M3受体遗传变异与血压钠钾反应性的关联研究

目的M3毒蕈碱乙酰胆碱受体(M3受体)由CHRM3基因编码,广泛分布于心血管系统并发挥重要的心脏调节作用。本研究旨在探讨M3受体遗传变异与钠钾饮食干预后血压反应性之间的关系。方法从中国陕西省农村地区招募来自124个家庭的333名受试者,经过3 d的基线观察后,依次进行7 d低盐饮食、7 d高盐饮食、7 d高盐补钾饮食。选取13个CHRM3基因单核苷酸多态性(SNP)位点进行相关分析。结果CHRM3基因SNP位点rs10802811与低盐期及高盐期舒张压及平均动脉压反应性显著相关,而rs6429147、rs373288072、rs114677844、rs663148与高盐期收缩压及平均动脉压反应性显著相关。此外,rs6692904与高盐补钾期收缩压、舒张压及平均动脉压反应性显著相关。结论M3受体基因多态性与血压钠钾反应性相关,提示M3受体基因可能参与血压盐敏感性及钾敏感性的形成。

M3受体激动剂对豚鼠心室肌细胞L型钙通道的影响

目的研究M3受体激动剂胆碱对豚鼠心室肌细胞L型钙通道的影响。方法应用全细胞膜片钳技术记录M3受体激动剂胆碱对豚鼠单个心室肌细胞L型钙通道电流(ICa-L)的影响;采用激光扫描共聚焦技术观察细胞内钙离子的变化。结果应用10 mmol.L-1胆碱使豚鼠心室肌细胞ICa-L密度从(9.02±0.82)pA/pF减少到(5.61±0.55)pA/pF(n=4,P<0.01),5 nmol.L-14-DAMP能够使其恢复至(8.12±0.65)pA/pF(n=4,P<0.01);10 mmol.L-1胆碱抑制KCl除极诱导的心肌细胞内钙的升高,从(2.76±0.05)降至(1.37±0.05)倍(n=8,P<0.01),5 nmol.L-14-DAMP可以阻断该作用(n=8,P<0.01)。结论M3受体激动剂胆碱通过延长L型钙通道激活过程而明显抑制ICa-L,减少细胞外的钙离子内流,降低心肌细胞内钙,从而发挥抗心律失常作用。

M3受体在脑心综合征心律失常中的作用

观察M3受体(M3R)在脑心综合征(CCS)模型大鼠心室肌中的作用及其表达,以探讨其与CCS心律失常的关系。线栓法建立CCS模型,监测心电图,激光共聚焦扫描显微镜记录激动M3R后心肌细胞内钙的变化,Western blotting检测心室肌中M3R表达水平的改变。同对照组相比,模型组心电图QRS、QT间期显著延长(P<0.01);Western blotting结果显示模型组心室肌中M3R的表达水平较对照组显著降低(P<0.05);胆碱激动M3R可以抑制KCl除极诱导的模型组心肌细胞内钙的升高幅度(P<0.01),其特异阻断剂4-DAMP可以阻断这一作用。M3R表达降低可能是CCS心律失常的重要原因之一。激动M3R可以降低心肌细胞内钙,M3R可能是治疗CCS心律失常新的靶点。

右心房组织中M3受体及缝隙连接蛋白43与心房颤动的相关性研究

目的探讨M3受体及Cx43在心房颤动发生与维持中的作用及二者之间的相互关系。方法收集94例风湿性心脏病瓣膜置换术患者右心房组织,按是否存在心房颤动分为心房颤动组(AF组,49例)和窦性心律组(SR组,45例),采用免疫荧光在激光共聚焦显微镜下观察M3受体和Cx43蛋白的表达及两者的结构共定位情况,采用Western blot方法检测两组M3受体和Cx43蛋白的蛋白表达量。结果与SR组相比,AF组心房组织M3受体及Cx43蛋白表达量下降(P<0.05),但M3受体与Cx43的结构共定位关系增强(P<0.05)。结论房颤患者右心房组织Cx43表达量下降,可能是房颤发生与维持机制之一,M3受体的表达量下降及其与Cx43的结构共定位关系增强,则可能是心房颤动时心肌细胞的自我保护、延缓电重构的机制。

M3受体激动剂治疗干燥综合征的临床观察

目的观察M3受体激动剂（环戊硫酮）治疗原发性干燥综合征（Primary Sjogren syndrome,pSS）的疗效及安全性。方法对60例pSS进行了环戊硫酮的开放性临床试验,环戊硫酮75 mg.d-1,治疗4w。结果①60例pSS患者为初治患者,平均年龄（44±6.4）岁,平均病程（41.2±5.9）月,男性2例,女性58例。②环戊硫酮能明显改善患者口腔舒适度和咀嚼吞咽能力;19例患者便秘症状消失。③环戊硫酮能明显增加唾液流率[治疗前（1.051±0.619）g/2 min;治疗后（1.324±0.726）g/2 min,P=0.004];泪流率也较治疗前升高[治疗前（4.72±5.67）mm/5 min;（治疗后6.763±5.958）mm/5 min,P=0.034]。④不良反应：治疗组有3例发生与药物有关的不良反应,1例尿频,2例多汗,程度较轻。对肝肾功能、血尿常规、大便隐血等无明显影响。结论环戊硫酮对干燥综合征患者有良好的治疗作用且副作用小。

骶神经根磁刺激对神经源性膀胱大鼠膀胱尿流动力学及M3受体表达的影响

目的探讨骶神经根磁刺激对神经源性膀胱大鼠膀胱尿流动力学及M3受体表达的影响。方法60只雌性成年SD大鼠按随机数字表法分为正常组、模型组、磁刺激组,每组20只。模型组、磁刺激组采用脊髓横断切除法建立神经源性膀胱动物模型。造模成功后,磁刺激组给予磁刺激治疗1次/d,连续治疗8周。8周后,麻醉大鼠行膀胱尿流动力学测定,处死大鼠取膀胱逼尿肌组织行组织学及超微结构观察,并检测M3受体表达水平。结果磁刺激组膀胱最大容量、膀胱顺应性均高于模型组(均P<0.05),漏尿点压力低于模型组(P<0.05);而磁刺激组与正常组上述3个参数比较,差异均无统计学意义(均P>0.05)。磁刺激组膀胱逼尿肌组织HE染色可见浆膜下组织中度充血、水肿,有轻度单核巨噬细胞浸润,并有少量成纤维细胞增生,但黏膜上皮细胞形态及排列较模型组接近正常;在透射电镜下可见逼尿肌细胞表面平滑,细胞间隙稍宽,排列尚均匀,胞质内线粒体结构较完整。磁刺激组大鼠膀胱逼尿肌组织中M3受体表达水平明显高于正常组、模型组(均P<0.05);而模型组与正常组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论骶神经根磁刺激对神经源性膀胱大鼠的膀胱功能有一定的改善作用,可能与膀胱逼尿肌组织中M3受体表达水平升高有关。

人血单个核细胞上M2、M3受体与冠脉痉挛的相关性研究

目的探讨人外周血单个核细胞上M2、M3受体表达的变化与冠状动脉痉挛的相关性。方法选择因静息性胸痛住院,且冠状动脉造影未见血管狭窄的患者29例,经乙酰胆碱激发试验分为冠状动脉痉挛组(痉挛组,20例)和非痉挛组(对照组,9例),应用ELISA分别检测并比较两组外周血单个核细胞上M2、M3受体的表达量。结果冠状动脉痉挛患者M3受体表达量显著低于对照组(P<0.01)。M2受体表达量两组无显著性差异(P>0.05)。在排除有组间差别的血中低密度脂蛋白胆固醇的影响后,两组间M3受体表达量的差别依然存在。结论M3受体与冠状动脉痉挛的发生相关,M2受体与冠状动脉痉挛的发生无相关,M3受体表达量的下降可能导致内皮功能紊乱,从而引起冠状动脉痉挛。

初步探讨抗M3受体抗体在干燥综合征的临床意义

干燥综合征（SS）是一种以侵及泪腺和唾液腺等外分泌腺为特征的全身性自身免疫病。该病最常见的临床表现为眼干、口干，并可累及肺、肾脏、淋巴系统、血管及肝脏等器官。但其发病机制尚不清楚。有研究发现分布于泪腺、唾液腺及平滑肌的毒蕈碱3（M3）受体与干燥综合征的发生有着密切的关系，并进一步证实M3受体是SS的器官特异性自身抗原。本研究旨在评估M3受体抗体在SS诊断中的意义，并探讨其与临床表现及其他实验室指标之间的关系。

M3受体亚型在间质性膀胱炎中密度的变化

目的研究M3受体亚型密度在间质性膀胱炎患者膀胱黏膜中的表达。方法通过免疫组织化学方法、蛋白质印迹、实时定量PCR3种实验方法检查M3受体在间质性膀胱炎患者和正常对照组膀胱黏膜组织标本中的表达。结果免疫组织化学:IC组(2.34±0.24)分,正常对照组(1.68±0.17)分;蛋白印迹:IC组(0.63±0.16),正常对照组(0.61±0.13);实时定量PCR:IC组(3.07±0.63)×10^-3,正常对照组(3.22±0.69)×10^-3。两组免疫组织化学结果比较差异具有统计学意义(P<0.05),蛋白印迹和实时定量PCR实验方法结果比较差异无统计学意义。结论 M3受体亚型密度在间质性膀胱炎中表达上调。

各种心律失常模型中心肌M3受体表达与心律失常的关系

目的：探讨各种心律失常模型心肌M3受体的变化及其与心律失常的关系。方法：30只大鼠随机分为3组，乌头碱，氯化钡和缺血组。分别注射乌头碱、氯化钡及结扎冠脉诱发大鼠心律失常，记录lh心电图的变化。Western blot检测心肌M3受体的表达（24h）。结果：各组均可诱发心律失常，乌头碱组心律失常和室性心动过速的持续时间较其余两个模型组明显延长。Western blot显示，各组模型大鼠心肌M3受体的表达均上调，分别为正常组的2．3，1．4和1．3倍，其中乌头碱组心肌M3受体的含量明显升高。心肌M3受体蛋白的表达和心律失常的持续时间呈正相关关系。结论：心律失常能诱导心肌M3受体的表达上调，且不同心律失常模型心肌M3受体上调的幅度不同，其机制可能和心律失常的严重程度呈正相关关系。

M3受体对胆管癌细胞增殖凋亡的影响

目的研究毒蕈碱型乙酰胆碱受体M3在胆管癌细胞系RBE中的表达,并探讨其表达对胆管癌细胞增殖及凋亡的影响。方法应用Western blotting检测RBE细胞中M3受体蛋白的表达;应用CCK-8法及流式细胞术分别检测M3受体激动剂及阻滞剂对RBE细胞增殖与凋亡的影响。结果匹罗卡品作用下胆管癌RBE细胞中M3蛋白的表达明显增加,且成浓度依赖性(P<0.05);匹罗卡品作用下胆管癌RBE细胞被阻滞于G1期,且凋亡率明显增加(P<0.05);以上作用可被M3受体阻滞剂阿托品所抑制。结论毒蕈碱型乙酰胆碱受体M3可抑制胆管癌细胞的增殖,并可以影响其DNA复制,促进其细胞凋亡。

M3受体激动剂诱导大鼠腮腺细胞内AQP5和脂质筏的核转位

水通道蛋白5（aquaporin,AQP5）存在于唾液腺腺泡细胞内,对调节水分转运速率和维持唾液分泌具有重要作用,AQP5功能失调会导致如增龄性口干、头面部放疗口干症、SS综合征和糖尿病口腔干燥等相关疾病的发生[1]。研究表明,M3毒蕈碱乙酰胆碱受体（M3 muscarinic acetylcholine receptor,M3-m AChR）激动剂西维美林（cevimeline）可以诱导AQP5与脂质筏（1ipid raft）从胞内囊泡转移至细胞顶膜（管腔侧细胞膜），通过增加膜上蛋白的数量而快速调节对水的通透性。

糖尿病大鼠精囊组织中神经生长因子和胆碱能M3受体的变化

目的:观察糖尿病大鼠精囊组织中神经生长因子(NGF)和胆碱能毒蕈碱M3受体含量的变化,以探讨糖尿病自主神经病变对精囊的影响,为糖尿病不育的临床防治提供理论依据。方法:成年雄性普通级SD大鼠15只,随机分为正常对照组5只和糖尿病模型组10只。链脲佐菌素(STZ)制备糖尿病模型成功后饲养8周,取精囊组织进行苏木精-伊红(HE)染色和免疫组化染色。结果:与正常对照组相比,糖尿病模型组HE染色可见大鼠精囊平滑肌细胞减少,腺上皮胞质变薄,结构紊乱。免疫组织化学染色显示,糖尿病模型组NGF阳性强度明显增强,而M3受体则明显减弱,糖尿病模型组与正常对照两组间NGF和M3平均累积光密度(IA)[0.018 7±0.002 4 vs 0.010 0±0.001 5和0.020 9±0.008 5 vs 0.041 2±0.011 7]的差异均具有统计学意义(P均<0.01)。结论:NGF和M3受体在糖尿病鼠精囊中表达改变,提示糖尿病可致精囊自主神经病变。

M3受体亚型在NSCLC细胞增殖、侵袭和迁移中的作用及机制研究

目的探讨M3R在NSCLC细胞增殖、侵袭和迁移中的作用及信号机制。方法 CCK-8法、划痕法和Transwell细胞侵袭实验检测M3R拮抗剂对NSCLC细胞增殖、迁移和侵袭的影响;钙成像观察M3R拮抗剂对卡巴胆碱诱导的内钙增加的影响;Western blot验证M3R拮抗剂对细胞增殖、迁移和细胞周期相关信号分子蛋白表达的影响。结果M3R拮抗剂1.25~80μmol·L^(-1)作用48 h后,能明显抑制NSCLC细胞增殖,抑制效果为R2-8018>达非那新(Darifenacin),H1299>H460;p-Akt、p-GSK3β、cyclin D1蛋白表达水平均随M3R拮抗剂作用时间延长明显下降,p21蛋白表达水平明显上调;R2-8018处理后,H1299细胞迁移和侵袭能力下降,MMP-2蛋白表达水平明显下降。结论拮抗M3R抑制Akt/GSK3β信号通路,抑制cyclin D1活性并上调p21,阻滞细胞周期进程,进而抑制细胞增殖;并通过下调MMP-2抑制H1299细胞的迁移和侵袭。

M3受体在慢性鼻-鼻窦炎合并鼻息肉患者鼻腔黏膜中的过度表达

目的:探讨M 3受体在人类鼻腔慢性炎症中的表达情况。方法:选择慢性鼻-鼻窦炎合并鼻息肉(CRS/NP)的患者30例作为研究对象。于鼻内镜手术过程中严格无菌操作,取鼻息肉组织及水肿黏膜用免疫组织化学和反转录PCR(RT-PCR)分别从蛋白质和基因水平确定M 3受体表达部位及密度。患者术后3个月换药时取恢复期黏膜,同法测定上述指标,最后进行统计学分析。结果:30例患者鼻腔或鼻窦黏膜的黏液腺和毛细血管上均有M 3受体亚型的过度表达,功能性鼻内镜手术后30例患者鼻腔黏膜M 3受体表达下降。结论:研究揭示在鼻腔慢性炎症过程中有M 3受体的过度表达,随着病情痊愈,M受体表达下调。

m3受体亚型在人舌下腺组织中的分布

目的 描述m3受体在人舌下腺组织中的分布。方法 应用m3受体亚型的单克隆抗体结合免疫组织化学方法(LSAB法)来描述m3受体在人舌下腺组织中的分布。结果 光镜下可见舌下腺组织中腺泡细胞和肌上皮细胞的细胞膜上均有棕黄色颗粒聚集,但前者免疫着色明显强于后者,导管组织及间质均未见棕黄色细颗粒聚集;阴性对照片未见棕黄色细颗粒聚集。结论 该结果提示人舌下腺中m3受体主要分布于腺泡细胞细胞膜表面,部分分布于肌上皮细胞细胞膜上。

胆碱能药物和人眼组织的M_3受体

目的 检测M3受体在人眼组织中的分布 ,探讨M3受体和胆碱能药物的关系。方法 人工合成M3受体特异性胞外肽链段 ,采用杂交瘤技术 ,制备M3受体单克隆抗体 ;用ELISA试验、放射配基受体结合实验和免疫组织化学实验 ,鉴定该抗体的特异性 ;通过免疫组织化学技术 ,检测M3受体在人眼组织中的分布。结果 虹膜、睫状肌、睫状体非色素上皮、视网膜和小梁网组织分布有M3受体 ,其中睫状肌的纵行纤维的M3受体的分布明显多于环行纤维。结论 人眼组织中广泛分布M3受体 。

M_3受体对体外H_2O_2 诱导大鼠心肌细胞凋亡的保护作用(英文)

目的 探讨M3受体激动对H2 O2 诱导的大鼠培养心肌细胞凋亡的作用 ,进一步阐明其机制。方法 末端标记法 (TUNEL)进行细胞凋亡检测 ;免疫组化方法检测Bcl 2和Fas的表达 ;共聚焦显微镜观察 [Ca2 + ]i荧光强度变化。结果 M3受体激动剂胆碱 (10mmol·L- 1 )可减少H2 O2 诱导的心肌细胞凋亡的数量 ,并可增加心肌Bcl 2的表达 ,减少Fas表达 ,抑制H2 O2 诱导的 [Ca2 + ]i荧光强度的升高。但预先应用 4DAMP (10nmol·L- 1 )阻断M3受体可逆转胆碱作用。结论 激动M3受体对H2 O2 诱导的心肌细胞凋亡有保护作用 ,其机制可能与Bcl 2和Fas表达以及下调[Ca2 + ]i有关。