗效的相关性分析显示,血清PLA2R抗体水平与24 h尿蛋白水平呈正相关(r=0.452),差异有统计学意义(P<0.05),与Alb水平呈负相关(r=-0.426),差异有统计学意义(P<0.05)。结论肾组织PLA2R的表达有助于PMN与SMN的鉴别诊断,血清PLA2R抗体水平的降低可提示治疗有效。

抗M型磷脂酶A2受体抗体水平对原发性膜性肾病患者临床特征及预后的影响

目的 分析不同抗M型磷脂酶A2受体(phospholipase A2 receptor, PLA2R)抗体水平的原发性膜性肾病(primary membranous nephropathy, PMN)患者临床特征,比较其治疗效果及预后情况。方法 回顾性收集161例PMN患者的临床资料,根据血抗PLA2R抗体水平不同,将患者分为高效价组44例、低效价组57例、阴性组60例,比较三组患者临床特征、治疗反应及肾脏预后。Cox回归分析PMN患者临床缓解和不良预后的影响因素。结果 高效价组和低效价组患者中的男性占比、血尿比例、24 h尿蛋白量、D2聚体水平均高于阴性组,差异有统计学意义(均P<0.05)。高效价组患者合并肾病综合征的比例及舒张压、血肌酐、胆固醇、低密度脂蛋白水平均高于阴性组,血白蛋白、IgG水平低于阴性组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。高效价组临床缓解率(70.5%)低于低效价组(87.7%)和阴性组(88.3%),差异有统计学意义(χ^(2)=7.088,P=0.029)。Cox回归分析显示,抗PLA2R抗体>150 RU/mL是PMN患者达到临床缓解的独立影响因素(HR=0.451,95%CI 0.288~0.706,P=0.001),肾病未缓解是PMN患者发生肾脏不良预后的独立影响因素(HR=17.922,95%CI 3.465~92.698,P=0.001)。结论 高抗PLA2R抗体水平的膜性肾病患者起病时病情往往更严重,且治疗反应不佳。

ANGPT2单克隆抗体对AML小鼠肿瘤组织血管增生和下游信号蛋白表达的影响

目的 探讨ANGPT2单克隆抗体对急性髓系白血病(AML)小鼠肿瘤组织血管增生、下游信号蛋白表达的影响。方法 建立AML小鼠模型20只,对照组与实验组各10只,采用免疫组织化学方法检测微血管密度及VEGF表达情况,采用Western blot检测下游信号通路蛋白TIE2、SHP2和PI3K的表达水平。结果 ANGPT2单克隆抗体治疗后,AML小鼠肿瘤组织微血管密度及VEGF表达水平显著下降79.29%(P<0.01),下游信号通路蛋白SHP2蛋白表达水平上升59.43%,PI3K蛋白表达水平下降20.37%(P<0.01)。结论 ANGPT2单克隆抗体显著抑制AML小鼠肿瘤组织血管增生。

马M2型CD163单克隆抗体的制备及其在巨噬细胞极化类型检测中的应用

本研究分别采用M1型诱导剂LPS+IFN-γ,M2型诱导剂IL-4或者IL-10刺激马巨噬细胞后,经荧光定量PCR检测巨噬细胞中5种细胞因子和3种表面标记物的转录水平,以确定M1和M2型马巨噬细胞的极比标志物和分泌的细胞因子。为方便快捷地检测马巨噬细胞经不同病原感染后的极化表型,本实验截取马巨噬细胞极化标志物CD163基因的SRCR1~SRCR4区域,并分别经原核和真核表达系统表达该重组蛋白CD163。将原核表达的马CD163蛋白免疫小鼠制备CD163的单克隆抗体(MAb),经western blot和激光共聚焦检测该MAb的反应性。以上述实验为基础,采用荧光定量PCR检测不同病原感染巨噬细胞后的3种极化标志物和3种细胞因子基因的转录水平以确定感染后的巨噬细胞的极化表型;将不同病原感染马巨噬细胞24 h后,利用制备的CD163 MAb分别采用流式细胞术检测表达CD163蛋白的马巨噬细胞数量,以及采用western blot检测不同病原感染巨噬细胞后的CD163蛋白的表达量,以进一步鉴定马巨噬细胞的极化状态。荧光定量PCR结果表明,经LPS+IFN-γ诱导后,马巨噬细胞向M1型发生了极化,TNF-α、IL-1β、IL-12、CD80基因可以作为鉴定M1型马巨噬细胞的标记基因;而经IL-4或者IL-10诱导后,马巨噬细胞向M2型发生了极化,TGF-β、IL-10、CD206、CD163基因可以作为鉴定M2型马巨噬细胞的标记基因。MAb western blot和激光共聚焦结果显示,该MAb与真核表达的CD163蛋白以及经IL-10诱导后马巨噬细胞表达的内源性CD163蛋白均能够很好反应,可以用于马巨噬细胞极化状态的检测。荧光定量PCR结果显示,马流产沙门氏菌(S.Abortus equi)、马疱疹病毒(EHV-1)和马动脉炎病毒(EAV)感染马巨噬细胞24 h后,M1型细胞因子TNF-α、IL-1β和其表面标记物CD80基因mRNA的转录水平均显著上调(p<0.05),而EIAV感染24 h后,M2型细胞因子IL-10和其表面标记物CD206、CD163基因的mRNA的转录水平均不同程度的上调。表明S.Abortus equi、EHV-1和EAV均能诱导马巨噬细胞极化为M1型,并释放大量促炎性因子,而EIAV则可以诱导巨噬细胞极化为M2型,产生了抑炎因子。利用制备的CD163 MAb经流式细胞术和westen blot鉴定结果均表明,在各病原感染早期,EIAV感染可以诱导马巨噬细胞极化为M2型,而其余3种病原未能诱导马巨噬细胞发生M2型的极化。本研究制备了CD163 MAb并利用其检测了不同病原感染后马巨噬细胞极化的表型,丰富了相关疾病发生机制研究的生物学工具。

禽腺病毒血清4型中国流行株fiber2蛋白单克隆抗体制备与鉴定

旨在制备禽腺病毒血清4型(fowl adenovirus serotype 4,FAdV-4)中国流行株的fiber2蛋白的特异性单克隆抗体。以纯化的FAdV-4中国流行株CH/HNJZ/2015免疫BALB/c小鼠,取小鼠脾脏与SP2/0细胞融合,采用基于fiber2蛋白的间接ELISA筛选阳性杂交瘤细胞,经过5次亚克隆,获得2株分泌抗fiber2蛋白抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为2C3和7B4。以制备的2C3和7B4腹水进行亚型鉴定、反应原性、特异性以及中和活性测定。结果显示,成功制备了抗FAdV-4 fiber2蛋白的特异性单克隆抗体,获得的单克隆抗体均为IgM亚型,可特异性识别FAdV-4及其fiber2蛋白,为FAdV-4的免疫检测和fiber2蛋白功能研究提供了研究材料。

兔出血症病毒2型SC株VP60蛋白特异性单克隆抗体的制备及鉴定

为了获得我国兔出血症病毒2型(RHDV2)SC株特异性单克隆抗体,研究以纯化RHDV2作为抗原免疫BALB/c小鼠,4次免疫后取脾细胞与SP2/0细胞融合,经间接ELISA方法筛选,获得一株能够稳定分泌RHDV2 VP60蛋白特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞,命名为6B3。经Western blot和间接免疫荧光试验验证,该单克隆抗体可识别RHDV2,不与RHDV1反应,具有良好的毒株特异性。亚型鉴定结果为IgG3,轻链为Kappa型,腹水ELISA效价为1∶80 000。本研究得到的针对RHDV2的特异性单抗,将对我国兔出血症的诊断及流行病学调查提供有效制剂。

抗黄曲霉毒素M_1的单克隆抗体细胞株的建立

本研究建立了抗黄曲霉毒素AFM1 的单克隆抗体细胞株。用AFM1-肟-牛血清白蛋白(AFM1 -oxim e-BSA)偶联物免疫Ba1b/c小鼠后,取脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞系Sp2/0融合,经3～4次亚克隆建立了3个稳定分泌抗黄曲霉毒素M1 抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为3G2,3G3,6G8。3株抗体均属IgG1 亚类。培养上清液的稀释度为1v2 000～1v12 800,腹水的抗体稀释度为1v3.2×106 ～1v20×107,参考工作稀释度为1v1×106 ～1v2.5×106。3G3和6G8抗体的IgG 含量分别为0.8和1.43 g/L,亲和常数分别为5.438和4.369。

猪链球菌2型人源株MRP的表达及其单克隆抗体的制备与应用

将猪链球菌2型(SS2)人源株Habbmrp基因进行截短修饰后,克隆于pGEX4T-2载体中,转化大肠杆菌诱导表达约61000的融合蛋白MRP-GST,该蛋白经凝血酶作用去除重组蛋白中的GST标签,得到约35000纯化的MRP。Western blotting证实MRP可被SS2阳性血清特异性识别。以纯化的MRP抗原免疫BALB/c小鼠,取免疫鼠脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0融合,间接ELISA进行筛选获得了6株能稳定分泌抗MRP特异性单抗的细胞株。特异性试验表明该6株单抗与SS2的另外2种蛋白、大肠杆菌均不发生交叉反应。以2B8单抗腹水和SS2多克隆抗血清建立夹心ELISA对71株标准菌株和122株猪链球菌野毒株进行MRP的表征鉴定,标准株检测结果与背景符合率为为97.2%(69/71),其中34株标准血清型菌株检测的符合率为100%。表明该方法可用于猪链球菌的快速诊断和流行病学调查。

猪链球菌2型人源分离株MRP单克隆抗体的制备与鉴定

为建立一种针对猪链球菌2型（SS2）毒力因子的特异性检测方法，研制了抗SS2溶菌酶释放蛋白（MRP）单克隆抗体（McAb），并对其生物学活性进行了分析。将表达、纯化的SS2菌株MRP免疫BALB／c小鼠，采用淋巴细胞杂交瘤技术将免疫鼠脾细胞与SP2／0骨髓瘤细胞融合，以纯化的MRP蛋白作为包被抗原，通过间接ELISA方法筛选获得了6株能稳定分泌抗MRPMcAb的杂交瘤细胞系288、3G5、1G1、3G9、186和2C3。经用间接ELISA方法测定，单抗腹水的抗体效价均超过1：10^5，杂交瘤细胞培养上清液的效价为1：128～1：1024。Western-blotting鉴定结果表明，6株单抗均具有特异的生物学活性；以288单抗腹水和SS2多克隆抗血清建立的夹心ELISA方法可特异地检测MRP。

堆型艾美耳球虫单克隆抗体细胞株的鉴定

通过对杂交瘤细胞染色体分析、单克隆抗体的免疫组化和免疫荧光等指标的检测 ,对已建立的单克隆抗体细胞株5B4和5G7进行鉴定 ,结果表明 :两株单克隆抗体细胞株的染色体数目均接近两亲本的染色体数目之和 ;所建立的单克隆抗体细胞株所分泌的特异性抗体是针对子孢子的。

禽副粘病毒2型(PMV-2)群特异性单克隆抗体的研究

禽副粘病毒 2型 (Yucaipa株 )鸡胚成纤维细胞适应毒经差速离心和蔗糖密度梯度离心法提纯 ,免疫Balb/c小鼠 ,取脾细胞与SP2 / 0骨髓瘤细胞融合 ,经间接ELISA方法筛选 ,有限稀释 3次克隆 ,获得了两株分泌PMV 2单克隆抗体的杂交瘤细胞株 6E9和 7E5。经鉴定两株单抗均为IgG1亚类 ,杂交瘤细胞的平均染色体分别为 96条和98条。细胞培养上清及腹水效价分别为 1∶2 5 6 0 0、1∶5 12 0 0和 1∶10 5、1∶10 7。 6E9和 7E5单抗能稳定分泌抗体且与NDV、AIV、EDSV无交叉反应。间接ELISA实验表明 4株PMV 2 (Yucaipa株、F4 株、F6株和F8株 )均含有单抗6E9和 7E5所针对的位点。

抗树突状细胞单克隆抗体对大鼠角膜移植术后植片内IFN-γmRNA表达和血清IL-2水平的影响

目的用抗树突状细胞单克隆抗体(anti-dendriticcell monoclonal antibody,DC-McAb)抑制树突状细胞(den-driticcell,DC),观察其对大鼠角膜移植排斥反应及植片内IFN-γmRNA的表达、血清IL-2水平的影响。方法以Wistar大鼠为供体,SD大鼠为受体,分A:对照组;A0:阳性对照组;B:腹腔给药组;C:结膜下给药组;D:保留受体上皮瓣组。A、A0、B、C组予常规穿透角膜移植术,D组保留受体上皮瓣。每组术前3d及术日,术后第1、第2、第3、第5、第7、第9、第11天给药,A组:腹腔注射灭菌注射用水0.5ml,A0组:腹腔注射小鼠抗大鼠IgG0.1ml+灭菌注射用水0.4ml,B、D组:DC-McAb0.1ml+灭菌注射用水0.4ml,C组:结膜下注射DC-McAb0.05ml。术后裂隙灯显微镜观察排斥反应情况,记录各组角膜发生排斥反应的时间。A、B、C、D组分别于术后第3、第7、第14和第21天采血清,ELISA法测IL-2水平。A、B组术后第7天取角膜植片,RT-PCR法检测IFN-γmRNA的表达情况。结果A组术后(7.63±0.74)d出现排斥反应,A0组(7.50±0.54)d,与A组相比差异无显著性(P>0.05);B组(17.11±1.17)d、C组(13.86±0.69)d、D组(17.88±0.84)d,与A组相比差异有显著性(P<0.01);C组与B、D组相比,差异有显著性(P<0.01);B组与D组相比,差异无显著性(P>0.05)。A组角膜植片IFN-γmRNA可检测到有较高表达,B组的表达量很少或检测不到,两组之间的差异较为明显。正常SD大鼠血清IL-2浓度为(35.18±2.59)pg/ml,移植术后3d略有升高,7d时明显升高,14d时IL-2的水平达高峰,21d时下降,B、C、D组升高幅度与A组相比明显减少(P<0.05),C组与B、D组相比升高幅度较大(P<0.05),B、D两组之间无明显差异(P>0.05)。结论抗树突状细胞单克隆抗体可抑制大鼠角膜移植排斥反应,延长角膜植片存活时间。

血清4型禽腺病毒penton蛋白单克隆抗体的制备及鉴定

【目的】制备和鉴定血清4型禽腺病毒(FAdV-4)五邻体(penton)蛋白单克隆抗体,为深入探究penton蛋白在FAdV-4感染致病机制中的作用及为抗原检测试剂研发提供抗体材料。【方法】以原核表达的FAdV-4 penton重组蛋白免疫6~8周雌性BALB/c小白鼠,加强免疫3次后,取鼠脾脏细胞与骨髓瘤细胞SP2/0进行细胞融合,通过penton-酶联免疫吸附剂测定(ELISA)和FAdV4 virus-ELISA方法分别筛选阳性杂交瘤细胞株,对筛选出的单克隆抗体杂交瘤细胞株进行亚类鉴定、特异性和广谱性鉴定及间接免疫荧光和稳定性试验。【结果】亚类鉴定结果表明,筛选获得7株能稳定分泌抗FAdV-4 penton蛋白的杂交瘤细胞株(1D11、2B3、2C4、2C9、6B3、8F12和8G11),其轻链均为Kappa链,重链3株为IgG1,4株为IgG2b;特异性检测结果表明,7株单克隆抗体只与FAdV-4反应,不与其他11种血清型FAdV及NDV、ARV、EDSV和IBV等常见禽病病原体发生交叉反应;广谱性鉴定结果表明,7株单克隆抗体均可与19株FAdV-4分离株结合,广谱性好;间接免疫荧光试验结果表明,7株单克隆抗体均与感染FAdV-4的鸡胚肝细胞(CEL)结合,出现明亮的绿色荧光。对筛选出的3株单克隆抗体(6B3、8F12和8G11)进行稳定性检测,发现其稳定性良好。【结论】通过单克隆抗体制备和鉴定获得3株与FAdV-4蛋白结合效果较好并具有特异性和广谱性的FAdV-4 penton蛋白杂交瘤细胞株(6B3、8F12和8G11),能稳定分泌penton蛋白单克隆抗体,为深入研究penton蛋白在FAdV-4感染致病机制中的作用提供单抗,为FAdV-4抗原检测试剂的研发打下基础。

抗人Ⅲ型前胶原单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

抗人Ⅲ型前胶原单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立邓修惠黄学梅李伟道叶学正刘兴明林丁宋蓉（重庆市肿瘤研究所，重庆６３００３０）本文报道用人工流产胎皮提取的Ⅲ型前胶原（ｈＰＣⅢ）免疫Ｂａｌｂ／ｃ小鼠，获得２株抗ｈＰＣⅢｍＡｂ的杂交瘤细胞（ＭＡ１和ＭＨ８），并对...

禽副粘病毒2型(APMV-2)血凝素单克隆抗体的制备与初步应用

A hybridoma cell line 1G4A7 secreting monoclonal antibody (McAb) specific to hemagglutinin of avian paramyxovirus type 2 (APMV-2) was developed by fusing the spleen cells of APMV-2 immunized BAlb/c mice with SP2/0 myeloma cells. The immunoglobulin subclass of 1G4A7 was IgG1 with light chain κ and the affinity constant against APMV-2 was 1.02×1010. Identified by HI and indirect ELISA, the McAb titers in ascities were 10 log 2 and 1∶106 respectively. The McAb did not cross react with the common avian viruses, showing good specificity. There existed obvious differences in antigenitic relationship among APMV-2 viruses analyzed by HI and indirect ELISA using McAb 1G4A7.

乙型肝炎病毒核糖核酸酶H(HBV-RNaseH)蛋白单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立及初步鉴定

目的建立能稳定分泌抗乙型肝炎病毒核糖核酸酶H1及H2(HBVRNaseH1及H2)重组蛋白单克隆抗体(McAb),并对其生物学活性进行实验室鉴定。方法用重组HBVRNaseH1及H2蛋白为抗原免疫BALB/c/小鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0进行融合,经有限稀释克隆3次后制备分泌McAb的杂交瘤细胞株,并用酶免疫(EIA)法对其分泌抗体进行初步鉴定。结果融合后的阳性克隆中筛选出4株能稳定分泌McAb的杂交瘤细胞株,命名为H1C6、D3;H2E2、F4。这4株McAb与HBVRNaseH1及H2重组抗原均有良好的反应性,杂交瘤培养上清的EIA抗体滴度为1∶100～1∶200,其中2株诱生的同系小鼠腹水滴度为1∶800,1∶1000。这4株McAb均为IgG1亚型。结论该McAb的制备,可为HBV感染者血清和肝组织中抗原检测方法的建立和生物工程药物的研制创造条件。