志贺菌福氏5a M90T热休克蛋白70(DnaK)多克隆抗体的制备和鉴定

目的制备小鼠抗志贺菌福氏5a M90T热休克蛋白70(Dna K)的多克隆抗体,并鉴定其特异性和效价。方法 PCR扩增M90T中的基因dna K插入到原核表达载体p ET-24a中,获得p ET24a-dna K重组质粒,然后转化到大肠杆菌BL21(DE3)中表达,通过亲和柱纯化融合蛋白Dna K-His。将纯化的融合蛋白作为抗原免疫BALB/c小鼠,采集抗血清。用免疫印迹法、ELISA和免疫荧光技术鉴定抗血清的特异性和效价。结果重组质粒p ET24a-dna K在大肠杆菌BL21(DE3)中可以高效表达。用纯化的融合蛋白Dna K-His免疫小鼠制备得到的多克隆抗体能特异性低检测志贺菌福氏5a M90T Dna K蛋白,能有效地用于免疫印迹法、ELISA和免疫荧光等试验。结论成功制备了抗志贺菌福氏5a M90T Dna K蛋白的小鼠多克隆抗体。

弗氏志贺菌M90T株毒力相关膜蛋白复合物组成基因缺失突变体的构建

目的:构建弗氏志贺菌M90T株毒力相关膜蛋白复合物组成蛋白基因的缺失突变株。方法:分别扩增目的基因的上、下游同源臂和卡那霉素抗性基因片段,利用重叠延伸PCR技术将这3个片段融合为打靶片段,电击转化M90T/pKD46感受态细胞,在λRed重组系统的作用下,通过同源重组将目的基因置换为卡那霉素抗性基因,之后在辅助质粒pCP20的作用下切除FRT位点之间的卡那霉素抗性基因,得到基因缺失突变体。结果与结论:分别构建了M90T株毒力相关膜蛋白复合物4个组成蛋白Apy、DnaK、ClpB、YdgA的基因缺失突变体,为进一步研究各基因的功能提供了突变体。

志贺菌福氏5a M90T毒力蛋白Apyrase的表达、纯化及多克隆抗体制备

目的:克隆编码志贺菌福氏5a M90T毒力蛋白Apyrase的基因phoN2并实现表达,纯化后免疫BALB/c小鼠制备鼠抗Apyrase的多克隆抗体,并对多克隆抗体进行评价。方法:通过PCR扩增的志贺菌5a M90T中的基因phoN2克隆至表达载体pET24a中,将重组质粒转化到E.coli BL21(DE3)中,筛选阳性克隆,进行IPTG诱导表达并纯化Apyrase-HIS融合蛋白。以纯化的融合蛋白作为抗原免疫BALB/c小鼠,制备该蛋白的多抗。Western blot、ELISA、免疫荧光鉴定获得的抗血清。结果:成功构建了原核表达载体pET24a-Apyrase,经诱导表达出相对分子量为28 kD的融合蛋白,用纯化的融合蛋白作为抗原免疫小鼠制备的多克隆抗体,通过Western blot、ELISA、免疫荧光法证明多克隆抗体制备成功。结论:成功制备了志贺菌福氏5a特异性的鼠多克隆抗体,为进一步研究Apyrase蛋白在志贺菌福氏5a M90T中的表达、定位及志贺菌福氏5a M90T的快速检测奠定了基础。

M90／M91微型OPLC

OPLC是在微型PLC系统中独树一帜的新产品，OPLC将控制器、I/O组件、操作显示面板溶为一体，具有结构简单、尺寸小巧、价格低廉、操作方面及基本功能全面等优点。

M90S微机失重秤的计量误差

在分析Ｍ９０Ｓ 微机失重秤计量误差原因的基础上， 建立了有关计量误差的若干计算方法；通过标定中的一些参数，可以计算使用中的计量误差。同时提出了一种计量精度的评定方法。

M90S失重秤在熟料配料中的应用

Ｍ９０Ｓ失重秤在熟料配料中的应用冯小武江西省安福县吉安地区水泥厂（３４３２００）１引言长期以来，我厂熟料配料采用ＤＣＭ－１型电子皮带秤，由于受熟料库存量的限制，入磨熟料温度较高，经常造成电子秤皮带拉长，跑偏甚至烧坏；该秤实物标定困难，稳定性差，故障率...

M90商用计算机在棉花收购中的应用

山东大学科教仪器厂从1982年开始生产棉花和烟草收购计算机，是国内最早生产农副产品收购计算机的单位。进入九十年代后，为了满足我国农副产品收购行业中现代化发展的更进一步需求，该厂於1990年设计生产了新一代产品－M90商用计算机。投放市场后，该机以其优异性能受到广大使用单位的欢迎。本文仅就M90商用计算机在棉花收购工作中的应用作一简单介绍。

FIRETEX M90问世

无溶剂、快速固化的M90膨胀性系列涂料可为油气设施的钢结构、甲板、舱壁提供长达3h的保护。在发生喷气或池火时，对管道支架、工艺设备、阀门和压力容器提供保护。由于每个钢结构部分的防火等级不同，所需膨胀性涂料要比适用于标准环氧涂层的厚度高出30倍，比火灾发生前的原始厚度多出5-10倍。

戴尔Precision M90、M65移动工作站登陆中国市场

2006年4月18日，戴尔公司宣布在国内市场推出一代移动工作站，Dell Precision M90和Dell Precision M65。

微机配料——M90S失重秤的应用

1 前言 失重秤是近几年来发展较快的一种静态计量(或间断计量)设备,该秤结构简单,计量精度稳定,维护保养方便,且易于加工,秤体封闭好,无粉尘飞扬。它是将一计量料仓用三只拉力传感器吊于空中,上部有一台电振机加料(软连接),下部有一台电振机给料(同为计量体的一部分)。2 工作原理 配料系统采用一机多路(可达8路)计量配料控制,其计量过程:加料给料为一个工作周期,加料时计算机首先采样,计算出瞬时重量为初重,随着物料通过周期性采样,计算出瞬时重量与初重相减后,与设定值比较。

M90-Ⅰ型高效脱硫催化剂研制成功

一种高效脱硫,且成本极为低廉的M90-1型新型催化剂最近在四川省南川县氮肥厂研制成功。这种新型脱硫催化剂可同时脱除无机硫和有机硫,脱硫效率高,对无机硫的脱硫效率高达99.5％以上;对有机硫脱硫效率也在50％以上。

羊种布氏杆菌M5-90△26基因缺失疫苗双重实时荧光定量PCR方法的建立

为了寻找一种能够鉴别布氏杆菌M5-90△26疫苗株与其他布氏杆菌菌株的双重实时荧光定量PCR检测方法。针对布氏杆菌菌株的16S rRNA和Bp26基因,各设计一套引物和探针,并优化反应体系和反应程序。以布氏杆菌A19、S2、M5-90和M5-90△26四种疫苗株以及大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、李斯特菌、沙门氏菌、链球菌进行双重荧光定量PCR扩增,评价该方法的特异性。克隆构建PCR_16S rRNA_Bp26标准品,通过倍比稀释进行双重荧光定量PCR扩增,评价该方法的灵敏度。使用该方法与虎红平板凝集试验、试管凝集试验进行检测结果对比,评价该方法的可行性。结果显示,本方法特异性好,布氏杆菌A19、S2、M5-90三种疫苗株均同时出现Bp26基因和16S rRNA基因的扩增,布氏杆菌M5-90△26疫苗株只出现16S rRNA基因的扩增,大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、李斯特菌、沙门氏菌、链球菌均未出现扩增曲线。该方法建立的16S rRNA基因序列扩增通道和Bp26基因序列扩增通道对标准品的最低检测限均达5 copies/μL。该方法对临床样本的检测结果与虎红平板凝集试验、试管凝集试验检测结果符合率较高,说明建立的羊种布氏杆菌M5-90△26基因缺失疫苗双重实时荧光定量PCR检测方法可用于临床的检测,为鉴别布氏杆菌M5-90△26疫苗株免疫与布氏杆菌野毒株感染提供一种可行的检测方法。

布鲁氏菌病疫苗免疫评估与野毒感染区分试验

为评估布鲁氏菌基因缺失活疫苗(M5-90△26株)的安全性和免疫效果,在华池县选取阴性、阳性羊群各一群,以腿部皮下注射的方式免疫接种布鲁氏菌基因缺失活疫苗(M5-90△26株),免疫接种后30 d、90 d、120 d、150 d、180 d分别采集血清样品,用虎红平板凝集试验和试管凝集试验开展免疫效果评估,统计抗体转阳率、转阴率等指标。结果显示,M5-90△26株免疫接种30d后抗体达到峰值,以后逐渐下降,免疫90d后转阴率在80%以上,说明该疫苗具有免疫效果好、保护率高、转阴快等优点。布鲁氏菌基因缺失活疫苗(M5-90△26株)中敲除bp26基因,用布鲁氏菌病LPS和BP26蛋白ELISA抗体检测试剂盒可以对疫苗免疫阳性和野毒感染进行区分,能够为布鲁氏菌病检疫、净化提供依据,为华池县布鲁氏菌病防控提供更多参考。

布鲁氏菌疫苗免疫抗体水平消长规律研究

本研究旨在评估不同布鲁氏菌疫苗株(A19、S2和M5)及免疫程序对牛羊的免疫效果和抗体消长规律,以优化布鲁氏菌病的疫苗免疫策略。选取免疫背景清晰的牛犊和羊只,分别采用A19疫苗注射、S2疫苗灌服和M5疫苗注射的方法进行免疫。免疫后定期采集血清样本,通过虎红平板凝集试验检测抗体阳性率。结果表明,A19疫苗在初次免疫后30 d抗体转阳率最高,加强免疫可维持较长时间阳性率。S2和M5疫苗在免疫后15~30 d达到抗体阳性高峰,注射组阳性率显著高于灌服组,且S2疫苗的阳性持续时间较长。统计分析显示,不同疫苗株和免疫方式对抗体阳性率和持续时间有显著影响。研究结果为制定布鲁氏菌病的疫苗免疫接种程序提供了科学依据,指出A19疫苗加强免疫的重要性,以及注射免疫方式相较于灌服在提高免疫效果和延长保护时间上的优势。