M2-型丙酮酸激酶促进肝癌细胞的侵袭

目的:探讨M2-型丙酮酸激酶(pyruvate kinase M2,PKM2)在肝癌组织中的表达及对肝癌侵袭的影响。方法:荧光定量PCR(real-time PCR)、免疫组化(IHC)比较PKM2在肝癌和癌旁组织中mRNA和蛋白的表达水平;构建人肝癌细胞株(HepG2)PKM2干扰和过表达的细胞株,分析PKM2对肝癌细胞侵袭的影响;Real-time PCR、免疫组化、Western blot分析肝癌组织及转染后的HepG2细胞STAT3的磷酸化、缺氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)的表达变化。结果:肝癌标本(106/115)中PKM2、HIF-1α的mRNA表达水平在肝癌组织中高于癌旁组织,免疫组化显示肝癌组织中的PKM2、HIF-1α的表达水平高于癌旁组织;在体外实验中,干扰PKM2能抑制肝癌细胞HepG2的侵袭,过表达PKM2促进肝癌细胞HepG2的侵袭;PKM2过表达促进STAT3(signal transducer and activator of transcription 3)的磷酸化,上调HIF-1α的表达。结论:PKM2通过促进STAT3磷酸化,上调HIF-1α的表达,促进肝癌细胞的侵袭,为肝癌的治疗提供了新思路。

胃癌患者手术前后血清肿瘤型M2-丙酮酸激酶的测定及其临床意义

目的研究胃癌患者手术前后血清肿瘤型M2-丙酮酸激酶(tumor M2-PK)的含量变化及其与临床病理学参数的关系。方法运用ELISA法定量检测胃癌患者手术前后血清中的肿瘤型M2-PK含量的变化。结果胃癌患者血清肿瘤型M2-PK增高,明显大于对照组(P<0.05)。胃癌肿瘤切除患者手术后肿瘤型M2-PK的含量低于术前(P<0.05)。而肿瘤未切除患者手术前后的差别不明显。肿瘤≥5 cm者肿瘤型M2-PK明显高于<5 cm者(P<0.05);TNMⅢ,Ⅳ期者明显高于Ⅰ,Ⅱ期者(P<0.01);而淋巴结转移情况、肿瘤胃壁浸润深度及组织学分级对肿瘤型M2-PK水平的影响无明显差别。结论胃癌患者血清肿瘤型M2-PK水平明显升高,且初步反应肿瘤大小和病期。肿瘤的存在与否,对肿瘤型M2-PK的水平有明显影响。肿瘤型M2-PK有可能用于监测胃癌肿瘤的发生和发展。

胃癌患者血清肿瘤型M2-PK的测定及其临床意义

目的研究胃癌患者血清肿瘤型M2-丙酮酸激酶(tM2-PK)的含量与临床病理学参数的关系。方法运用ELISA法定量检测tM2-PK在胃癌、胃溃疡、及正常人血清中的含量。结果胃癌患者血清tM2-PK增高,明显大于胃溃疡(P<0·05)与正常人组(P<0·01)。肿瘤≥5cm者明显高于<5cm者(P<0·05);TNMⅢ,Ⅳ期者明显高于Ⅰ,Ⅱ期者(P<0·01);而淋巴结转移情况、肿瘤胃壁浸润深度及组织学分级对tM2-PK水平的影响无明显差异。以大于15U/ml为阳性者,胃癌组阳性率为64%,胃溃疡组假阳性率为20%,正常对照组假阳性率为6%。结论胃癌肿瘤代谢的改变可产生大量tM2-PK。血清肿瘤型M2-PK水平升高可为肿瘤大小和病期提供依据。

沉默PKM2对乳腺癌他莫昔芬耐药MCF-7细胞系侵袭及迁移的影响

目的探讨PKM2下调对乳腺癌他莫昔芬(TAM)耐药MCF-7细胞系侵袭、迁移的影响。方法以浓度梯度法诱导获得乳腺癌他莫昔芬耐药细胞系(MCF-7R);细胞增殖与凋亡试剂盒(CCK-8)检测细胞增殖能力;Western blot检测细胞PKM2的表达;将表达针对PKM2的shRNA慢病毒干扰载体感染耐药细胞系,RT-q PCR、Western blot验证干扰效果,分别用Transwell侵袭实验、划痕实验检测细胞侵袭、迁移能力。结果与MCF-7细胞相比,MCF-7R细胞对他莫昔芬的抵抗能力显著增强(P<0.01),PKM2的表达水平明显升高(P<0.01)。稳定干扰PKM2的耐药细胞中PKM2的mRNA和蛋白水平较对照组均明显下降(P<0.01),PKM2干扰后可明显抑制MCF-7R细胞的侵袭、迁移能力(P<0.01)。结论 MCF-7R细胞中PKM2表达明显高于MCF-7细胞,沉默PKM2可以抑制MCF-7R细胞的侵袭和迁移能力。

PKM2对肝内胆管癌细胞增殖及上皮间质化的影响

目的检测M2-型丙酮酸激酶(pyruvate kinase M2,PKM2)在肝内胆管细胞癌(intrahepatic cholangiocarcinoma,ICC)组织中的表达情况,探讨PKM2对ICC细胞增殖及上皮间质化(EMT)的影响。方法RT-PCR和免疫组化法检测ICC组织中PKM2的表达,慢病毒载体介导的RNA干扰PKM2的表达,观察其对ICC细胞增殖、侵袭能力及EMT相关生物学特性的影响。结果RT-PCR结果显示,PKM2在ICC组织中高表达(P<0.05)。体外实验显示,PKM2基因沉默在体外抑制了ICC细胞的增殖和侵袭能力,PKM2-RNAi转染组细胞克隆形成数(152±9.63)显著低于空白组(351.5±17.6)及对照组(333.1±21.3)(P<0.05)。转染组的侵袭能力明显低于空载(Mock)及对照组(Control)组,发生迁移的细胞数分别为(96.0±7.1)、(185.5±11.3)、(197.1±17.2)(P<0.05)。其具体机制是通过抑制Wnt/β-catenin信号传导,进而抑制EMT相关通路。结论胆管癌组织中PKM2表达明显高于癌旁组织,PKM2可通过Wnt/β-catenin信号调节EMT,进而调控ICC细胞侵袭的能力。