A型流感病毒H5N1的M2离子通道稳定细胞株的建立

A型流感病毒H5N1的M2离子通道(H5M2)基因经优化后由人工合成,适合于哺乳动物细胞中表达。通过酶切克隆于pcDNA4质粒,并在HEK293细胞中建立稳定细胞株。Western blotting和免疫荧光证实H5M2在稳定细胞中只有在四环素诱导下才能表达,并经膜片钳证实在HEK293细胞中表达的H5M2具有H+通道活性,为M2离子通道功能的研究和M2离子通道阻断剂筛选方法的建立提供了参考。

黄芪提取物调节TRPM2表达的抗急性药物性肝损伤作用研究

目的 探讨黄芪提取物(AR)调节TRPM2表达的抗急性DILI作用机制。方法 雄性小鼠39只,随机分为对照组(n=7),对乙酰氨基酚(APAP)模型组,AR低、高剂量组及N-乙酰半胱氨酸(NAC)治疗组,每组各8只。其中AR低、高剂量组分别以50、75 mg/kg的AR灌胃,NAC组以100 mg/kg灌胃,每日1次,共3 d。第4天,除对照组外,其余各组以350 mg/kg剂量APAP灌胃,12 h后处死全部小鼠,收集血清及肝组织。检测血清ALT、AST活性;HE染色观察肝组织病理学变化;免疫组化染色观察肝组织髓过氧化物酶(MPO)、瞬时受体电位M2型离子通道(TRPM2)表达。体外实验以不同剂量APAP(0、5、10、20 mM)孵育AML12细胞12、24 h,筛选出APAP肝细胞损伤最佳浓度和作用时间,并动态检测肝细胞TRPM2基因及蛋白表达。肝细胞分为对照组,模型组,AR低、高剂量组及NAC对照组,除对照组外,其余各组以20 mM APAP诱导损伤,并分别以125、250μg/mL的AR、50 mM NAC孵育24 h。采用CCK8检测细胞活力,qRT-PCR检测肝细胞TRPM2基因表达、Western Blot检测蛋白表达。结果 与对照组比较,APAP可诱导急性DILI,血清ALT、AST活性明显升高(F=35.717、F=18.997,P值均<0.01),肝组织结构破坏严重、肝细胞大块/亚大块坏死、中央静脉淤血;与模型组相比,AR能显著降低模型小鼠血清ALT、AST活性,减轻肝细胞坏死、肝组织MPO及TRPM2表达,具有明显的保肝作用,且AR高剂量组与NAC疗效相当。5 mM APAP孵育AML12细胞24 h明显诱导肝细胞损伤,且肝细胞TRPM2表达随着时间的延长而增加(F=25.408,P<0.01);与模型组相比,AR可提高肝细胞活力、降低肝细胞TRPM2表达。结论 黄芪提取物具有良好的保护APAP诱导急性DILI作用,其机制与抑制TRPM2表达相关。

甲型流感病毒M1、M2和M42蛋白研究进展

甲型流感病毒基因组由8个分节段的基因组成,最初认为流感病毒的每个基因只能编码1个病毒蛋白,但随后发现M基因编码2种蛋白,即M1基质蛋白和M2离子通道蛋白。近年来的研究表明PB1基因编码PB1、PB1-F2和PB1-N40 3种蛋白,而PA基因则能编码PA、PA-X、PA-N155及PA-N182 4种蛋白。到目前为止,流感病毒的4个基因都已被证明能编码两种或两种以上的蛋白,说明流感病毒可以利用感染细胞的mRNA选择性剪接及蛋白翻译的不同机制实现其相关基因节段编码更多蛋白的能力。2012年发现流感病毒M基因可以编码一种新的蛋白,即M42蛋白。论文将对甲型流感病毒M基因所编码的M1、M2及M42这3种病毒蛋白的研究概况进行综述。

2003年～2005年北京地区甲3型流感病毒流行株金刚烷胺耐药性调查

目的:为我国制订流感大流行防备计划提供参考。方法:对2003年～2005年北京地区流感样患儿分离的流感病毒流行株30株,用RT-PCR一步法扩增流感病毒M2基因片段、测定核酸序列和进行生物信息软件分析,确定耐药性氨基酸位点。结果:M2基因31位氨基酸被天冬酰胺置换的有20株,显示对金刚烷胺类药耐药率为66.7%。结论:应在我国进一步开展抗流感病毒耐药性监测。

靶向抗流感病毒药物的抗病毒作用研究进展

流行性感冒(简称流感)是由流感病毒引起的一种急性呼吸道传染病,甲型和乙型流感病毒每年呈季节性流行,其中甲型流感病毒可引起全球大流行。当前,临床常采用抗流感病毒药物治疗流感,其主要通过阻止流感病毒的进入、复制和释放而发挥药效。然而,流感病毒亦会通过变异与伪装而逃脱免疫系统的识别和清除,这反过来加速了科研人员对靶向抗流感病毒药物的研发。本文主要对靶向流感病毒的血凝素、M2离子通道蛋白、RNA依赖性RNA聚合酶、Cap依赖性内切酶、神经氨酸酶、非结构蛋白1等为位点的抗流感病毒药物的抗病毒作用进行了综合和分析,以期为临床防治流感和新药的研发提供理论支撑。

抗流感病毒药物研究进展

介绍近年来临床主要应用的2类抗流感病毒药物:M2离子通道蛋白抑制剂和神经氨酸酶抑制剂的作用机制、临床应用特点及不良反应,并简要介绍了其他一些在我国常用的抗流感病毒药物。

抗流感病毒药物靶标研究进展

随着流感病毒的加速变异及不同亚型病毒在物种间重组概率的增加,流感作为世界范围的季节性流行性传染性疾病,对人类健康的威胁正日益增加和严峻。由于特异性疫苗研发的相对滞后性,全新机制的抗流感药物始终是有效对抗流感、保障人类健康的第一道防线。人类对流感病毒感染及增殖机制的认识,使现代抗流感药物的研究得到空前的推动。本文介绍了抗流感药物主要靶标的研究进展,以期为流感防治药物的研发提供借鉴。

抗流感病毒药物研究进展

季节性和爆发性流感引起了高发病率和死亡率,不仅严重危害人体健康,还影响社会稳定和经济发展。目前对抗流感的主要措施是预防接种,然而流感病毒变异速度非常快,使得现有的疫苗对新变异的流感病毒无效或者预防效果不好。因此,抗病毒药物的研究显得非常必要,而被深入研究的流感病毒的生命周期和病毒结构蛋白也推进了抗流感病毒药物设计的进展。本文将对抗流感药物设计靶向进行概述,旨在为今后研究开发出更高效、更理想的多靶向抗流感病毒药物提供借鉴。

稳定抑制TRPM2基因表达肺微血管内皮细胞系的构建与鉴定

应用短发卡RNA(shRNA)慢病毒表达载体感染小鼠肺微血管内皮细胞(PMVEC),对其M2型瞬时受体电位(TRPM2)基因进行干扰,以建立稳定shRNA TRPM2 PMVEC细胞株。结果表明,正常PMVEC对胰酶的最大耐受浓度和嘌呤霉素最小致死剂量分别为0.4μg/mL和0.6μg/mL;然后加入0.6、2.0、4.0、8.0μg/mL嘌呤霉素筛选稳定抑制TRPM2表达的shRNA TRPM2 PMVEC株,结果在嘌呤霉素达到8μg/mL时该细胞株仍细胞生长良好; Semi-quantitative PCR和Western blot对获得阳性细胞株进行TRPM2基因和蛋白表达的检测显示, shRNA TRPM2阳性PMVEC的TRPM2基因和蛋白表达相对量显著低于阴性对照和正常对照组(P<0.01)。该研究通过shRNA慢病毒载体成功建立了稳定shRNA TRPM2 PMVEC细胞株,为进一步开展TRPM2在流感病毒诱导肺微血管内皮细胞损伤的作用机制奠定了基础。

直击流感病毒

流感是由流感病毒引起的上呼吸道传染病,我国北方的流行季节多为冬春季,而热带全年均可流行。我国是流感的高发区,因而流感的防治工作尤为重要。 普通人一般容易把流感和普通感冒混为一谈。在治疗上流感与普通感冒是有区别的。由于流感是通过咳嗽、打喷嚏时的飞沫进行传播的。

2009—2011年广州地区甲型H1N1流感病毒对奥司他韦耐药性分析

推荐理由：目前，临床上使用的抗流感药物主要为M2离子通道阻滞剂（金刚烷胺和金刚乙胺）和神经氨酸酶抑制剂（扎拉米韦和奥司他韦）。由于治疗甲型H1N1流感的首选药物为奥司他韦，病毒在传播进化过程中受到的药物选择压力增大，自201O年10月起世界卫生组织全球流感监测网络发现，

抗流感病毒药物研究进展

流感病毒是人类健康的一大威胁。应对流感病毒的主要方式是疫苗和药物治疗。对可能大规模爆发的流感疫情来讲,药物治疗是最好的控制流感病毒传播的手段。目前,抗流感病毒药物包括已在俄罗斯上市的盐酸阿比朵尔和美国FDA批准的4个抗流感病毒药物,后者根据作用机制的不同分为M2离子通道蛋白抑制剂和神经氨酸酶(NA)抑制剂。其中,NA抑制剂根据结构又可分为唾液酸类似物、苯甲酸衍生物、环己烯衍生物、环戊烷衍生物、吡咯烷衍生物及天然提取物6大类。本文简要介绍了上述各类已上市和临床在研药物的最新研究进展。

抗流感病毒药物研究进展

对抗流感病毒药物中的神经氨酸酶抑制剂和血凝素抑制剂的研究进展进行综述,介绍了已有的神经氨酸酶抑制剂扎那米韦、奥司米韦,具有开发前景的帕洛米韦、CS-8958,以及新型抗流感化合物等的研发状况。

湖州市甲3型流感病毒烷胺类药物耐药性分析

目的:分析湖州市2009年-2012年流感流行期甲3型流感病毒流行株对金刚烷胺的耐药情况,为流感的临床治疗用药提供参考。方法:选取湖州市流感监测网络和流感暴发疫情中所分离的48株甲3型流感病毒株,提取病毒核酸,采用RT-PCR扩增病毒M2基因片段,纯化后进行核苷酸序列测定,用生物信息软件分析与耐药有关的氨基酸位点。结果:48株甲3型流感病毒分离株中,43株M2蛋白跨膜区耐药位点的氨基酸被置换,对金刚烷胺耐药率为89.58%。2009年-2012年4个流行期耐药率分别为85.71%、78.57%、94.12%和100%。变异主要发生在M2蛋白跨膜区第31位氨基酸,42株发生了S31N置换,占87.5%,其次是在第27位,有3株发生了V27A置换,占6.25%。结论:人群甲3型流感对金刚烷胺类药物耐药率较高,应加强耐药性监测,提醒卫生部门应对流感大流行谨慎使用此类药物。

具抗病毒活性的金刚烷胺衍生物的研究进展

目的介绍M2离子通道抑制剂金刚烷胺衍生物的研究进展,为设计新的抗流感病毒药物提供相关依据和信息。方法对近年来关具抗流感病毒活性金刚烷胺衍生物、类似物的相关文献进行综述。结果国内外课题组主要集中在金刚烷的1位和2位修饰,合成一系列金刚烷胺衍生物或结构类似物,并进行抗流感病毒活性测试。结论部分金刚烷胺衍生物具有较好的抗流感病毒活性,其中一些化合物的活性优于金刚烷胺和金刚乙胺,这些结果对设计新的抗流感病毒药物具有较好的参考价值。

治疗“流感”的药物有哪些？

流感一旦确诊，可以尽早使用相关抗病毒类药物。一般说来，抗病毒药物在发病48小时内应用能有效缓解症状、缩短病程，用药越早效果越好。如发病超过48小时用药，将使抗流感病毒药物的整体疗效大大降低。目前治流感尚无特效药物，相对而言，疗效确切、可供临床使用的抗流感病毒药物主要有两类：即离子通道M，阻滞剂和神经氨酸酶抑制剂。