M2抗体人源靶抗原三联体的克隆表达及其在原发性胆汁性肝硬化中的应用

目的 设计克隆表达抗原蛋白三联体 BPO,利用纯化的重组 BPO,建立原发性胆汁性肝硬化 ( primary biliarycirrhosis,PBC)特异性免疫学诊断方法。方法 利用基因工程方法克隆表达 M2抗原及其三联体 BPO,并加以鉴定。纯化BPO,建立 ELISA法。应用 ELISA法检测 1 7例 PBC患者血清 M2抗体 ,以 1 67例非 PBC患者和 1 2 2 5例健康人作对照。结果 1 7例临床诊断为 PBC的患者 ,M2抗体均为阳性 ,而对照组 M2抗体均为阴性。结论 本法检测 M2抗体有较好的敏感性及特异性 ,为 PBC的临床诊断提供了有效手段。

人源M2三联体靶抗原检测抗体诊断原发性胆汁性肝硬化

目的 探讨用人源 M2三联体靶抗原检测 M2抗体在原发性胆汁性肝硬化诊断中的应用价值。方法间接免疫荧光法检测肝病患者,自身免疫病患者和健康体检者血清中的抗线粒体抗体。以人源M2三联体靶抗原建立的ELISA法与以猪心肌纯化组分作为抗原的免疫印迹法商业试剂盒检测M2抗体。结果20例原发性胆汁性肝硬化（PBC）均检出M2抗体,28例不明原因肝病6例M2抗体阳性。ELISA法的敏感性和特异性优于经典的间接免疫荧光法和商业试剂盒。结论 以人源M2三联体靶抗原建立的ELISA法具有很高的特异性和敏感性,为原发性胆汁性肝硬化的诊断提供了简便、快速而有效的手段。

用重组M2三联体抗原建立原发性胆汁性肝硬化免疫检测法

目的 建立原发性胆汁性肝硬化 (PBC)特异性免疫学检测方法。方法 在重组质粒表达的基础上 ,用亲和层析进一步纯化重组蛋白后 ,用酶免疫吸附法检测M2抗体。结果 在PBC组 1 1例患者中全部检出M2抗体 ,阳性率为 1 0 0 % ,而非PBC组 75例患者中无一检出M2抗体。本法与病理检查和临床诊断的相关性有非常显著意义 (P <0 .0 1 )。结论 本法检测M2抗体有较好的敏感性及特异性 。

抗CD3人源化抗体恒定区突变体的体外生物学特性研究

目的 研究抗CD3人源化抗体hu12F6的恒定区突变体hu12F6m的体外生物学活性。方法 通过细胞因子释放分析及早期活化标志分子的检测对hu12F6m的T细胞活化性质进行评价 ;通过体外抗原调变实验考察hu12F6m对T细胞的抑制功能。结果 hu12F6m激活T细胞释放TNF α、IFN γ、IL 10等细胞因子及表达早期活化标志CD6 9分子的水平明显低于hu12F6 ,但其调变CD3抗原的能力保持与hu12F6相似。结论 hu12F6m对T细胞的激活作用显著减弱并保留了对T细胞的抑制功能 ,有望成为一种抗排异能力强、免疫原性和毒副作用小的有效免疫抑制剂。

ELISA抑制法检测动物组织中α1,3-Gal抗原

目的:用人工合成的Gal/BSA抗原对骨髓瘤细胞的Gal抗原表位数进行赋值;再用骨髓瘤细胞作为参照品,建立并优化单克隆特异性抗体M86检测动物组织中α1,3-Gal(Gal)抗原的ELISA抑制法。应用优化后的方法,检测猪和小鼠组织Gal抗原表位数。方法:将待测物抗原(Gal-BSA系列稀释液、SP2/0细胞及待检组织样品)与M86特异性抗体反应后离心,取含有M86剩余抗体的上清液;再与Gal-BSA包被的固相抗原反应,计算出待测样品和标准曲线样品的M86结合抑制率;之后绘制相应的质量浓度-结合抑制率曲线,再根据曲线拟合公式计算其50%结合抑制时的质量浓度;进而计算Gal抗原表位数。结果:各结合抑制曲线相关性较好,R2>0.95。SP2/0骨髓瘤细胞Gal抗原数为每个细胞6.19×108个;利用优化了的方法检测猪的冻干组织抗原含量趋势为:肺>肾>脾>心>腹膜>心包膜>肝组织>皮肤;小鼠的新鲜湿组织抗原含量趋势为:心>肺>脾>肾>肝。结论:应用骨髓瘤细胞作为参照品,所建立的M86抗体ELISA抑制法检测动物组织的Gal抗原含量具有较好的敏感性和特异性,为进一步建立该方法规范性的行业标准奠定了基础。