H9N2亚型禽流感病毒M2e蛋白在原核系统中的表达

以含有全长H9N2亚型AIV M2基因的质粒为模板,经PCR扩增得到M2e基因;利用BglⅡ和BamHⅠ之间互为同尾酶关系,构建顺次连接的多拷贝体M2e,并连接入原核表达载体pGEX-6p-1,构成2M2e-pGEX、4M2e-pGEX、6M2e-pGEX、8M2e-pGEX和10M2e-pGEX重组质粒,并转化至表达宿主菌中;将测序正确的菌液经不同浓度IPTG进行诱导,SDS-PAGE电泳鉴定重组蛋白大小,对蛋白进行可溶性分析;利用Western blot分析5种重组蛋白的反应原性。结果显示,在37℃下,2M2e-pGEX、4M2e-pGEX、6M2e-pGEX、8M2e-pGEX和10M2e-pGEX重组蛋白分别经终浓度为0.25、0.25、0.5、0.25、0.75mmol/L的IPTG诱导4h时,表达量最高;2M2e-pGEX、4M2e-pGEX、6M2e-pGEX、8M2e-pGEX和10M2e-pGEX重组蛋白大小分别为31.7、37.2、42.7、48.2、53.9ku;对重组蛋白进行可溶性分析显示,5种重组蛋白均以包涵体形式存在;Western blot分析显示,2M2e-pGEX、4M2e-pGEX、6M2e-pGEX、8M2e-pGEX和10M2epGEX重组蛋白与鼠抗GST标签的单克隆抗体具有良好的特异性反应,为后期进一步获得高免疫原性蛋白和筛选具有通用免疫原性的重组蛋白奠定基础。

基于M2e的广谱流感疫苗及其免疫保护机制研究进展

疫苗接种是预防流感最有效和经济的手段。当前使用的流感疫苗主要是作用于特异性的流感病毒表面糖蛋白血凝素,只能对和疫苗株匹配的流行株提供保护,因此每年需要对疫苗株进行更新。研发能够预防不同亚型流感病毒的广谱疫苗成为流感疫苗研究的热点。M2e是甲型流感病毒保守片段,可作为广谱流感疫苗的候选抗原,是目前广谱流感疫苗研究的热点。本文将就M2e广谱流感疫苗及其免疫保护机制的研究进展作一综述。

4种禽流感病毒M2e多肽的串联表达和小鼠口服免疫效果

为研制广谱性禽流感口服疫苗,将4种禽流感病毒特异的基质蛋白2胞外区(matrix protein 2ectodomain,M2e)多肽与黏膜免疫佐剂CTA1-DD串联,原核表达并纯化CTA1DD-AVI4M2e融合蛋白。以200μg融合蛋白CTA1DD-AVI4M2e口服免疫BALB/c小鼠,结果显示实验组肠液IgA抗体效价和血清IgG抗体效价比对照组显著升高,血清中特异性IgG抗体效价达约360倍。分割的3段肠样中:第1段浸出液IgA抗体效价约为360倍,第2段约为120倍,第3段约为9 720倍。结果表明,本研究制备的CTA1DDAVI4M2e具有显著口服免疫效果,为后续研究提供了基础。