毒蕈碱型M5受体亚型及生物学特性

M5是最后一个被克隆出的乙酰胆碱毒蕈碱型受体亚型,具有G蛋白偶联受体家族的基本结构特征, 其信号转导方式既可以与G蛋白偶联,激活多种效应酶 (腺苷酸环化酶、磷脂酶C、磷脂酶A2 )产生相应的生物学效应,又可作用于离子通道来调节细胞间的信号传递。M5生理作用主要与调节中枢NO的生成和DA的释放有关,可能为药物滥用成瘾、DA系统功能障碍性疾病、阿尔采末病、脑缺血等的药物治疗提供一个新靶标。

补肾活血饮对帕金森病大鼠的旋转行为及中脑M5受体mRNA表达的影响

目的探讨补肾活血饮治疗帕金森病(PD)的作用机理。方法通过直接向脑组织内注入神经毒剂6-羟基多巴损毁脑黑质致密部建立PD大鼠模型。将120只SD大鼠随机分为健康对照组(对照组)、生理盐水对照组(模型组)和补肾活血饮治疗组(治疗组),连续治疗8周。观察各组治疗前及治疗5周起PD大鼠旋转行为特征的变化;应用RT-PCR观察各组大鼠中脑M5受体mRNA表达差异。结果补肾活血饮能明显改善PD模型大鼠的旋转行为,使治疗组大鼠每40min的平均旋转次数从(377.0±62.3)圈降为(84.0±20.0)圈(P<0.01)。与模型组比较,治疗组中脑M5受体mRNA相对表达值显著提高(1.02±0.26vs0.21±0.07),差异具有统计学意义(P<0.01)。结论补肾活血饮能提高PD模型大鼠中脑M5受体mRNA表达,促进多巴胺能神经元释放多巴胺(DA),从而改善PD大鼠的旋转行为。

阻断VTA内M5受体抑制大鼠海洛因行为敏化的表达

目的：探讨M5毒蕈碱受体亚型对海洛陶诱导的大鼠行为敏化的影响，以及海洛因敏化后大脑杏仁核和海马中pCREB蛋白表达的变化。方法：SD成年雄性大鼠皮下注射海洛因（0．25mg／kg）或者等量生理盐水，每天一次，测定大鼠自主活动（LA），连续8d，随后戒断10d。在第18天大脑腹侧被盖区（VTA）中分别微注射0．5μl（2μg Oligos）M5受体反义、有义脱氧寡核苷酸、或转染液。处理后24h所有大鼠皮下注射0.25mg／kg海洛因进行激发实验，最后一次LA测定后．各组动物用免疫组化法测定大鼠pCREB蛋白表达。结果：海洛因处理组大鼠与盐水对照组相比，第19天大鼠1h内LA显著增加（P〈0．05），表明0．25mg／kg剂量海洛因已稳定建立了海洛因敏化大鼠模型。

盐酸戊乙奎醚对吗啡依赖大鼠相关脑区p-CREB及M5受体的影响

目的观察盐酸戊乙奎醚（PHC）对吗啡依赖大鼠相关脑区p-CREB及M5受体的影响。方法将雄性SD大鼠30只随机分为对照组（NS组）、吗啡依赖组（MOR组）和PHC治疗组（PHC组），每组10只。连续7d交替皮下注射吗啡（10mg／kg，每天1次）或生理盐水，诱导大鼠的吗啡依赖位置偏爱效应。实验第8天停用吗啡，NS组与MOR组腹腔注射等体积的生理盐水；PHC治疗组则腹腔注射PHC 1．5mg／kg。30min后各组大鼠行CPP测试。Westernblot法检测大鼠中脑腹侧被盖区、伏隔核、前额叶皮层p-CREB的蛋白表达；实时定量聚合酶链反应（PCR）检测大鼠中脑腹侧被盖区、伏隔核、前额叶皮层M5受体的mRNA水平。结果（1）PHC治疗组的灰区停留时间与MOR组比较显著缩短[（422±103）s比（622±97）S，P〈0．01]。（2）MOR组中脑腹侧被盖区、伏隔核、前额叶皮层组织中p-CREB水平显著高于Ns组[（0．93±0．06）、（0．67±0．10）、（0．89±0．14）比（0．31±0．02）、（0．20±0．01）、（0．40±0．07），P〈0．01]；与MOR组比较，PHC组中脑腹侧被盖区、伏隔核、前额叶皮层组织中p-CREB水平显著降低[（0．65±0．05）、（0．58±0．04）、（0．67±0．09），P〈0．05或P〈0．01]。（3）MOR组中脑腹侧被盖区、伏隔核、前额叶皮层组织中M5受体的mRNA含量较NS组显著增高（1．80、0．22、0．50比1．00、0．13、0．32，P〈0．01）；与MOR组比较，PHC组能明显降低中脑腹侧被盖区、伏隔核、前额叶皮层组织中M5的mRNA含量（0．65、0．09、0．07，P〈0．01）。结论PHC能抑制吗啡依赖大鼠条件性位置偏爱的表达，该效应可能与PHC下调中脑腹侧被盖区、伏隔核、前额叶皮层组织中M5受体，抑制p-CREB表达有关。

M5毒蕈碱乙酰胆碱受体参与药物成瘾的研究进展

M5受体是毒蕈碱乙酰胆碱受体家族的一个新成员，是毒蕈碱乙酰胆碱受体家族（M1-M5亚型）最后一个被克隆出来的，属于G蛋白偶联受体。免疫沉淀和m RNA原位杂交实验表明M5受体在中枢神经系统中特定区域表达，包括海马、丘脑、黑质和中脑腹侧背盖区（VTA）部位）^[1，2，3]。可是和其他M受体比较，M5受体表达水平较低，

毒蕈碱乙酰胆碱受体新成员:孤儿受体m_5

m5受体是M受体家族一个新成员 ,与其它亚型相比 ,由于缺乏高选择性配体和标记条件以及富含m5受体的组织来源 ,目前对其分子结构、结合特性、组织分布、生理功能等知之甚少。随着免疫沉淀、原位杂交和药理学标记方法的发展 ,现已证实m5受体主要分布于大脑皮质最外层 ,海马齿状回、CA1、CA2区 ,嗅结节 ,横核以及外周血淋巴细胞、单核细胞、睫状肌等部位 ,提示m5受体在调节大脑和外周组织胆碱能神经活动方面具有独特而重要的作用 ,有可能成为治疗帕金森病、阿尔采末病、局灶性脑缺血等疾病新的药物靶点。

新型M5胆碱受体选择性拮抗剂的发现及药理活性研究

目的:选择性拮抗M5胆碱受体可成为治疗药物成瘾的新途径,本文旨在利用虚拟筛选、结构优化、分子与细胞水平的药理活性评价,以期获得新型M5胆碱受体选择性拮抗剂。方法:通过虚拟筛选获得具有新型骨架的候选化合物,以该结构为基础进行结构优化;利用放射配基实验对系列化合物进行活性测定;进一步评价其亲和力对各胆碱受体亚型的选择性,并利用细胞内钙离子释放实验评价其拮抗活性。结果:通过虚拟筛选得到具有新型骨架的M5胆碱受体拮抗剂WXY-1-1,对其进行三轮结构优化共合成20个化合物;放射配基实验表明,其中化合物WXY-3-5对M5胆碱受体亚型具有亚微摩尔级亲和力(Ki=0.7μM)且具有亚型选择性(高出其他4个亚型9-35倍);钙流实验表明,化合物WXY-3-5对M5胆碱受体亚型具有拮抗活性(IC50=6.1μM)。结论:通过虚拟筛选、结构优化以及药理活性评价,获得具有新骨架的M5胆碱受体选择性拮抗剂,为后续药物开发提供了新的先导结构。