白芍通过调控M2巨噬细胞极化有效缓解何首乌引发的特异质肝损伤

特异质药物性肝损伤(IDILI)是一种因药物引起的严重不良反应,通常发生在少数易感人群中。何首乌(PM)虽是一个常用的补益药,但许多临床数据已证明PM会引发IDILI。大多数IDILI的发生与机体免疫应激相关,然而对于PM导致IDILI的内在机制仍尚未被阐明。白芍(PRA)在临床上常与其他中药配伍,具有增效减毒缓解炎症等功效。但PRA是否能够缓解PM引发的肝损伤及内在机制仍未可知。在本研究中,通过网络药理学分析预测了PRA配伍PM在天然免疫中的相关靶点可能与巨噬细胞极化相关。同时采用非肝毒性剂量的LPS复制免疫应激模型,通过肝功能指标及病理等结果显示,当PM与PRA联用后,肝损伤的程度有所改善,相关促炎因子TNF-α和IL-6下降,M2巨噬细胞相关因子也有所上升。在体外,PM抑制了小鼠骨髓来源巨噬细胞(BMDMs)中IL-4诱导的Arg1及M2巨噬细胞标记物的表达,PRA则能够促进M2巨噬细胞极化,当二者配伍时,PRA可以改善PM对M2巨噬细胞极化的抑制作用。总之,这些研究结初步表明PRA能够通过促进M2巨噬细胞极化,降低炎症因子的表达,从而缓解PM引发的肝损伤,为解决何首乌引发的IDILI提供了新的思路和方案。

龙胆泻肝汤对实验性自身免疫性葡萄膜炎大鼠M1/M2巨噬细胞极化平衡的调控作用

目的探讨龙胆泻肝汤(Longdan Xiegan decoction,LXD)对实验性自身免疫性葡萄膜炎(EAU)大鼠M1/M2巨噬细胞极化平衡的调控作用。方法将48只雌性Lewis大鼠随机分为正常对照组、EAU模型组和LXD干预组,其中EAU模型组和LXD干预组大鼠首先诱导并建立EAU模型,LXD干预组大鼠每天给予LXD灌胃处理12 d,EAU组大鼠给予相同体积的PBS缓冲液灌胃处理12 d。实时荧光定量PCR(Q-PCR)和酶联免疫吸附实验(ELISA)检测免疫后12 d三组大鼠脾脏、淋巴结及眼组织中iNOS和Arg1 mRNA及蛋白的表达;此外,采用流式细胞仪检测以上各组织中M1型、M2型巨噬细胞极化水平,分析LXD对EAU大鼠M1/M2巨噬细胞极化平衡的影响。结果免疫后12 d,与正常对照组相比,EAU模型组大鼠各组织中iNOS mRNA和蛋白表达均升高,而Arg1 mRNA和蛋白表达均降低(均为P<0.05);与EAU模型组相比,LXD干预组大鼠脾脏、淋巴结以及眼组织中iNOS表达均降低,而Arg1表达均升高(均为P<0.05)。流式细胞仪检测结果显示,免疫后12 d,EAU模型组大鼠各组织中M1型巨噬细胞极化水平升高,而M2型巨噬细胞极化水平降低(均为P<0.05),呈现不均衡表达;与EAU模型组相比,LXD干预组大鼠各组织中M1型巨噬细胞极化水平下降,而M2型巨噬细胞极化水平升高,两者比例逐渐恢复均衡。结论在EAU大鼠中,M1/M2巨噬细胞极化比例紊乱,LXD可明显降低M1型巨噬细胞极化水平以及相关因子iNOS表达,提高M2型巨噬细胞极化水平以及相关因子Arg1表达,从而发挥对EAU大鼠M1/M2巨噬细胞极化平衡的调控作用。

西地那非通过促进巨噬细胞M2型极化缓解慢性盆腔疼痛大鼠痛觉和炎症

目的:探讨磷酸二酯酶5(PDE5)抑制剂西地那非对巨噬细胞极化介导的慢性盆腔疼痛痛觉和炎症的机制。方法:32只成年Wistar大鼠随机分为4组:Sham组、实验性自身免疫性前列腺炎(EAP)组、Sildenafil^(+)EAP组、MET^(+)Sildenafil^(+)EAP组,每组8只。皮下注射前列腺抗原(PAg)和弗氏完全佐剂诱导EAP模型,Sham组注射等量生理盐水,西地那非治疗EAP大鼠,另外,Sildenafil^(+)EAP处理基础上注射巨噬细胞M2型极化抑制剂二甲双胍。HE染色分析前列腺组织病理变化;von Frey纤维法检测大鼠盆腔痛觉反应率;ELISA检测血清细胞因子IL-10和TNF-α水平。流式细胞术检测血清iNOS^(+)和CD16/32^(+)巨噬细胞数量及CD206^(+)、CD10^(+)巨噬细胞数量。结果:与Sham组相比,EAP组前列腺腹侧腺体组织出现明显局灶性或多灶性炎症,盆腔痛觉反应率、血清炎症因子TNF-α水平、巨噬细胞M1型极化特征iNOS^(+)和CD16/32^(+)细胞数量显著升高(均P<0.05),而巨噬细胞M2型极化特征IL-10水平和CD206^(+)、CD10^(+)巨噬细胞数量显著减少(均P<0.05)。与EAP组相比,Sildenafil^(+)EAP组盆腔痛觉反应率、TNF-α水平、iNOS^(+)和CD16/32^(+)细胞数量显著降低(均P<0.05),而IL-10水平和CD206^(+)、CD10^(+)巨噬细胞数量显著升高(均P<0.05)。与Sildenafil^(+)EAP组相比,MET^(+)Sildenafil^(+)EAP组盆腔痛觉反应率、TNF-α水平、iNOS^(+)和CD16/32^(+)细胞数量显著升高(均P<0.05),而IL-10水平和CD206^(+)与CD10^(+)巨噬细胞数量显著降低(均P<0.05)。结论:PDE5抑制剂西地那非通过促进M2巨噬细胞极化阻断慢性盆腔疼痛和炎症。

CTRP9通过调节M1/M2巨噬细胞极化改善大鼠心肌梗死后早期心功能的临床研究

目的探讨C1q/肿瘤坏死因子相关蛋白9(CTRP9)通过调节M1/M2巨噬细胞极化对大鼠心肌梗死后早期心功能的改善作用。方法将SD大鼠60只随机分为对照组、模型组、干预组,每组20只。采用结扎左冠脉前降支方法制作模型组、干预组的心肌梗死大鼠模型,干预组采用pcDNA3.1-CTRP9重组质粒进行干预,比较各组一般情况、心肌梗死面积、心功能[左心射血分数(LVEF)、左心室舒张末期内径(LVDd)、心室收缩末期内径(LVDs)、短轴缩短率(FS)]、心肌细胞凋亡率、M1/M2巨噬细胞极化情况[M1型巨噬细胞F4/80阳性和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)阳性百分比、M2型巨噬细胞F4/80阳性和精氨酸酶1(ARG-1)阳性百分比]、心肌组织中CTRP9蛋白表达量。结果干预组大鼠精神状态、毛发生长、饮食活动、存活等一般情况较模型组好转。模型组和干预组心肌细胞凋亡率、心肌梗死面积、LVDs、LVDd、M1型巨噬细胞F4/80阳性和iNOS阳性百分比高于对照组(P<0.05)。干预组心肌细胞凋亡率、心肌梗死面积、LVDs、LVDd、M1型巨噬细胞F4/80阳性和iNOS阳性百分比显著低于模型组(P<0.05)。模型组和干预组LVEF、FS、M2型巨噬细胞F4/80阳性和ARG-1阳性百分比低于对照组(P<0.05)。干预组LVEF、FS、M2型巨噬细胞F4/80阳性和ARG-1阳性百分比高于模型组(P<0.05)。模型组心肌组织中CTRP9蛋白表达量低于对照组(P<0.05),干预组心肌组织中CTRP9蛋白表达量高于模型组和对照组(P<0.05)。结论CTRP9可通过促进M1/M2巨噬细胞极化改善心肌梗死后早期心功能。

外泌体来源的circ_0003759在肝细胞癌的表达及其诱导巨噬细胞M2型极化的临床意义

目的探讨外泌体来源的circ_0003759在肝细胞癌(HCC)中的表达情况,及其诱导巨噬细胞M2极化对HCC预后的影响。方法基于GSE97332联合HCC患者血清外泌体环状RNA(cirRNAs)测序数据筛选出circ_0003759。透射电镜及蛋白质免疫印迹法鉴定及检测外泌体,荧光定量PCR检测外泌体circ_0003759表达水平。PKH26标记HCC外泌体与人巨噬细胞共培养,流式细胞术检测巨噬细胞M2型极化标记物CD206和CD209。构建sh_circ_0003759慢病毒并转染至肝癌HCCLM3细胞,抽提外泌体与人巨噬细胞共培养,检测巨噬细胞M2型极化情况。CIBERSORT分析HCC微环境免疫细胞浸润丰度,Kaplan-Meier法和Cox比例风险回归模型分析M2型巨噬细胞对HCC预后的影响。基因集富集分析(GSEA)巨噬细胞M2型极化的相关信号通路。结果circ_0003759在HCC组织和HCC血清外泌体中表达显著增加(P<0.05)。将HCC外泌体与人巨噬细胞共同培养后,巨噬细胞CD206和CD209阳性细胞比率显著上升(P<0.05)。肝癌HCCLM3细胞转染sh_circ_0003759,将其外泌体与人巨噬细胞共同培养后,巨噬细胞CD206和CD209阳性细胞比率显著下降(P<0.05)。此外,HCC组织中M2型巨噬细胞的浸润相对丰度明显高于对照组(P<0.001),生存分析结果表明M2型巨噬细胞相对丰度高的HCC患者预后较差(P<0.05)。GSEA分析显示巨噬细胞M2型极化与补体、炎性反应、干扰素γ及抗肿瘤坏死因子α/细胞核因子κB免疫信号通路的抑制相关。结论HCC外泌体高表达circ_0003759并诱导巨噬细胞M2型极化,与HCC预后差、免疫抑制状态相关。

HTRA3基因对脉络膜新生血管和M2型巨噬细胞极化的影响

目的 探讨HtrA丝氨酸肽酶3(HTRA3)基因对脉络膜新生血管(CNV)和M2型巨噬细胞极化的影响。方法 收集30例湿性年龄相关性黄斑变性(wAMD)患者(wAMD组)和30例同期健康体检者(健康组)的空腹静脉血,通过qRT-PCR检测血清HTRA3 mRNA水平。将RF/6A细胞随机分为对照组、NC-sh组和HTRA3-sh组,使用Lipofectamine2000将NC-shRNA和HTRA3-shRNA慢病毒载体分别转染到NC-sh组和HTRA3-sh组RF/6A细胞中,通过qRT-PCR和Western blot检测HTRA3的转染情况。将RF/6A细胞随机分为N组、H组、H+NC-sh组和H+HTRA3-sh组,细胞转染后,N组RF/6A细胞在完全RPMI 1640培养基中进行常氧培养,其他组细胞在添加200 mmol·L^(-1)氯化钴(CoCl_(2))的RPMI 1640培养基中进行低氧培养,使用Matrigel测定小管形成。将C57BL/6J小鼠随机分为对照组、CNV组、CNV+NC-sh组和CNV+HTRA3-sh组,每组12只。对照组为未建模的小鼠,其他组为激光诱导的CNV模型小鼠。向CNV+NC-sh组和CNV+HTRA3-sh组小鼠玻璃体内分别注射1μL滴度为1×10^(11)TU·mL^(-1)的NC-shRNA和HTRA3-shRNA慢病毒载体。对照组和CNV组小鼠注射PBS。注射后7 d,对小鼠进行荧光素眼底血管造影(FFA)检测和眼球苏木精伊红(HE)染色。通过qRT-PCR检测RF/6A细胞或各组小鼠脉络膜组织中HTRA3、类几丁质酶3样蛋白3(Ym-1)、精氨酸酶1(Arg-1)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、环氧化酶-2(COX-2)和血管内皮生长因子(VEGF)mRNA水平。通过Western blot检测RF/6A细胞或脉络膜组织中HTRA3、VEGF和细胞核核因子κB(NF-κB) p65的蛋白表达水平。结果 与健康组比较,wAMD组患者的血清HTRA3 mRNA水平升高(t=11.804,P<0.001)。与对照组和NC-sh组比较,HTRA3-sh组RF/6A细胞的HTRA3 mRNA和蛋白表达水平降低(P<0.05)。与N组比较,H组RF/6A细胞的闭合管腔数量、HTRA3和VEGF的mRNA和蛋白表达水平均增加(均为P<0.05)。与H+NC-sh组比较,H+HTRA3-sh组RF/6A细胞的闭合管腔数量、HTRA3和VEGF的mRNA和蛋白表达水平均减少(均为P<0.05)。与对照组比较,CNV组小鼠的HTRA3的mRNA和蛋白表达水平增加,CNV相对荧光强度升高,Ym-1和Arg-1 mRNA水平升高,iNOS和COX-2 mRNA水平降低,细胞核NF-κB p65蛋白表达水平升高(均为P<0.05)。与CNV+NC-sh组比较,CNV+HTRA3-sh组小鼠的HTRA3的mRNA和蛋白表达水平减少,CNV相对荧光强度降低,Ym-1和Arg-1 mRNA水平降低,iNOS和COX-2 mRNA水平升高,细胞核NF-κB p65蛋白表达水平降低(均为P<0.05)。结论 下调HTRA3可抑制CNV形成和M2型巨噬细胞极化,HTRA3可能是防治wAMD的重要潜在靶点。

巨噬细胞M1/M2型极化对糖尿病视网膜病变进程的影响及相关性分析

目的分析巨噬细胞(Mø)M1/M2型极化对糖尿病视网膜病变(DR)进程的影响,为临床治疗提供参考。方法选取2020年6月至2022年7月南华大学附属第二医院收治的97例DR患者(研究组)及同期105例单纯糖尿病(DM)患者(对照组)为研究对象,比较两组患者临床资料,分析Mø表型检测的诊断价值,以及M1/M2型Mø与炎症因子、血糖水平、氧化应激反应标志物、DR进程的关系。结果研究组患者M1型、M1/M2型Mø占比均大于对照组,M2型Mø占比小于对照组(均P<0.05);M1/M2型Mø>7.275时诊断DM患者发生DR的灵敏度为83.51%,特异度为77.14%,曲线下面积(AUC)为0.8655(P<0.05);研究组患者白细胞介素-4(IL-4)、转化生长因子-β(TGF-β)、超氧化物歧化酶(SOD)水平均低于对照组,肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、丙二醛(MDA)水平均高于对照组(P<0.05);研究组患者M1/M2型Mø与IL-4、TGF-β、SOD水平均呈负相关,与TNF-α、iNOS、空腹血糖(FBP)、餐后2 h血糖(2 hBP)、MDA水平呈正相关(均P<0.05)。结论DR患者Mø由M2型向M1型极化过程中炎性反应与氧化应激反应加重,升高血糖水平,加速DR的恶性病理发展。

平喘颗粒调控M2型巨噬细胞极化改善哮喘小鼠气道炎症及气道重塑的实验研究

目的 观察平喘颗粒对哮喘小鼠气道炎症、气道重塑及M2型巨噬细胞极化相关因子的影响。方法 选择30只6~8周雌性BALB/C小鼠随机分为空白组、模型组、平喘颗粒组,采用卵清蛋白和氢氧化铝构建哮喘小鼠模型,给予平喘颗粒进行干预。采用HE和PAS染色检测各组小鼠肺组织病理形态变化;吉姆萨染色计数各组小鼠肺泡灌洗液中总细胞数、嗜酸性粒细胞数、中性粒细胞数、巨噬细胞数;ELISA法检测各组小鼠血清IgE含量及肺泡灌洗液中巨噬细胞M2标记物Arg1、白细胞介素-10(IL-10)的含量;real-time PCR检测各组小鼠肺组织中巨噬细胞M2标记物YM1、MRC1的水平;免疫荧光检测肺组织F4/80与MRC1的表达与共定位。结果 与模型组相比,平喘颗粒组小鼠肺组织炎性细胞浸润情况明显减少,气道黏液及杯状细胞明显减轻。与模型组相比,平喘颗粒组BALF中白细胞总数、嗜酸性粒细胞数量、中性粒细胞数量、巨噬细胞数量明显降低,差异有统计学意义(P <0.05)。平喘颗粒组小鼠血清中IgE水平明显低于模型组,但高于空白组,与模型组及空白组比较差异均有统计学意义(P <0.05)。与模型组相比,平喘颗粒组小鼠BALF中Arg1和IL-10水平明显降低(P <0.05),与空白组比较无明显差异(P> 0.05);平喘颗粒组小鼠肺组织中YM1、MRC1基因表达水平明显降低,比较差异有统计学意义(P <0.05),与空白组比较无明显差异(P> 0.05)。免疫荧光检测各组小鼠肺组织结果显示MRC1与F4/80的表达与共定位荧光强度明显降低。结论 平喘颗粒可以抑制哮喘小鼠气道炎症及气道重塑,其机制可能与本方能够抑制哮喘小鼠M2型巨噬细胞极化的相关因子有关。

STAT1诱导的LINC00987调节miR-223-3p/FZD4促进人胶质母细胞瘤相关巨噬细胞向M2型极化

目的本研究旨在探讨STAT1激活的LINC00987对人胶质母细胞瘤(GBM)相关巨噬细胞向M2型极化的影响。方法通过GEO数据库分析筛选出GBM中表达失调的lncRNAs。RT-qPCR检测LINC00987、miR-223-3p、卷曲蛋白4基因(FZD4)的表达。将人单核细胞白血病细胞系THP-1分别诱导成M0、M1、M2型巨噬细胞,并将GBM细胞与THP-1细胞共培养,流式细胞测量术检测CD14^(+)/CD206^(+)巨噬细胞的占比,ELISA检测M2型巨噬细胞相关因子(VEGF、TGF-β1)的表达。结果相对于癌旁组织和人正常神经胶质细胞系HEB,GBM组织和细胞中的LINC00987、FZD4表达上调而miR-223-3p表达下调(P<0.05)。在GBM细胞中,STAT1能够激活LINC00987并影响miR-223-3p/FZD4轴。过表达LINC00987能够促进GBM相关巨噬细胞向M2型极化(P<0.05)。敲减LINC00987则能够抑制GBM相关巨噬细胞向M2型极化,但该作用能被miR-223-3p抑制剂部分挽救(P<0.05)。敲减FZD4能够抑制GBM相关巨噬细胞向M2型极化,但该作用能被过表达LINC00987部分挽救(P<0.05)。结论STAT1激活的LINC00987调节miR-223-3p/FZD4轴诱导GBM相关巨噬细胞向M2型极化。

从少火生气理论探讨肾气丸促巨噬细胞M2型极化影响成骨的作用

目的基于少火生气理论探讨肾气丸原组方(SQW)和肾气丸去除桂枝、附子(SQQ)诱导巨噬细胞M2型极化对小鼠骨髓间充质干细胞(BMSC)成骨分化作用的效果差异。方法采用CCK8法分别检测SQW、SQQ对RAW264.7细胞存活率的影响,以确定药物干预的安全作用浓度。将RAW264.7细胞分为CON组、IL-4组、IL-4+SQW组、IL-4+SQQ组。将不同药物组诱导巨噬细胞M2型极化后分泌的细胞上清液作为条件培养基培养BMSC,评估BMSC成骨分化的能力。用碱性磷酸酶染色法(ALP)及茜素红染色法(ARS)检测各组BMSC成骨分化能力;使用免疫荧光技术(IF)检测BMSC成骨标志蛋白骨形态发生蛋白4(BMP4)、骨保护素(OPG)的分布和表达;使用蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测M2型巨噬细胞极化相关的精氨酸酶1(ARG1)、白细胞介素10(IL-10)的表达以及BMSC成骨相关的BMP4、RUNT相关转录因子2(RUNX2)的表达。结果与IL-4+SQQ组相比,IL-4+SQW组更加显著促进M2型巨噬细胞极化相关因子ARG1、IL-10上调(P<0.01),且其条件培养基培养的BMSC的ALP及ARS染色增强,成骨蛋白BMP4、OPG、RUNX2表达升高(P<0.05)。结论肾气丸原组方与肾气丸去除桂枝、附子两味药相比,具备更强的促进巨噬细胞M2型极化与增强BMSC成骨分化能力,为少火生气理论提供了实验依据。

乳酸诱导巨噬细胞M2型极化对黑色素瘤细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响

目的探究乳酸(LA)是否可通过调控巨噬细胞M2型极化影响黑色素瘤细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭。方法2021年1月至2022年2月采用细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测乳酸对细胞的毒性;使用乳酸干预巨噬细胞后的细胞上清液培养黑色素瘤细胞,经CCK-8法和流式细胞术检测细胞增殖和凋亡;经划痕愈合实验和Transwell法检测细胞迁移和侵袭。通过光学显微镜对乳酸干预后的巨噬细胞的形态进行观察,并通过ELISA检测巨噬细胞极化相关因子的表达情况。实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测乳酸对巨噬细胞中肿瘤蛋白翻译调节因子1(Tpt1)、肺腺癌转移相关转录本1(Malat1)表达的影响。结果乳酸对巨噬细胞Raw264.7和黑色素瘤细胞B16F10均无明显毒性(P>0.05)。5、10、20 mmol/L乳酸干预Raw264.7细胞后的上清液后,B16F10细胞活力[(125.36±7.88)%、(144.36±8.65)%、(167.28±10.12)%比(100.00±0.00)%]、划痕愈合率[(39.21±3.15)%、(52.65±3.87)%、(64.24±6.12)%比(25.26±2.23)%]、侵袭细胞数[(89.36±8.12)个、(113.05±10.03)个、(131.25±11.14)个比(45.36±4.21)个]增高,凋亡率[(41.23±4.02)%、(29.26±3.14)%、(18.64±2.09)%比(57.26±4.25)%]下降(P<0.05)。5、10、20 mmol/L乳酸作用Raw264.7细胞后,细胞形态出现M2型形态变化,M1型相关分子表达差异无统计学意义(P>0.05),M2型相关因子血管内皮生长因子(VEGF)、白细胞介素-10(IL-10)[(47.26±4.02)ng/L、(65.32±5.48)ng/L、(79.36±7.12)ng/L比(27.25±2.21)ng/L]、CD163表达均显著增多(P<0.05)。乳酸对Raw264.7细胞中Tpt1、Malat1表达具有明显的促进作用(P<0.05)。结论乳酸诱导巨噬细胞M2型极化促进黑色素瘤恶性生物学发展,且Tpt1、Malat1表达可能参与此过程。

AMPK通过下调CCL2抑制舌鳞状细胞癌肿瘤微环境中M2巨噬细胞的极化

目的:探究单磷酸腺苷激酶(AMPK)在舌鳞状细胞癌(TSCC)中的作用及与肿瘤微环境(TME)巨噬细胞分化的关系。方法:免疫组化检测AMPK在舌癌组织的磷酸化水平及与患者预后的关系。多重免疫荧光检测AMPK的磷酸化水平与肿瘤微环境巨噬细胞极化的关系。通过条件性共培养,观察AMPK激活后,对单核细胞体外诱导成功率的影响。结果:免疫组织化学检测结果发现,在舌癌组织中AMPK磷酸化水平显著高于其癌旁组织。多重免疫荧光显示AMPK的磷酸化水平与M1型巨噬细胞浸润呈正相关,与M2型巨噬细胞浸润呈负相关。ELISA及体外条件性共培养实验提示肿瘤细胞AMPK激活后趋化因子(C-C基序)配体2(CCL2)的表达下降,促进巨噬细胞向M1极化,抑制M2极化。结论:AMPK可以通过下调舌癌细胞的CCL2的表达抑制TME中巨噬细胞的M2极化。

N-乙酰-D-氨基葡萄糖抑制氧化应激和促进巨噬细胞M2极化减轻大鼠急性胰腺炎

目的本文研究N-乙酰-D-氨基葡萄糖(N-acetyl-D-glucosamine,GlcNAc)对大鼠急性胰腺炎的影响。方法将20只SPF级雄性SD大鼠随机分为对照组、AP组、低剂量GlcNAc+AP组、高剂量GlcNAc+AP组,每组5只。AP组、低剂量GlcNAc+AP组、高剂量GlcNAc+AP组分别予以腹腔注射2.5 g/kg的L-精氨酸致大鼠急性胰腺炎2次,每次间隔1 h,其中低剂量GlcNAc+AP组和高剂量GlcNAc+AP组第1次腹腔注射L-精氨酸前24 h分别予以50 mg/kg和200 mg/kg GlcNAc腹腔注射,对照组、AP组腹腔注射同等体积生理盐水。24 h后处死大鼠,采集血清和胰腺组织。HE染色观察胰腺组织形态,酶联免疫吸附实验检测大鼠血清中淀粉酶(AMY)、脂肪酶(LPS)、白介素-1β(IL-1β)、白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA);Western Blot检测胰腺组织核因子E2相关因子2(NRF2)、血红素氧合酶-1(HO-1)、过氧化物酶体增殖物激活受体-γ(PPAR-γ)的表达;免疫荧光检测胰腺组织白细胞分化抗原86(CD86)、白细胞分化抗原(CD206)、巨噬细胞标志物(F4/80)。免疫组化检测胰腺CD86、CD206的表达。结果(1)与对照组大鼠相比,AP组大鼠血清AMY、LPS、IL-1β、IL-6、TNF-α、MDA水平、胰腺CD86免疫荧光定量明显升高(P<0.05);而SOD活性、NRF2、HO-1、PPAR-γ蛋白表达水平、胰腺CD206免疫荧光定量明显下降(P<0.05);(2)与AP组大鼠相比,低剂量GlcNAc+AP组大鼠血清IL-1β、IL-6、TNF-α、MDA、LPS、胰腺CD86免疫荧光定量水平明显降低(P<0.05);胰腺PPAR-γ蛋白水平明显升高(P<0.05);(3)与AP组大鼠相比,高剂量GlcNAc+AP组大鼠血清AMY、LPS、IL-1β、IL-6、TNF-α、MDA、胰腺CD86免疫荧光定量水平明显降低(P<0.05),而血清SOD水平、NRF2、HO-1、PPAR-γ蛋白表达水平、胰腺CD206免疫荧光定量水平明显升高(P<0.05);(4)与低剂量GlcNAc+AP组相比,高剂量GlcNAc+AP组大鼠血清LPS、IL-1β、IL-6明显降低(P<0.05);胰腺HO-1、PPAR-γ蛋白的表达水平、胰腺CD206免疫荧光定量明显升高(P<0.05)。结论GlcNAc干预可以减轻AP大鼠急性胰腺炎损伤,可能是激活NRF2/HO-1信号通路抑制氧化应激和促进巨噬细胞M2极化来减轻AP大鼠胰腺损伤。

A1类清道夫受体通过促进M2型巨噬细胞极化增加脂肪组织产热能力

目的:探讨A1类清道夫受体(macrophage scavenger receptor 1,MSR1)在低温刺激诱导白色脂肪产热进程中的作用及其机制。方法:正常饮食(common diet,CD)的野生型小鼠(MSR1^(+/+))和MSR1缺失表达小鼠(MSR1^(-/-))分别给予低温刺激1 d或者14 d后,通过qRT-PCR、Western blot和免疫组织化学染色检测皮下白色脂肪组织(subcutaneous white adipose tissue,scWAT)和棕色脂肪组织(brown adipose tissue,BAT)中脂肪产热能力标志物(UCP1、Cidea和Cox8b)的表达。qRT-PCR和流式细胞术检测正常饮食的MSR1^(+/+)和MSR1^(-/-)小鼠给予低温刺激14 d后,小鼠scWAT中巨噬细胞极化情况。建立高脂饮食(high fat diet,HFD)诱导的小鼠肥胖模型,监测CD和HFD 12周的MSR1^(+/+)和MSR1^(-/-)小鼠体重变化,并使用代谢笼监测小鼠耗氧量和产热量变化;qRT-PCR和免疫组织化学染色检测HFD 12周的小鼠给予低温刺激7 d后,小鼠scWAT和BAT中产热基因表达。体外实验应用巨噬细胞条件培养基刺激小鼠前脂肪细胞分化,待分化成熟后应用qRT-PCR检测产热基因表达。结果:慢性低温刺激下,与MSR1^(+/+)小鼠相比,MSR1^(-/-)小鼠脂肪组织产热基因表达明显降低。进一步,MSR1^(-/-)小鼠scWAT中M2型巨噬细胞数量明显减少。HFD喂养12周后,MSR1^(-/-)小鼠体重增加更为明显,并且耗氧量和产热量明显降低。低温刺激下,与MSR1^(+/+)HFD小鼠相比,MSR1^(-/-)HFD小鼠脂肪产热能力明显降低。体外细胞研究发现,与MSR1^(+/+)小鼠腹腔巨噬细胞条件培养基诱导的成熟脂肪细胞相比,MSR1^(-/-)小鼠腹腔巨噬细胞条件培养基诱导的成熟脂肪细胞产热基因表达明显降低。结论:低温刺激下,MSR1通过增加M2型巨噬细胞极化促进小鼠脂肪组织产热。

青藤碱调节胃癌细胞诱发的巨噬细胞M2极化的机制

目的研究青藤碱在胃癌细胞诱导的巨噬细胞极化中的作用及机制。方法在胃癌细胞BGC-823和MKN-45中加入青藤碱,用CCK-8测定细胞活力,用克隆形成实验测定细胞增殖能力,用共培养和Transwell小室迁移实验评估青藤碱对巨噬细胞的招募和极化,流式细胞术评估巨噬细胞极化,RT-qPCR法和Western blotting分别检测基因RNA水平和蛋白表达水平。结果青藤碱能抑制胃癌细胞增殖,抑制胃癌细胞对巨噬细胞的募集及抑制其M2型极化作用。青藤碱同时抑制了转录激活因子6(STAT6)的表达和CAAT增强子结合蛋白β(C/EBPβ)的表达和磷酸化。当STAT6过表达时,可以降低青藤碱对胃癌细胞的这些抑制作用。进一步研究发现,STAT6介导胃癌细胞分泌白细胞介素-6(IL-6)是造成青藤碱介导的巨噬细胞募集和M2极化的原因。结论天然药物青藤碱对胃癌具有良好的肿瘤抑制能力,直接抑制胃癌细胞的生存和迁移,并且通过抑制IL-6的表达,抑制肿瘤微环境中的M2表型,重塑肿瘤环境,降低M2型巨噬细胞为胃癌肿瘤带来免疫抑制环境的风险。

骨肉瘤源外泌体通过Tim-3诱导巨噬细胞M2极化并促进MG63细胞的转移

目的:探究骨肉瘤来源的外泌体对肿瘤相关巨噬细胞分化的影响及其具体作用机制。方法:收集2018年3月至2019年10年于川北医学院附属医院骨科及小儿外科行骨肉瘤切除术、病理诊断明确的18例原发性骨肉瘤患者的肿瘤组织及癌旁组织,Western blotting实验检测Tim-3的表达水平;分离骨肉瘤MG63细胞外泌体(MG63-Exo),并采用透射电镜及纳米粒径分析进行鉴定,双荧光染色法验证其是否能够被巨噬细胞吞噬,利用qPCR检测MG63-Exo对巨噬细胞分化及IL-10、TGF-β、VEGF表达的影响,应用Transwell侵袭和迁移实验及Western blotting检测MG63-Exo所诱导分化的巨噬细胞对MG63细胞迁移及侵袭及EMT相关蛋白表达的影响;应用CRISPR/Cas9技术敲除MG63细胞中的Tim-3,Western blotting实验检测MG63-Exo中Tim-3表达,再次应用qPCR、Transwell及Western blotting实验检测来源于敲除Tim-3的MG63外泌体对巨噬细胞分化及其处理后的巨噬细胞对MG63的迁移、侵袭、EMT相关蛋白表达的影响;最后利用骨肉瘤肺转移小鼠模型验证上述不同来源的外泌体对骨肉瘤肺转移的影响。结果:透射电镜及纳米粒径分析结果证实成功分离了MG63-Exo,荧光共聚焦显微观察结果显示其能够被巨噬细胞吞噬。与对照组相比,MG63-Exo能够显著促进巨噬细胞的M2型分化(P<0.05);与对照组相比,经MG63-Exo诱导的M2巨噬细胞能够显著促进骨肉瘤细胞的迁移、侵袭与EMT能力(均P<0.05);应用CRISPR/Cas9技术敲除Tim-3后的MG63细胞中Tim-3 mRNA及蛋白表达均显著降低(P<0.05),且Tim-3能够以外泌体的形式转移至巨噬细胞中;与MG63-Exo共培养的巨噬细胞相比,来源于Tim-3敲除细胞的MG63-Exo能显著抑制巨噬细胞的M2型分化(P<0.05);相比与经MG63-Exo诱导的巨噬细胞进行共培养的MG63细胞,Tim-3敲除的MG63-Exo诱导的巨噬细胞能显著抑制肿瘤细胞的迁移、侵袭与EMT及促进肿瘤肺转移(均P<0.05)。结论:骨肉瘤来源的外泌体通过Tim-3诱导巨噬细胞的M2极化并促进肿瘤的侵袭及转移能力。

包虫抗原B通过肿瘤坏死因子受体2调控巨噬细胞极化对小鼠免疫性血小板减少症的改善作用

目的:探讨包虫抗原B (HA-B)对小鼠免疫性血小板减少症(ITP)的改善作用,阐明其相关作用机制。方法:将野生型(WT)和肿瘤坏死因子受体2 (TNFR2)基因敲除(TNFR2^(-/-))的C57/B6小鼠分为WT对照组、WT-ITP模型组、WT-HA-B组、TNFR2^(-/-)对照组、TNFR2^(-/-)ITP模型组和TNFR2^(-/-)HA-B组,检测各组小鼠体质量、脏器指数和血常规指标,采用流式细胞术检测各组小鼠外周血中M2巨噬细胞百分率,酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测各组小鼠血清中精氨酸酶1(Arg1)、白细胞介素10 (IL-10)、诱导型一氧化氮合成酶(iNOS)和白细胞介素6 (IL-6)水平,采用实时荧光定量PCR (RT-qPCR)法检测各组小鼠骨髓来源巨噬细胞(BMDM)中Arg1、IL-10、iNOS和IL-6表达水平。分别将WT对照组和TNFR2^(-/-)对照组小鼠BMDM诱导为M2巨噬细胞(WT M2组和TNFR2^(-/-)M2组),加入HA-B (WT M2+HA-B组和TNFR2^(-/-)M2+HA-B组),采用RT-qPCR法检测各组细胞中Arg1和IL-10mRNA表达水平。结果:分别与WT对照组和TNFR2^(-/-)对照组比较,WT-ITP模型组和TNFR2^(-/-)ITP模型组小鼠体质量降低(P<0.05),脾脏和胸腺指数升高(P<0.05),血小板和红细胞数量减少(P<0.05),血红蛋白水平降低(P<0.05),白细胞数量增加(P<0.05),凝血时间延长(P<0.05);外周血中M2巨噬细胞百分率降低(P<0.05),血清中Arg1和IL-10水平降低(P<0.05),iNOS和IL-6水平升高(P<0.05);BMDM中Arg1和IL-10 mRNA表达水平降低(P<0.05),iNOS和IL-6 mRNA表达水平升高(P<0.05)。与WT-ITP模型组比较,WT-HA-B组小鼠体质量增加(P<0.05),脾脏和胸腺指数降低(P<0.05),血小板和红细胞数量增加(P<0.05),血红蛋白水平升高(P<0.05),白细胞数量减少(P<0.05),凝血时间缩短(P<0.05);外周血中M2巨噬细胞百分率升高(P<0.05),血清中Arg1和IL-10水平升高(P<0.05),iNOS和IL-6水平降低(P<0.05);BMDM中Arg1和IL-10 mRNA表达水平升高(P<0.05),iNOS和IL-6 mRNA表达水平降低(P<0.05)。与WT-HA-B组比较,TNFR2^(-/-)HA-B组小鼠体质量降低(P<0.05),脾脏和胸腺指数升高(P<0.05),血小板和红细胞数量减少(P<0.05),血红蛋白水平降低(P<0.05),白细胞数量增加(P<0.05),凝血时间延长(P<0.05);外周血中M2巨噬细胞百分率降低(P<0.05),血清中Arg1和IL-10水平降低(P<0.05),iNOS和IL-6水平升高(P<0.05);BMDM中Arg1和IL-10mRNA表达水平降低(P<0.05),iNOS和IL-6 mRNA表达水平升高(P<0.05)。与WT M2组比较,WT M2+HA-B组M2巨噬细胞中Arg1和IL-10 mRNA表达水平升高(P<0.05);与WT M2+HA-B组比较,TNFR2^(-/-)M2+HA-B组M2巨噬细胞中Arg1和IL-10 mRNA表达水平降低(P<0.05)。结论:HA-B可通过TNFR2促进巨噬细胞M2极化,进而发挥治疗ITP的作用。

平喘颗粒对哮喘小鼠Ⅱ型固有淋巴细胞及巨噬细胞M2型极化的影响

目的:观察平喘颗粒对哮喘小鼠肺组织中Ⅱ型固有淋巴细胞(ILC2)数量和巨噬细胞M2型极化的影响。方法:采用卵清蛋白致敏和激发构建哮喘小鼠模型,在此基础上分别给予平喘颗粒或IL⁃33中和抗体进行干预,分别通过HE、PAS和Masson染色观察各组小鼠肺组织病理形态,分别以ELISA和qRT⁃PCR法检测肺泡灌洗液及肺组织中IL⁃4、IL⁃5、IL⁃13和IL⁃33的表达,采用流式细胞术检测肺组织中Ⅱ型固有淋巴细胞和M2型巨噬细胞的数量,采用Westernblot法检测肺组织中ST⁃2、FIZZ1和Arg⁃1蛋白的表达水平。结果:与空白组相比,模型组小鼠肺组织炎症评分、PAS评分和胶原染色面积明显增加,肺泡灌洗液和肺组织中IL⁃4、IL⁃5、IL⁃13和IL⁃33的表达明显增加,肺组织中ILC2和M2型巨噬细胞的数量、ST⁃2、FIZZ1和Arg⁃1蛋白的表达明显增加,差异均具有统计学意义(P<0.05);与模型组相比,平喘颗粒能够降低哮喘小鼠肺组织炎症评分、PAS评分和胶原染色面积,下调肺泡灌洗液和肺组织中IL⁃4、IL⁃5、IL⁃13和IL⁃33的表达,降低肺组织中ILC2和M2型巨噬细胞的数量、ST⁃2、FIZZ1和Arg⁃1蛋白的表达,差异均具有统计学意义(P<0.05);结论:平喘颗粒通过抑制ILC2介导的M2型巨噬细胞极化,从而改善哮喘气道重塑,达到治疗哮喘的作用。

白藜芦醇对M1/M2巨噬细胞极化的作用及其机制

目的研究白藜芦醇对M1/M2型巨噬细胞极化以及M1/M2型巨噬细胞能量代谢的影响。方法建立了骨髓来源巨噬细胞(BMDM)的体外培养模型。在BMDM以及Raw264.7细胞中加入白藜芦醇,应用RT-q PCR以及Western blot检测M1、M2型巨噬细胞的标志分子。应用细胞外流量测试仪检测白藜芦醇M1、M2型巨噬细胞能量代谢的影响。结果白藜芦醇可以促进M2型巨噬细胞极化,抑制M1型巨噬细胞极化。白藜芦醇促进M2型巨噬细胞标志蛋白arginase1的表达,同时也会促进抗炎细胞因子IL-10的表达。LPS具有促进M1型巨噬细胞糖酵解的功能,而白藜芦醇可以抑制LPS引起的巨噬细胞糖酵解增加。结论白藜芦醇作为天然产物之一,可通过抑制NO生成进而调控M1/M2型巨噬细胞的能量代谢,促进M2型巨噬细胞的极化。

替米沙坦对小鼠巨噬细胞M1/M2亚型极化的影响

目的探讨替米沙坦对小鼠巨噬细胞M1/M2亚型极化的影响。方法分别用脂多糖(LPS)联合干扰素-γ(IFN-γ)和白介素-4(IL-4)诱导小鼠巨噬细胞M1/M2型极化,用免疫荧光法检测极化结果。在M1型巨噬细胞中分别加入0.1、1、10μmol/L替米沙坦,同时设立空白对照组及溶剂对照组,Western blot法检测各组巨噬细胞亚型标志物诱导性一氧化氮合酶(iN OS)和精氨酸酶Ⅰ(ArgⅠ)的表达情况,ELISA法检测各组培养液上清中IL-6、IL-10表达情况。结果在LPS+IFN-γ诱导的小鼠巨噬细胞中M1型巨噬细胞标志物iN OS、IL-6的表达水平明显升高,替米沙坦干预后,各干预组M1型巨噬细胞标志物iN OS、IL-6的表达水平下降(P<0.05),随着替米沙坦浓度的增加而降低,而代表M2型巨噬细胞标志物的ArgⅠ和IL-10表达水平上升(P<0.05)。结论替米沙坦可以抑制LPS+IFN-γ诱导的小鼠巨噬细胞M1型极化,促进M1型巨噬细胞向M2型巨噬细胞转化。