基于PiggyBac转座子优化稳定表达细胞系的新型瞬时受体电位M2通道抑制剂筛选

目的:使用PiggyBac(PB)转座系统建立稳定表达瞬时受体电位M2(TRPM2)通道的人胚胎肾细胞HEK293T,并进行TRPM2通道抑制剂筛选,为治疗脑缺血等疾病寻找潜在的药物。方法:根据PB转座原理,构建pPB-hTRPM2真核表达载体。将重组质粒和辅助质粒共同转染至HEK293T细胞中,利用系统携带的荧光与膜片钳鉴定TRPM2基因表达,通过Z'因子评估细胞模型是否适用于钙成像法的高通量筛选。利用钙成像法和膜片钳对11个先导化合物分子进行初步活性评价,测定化合物分子对TRPM2通道的抑制活性。利用氧糖剥夺/再灌注(OGD/R)损伤模型和细胞计数试剂盒8(CCK-8)方法验证筛选得到的化合物分子对损伤细胞的保护作用。利用流式细胞术检测细胞活性氧水平。利用小鼠短暂性大脑中动脉栓塞(tMCAO)模型评价化合物的神经保护作用。结果:成功构建pPB-hTRPM2真核表达载体,构建出可高效表达TRPM2基因的HEK293T细胞系,并同时表达增强型绿色荧光蛋白(EGFP)。在筛选获得的嘌呤霉素抗性细胞中,所有细胞荧光明亮可见,诱导后细胞表现出经典的TRPM2通道电流特征,TRPM2通道电流值与瞬时转染对照组差异无统计学意义(P>0.05)。该筛选系统进行钙成像实验的Z'因子为0.5416,表明其适用于高通量筛选。通过钙成像法结合膜片钳筛选出化合物6,其具有显著的TRPM2通道抑制作用,且1.0μmol/L的化合物6能够显著提高OGD/R后SH-SY5Y细胞的存活率(P<0.05),降低活性氧水平(P<0.05),0.3、1.0 mg/kg的化合物6能降低tMCAO小鼠脑梗死体积百分比(均P<0.05)。结论:利用PiggyBac基因编辑技术成功构建了TRPM2基因稳定表达细胞系,利用钙成像法和膜片钳在候选化合物中成功筛选出一个高亲和力的新的TRPM2通道抑制剂。该抑制剂可以通过降低细胞活性氧水平缓解OGD/R后细胞损伤,并对小鼠脑缺血再灌注损伤具有保护作用。

TRPM7和BTG2在宫颈癌组织中的表达及临床意义

目的探讨瞬时受体电位M7通道(TRPM7)和B细胞迁移基因2(BTG2)在宫颈癌组织中的表达及临床意义。方法选取2018年5月至2020年5月石家庄市妇幼保健院收治的110例宫颈癌患者作为研究对象,术中取其肿瘤组织及癌旁组织,根据随访情况分为预后良好组与预后不良组。采用免疫组化法检测癌旁组织和肿瘤组织中TRPM7、BTG2蛋白表达,分析TRPM7、BTG2蛋白表达水平与患者临床病理特征的关系,比较预后不良组与预后良好组肿瘤组织中TRPM7、BTG2蛋白表达,采用Cox回归分析宫颈癌患者预后的影响因素,采用Kaplan-Meier曲线分析TRPM7、BTG2水平与宫颈癌患者预后的关系。结果与癌旁组织比较,肿瘤组织中TRPM7蛋白表达水平升高,BTG2蛋白表达水平降低(P<0.05)。TRPM7、BTG2蛋白表达水平与肿瘤分化程度、淋巴结转移、恶性肿瘤国际临床病理(TNM)分期有关(P<0.05)。与预后良好组比较,预后不良组肿瘤组织中TRPM7蛋白表达水平升高,BTG2蛋白表达水平降低(P<0.05)。TRPM7、TNM分期(Ⅲ期)、肿瘤低分化程度、淋巴结转移是宫颈癌患者预后的危险因素(P<0.05),BTG2是宫颈癌患者预后的保护因素(P<0.05)。TRPM7高表达组3年生存率低于TRPM7低表达组(P<0.05);BTG2高表达组3年生存率高于BTG2低表达组(P<0.05)。结论宫颈癌患者肿瘤组织中TRPM7蛋白表达上调,BTG2蛋白表达下调,均与宫颈癌预后有关。

瞬时受体电位阳离子通道亚家族M成员2在小鼠肝缺血再灌注损伤模型中的作用及机制

目的:观察瞬时受体电位阳离子通道亚家族M成员2(transient receptor potential cation channel subfamily M member 2,TRPM2)在小鼠肝缺血再灌注损伤(hepatic ischemia-reperfusion injury,HIRI)模型中的作用及可能的机制。方法:60只成年雄性C57BL/6小鼠随机分为假手术组(S组)、模型组(M组)、TRPM2腺病毒干扰载体预处理组(T组)和TRPM2腺病毒对照载体预处理组(C组)(均n=15)。取各组小鼠灌注前肝组织,采用荧光显微镜观察腺病毒感染效率,利用real-time PCR检测腺病毒对TRPM2的沉默效率。各组小鼠分别于再灌注2,4和8 h抽取腹主动脉血并获取肝组织,分别检测血清中谷丙转氨酶(alanine amino-transferase,ALT)和谷草转氨酶(aspartate amino-transferase,AST)活性。采用HE染色观察肝组织病理学变化;蛋白质印迹法检测肝中TRPM2和Rac家族小GTP酶1(Rac family small GTPase 1,RAC1)蛋白质的表达量变化;并通过酶联免疫吸附试验检测肝中丙二醛(malondialdehyde,MDA)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)及髓过氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)活性的变化。结果:与S组和M组相比,T组和C组小鼠肝组织可见大量绿色荧光。与S组、M组及C组相比,T组小鼠肝组织中TRPM2 mRNA的表达量显著降低(均P<0.05)。光镜下S组小鼠肝细胞形态正常;M组和C组小鼠肝窦扩张和淤血、肝细胞变性、小叶中央坏死及大量炎症细胞浸润;与M组和C组相比较,T组小鼠肝细胞受损程度明显减轻。与S组相比较,M组、T组及C组小鼠血清中ALT及AST活性在再灌注2,4和8 h均显著升高(均P<0.05);与M组和C组相比较,T组小鼠血清中ALT及AST活性在再灌注2,4和8 h均显著降低(均P<0.05)。与M组和C组相比较,T组小鼠中SOD活性在再灌注2,4和8 h均显著升高(均P<0.05),而MDA和MPO活性均显著降低(均P<0.05)。T组小鼠肝组织中TRPM2和RAC1蛋白质表达量在再灌注2,4和8 h较M组和C组均显著降低(均P<0.05)。结论:TRPM2腺病毒干扰载体预处理能有效沉默小鼠肝组织中TRPM2基因表达,并能减轻HIRI,该机制可能与抑制氧化应激和降低RAC1蛋白质表达水平有关。

瞬时受体电位M2型离子通道配体及功能研究进展

瞬时受体电位M2型(transient receptor potential melastain 2,TRPM2)离子通道作为配体门控的非选择性阳离子通道,在大脑中分布广泛,主要介导Na^+和Ca^(2+)等阳离子内流,使细胞去极化、胞内Ca^(2+)浓度升高,进而参与细胞相关的病理生理过程。高Ca^(2+)浓度或氧化应激等因素直接或间接作用下胞内生成的大量腺苷二磷酸核糖(adenosine diphosphate ribose,ADPR)与TRPM2通道的NUDT9-H结构域结合,从而激活TRPM2通道。虽然TRPM2介导许多病理过程,但是现有的TRPM2通道的拮抗剂尚缺乏特异性,因此通过寻找和研究其特异性拮抗剂有望使TRPM2通道成为诸多相关疾病的潜在治疗靶点。

瞬时受体电位M2型离子通道在神经系统疾病中的作用研究进展

瞬时受体电位M2型(TRPM2)离子通道是可渗透钙离子的非选择性阳离子通道,在神经炎症、缺血再灌注脑损伤、神经退行性病变、神经病理性疼痛、癫痫等多种神经系统疾病中发挥重要作用。在缺血再灌注脑损伤中,TRPM2通过调节谷氨酸离子N-甲基-D-天冬氨酸受体不同亚基、响应钙离子/锌离子信号,介导神经元死亡。在阿尔茨海默病中,TRPM2被β-淀粉样肽生成的活性氧激活形成恶性正反馈循环诱导神经元死亡,并在胶质细胞中通过促进炎症反应和氧化应激参与其病理过程。在癫痫中,TRPM2基因敲除通过抑制自噬和凋亡相关蛋白,减轻癫痫引起的神经元变性。本文总结了近年来TRPM2通道在多种中枢神经系统疾病发病机制中的作用及其潜在的药物研发和临床应用前景。

动脉瘤性蛛网膜下腔出血患者外周血单个核细胞中瞬时受体电位通道M2水平与介入治疗预后的关系

目的 分析动脉瘤性蛛网膜下腔出血(aSAH)患者外周血单个核细胞中瞬时受体电位通道M2(TRPM2)水平与介入治疗预后的关系。方法 选取2019年8月至2021年5月在三亚市中医院接受介入治疗的148例aSAH患者作为研究对象。用Ficoll密度梯度离心法和蛋白质免疫印迹法检测外周血单个核细胞中TRPM2水平。用改良Rankin量表(mRS)评分评价介入治疗90 d后预后。用logistic回归分析TRPM2与aSAH患者介入治疗预后的关系。结果 根据随访后m RS评分将患者分为预后良好组(n=107)和预后不良组(n=41)。预后良好组年龄、Hunt-Hess分级Ⅲ级占比、脑血管痉挛占比和Glasgow昏迷量表(GCS)评分低于预后不良组(均P<0.05)。预后良好组治疗前后TRPM2水平低于预后不良组(均P<0.05)。治疗后TRPM2>0.28和Hunt-Hess分级Ⅲ级是a SAH患者预后的独立危险因素(P<0.05)。结论 aSAH患者介入治疗后TRPM2水平高与预后不良有关。

瞬时受体电位M2通道:氧化应激敏感的离子通道

瞬时受体电位(TRP)通道是位于细胞膜上的一类重要的阳离子通道超家族,根据氨基酸序列的同源性,可将已发现的TRP通道分为7个不同的亚家族,瞬时受体电位M2(TRPM2)通道隶属于TRPM家族。越来越多证据表明,TRPM2通道参与如胰岛素分泌和释放、炎性细胞因子分泌、氧化应激介导的细胞死亡等多种病理生理过程。TRPM2离子通道作为氧化应激反应感受器,可被多种因子激活和影响,有望成为氧化应激相关疾病的一个潜在治疗靶点。

瞬时受体电位M2型离子通道在神经退行性病变和阿尔茨海默病病理学中的作用（英文）

神经退行性病变是一种可导致神经细胞渐进性退变或死亡的不可治愈性疾病。该疾病可诱发功能性运动障碍以及精神问题,比如痴呆。在诸多种类的神经退行性病变中,阿尔茨海默病占据最大比例。瞬时受体电位M2型(TRPM2)离子通道是一个可通过钙离子的非选择性阳离子通道。研究表明,TRPM2离子通道有可能通过不同路径(包括炎症路径)参与阿尔茨海默病的病理过程。本综述主要通过对TRPM2与Aβ、氧化应激以及钙离子之间关系的讨论,总结概括了TRPM2在阿尔茨海默病病理学中的作用,也对近期TRPM2药理学领域的研究进展进行了探讨,并对如何进一步研究TRPM2在阿尔茨海默病中的作用进行了展望。

氧化应激的细胞感受器:瞬时受体电位M2型

瞬时受体电位M2型（transient receptor potential melastatin2,TRPM2）是一种非选择性阳离子通道,广泛存在于哺乳类动物组织中,感受氧化应激刺激。氧化应激通过氧化代谢物如过氧化氢（H2O2）等引起细胞内腺苷二磷酸核糖（ADP-ribose）的生成,ADP-ribose进而使TRPM2通道开放。

沉默TRPM7对无镁外液致痫Neuro-2a细胞炎症反应的影响

目的观察沉默瞬时受体电位M7通道(transient receptor potential melastatin 7,TRPM7)对无镁外液致痫小鼠脑神经瘤Neuro-2a细胞炎症反应的影响。方法Neuro-2a细胞经脂质体转染TRPM7 siRNA,经无镁外液培养3 h建立癫痫细胞模型。实验分为4组:对照组(Control)、癫痫组(EP)、癫痫转染组(EP+si-TRPM7)和癫痫转染阴性对照组(EP+si-NC)。成模后24 h,利用实时荧光定量PCR技术检测TRPM7 mRNA表达;利用Western Blot检测HMGB1和TLR4蛋白的表达;利用ELISA方法检测上清液中TNF-α、IL-1β和IL-6的含量;CCK-8法检测细胞活力。结果成模后24 h,与Control组比较,EP组TRPM7 mRNA、HMGB1和TLR4蛋白表达增多,上清液中TNF-α、IL-1β和IL-6含量增多,细胞活力降低。与EP+si-NC组比较,EP+si-TRPM7组TRPM7 mRNA、HMGB1和TLR4蛋白表达减少,上清液中TNF-α、IL-1β和IL-6含量减少,细胞活力增高(P<0.01)。结论沉默TRPM7能抑制HMGB1/TLR4通路,减轻炎症反应,对无镁外液致痫细胞有保护作用。

薄荷醇通过激活瞬时受体电位M8(TRPM8)促进BEAS-2B人支气管上皮细胞的细胞因子分泌

目的探讨瞬时受体电位M8(TRPM8)在薄荷醇诱导BEAS-2B人支气管上皮细胞表达气道上皮源性细胞因子白细胞介素25(IL-25)、IL-33和胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP)中的作用及其相关信号转导机制。方法用2 mmol/L薄荷醇处理BEAS-2B细胞1、2、3、4 h,选择IL-25、IL-33、TSLP或Ca^(2+)表达较高的时间组,通过小干涉RNA(siRNA)特异性敲低TRPM8(si-TRPM8),采用细胞内钙离子螯合剂1,2-二(2-氨基苯氧基)乙烷-N,N,N′,N′-四乙酸四乙酰氧甲基酯(BAPTA-AM)及核因子κB(NF-κB)抑制剂吡咯烷二硫代氨基甲酸盐(PDTC)处理。CCK-8法检测细胞活力;实时荧光定量PCR检测IL-25、IL-33和TSLP mRNA表达;ELISA检测培养上清液IL-25、IL-33和TSLP蛋白水平;Fluo-4 AM负载结合流式细胞术检测胞内Ca^(2+)荧光强度;Western blot法检测si-TRPM8对BEAS-2B细胞合成TRPM8蛋白的干扰效率及NF-κB p65蛋白表达的影响。结果与空白对照组比,薄荷醇组IL-25、IL-33、TSLP mRNA及蛋白、胞内Ca^(2+)水平和NF-κB p65蛋白表达均增加;敲低TRPM8后,抑制薄荷醇诱导的Ca^(2+)、IL-25、IL-33、TSLP和NF-κB p65表达增加,BAPTA-AM和PDTC均可抑制薄荷醇诱导的IL-25、IL-33和TSLP的高表达。结论薄荷醇通过激活TRPM8引起Ca^(2+)浓度升高、激活NF-κB通路诱导BEAS-2B支气管上皮细胞IL-25、IL-33和TSLP的分泌。

瞬时受体电位M2型在中枢神经系统疾病中的研究进展

瞬时受体电位M2型(TRPM2)属于TRP超家族中TRPM亚家族的一员,是位于细胞膜上的一类重要的非选择性阳离子通道。该通道在脑中高度表达,在介导细胞对多种刺激的反应中起到重要作用,并通过调节氧化应激、炎症、胰岛素的分泌与释放等过程参与多种疾病。越来越多的证据表明TRPM2从不同途径影响中枢神经系统疾病的发生发展,但详细机制尚不明确。研究TRPM2通道与中枢神经系统疾病之间的关系,有助于为疾病的预防和治疗提供新的思路和方法。

瞬时受体电位通道M2在恶性肿瘤中的作用

瞬时受体电位通道M2(transient receptor potential channel melastatin 2,TRPM2)是人体中一个重要的Ca^(2+)通透性非选择性阳离子通道,通常表达于正常细胞胞膜和溶酶体膜上,并在氧化应激中发挥重要的离子调节作用。但近年发现,TRPM2也在多种恶性肿瘤(神经母细胞瘤,舌/喉鳞状细胞癌,肺癌,乳腺癌,胃癌,胰腺癌,膀胱癌,前列腺癌和T细胞白血病)中高表达,能通过调节细胞线粒体功能和自噬促进肿瘤细胞的生物学能量而促进其生存能力,通过调节抗氧化物水平增强细胞对氧化刺激的耐受力而表现出化疗抵抗作用。同时,在肿瘤细胞膜上该通道大量激活又对化疗药物联合使用发挥协同作用。此外,TRPM2能通过激活多种不同的分子的信号通路,促进细胞增殖、侵袭和转移能力。总之,根据肿瘤的不同,TRPM2对肿瘤细胞生物学行为的调控机制也不同,甚至具有复杂的双重作用。所以,对TRPM2的生化及分子机制的研究必将使我们对肿瘤的发生发展的认识更加全面。本文将从TRPM2蛋白质的结构,生理功能及肿瘤机制等不同角度系统阐述TRPM2的研究现状和进展。

瞬时受体电位M2抑制剂A10对缺糖缺氧后复糖复氧细胞的保护作用

目的:探讨瞬时受体电位M2(TRPM2)抑制剂A10对缺糖缺氧后复糖复氧(OGD/R)细胞模型的保护作用。方法:采用SH-SY5Y细胞系制备OGD/R损伤模型。将细胞随机分为空白对照组、模型对照组和A10组。细胞计数试剂盒8检测细胞存活率;活性氧检测试剂盒检测细胞活性氧水平;四甲基罗丹明甲酯法检测线粒体膜电位;一步法TUNEL细胞凋亡检测试剂盒检测凋亡细胞数量;蛋白质印迹法测定cleaved caspase 3蛋白表达。结果:相对于3、20、30、50和100μmol/L,10μmol/L浓度的A10具有较低的细胞毒性及较好的通道活性抑制作用。与模型对照组比较,A10组活性氧水平降低(P<0.05),线粒体膜电位降低程度改善(P<0.05),凋亡细胞数减少(P<0.05),凋亡相关蛋白cleaved caspase 3表达减少(P<0.05)。结论:A10可以通过抑制TRPM2通道功能、减少细胞外钙离子内流、降低细胞活性氧水平、稳定线粒体膜电位水平和减少细胞凋亡缓解OGD/R后细胞的损伤。

黄芪提取物调节TRPM2表达的抗急性药物性肝损伤作用研究

目的 探讨黄芪提取物(AR)调节TRPM2表达的抗急性DILI作用机制。方法 雄性小鼠39只,随机分为对照组(n=7),对乙酰氨基酚(APAP)模型组,AR低、高剂量组及N-乙酰半胱氨酸(NAC)治疗组,每组各8只。其中AR低、高剂量组分别以50、75 mg/kg的AR灌胃,NAC组以100 mg/kg灌胃,每日1次,共3 d。第4天,除对照组外,其余各组以350 mg/kg剂量APAP灌胃,12 h后处死全部小鼠,收集血清及肝组织。检测血清ALT、AST活性;HE染色观察肝组织病理学变化;免疫组化染色观察肝组织髓过氧化物酶(MPO)、瞬时受体电位M2型离子通道(TRPM2)表达。体外实验以不同剂量APAP(0、5、10、20 mM)孵育AML12细胞12、24 h,筛选出APAP肝细胞损伤最佳浓度和作用时间,并动态检测肝细胞TRPM2基因及蛋白表达。肝细胞分为对照组,模型组,AR低、高剂量组及NAC对照组,除对照组外,其余各组以20 mM APAP诱导损伤,并分别以125、250μg/mL的AR、50 mM NAC孵育24 h。采用CCK8检测细胞活力,qRT-PCR检测肝细胞TRPM2基因表达、Western Blot检测蛋白表达。结果 与对照组比较,APAP可诱导急性DILI,血清ALT、AST活性明显升高(F=35.717、F=18.997,P值均<0.01),肝组织结构破坏严重、肝细胞大块/亚大块坏死、中央静脉淤血;与模型组相比,AR能显著降低模型小鼠血清ALT、AST活性,减轻肝细胞坏死、肝组织MPO及TRPM2表达,具有明显的保肝作用,且AR高剂量组与NAC疗效相当。5 mM APAP孵育AML12细胞24 h明显诱导肝细胞损伤,且肝细胞TRPM2表达随着时间的延长而增加(F=25.408,P<0.01);与模型组相比,AR可提高肝细胞活力、降低肝细胞TRPM2表达。结论 黄芪提取物具有良好的保护APAP诱导急性DILI作用,其机制与抑制TRPM2表达相关。

人牙髓干细胞增殖与瞬时受体电位M7通道的作用

背景:瞬时受体电位M7通道广泛存在于机体组织和细胞,对细胞存活、增殖和维持细胞镁离子平衡是必须的。目的:探讨瞬时受体电位M7通道对人牙髓干细胞增殖的作用。方法:酶消化法分离培养人牙髓干细胞,运用不同浓度(50,100μmol/L)瞬时受体电位M7通道抑制剂2-氨基乙基二苯硼酸酯作用于人牙髓干细胞72h后,Western-blot检测2-氨基乙基二苯硼酸酯对瞬时受体电位M7通道蛋白水平的影响,MTT法观察其对人牙髓干细胞增殖的影响;构建特异抑制瞬时受体电位M7通道表达慢病毒载体,运用慢病毒感染人牙髓干细胞。进行RT-PCR和Western-blot沉默效果分析,在1,3,5,7d进行MTT法检测特异沉默瞬时受体电位M7通道后对细胞增殖的影响。结果与结论:50,100μmol/L2-氨基乙基二苯硼酸酯均能抑制瞬时受体电位M7通道蛋白水平的表达并且能明显抑制人牙髓干细胞增殖(P<0.01),特异性沉默瞬时受体电位M7通道表达后,在不同时间段人牙髓干细胞增殖能力均明显降低(P<0.01)。提示瞬时受体电位M7通道对维持人牙髓干细胞增殖能力有重要作用。

TRPM2通道与炎症反应

瞬时感受器电位M2型(TRPM2)通道是一种非谷氨酸依赖性离子通道,是瞬时受体电位(TRP)通道超家族成员之一。不同致病因素作用于各种免疫细胞,引起TRPM2通道开放,导致阳离子内流,尤其是Ca^(2+),进而调节诸多信号通路,引起炎症反应的发生发展。本文聚焦TRPM2通道在炎症反应中的免疫学作用,期望为靶向TRPM2通道决策炎症相关疾病的治疗措施拓展新的思路。

TRPM2通道在星形胶质细胞氨中毒中的作用

目的:通过建立星形胶质细胞氨中毒的模型,探讨瞬时受体电位M2(TRPM2)阳离子通道在其中发挥的作用。方法:分离并培养小鼠原代星形胶质细胞。实验分为5组:对照组、氯化铵处理组、氯化铵+3-氨基苯甲酰胺(3-AB)处理组、氯化铵+PJ-34处理组和TRPM2基因敲除小鼠+氧化铵处理组。测定细胞的活性、caspase-3活性、细胞坏死和体积大小,以此来衡量氨中毒的程度。用全细胞膜片钳记录TRPM2通道电流变化。结果:氯化铵引起细胞肿胀伴随着细胞坏死。聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)抑制剂3-AB和PJ-34抑制了氯化铵引起的阳离子电流,并减轻了氯化铵引起的相应细胞伤害。TRPM2基因敲除小鼠组细胞的伤害明显减轻(P<0.01)。结论:TRMP2通道的激活是细胞暴露于氯化铵后发生肿胀、坏死的必要步骤;氯化铵诱导的星形胶质细胞肿胀与坏死密切相关。

吴茱萸碱抑制M2型巨噬细胞功能的机制研究

目的:吴茱萸碱是中药吴茱萸重要生物碱成分之一,其具有明显的抗炎作用,但具体机制不清。研究显示瞬时受体电位香草醛亚型1受体(Transient Receptor Potential Vanilloid Type 1 Channel,TRPV1)对炎症反应具有明显的抑制作用,而吴茱萸碱可激活TRPV1受体。本研究以人单核细胞(THP-1)培养模型,探明吴茱萸碱对M2型巨噬细胞功能的影响及TRPV1受体参与该过程中的作用,从而阐明吴茱萸碱抑制炎症反应的分子生物机制。方法:在THP-1细胞培养模型上,观察吴茱萸碱对白介素-4(Interleukin-4,IL-4)诱导的M2型巨噬细胞功能的影响,以及特异性TRPV1受体拮抗剂Capsazepine(CAPZ)对该过程的影响,并分别利用ELISA、荧光定量PCR和western blot确定M2型巨噬细胞功能指标,其中包括TGF-β1的产生、Arginase-1和Mannose Receptor m RNA和蛋白的表达。结果:本研究发现吴茱萸碱明显抑制IL-4诱导的M2型巨噬细胞功能亚型,其主要表现为TGF-β1分泌产生下降(P<0.05),同时伴有Arginase-1和Mannose Receptor m RNA和蛋白表达的降低(P<0.05),以上结果可被特异性TRPV1受体拮抗剂CAPZ所阻断(P<0.05)。结论:本研究显示吴茱萸碱通过激活TRPV1受体抑制M2型巨噬细胞功能反应,从而实现其抑制炎症反应的作用。

TRPM2在H9N2猪流感病毒感染小鼠PMVEC损伤中的表达与作用

目的:探讨瞬时受体电位阳离子通道M2(TRPM2)在H9N2猪流感病毒(H9N2-SIV)感染小鼠肺微血管内皮细胞(PMVEC)损伤中的表达与作用。方法:采用H9N2-SIV感染小鼠PMVEC (每组设立3个重复),在病毒感染后24 h和48 h进行采样,根据试剂盒方法测定超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、活性氧簇(ROS)和一氧化氮合成酶(NOS)的变化;电镜观察PMVEC超微结构变化;利用Transwell培养PMVEC单层细胞,测定跨膜电阻及辣根过氧化物酶渗出率;real-time PCR和Western blot方法检测TRPM2 mRNA与蛋白的表达;采用Annexin V/PI双染法观察病毒感染细胞的凋亡情况。结果:H9N2-SIV感染后小鼠PMVEC中GSH-Px和SOD活性显著下降,而ROS水平和NOS活性显著高于未感染对照组(P<0.01);病毒感染细胞细胞器明显减少,出现空泡化结构,线粒体基质减少,细胞发生凋亡;病毒感染后跨膜电阻值明显降低,辣根过氧化物酶渗出率则显著增加;TRPM2 mRNA和蛋白表达随病毒感染时间增加显著升高(P<0.01);Annexin V/PI双染法显示病毒感染细胞的胞膜荧光显著增强,同时大量细胞的胞核显现红色,表明大量细胞发生凋亡现象。结论:TRPM2在H9N2-SIV感染PMEVC过程中表达明显增强,提示其参与了H9N2-SIV感染导致的PMVEC损伤和凋亡过程。