计算机辅助设计提高人NMDA受体主亚基M3-M4环在E.coli中的表达

基于对螺旋区随机堆积的RNA二级结构的预测和密码子偏性计算 ,建立了pBV2 2 0载体中外源基因高效表达的判别模型。该模型认为 ,外源基因的表达水平与其 5′端 30～ 39区域 ,以及 3′端 30～ - 39区域的RNA二级结构自由能具有显著的统计学意义 ;其次与 3′端 9bp的局部密码子偏性相关。据此模型 ,使用RNAfold和Goldkey软件优化改构设计了用于克隆表达人NMDA受体主亚基M3 M4环的引物。将PCR扩增的基因克隆入pBV2 2 0载体中 ,在大肠杆菌DH5α宿主中获得了高效表达 (表达水平在 2 0 %以上 )。