牛支原体重组融合膜蛋白基因M27-498原核表达载体的构建

为构建牛支原体融合膜蛋白原核表达载体,使用SOE-PCR技术融合M27、M498基因并扩增融合基因M27-498,利用基因克隆技术构建pMD19-T-M27-498双基因克隆载体,通过亚克隆技术将融合基因M27-498克隆至表达载体pColdⅠ,构建pColdⅠ-M27-498原核表达载体。结果:SOE-PCR产物的电泳条带约1167 bp,与融合基因M27-498片段相符;经PCR、双酶切、测序鉴定,重组质粒pMD19-T-M27-498、pColdⅠ-M27-498的DNA均包含融合基因M27-498。结论:pColdⅠ-M27-498原核表达载体构建成功,可为牛支原体亚单位疫苗的研发奠定基础。