蓝舌病毒HbC_3株对小鼠乳腺癌MA-782细胞的感染特性

体外研究蓝舌病毒湖北株3(BTV-HbC3)对鼠乳腺癌细胞MA782的感染性并探讨BTV-HbC3靶向性溶癌的机制。观察MA782细胞感染BTV-HbC3的病变效应(CPE);MTT法研究病毒致细胞病变率的特征;透射电镜观察感染病毒后细胞超微结构的变化;免疫组化研究病毒蛋白在细胞内的表达特点;凋亡染色(TUNEL法)观察病毒诱导细胞凋亡的情况;流式细胞仪测定病毒对MA782细胞周期的影响。结果证明BTV-HbC3感染MA782细胞后有明显的细胞病变效应;病毒蛋白主要表达在细胞的胞膜及胞浆内;凋亡染色发现大量的凋亡细胞;流式细胞仪可见明显的亚二倍体峰。故认为BTV-HbC3在体外能有效的感染MA782细胞,并能诱导MA782细胞凋亡。

雌二醇和孕酮对津白Ⅱ小鼠MA891乳腺癌细胞侵袭、迁移与基质金属蛋白酶2和9表达影响

为研究雌二醇和孕酮对TA2小鼠MA891乳腺癌细胞体外侵袭迁移以及MMP2和MMP9表达的影响,探讨雌孕激素与MA891乳腺癌细胞侵袭及迁移的可能机制,将MA891乳腺癌细胞分为雌二醇(E2)组、孕酮(P)组、雌二醇-孕酮组(E2+P)组、阴性对照组和空白对照组。用划痕实验和Transwell法检测MA891乳腺癌细胞体外侵袭和迁移。细胞免疫组化分析MMP2和MMP9的表达结果显示,E2组、P组及E2+P组MA891乳腺癌细胞迁移和侵袭能力增加(P<0.01);E2+P组MA891乳腺癌细胞迁移和侵袭能力较E2组及P组高(P<0.05);E2组、P组及E2+P组MA891乳腺癌细胞表达MMP2和MMP9上调(P<0.05,P<0.05,P<0.01;P<0.05,P<0.05,P<0.05)。因此,雌二醇和孕酮可能通过使MA891乳腺癌细胞MMP2及MMP9表达上调,增加MA891乳腺癌细胞迁移和侵袭能力。

小鼠乳腺腺癌细胞系MA782/5S-8102细胞的超微结构

对小鼠乳腺腺癌细胞系MA782/5 S-8102细胞的超微结构观察,可见细胞基质电子密度不同的亮细胞和暗细胞,细胞核呈明显畸形,核大,核仁数有所增加,核内异染色质浓聚,核膜肿胀,核质比例高。细胞质内核糖体、线粒体显著增加,粗面内质网明显扩张,高尔基体、溶酶体、脂质粒及微丝清楚可见,并观察到胞内A型病毒颗粒及从细胞表面微绒毛芽生的未成熟的B型样颗粒。细胞膜褶皱,细胞表面具有较丰富的微绒毛,在相邻细胞之间可观察到桥粒。结果表明MA782/5 S-8102细胞系细胞具有明显的恶性细胞特征。本文还对所出现的病毒进行了讨论。

TAM诱导MA782细胞凋亡与Cyclin D1、CDK4、TGF-β1的关系

目的 :探讨Tamoxifen(TAM )诱导ER(- )小鼠乳腺癌细胞MA782细胞凋亡及其分子作用机制。方法 :TAM体外作用于MA782细胞 ,用MTT法检测细胞增殖活性、流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期分布 ,免疫组化检测cyclinD1、CDK4、TGF β1蛋白表达 ,并用病理图像分析软件进行半定量分析。 结果 :TAM在体外能明显抑制MA782细胞生长 ,诱导细胞凋亡 ,下调cyclinD1、CDK4表达 ,上调TGF β1表达。免疫组化半定量分析显示 6μmol/L作用 72小时后 ,cyclinD1、CDK4蛋白平均灰度值分别从 132 .5± 0 .0 2、10 7.2± 0 .0 1下降至 12 6 .18± 0 .0 3、76 .2 1± 0 .0 3,10 μmol/L作用 72小时后分别为 73.5 6± 0 .0 2、72 .0 3± 0 .0 1,与对照组相比差异极其显著性 (P <0 0 1)。MA782细胞TGF β1平均灰度值为 5 9.72± 0 .0 2 ,2 μmol/L作用 4 8小时后无明显变化 ,72小时后上升到97 1± 0 .0 3,6、10 μmol/L作用 4 8小时后平均灰度值分别为 83.2± 0 .0 4、96 .83± 0 .0 2 ,72小时后分别上升到12 1 75± 0 .0 3、139.0 1± 0 .0 5 ,与对照组相比差异极其显著 (P <0 .0 1)。结论 :TAM诱导MA782细胞凋亡其分子作用机制可能与下调cyclinD1、CDK4蛋白表达 ,上调TGF β1蛋白表达有关。

TAM诱导MA782细胞凋亡与CDK4关系

目的探讨Tamoxifen(TAM)诱导ER(-)小鼠乳腺癌细胞MA782细胞凋亡及其分子作用机制。方法TAM体外作用于MA782细胞,用MTT法检测细胞增殖活性、流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期分布,免疫组化检测CDK4蛋白表达,并用病理图像分析软件进行半定量分析。结果6、10μmol/LTAM在体外能明显抑制MA782细胞生长,诱导细胞凋亡,作用24h细胞凋亡率分别为7.04%、19.04%,10μmol/LTAM作用48h后细胞凋亡率从19.04%上升到51.27%,与对照组比较有显著差异(P<0.01)。2μmol/LTAM作用于细胞不同时间后检测CDK4蛋白,与对照组无明显变化(P>0.05),而6、10μmol/LTAM作用不同时间后,CDK4蛋白表达有不同程度的下降,与对照组相比差异显著(P<0.05或P<0.01)。结论TAM诱导MA782细胞凋亡其分子作用机制可能与下调细胞CDK4蛋白表达有关。

三苯氧胺诱导MA782细胞凋亡与Cyclin D1的关系

目的 探讨三苯氧胺Tamoxifen(TAM)诱导ER( - )小鼠乳腺癌细胞MA782细胞凋亡及其分子作用机制。方法 TAM体外作用于MA782细胞 ,用MTT法检测细胞增殖活性 ,流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期分布变化 ,免疫组化检测MA782细胞cyclinD1蛋白表达(并用病理图像分析软件进行半定量分析 ) ,RT -PCR检测MA782细胞cyclinD1mRNA表达情况。结果 TAM在体外能明显抑制MA782细胞生长 ,诱导细胞凋亡 ,下调cyclinD1mRNA及蛋白表达 ,免疫组化半定量分析显示 6μmol/LTAM作用MA782细胞 72小时后 ,cyclinD1蛋白平均灰度值从 1 32 .5± 0 .0 2下降至 1 2 6.1 8± 0 .0 3,1 0 μmol/LTAM作用 72小时后下降为 73.5 6± 0 .0 2 ,与对照组相比差异极其显著 (P <0 .0 1 )。RT -PCR检测结果显示 :2 μmol/LTAM组无明显改变 ,而 6、1 0 μmol/LTAM作用于细胞 2 4、48小时后 ,细胞cyclinD1mRNA表达呈现出不同程度的下降 ,与对照组比较有统计学意义 (P <0 .0 5或P <0 .0 1 )。结论 TAM诱导MA782细胞凋亡其分子作用机制 。

Tamoxifen诱导MA782细胞凋亡与P21/CIP1、PCNA的关系

目的 探讨三苯氧胺 (TamoxifenTAM )诱导ER(- )小鼠乳腺癌细胞MA782细胞凋亡及其分子作用机制。方法 TAM体外作用于MA782细胞 ,用MTT法检测细胞增殖活性、流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期分布 ,透射电镜观察细胞凋亡超微结构改变 ,免疫组化检测MA782细胞p2 1/CIP1、PCNA蛋白表达 ,并用病理图像分析软件进行半定量分析。 结果 6 μmol/L、10 μmol/LTAM在体外能明显抑制MA782细胞生长 ,诱导细胞凋亡 ,作用 2 4小时细胞凋亡率分别为 7.0 4 %、19.0 4 % ,10 μmol/LTAM作用 4 8小时后细胞凋亡率从 19.0 4 %上升到 5 1.2 7% ,与对照组比较有显著差异 (P <0 .0 1)。 2 μmol/LTAM作用不同时间后 ,细胞上述蛋白无明显变化 ,而 6 μmol/L、10 μmol/LTAM作用不同时间后 ,PCNA蛋白表达有不同程度的下降 ,p2 1/CIP1蛋白表达有不同程度的上升与对照组相比差异显著 (P <0 .0 5或P <0 .0 1)。结论 TAM诱导MA782细胞凋亡其分子作用机制可能与下调细胞PCNA蛋白表达及上调 p2 1/CIP1蛋白表达有关。

TGF-β1与TAM诱导MA782细胞凋亡的关系

目的探讨三苯氧胺Tamoxifen(TAM)诱导ER(-)小鼠乳腺癌细胞MA782细胞凋亡及其分子作用机制。方法TAM体外作用于MA782细胞。流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期分布情况。MTT法检测细胞增殖活性。免疫组化法检测MA782细胞TGF-β1蛋白表达量,并用病理图像分析软件对蛋白表达进行半定量分析。RT-PCR法检测MA782细胞TGF-β1mRNA表达情况。结果TAM在体外能明显抑制MA782细胞生长,诱导细胞凋亡,上调TGF-β1mRNA及蛋白表达量,免疫组化半定量分析显示TGF-β1平均灰度值为(59.72±0.02),2μmol/L TAM作用48h后无明显变化,72h后上升到(97.1±0.03),6、10μmol/LTAM作用48h后分别上升为(83.2±0.04)、(96.83±0.02),72别上升到(121.75±0.03)、(139.01±0.05),与对照组相比差异极其显著(P<0.01)。RT-PCR检测结果显示2μmol/L TAM组无明显改变,而6、10μmol/LTAM作用于细胞24、48h后,细胞TGF-β1mRNA水平表现出不同程度的上升,与对照组比较有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论TAM诱导MA782细胞凋亡,其分子作用机制可能与上调细胞TGF-β1mRNA及蛋白表达有关。

三种建立小鼠乳腺癌移植模型方法的比较

目的:用MA782细胞建立稳定的小鼠乳腺癌模型,选择最佳的模型制作方法。方法:60只BALB/c小鼠随机分为3组,每组20只,分别采用小鼠左腋窝皮下细胞悬液注射法、组织块悬液注射法、组织块种植法制作小鼠乳腺癌模型,比较各组的种植成活率、肿瘤生长率,并观察肿瘤的生物学形态。结果:组织块悬液注射法操作简便,经济,成瘤率高,肿瘤大小均一,肿瘤呈浸润性生长,增殖旺盛;细胞悬液注射法操作复杂,价格昂贵;组织块种植法操作复杂,成瘤率较低,大小相差较大。结论:三种方法中,组织块悬液注射法是最佳的模型制作方法。

生物酶制剂JA消融小鼠乳腺癌的治疗研究

目的:探讨生物酶制剂JA治疗小鼠乳腺癌的可行性和安全性,为临床应用提供实验依据。方法:用小鼠乳腺癌MA782细胞和组织悬液接种小鼠皮下的方法制成动物模型,共60只,随机分成3组(G1-G3),分别行瘤体内注射生理盐水、无水乙醇、制剂JA各0.2 ml,观察用药后肿瘤大小变化。于用药第1,10天每组各处死8只小鼠,采血检查肝肾功能并取肿块病检。结果:肿瘤消融效果G3>G2>G1,G2组出现ALT、AST持续升高,G3组ALT、AST仅表现为一过性升高,其它各组间各指标无显著性差异。结论:制剂JA对实验性小鼠乳腺癌(MA782肿瘤)有独特的消融效果,明显优于无水乙醇,是一种安全有效的生物酶消融制剂,具有潜在的临床应用前景。

三苯氧胺治疗乳腺癌分子机制及其与CDK4、PCNA的关系

目的探讨三苯氧胺(TAM)治疗乳腺癌分子作用机制及其与细胞周期的关系。方法TAM作用于ER(-)小鼠乳腺癌MA782细胞,用流式细胞仪检测细胞凋亡率和细胞周期分布;MTT法检测细胞增殖活性;免疫法检测CDK4、PCNA蛋白表达量变化值,同时用病理图像分析软件进行半定量分析。结果TAM(6、10μmol/L)在体外能明显抑制MA782细胞生长,诱导细胞凋亡,TAM(6、10μmol/L)作用于细胞24 h后,细胞凋亡率分别为7.04%、19.04%,与对照组比较结果有明显差异,TAM(10μmol/L)作用于细胞24、48 h后细胞凋亡率从19.04%上升到51.27%,两时间段之间差异显著。免疫组织化学染色结果显示TAM(2μmol/L)作用于细胞不同时间后,CDK4、PCNA蛋白表达量无明显变化,而6、10μmol/L TAM作用于细胞不同时间后,CDK4、PCNA蛋白表达量有不同程度的下降,与对照组相比差异显著(P<0.05或P<0.01)。结论TAM诱导MA782细胞凋亡的分子作用机制,可能与TAM下调细胞周期正性调节因子CDK4、PCNA蛋白表达量有关。