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MAD2L1在结直肠癌中的表达及与免疫浸润关系的研究
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作者 刘萌萌 李付广 《临床研究》 2024年第5期5-9,共5页
目的 探讨干扰有丝分裂阻滞缺陷2样蛋白1(MAD2L1)在结直肠癌组织中的表达及与免疫浸润的关系。方法 基于TCGA数据库分析结直肠癌组织及正常结直肠组织中MAD2L1的表达差异,生存分析评价MAD2L1表达水平与患者预后的关系,采用临床相关性分... 目的 探讨干扰有丝分裂阻滞缺陷2样蛋白1(MAD2L1)在结直肠癌组织中的表达及与免疫浸润的关系。方法 基于TCGA数据库分析结直肠癌组织及正常结直肠组织中MAD2L1的表达差异,生存分析评价MAD2L1表达水平与患者预后的关系,采用临床相关性分析研究结直肠癌与临床资料的相关性。使用Timer数据库gene模块分析探究MAD2L1与免疫细胞群之间的关系。使用correlation模块评估与免疫检查点水平的相关性。使用correlation模块进行免疫细胞浸润的关联分析,分析结直肠癌组织中MAD2L1的表达与免疫细胞浸润的关系。结果 与正常组织相比,结直肠癌组织中MAD2L1表达上调;MAD2L1高表达组与低表达组结直肠癌患者相比,N分期患者比例不同,差异具有统计学意义(P<0.05)。预后分析显示,MAD2L1高表达组的患者生存期、无进展生存期均高于低表达组的患者,差异具有统计学意义(P<0.05)。多因素COX回归分析显示,年龄和T分期可作为影响结直肠癌患者预后的独立预后因子(P<0.05)。MAD2L1与结直肠癌中CD8^(+)T细胞(结肠癌:r=0.315,P<0.001;直肠癌r=0.352,P<0.001)、嗜中性粒细胞(结肠癌:r=0.195,P<0.001;直肠癌:r=0.278,P<0.001)浸润水平均呈正相关,与CD4^(+)T细胞(结肠癌:r=-0.174,P<0.001;直肠癌:r=-0.381,P<0.001)浸润水平呈负相关。其中还与结肠癌中B细胞水平(r=0.125,P<0.05)呈正相关。在结肠癌中,MAD2L1与PD-L1(r=0.159,P<0.05)呈正相关。在直肠癌中,MAD2L1与PD-1(r=-0.241,P<0.05)呈负相关。结论 MAD2L1在结直肠癌中高表达,与结直肠癌良好的预后及肿瘤免疫浸润相关,可能是结直肠癌患者潜在的治疗靶点。 展开更多
关键词 mad2L1 结直肠癌 免疫浸润 预后
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金果胃康胶囊调控胃癌前病变大鼠HSP27及MAD2表达研究
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作者 惠建萍 张耀之 +3 位作者 刘海涛 王军 李龙梅 沈舒文 《陕西中医药大学学报》 2023年第6期60-66,共7页
目的观察金果胃康胶囊对胃癌前病变大鼠胃黏膜HSP27、MAD2蛋白表达的影响。方法将85只大鼠随机分为空白组10只和造模组75只。空白组给予正常饮食,造模组采用N-甲基-N’-硝基-N-亚硝基胍(MNNG)联合乙醇、氨水及饥饱失常组成复合造模法。... 目的观察金果胃康胶囊对胃癌前病变大鼠胃黏膜HSP27、MAD2蛋白表达的影响。方法将85只大鼠随机分为空白组10只和造模组75只。空白组给予正常饮食,造模组采用N-甲基-N’-硝基-N-亚硝基胍(MNNG)联合乙醇、氨水及饥饱失常组成复合造模法。将造模后大鼠随机分成模型组、金果胃康胶囊高、中、低剂量组和维酶素组。各给药组分别给予相应药物灌胃,空白组和模型组给予等量生理盐水灌胃,1次·d-1,连续12 w。12 w后处死所有大鼠,取胃体组织,光镜下观察各组大鼠胃黏膜组织病理变化;免疫组化法检测胃黏膜组织中HSP27、MAD2蛋白表达情况。结果模型组大鼠HSP27、MAD2蛋白表达水平明显高于空白组(均P<0.05)。各给药组HSP27、MAD2蛋白表达水平明显低于模型组(P均<0.05),且金果胃康胶囊中高剂量组明显低于维霉素组(均P<0.05)。结论金果胃康胶囊可逆转胃癌前病变的发生,作用机制可能与其能抑制HSP27蛋白的表达及控制MAD2蛋白的表达有关。 展开更多
关键词 金果胃康胶囊 胃癌前病变 慢性萎缩性胃炎 HSP27 mad2
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Increased MAD2L2 expression predicts poor clinical outcome in Colon Adenocarcinoma
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作者 HAOTONG SUN HEYING WANG +5 位作者 XIN LI YANJIE HAO JUN LING HUAN WANG FEIMIAO WANG FANG XU 《BIOCELL》 SCIE 2023年第3期607-618,共12页
Background:Colon adenocarcinoma(COAD)is the second leading cause of cancer death worldwide thus,identification of COAD biomarkers is critical.Mitotic Arrest Deficient 2 Like 2(MAD2L2)is a key factor in mammalian DNA d... Background:Colon adenocarcinoma(COAD)is the second leading cause of cancer death worldwide thus,identification of COAD biomarkers is critical.Mitotic Arrest Deficient 2 Like 2(MAD2L2)is a key factor in mammalian DNA damage repair and is highly expressed in many malignant tumors.This is a comprehensive study of MAD2L2 expression,its diagnostic value,prognostic analysis,potential biological function,and impact on the immune system of patients with COAD.Methods:Gene expression,clinical relevance,prognostic analysis,diagnostic value,GO/KEGG cluster analysis,data obtained from TCGA,and bioinformatics statistical analysis were performed using the R package.Immune responses to MAD2L2 expression in COAD were analyzed using TIMER.The expression of MAD2L2 in HCT116 cells induced by the inflammatory factor TNF-αwas detected using Western blot.Results:Our results underscore the clinical diagnostic value and potential biological significance of MAD2L2 in patients with COAD.A high level of MAD2L2 expression has been found in COAD and correlated with tumor status and colon polyps.ROC curve analysis showed that MAD2L2 expression has high diagnostic value in COAD.Analysis of immune infiltration results showed that MAD2L2 expression was positively correlated with neutrophil levels.The western blot results demonstrated that MAD2L2 was dose-dependently present with TNF-α.GO/KEGG revealed that MAD2L2 overexpressed and coexpressed genes were mostly involved in biological functions,including hypoxia response,response to reduced oxygen levels,mitochondrial translation elongation,and other processes.Conclusion:MAD2L2 as a new COAD biomarker contributes to our understanding of how alterations in gene expression and the immunological environment contribute to the development of colon cancer.Following further investigation,MAD2L2 may prove to be a viable target factor for clinical diagnosis and therapy of COAD. 展开更多
关键词 mad2L2 COAD Poor prognosis Immune infiltration TCGA
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甘草酸对四氯化碳肝纤维化大鼠肝组织smad2免疫组织化学表达的影响 被引量:6
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作者 周朝晖 蔡瑜 +2 位作者 沈锡中 朱腾方 王吉耀 《肝脏》 2006年第1期35-36,共2页
关键词 免疫组织化学方法 肝纤维化大鼠 甘草酸 Smad2 四氯化碳 肝组织 肝星状细胞激活 转化生长因子 SMAD蛋白 mad2蛋白
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MAD2 RNA干扰载体的构建及其对胃癌细胞生长的影响 被引量:6
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作者 杜昱蕾 尹芳 +4 位作者 杨桂涛 谢华红 宋久刚 刘杰 樊代明 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期290-292,共3页
目的构建MAD2(有丝分裂阻滞缺陷蛋白2)特异性RNA干扰真核表达载体,体外观察抑制MAD2基因表达对胃癌细胞生长和细胞周期的影响。方法构建MAD2siRNA真核表达载体,脂质体法将pSilencer3.1空载体和pSilencer3.1/MAD2-siRNA1和pSilencer3.1/M... 目的构建MAD2(有丝分裂阻滞缺陷蛋白2)特异性RNA干扰真核表达载体,体外观察抑制MAD2基因表达对胃癌细胞生长和细胞周期的影响。方法构建MAD2siRNA真核表达载体,脂质体法将pSilencer3.1空载体和pSilencer3.1/MAD2-siRNA1和pSilencer3.1/MAD2-siRNA2真核表达载体分别导入人胃癌细胞系SGC7901。稳定转染后Westernblot和RT-PCR检测胃癌细胞内MAD2蛋白及mRNA水平的表达情况,挑选出抑制效果最好的单个克隆。MTT法检测各实验组细胞生长情况,流式细胞术检测纺锤体抑制剂长春新碱作用后,胃癌细胞MAD2-siRNA转染组和空载体组细胞周期的分布。结果成功构建MAD2siRNA真核表达载体,转染胃癌细胞SGC7901可使其MAD2蛋白及mRNA表达显著下调。MAD2表达降低的胃癌细胞生长速度明显增快(P<0.01),经长春新碱作用后不能被阻滞于有丝分裂期。结论小干扰RNA技术可以有效地特异性抑制胃癌细胞纺锤体检查点关键蛋白MAD2的表达。MAD2的抑制可使胃癌细胞SGC7901生长加速,增殖能力增强,同时减弱纺锤体抑制剂长春新碱阻滞细胞周期的作用。 展开更多
关键词 有丝分裂阻滞缺陷蛋白2(mad2) RNA干扰技术 胃癌 细胞周期
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MAD2蛋白在人正常组织和胃癌组织中的表达 被引量:5
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作者 王莉 尹芳 +4 位作者 杜煜蕾 陈铮 乔泰东 吴开春 樊代明 《现代肿瘤医学》 CAS 2009年第11期2045-2048,共4页
目的:研究MAD2蛋白在人正常组织和胃癌中的表达及其临床意义。方法:用免疫组织化学方法检测23例人正常组织及102例胃癌及癌旁组织中MAD2蛋白的表达。结果:MAD2蛋白在23例正常组织中主要定位在胞核和胞浆中,在正常胃组织主要定位在胞浆,... 目的:研究MAD2蛋白在人正常组织和胃癌中的表达及其临床意义。方法:用免疫组织化学方法检测23例人正常组织及102例胃癌及癌旁组织中MAD2蛋白的表达。结果:MAD2蛋白在23例正常组织中主要定位在胞核和胞浆中,在正常胃组织主要定位在胞浆,在胃癌组织中主要定位在胞核和胞浆。MAD2在胃癌中和癌旁组织的表达阳性率分别为70.59%(72/102)和38.24%(39/102),两者差异具有统计学意义(P<0.001)。MAD2蛋白表达与肿瘤组织分化程度呈负相关,与淋巴结转移呈正相关(P<0.001)。结论:MAD2蛋白在细胞有丝分裂监测点中发挥重要作用,其亚细胞定位在胃癌形成中发生变化,MAD2表达在胃癌发生过程中具有重要作用,对其检测有助于胃癌恶性程度评价和预后判断。 展开更多
关键词 有丝分裂纺锤体监测点 mad2基因 人正常组织 免疫组织化学 染色体不稳定性
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MAD2和p55CDC在前列腺癌组织中的表达及其与前列腺癌分级的相关性 被引量:3
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作者 许克新 王向红 +2 位作者 薛为成 王晓峰 侯树坤 《北京大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2003年第6期586-590,共5页
目的 :研究有丝分裂检查点调控蛋白MAD2和 p5 5CDC在前列腺增生组织和前列腺癌组织的表达情况 ,了解此两种蛋白的表达水平是否同前列腺癌的分级存在相关性。方法 :采用免疫组化的方法 ,对 4 6例前列腺增生组织和 6 5例前列腺癌组织的MAD... 目的 :研究有丝分裂检查点调控蛋白MAD2和 p5 5CDC在前列腺增生组织和前列腺癌组织的表达情况 ,了解此两种蛋白的表达水平是否同前列腺癌的分级存在相关性。方法 :采用免疫组化的方法 ,对 4 6例前列腺增生组织和 6 5例前列腺癌组织的MAD2和 p5 5CDC蛋白表达水平进行检测 ,并对前列腺增生组织和前列腺癌组织以及不同分级的前列腺癌组织的MAD2和 p5 5CDC蛋白表达水平进行统计学比较和分析。 结果 :发现前列腺癌组织的MAD2和 p5 5CDC蛋白表达水平与前列腺增生组织相比明显下降 ,而且随前列腺癌分级的升高 ,MAD2和p5 5CDC蛋白表达水平呈进行性下降。 结论 :前列腺癌组织常存在MAD2和 p5 5CDC蛋白表达的缺失 ,而这两种蛋白的表达水平与Gleason分级存在密切相关性。发现了有丝分裂检查点调控蛋白MAD2和 p5 展开更多
关键词 mad2 p55CDC 前列腺癌 表达及 分级 相关性 癌组织
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RNA干扰MAD2基因对细胞增殖的影响 被引量:2
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作者 施琼 王箭 +7 位作者 舒朝忠 翁亚光 王应雄 徐远久 蒋洪彦 刘子杰 刘青松 蔡燕 《解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期400-404,共5页
目的:探讨MAD2对HepG2细胞周期的影响。方法:构建针对MAD2基因的shRNA表达载体,MAD2基因与GFP融合的绿色荧光蛋白真核表达质粒pmad2-EGFP共转染HepG2细胞株,用Western印迹法检测shRNA的抑制效应;用MTT法测定细胞增殖率;用流式细胞仪检... 目的:探讨MAD2对HepG2细胞周期的影响。方法:构建针对MAD2基因的shRNA表达载体,MAD2基因与GFP融合的绿色荧光蛋白真核表达质粒pmad2-EGFP共转染HepG2细胞株,用Western印迹法检测shRNA的抑制效应;用MTT法测定细胞增殖率;用流式细胞仪检测细胞周期。结果:shRNA的重组质粒表达载体能明显抑制MAD2绿色荧光融合蛋白的表达。HepG2细胞转染有效干扰质粒48h后,细胞增殖抑制率达65%。有效干扰质粒引起G0/G1期和S期细胞的明显降低,G2/M期细胞增多。结论:在细胞水平,可通过RNA干扰特异性抑制MAD2基因来抑制细胞的增殖,为研究MAD2基因在细胞增殖中的作用机制奠定基础。 展开更多
关键词 mad2基因 RNA干扰 细胞增殖
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基于CRISPR/Cas9系统定点编辑小鼠MAD2L1基因及其脱靶效应分析 被引量:3
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作者 陈丽香 彭秀华 +5 位作者 谭丹 韩铖潇 赵锐 王超 李顺 周晓辉 《中国实验动物学报》 CSCD 北大核心 2017年第6期587-593,共7页
目的建立利用CRISPR/Cas9系统对小鼠MAD2L1基因第二外显子基因编辑的方法体系,并分析CRISPR/Cas9对MAD2L1基因编辑的脱靶效应。方法通过CHOPCHOP网站设计位于小鼠MAD2L1基因第二外显子的靶点序列,并构建Cas9-MAD2L1载体,将该载体转染到N... 目的建立利用CRISPR/Cas9系统对小鼠MAD2L1基因第二外显子基因编辑的方法体系,并分析CRISPR/Cas9对MAD2L1基因编辑的脱靶效应。方法通过CHOPCHOP网站设计位于小鼠MAD2L1基因第二外显子的靶点序列,并构建Cas9-MAD2L1载体,将该载体转染到NIH/3T3细胞中,通过嘌呤霉素筛选并结合荧光显微镜观察GFP后,提取细胞转染后的基因组DNA,利用PCR方法,结合T7E1分析和桑格尔测序,鉴定对小鼠MAD2L1基因编辑情况,并对转染后的NIH/3T3细胞进行CRISPR/Cas9脱靶效应分析。结果将Cas9-MAD2L1载体转染到NIH/3T3细胞并进行嘌呤霉素筛选后,荧光显微镜下观察到大量表达GFP的细胞,PCR结合T7E1结果显示,以转染后的细胞DNA为模板扩增出的228 bp MAD2L1 PCR产物,可被酶切成166 bp和62 bp片段,测序结果显示,成功对MAD2L1基因第二外显子靶点处进行基因编辑,脱靶效应分析未检测到CRISPR/Cas9有对脱靶位点进行基因编辑。结论成功建立对小鼠MAD2L1基因第二外显子进行基因编辑的方法体系,设计的对MAD2L1基因编辑靶点未检测到脱靶效应的发生。 展开更多
关键词 CRISPR/Cas9 小鼠 mad2L1 脱靶效应
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mad2检测作为小细胞肺癌早期诊断潜在指标的临床研究 被引量:1
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作者 吴洋 谭立明 +10 位作者 陈娟娟 李华 应后群 蒋永清 吴琼 于国芳 田永建 余建林 曾婷婷 颜玲仙 刘川 《中国肿瘤临床》 CAS CSCD 北大核心 2018年第2期67-71,共5页
目的:探讨有丝分裂阻滞缺陷蛋白基因2(mitotic arrest deficient 2,mad2)联合抗纺锤体抗体(anti-nuclear mitotic spindle apparatus antibody,MSA)和抗着丝点抗体(anti-centromere antibody,ACA)检测对诊断小细胞肺癌(small cell lung ... 目的:探讨有丝分裂阻滞缺陷蛋白基因2(mitotic arrest deficient 2,mad2)联合抗纺锤体抗体(anti-nuclear mitotic spindle apparatus antibody,MSA)和抗着丝点抗体(anti-centromere antibody,ACA)检测对诊断小细胞肺癌(small cell lung cancer,SCLC)的临床意义。方法:对120例SCLC、110例非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)患者和115例肺结节(pulmonary nodule,PN)患者用荧光定量PCR(qt-PCR)法检测mad2基因的表达,用间接免疫荧光法(indirect immunofluorescence assay,IFA)检测MSA,ACA的表达。结果:mad2基因在SCLC,NSCLC患者中均有表达;和NSCLC相比,mad2在SCLC中表达量更高(P<0.05);mad2诊断SCLC的ROC曲线下面积为0.799,诊断价值中等;相关性分析中MSA、ACA与SCLC的OR值分别为6.94和5.60;一致性分析中mad2基因联合MSA诊断的Kappa值为0.49;mad2联合ACA诊断的Kappa值0.42;并联分析诊断的敏感性为83.31%,特异性为79.34%,约登指数为0.62;串联分析诊断的敏感性为65.32%,特异性为93.35%,约登指数为0.59。结论:mad2在SCLC组中的表达量高于NSCLC组及肺结节组,在SCLC发生发展中起到重要作用;mad2检测联合MSA及ACA有助于提高诊断敏感性及特异性,对SCLC的早期检测、临床诊断及潜在的治疗方法有一定的应用价值。 展开更多
关键词 小细胞肺癌 mad2 抗纺锤体抗体 抗着丝点抗体
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胚胎细胞MAD2基因表达对染色体分离的影响 被引量:1
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作者 施琼 翁亚光 +2 位作者 蔡燕 刘青松 刘子杰 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第15期1544-1547,共4页
目的探讨MAD2基因表达对染色体分离的影响。方法用定量RT-PCR比较RNA干扰前后的胚胎细胞内源性基因MAD2 mRNA表达水平,同时对染色体数目异常率进行比较分析。结果干扰后MAD2基因mRNA拷贝数/GAPDH基因mRNA拷贝数的均值为干扰前的20%,染... 目的探讨MAD2基因表达对染色体分离的影响。方法用定量RT-PCR比较RNA干扰前后的胚胎细胞内源性基因MAD2 mRNA表达水平,同时对染色体数目异常率进行比较分析。结果干扰后MAD2基因mRNA拷贝数/GAPDH基因mRNA拷贝数的均值为干扰前的20%,染色体数目异常率均值由干扰前的4.702%上升到28.498%。经统计学分析,RNA干扰后MAD2基因mRNA水平显著下降,染色体数目异常率显著增高。结论MAD2基因表达的降低会导致染色体分离的异常,本研究为染色体分离相关蛋白功能研究建立了新的研究手段和实验评价体系。 展开更多
关键词 mad2基因 RNA干扰 定量RT—PCR
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p16,p53和Mad2在胃癌中的表达及临床病理学意义 被引量:1
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作者 党冬梅 杨建军 +2 位作者 王颖萍 魏晓萍 梁树辉 《第四军医大学学报》 北大核心 2009年第23期2785-2787,共3页
目的:研究p16,p53和Mad2基因在胃癌中的表达及其临床病理学意义.方法:应用免疫组化SP法检测胃癌组和对照组(正常胃粘膜、慢性浅表性胃炎、慢性萎缩性胃炎、增生性息肉、不典型增生)中p16,p53和Mad2蛋白的表达.结果:对照组中p16,p53和Mad... 目的:研究p16,p53和Mad2基因在胃癌中的表达及其临床病理学意义.方法:应用免疫组化SP法检测胃癌组和对照组(正常胃粘膜、慢性浅表性胃炎、慢性萎缩性胃炎、增生性息肉、不典型增生)中p16,p53和Mad2蛋白的表达.结果:对照组中p16,p53和Mad2的阳性率分别为74.6%,32.8%和59.7%,而胃癌中p16,p53和Mad2的阳性率分别为46.3%,58.7%和79.1%,各指标在两组间的表达均有显著性差异(P<0.05);p16在累及浆膜组的表达与未累及浆膜组间有显著性差异(P<0.05);p16,p53和Mad2在有淋巴结转移组与无淋巴结转移组间均存在显著性差异(P<0.05).结论:p16,p53和Mad2基因表达的异常在胃癌的发生、发展和预后中起着重要的作用. 展开更多
关键词 胃癌 P16 P53 mad2
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人Mad2基因正义真核表达质粒的构建及其对人卵巢癌细胞A2780紫杉醇敏感性的影响 被引量:1
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作者 郝星 叶双梅 +3 位作者 周志刚 周婷 卢运萍 王世宣 《中国癌症杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第10期733-738,共6页
背景与目的:紫杉醇是一种高效广谱的抗肿瘤药物,已常规应用于卵巢癌的化疗。但近年来随着耐药的发生,紫杉醇耐药已成为影响肿瘤化疗预后的主要难题,有研究显示紫杉醇药效的发挥与纺锤体检测点功能完整性相关。本研究通过构建人纺锤体检... 背景与目的:紫杉醇是一种高效广谱的抗肿瘤药物,已常规应用于卵巢癌的化疗。但近年来随着耐药的发生,紫杉醇耐药已成为影响肿瘤化疗预后的主要难题,有研究显示紫杉醇药效的发挥与纺锤体检测点功能完整性相关。本研究通过构建人纺锤体检测点蛋白Mad2基因正义真核表达质粒,旨在探讨Mad2蛋白对人卵巢癌A2780细胞株紫杉醇敏感性的影响。方法:构建pEGFP-Mad2正义表达质粒,通过脂质体LipofectamineTM 2000将其转入体外培养的人卵巢癌细胞株A2780中,应用RT-PCR、Western blot等方法分析相关基因和蛋白水平的变化情况;通过流式细胞术比较稳筛细胞对紫杉醇敏感性的改变情况。结果:成功构建了pEGFP-Mad2正义表达质粒;并筛选出稳定高表达Mad2的细胞株。RT-PCR、Western blot检测均显示稳定筛出的pEGFP-Mad2/A2780细胞株中Mad2呈高表达。流式细胞术检测结果显示,紫杉醇作用24或48 h后,对照组pEGFP-N1/A2780的细胞凋亡率分别为12.34%和58.76%,而pEGFP-Mad2/A2780组细胞凋亡率则分别为27.32%和87.53%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:pEGFP-Mad2正义表达质粒能够有效上调A2780细胞中Mad2基因mRNA和蛋白的表达,并增加人卵巢癌细胞A2780对紫杉醇化疗的敏感性。 展开更多
关键词 卵巢癌 紫杉醇 耐药 mad2基因
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MAD2B与TCF4相互作用及其对毛乳头细胞功能的影响 被引量:1
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作者 张可洲 熊亚 +3 位作者 杨希川 宋志强 钟白玉 郝飞 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第11期1071-1075,共5页
目的探讨MAD2B基因过表达对毛乳头细胞(dermal papilla cells,DPCs)生物学功能的影响。方法构建真核表达载体pIRES2-MAD2B和pIRES2-TCF4质粒,在LipofectamineTM2000脂质体的介导下转染毛乳头细胞,荧光显微镜下观察转染效率,使用Western ... 目的探讨MAD2B基因过表达对毛乳头细胞(dermal papilla cells,DPCs)生物学功能的影响。方法构建真核表达载体pIRES2-MAD2B和pIRES2-TCF4质粒,在LipofectamineTM2000脂质体的介导下转染毛乳头细胞,荧光显微镜下观察转染效率,使用Western blot检测目的蛋白的表达,并验证两种蛋白的相互作用,比较细胞增殖状况,Wnt通路信号强度,毛乳头分泌胰岛素样生长因子-1(insulin-like growth factor-1,IGF-1)、血管内皮生长因子(vascular endothelial growthfactor,VEGF)、肝细胞生长因子(hepatocyte growth-promoting factors,HGF)的变化情况。结果成功构建pIRES2-MAD2B和pIRES2-TCF4重组质粒,且转染后发现MAD2B和TCF4蛋白过表达于毛乳头细胞。免疫共沉淀实验结果提示在凝集生长的毛乳头细胞中存在相互作用的MAD2B和TCF4蛋白质复合物。在MAD2B过表达于毛乳头细胞之后,发现Wnt途径信号通路强度下调。CCK-8实验结果提示MAD2B过表达后细胞增殖活性下降,与对照组比较有统计学差异(P<0.05);同时实时荧光定量PCR检测结果显示,与对照组相比,IGF-1、VEGF、HGF mRNA的表达有所下降(P<0.05)。结论免疫共沉淀提示MAD2B与TCF4在毛乳头细胞中存在相互作用,MAD2B过表达后可能通过抑制Wnt信号通路而对毛乳头细胞增殖和其旁分泌因子IGF-1、VEGF、HGF产生抑制作用。 展开更多
关键词 mad2B TCF4 毛乳头细胞 旁分泌因子 WNT
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MAD2基因沉默促进人食管鳞癌细胞系KYSE30细胞增殖和侵袭能力的实验研究
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作者 王莉 王如文 +7 位作者 蒋耀光 秦叔逵 梁树辉 龚太乾 赵云平 谭群友 郭伟 范小青 《中国癌症杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第7期562-567,共6页
背景与目的:有丝分裂检测点缺陷可引起细胞染色体不稳定性而使细胞生物学行为改变,本实验探讨RNA干扰有丝分裂阻滞缺陷蛋白2(mitotic arrest deficient2,MAD2)基因表达对人食管鳞癌细胞系KYSE30细胞增殖和侵袭能力的影响。方法:利用脂... 背景与目的:有丝分裂检测点缺陷可引起细胞染色体不稳定性而使细胞生物学行为改变,本实验探讨RNA干扰有丝分裂阻滞缺陷蛋白2(mitotic arrest deficient2,MAD2)基因表达对人食管鳞癌细胞系KYSE30细胞增殖和侵袭能力的影响。方法:利用脂质体转染的方法,将MAD2基因的siRNA转染食管鳞癌细胞KYSE30,并通过RT-PCR以及免疫印迹的方法进行siRNA效果鉴定。实验分为正常对照组、非特异干扰组、特异干扰组。MTT、克隆形成实验检测细胞增殖活性的变化,损伤刮擦实验和Transwell小室实验分别检测转染细胞株的迁移与侵袭能力。结果:siRNA作用48h组,MAD2蛋白的表达最低;相应地,迁移黏附能力增强,侵袭实验显示转染后细胞侵袭能力较转染前有显著加强。结论:MAD2基因沉默能够促进人食管鳞癌细胞系KYSE30的体外增殖和侵袭能力增强,并抑制凋亡,提示其变化对肿瘤的发生和转移发挥重要作用。 展开更多
关键词 mad2基因 SIRNA 转染 食道鳞癌 侵袭 增殖
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微小RNA抑制胚胎细胞MAD2基因的表达
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作者 施琼 翁亚光 +2 位作者 徐远久 蔡燕 蒋洪彦 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 2007年第2期138-141,共4页
目的:探讨微小RNA(microRNA)抑制胚胎细胞MAD2基因表达的机理。方法:用定量real-time PCR比较microRNA转染前后的胚胎细胞内源性基因MAD2 mRNA表达水平,同时用western blot比较转染前后Mad2蛋白的表达水平。结果:对照组的MAD2基因mRNA... 目的:探讨微小RNA(microRNA)抑制胚胎细胞MAD2基因表达的机理。方法:用定量real-time PCR比较microRNA转染前后的胚胎细胞内源性基因MAD2 mRNA表达水平,同时用western blot比较转染前后Mad2蛋白的表达水平。结果:对照组的MAD2基因mRNA拷贝数/GAPAH mRNA拷贝数为0.1780±0.0688,而转染microRNA重组质粒后,实验组的mRNA比值分别为0.1778±0.0689和0.1778±0.0670,经统计分析,两实验组细胞的内源性MAD2基因mRNA水平与对照组无显著性差异;而其中一实验组的蛋白水平在转染后有明显降低。结论:microRNA主要在翻译水平调节哺乳动物细胞内基因的表达,为研究基因表达的调控机制奠定了良好的基础。 展开更多
关键词 微小RNA mad2基因 定量RT-PCR
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细胞分裂调控基因MAD2与GFP融合的真核表达质粒的构建及表达
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作者 施琼 翁亚光 +4 位作者 徐远久 蒋洪彦 刘子杰 刘青松 蔡燕 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 2006年第2期180-182,239,共4页
目的:构建MAD2基因与GFP融合的绿色荧光蛋白真核表达质粒,并在HepG2细胞中表达。方法:通过RT-PCR扩增,获得MAD2基因的完整序列。将此片断插入pEGFP-N1载体多克隆位点区,构建MAD2基因与GFP融合的绿色荧光蛋白真核表达质粒。应用脂质体转... 目的:构建MAD2基因与GFP融合的绿色荧光蛋白真核表达质粒,并在HepG2细胞中表达。方法:通过RT-PCR扩增,获得MAD2基因的完整序列。将此片断插入pEGFP-N1载体多克隆位点区,构建MAD2基因与GFP融合的绿色荧光蛋白真核表达质粒。应用脂质体转染技术转染HepG2细胞并观察表达的绿色荧光。结果:成功构建MAD2基因与GFP融合的绿色荧光蛋白真核表达质粒,并在HepG2细胞中观察到绿色荧光蛋白的表达。结论:该载体的成功构建,为研究MAD2基因在细胞分裂中的功能及定位建立了有效的观察体系。 展开更多
关键词 mad2基因 绿色荧光蛋白 HEPG2细胞
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纤维连接蛋白降解片段(MAD2)单抗的制备及肝细胞癌患者血浆含量检测
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作者 赵景民 杨守纯 +5 位作者 王业东 王松山 辛绍杰 董时军 王凝芳 刘平 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第1期27-29,共3页
应用杂交瘤技术制备了纤维连接蛋白 (FN)降解片段MAD2的单克隆抗体 (McAb) ;建立了MAD2检测的双抗体夹心ELISA法 ;对 2 2 7例肝细胞癌 (HCC)、76例肝转移癌 (HMC)、98例消化道癌 (ACC)、15 6例慢性肝病 (CLD)患者和 48例健康人体血浆MAD... 应用杂交瘤技术制备了纤维连接蛋白 (FN)降解片段MAD2的单克隆抗体 (McAb) ;建立了MAD2检测的双抗体夹心ELISA法 ;对 2 2 7例肝细胞癌 (HCC)、76例肝转移癌 (HMC)、98例消化道癌 (ACC)、15 6例慢性肝病 (CLD)患者和 48例健康人体血浆MAD2含量进行测定。结果显示 ,制备的MAD2McAb属IgG1,与FN无交叉反应 ;HCC组血浆MAD2含量均值与CLD组、HMC组、ACC组和正常对照组比较差异有显著性意义 (分别P <0 0 1) ,以HCC患者的最低MAD2值作临界值时 ,仅 13 5 %CLD、6 6 %HMC和 4 1%ACC超过此值 ,而健康人体血浆MAD2含量均低于临界值 ;6 5例血清AFP正常的HCC患者其血浆平均MAD2值仍明显高于非HCC肿瘤、CLD患者和正常对照。结合以前的结果 ,进一步表明 ,血浆MAD2检测可作为HCC诊断的新标志物 ,并可与AFP相互补充 ;MAD2 McAb的制备使MAD2的检测变得易行。 展开更多
关键词 肝细胞肿瘤 纤维连接蛋白 单克隆抗体 降解片段 mad2
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陕北胃癌高发区胃黏膜组织中MAD2的表达及意义
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作者 党冬梅 杨建军 +2 位作者 王颖萍 惠起源 魏晓萍 《现代肿瘤医学》 CAS 2010年第5期960-962,共3页
目的:研究MAD2在正常胃黏膜、胃病变黏膜组织中的表达,并探讨其与浅表性胃炎、萎缩性胃炎、不典型增生、胃癌之间的关系。方法:应用免疫组织化学SP法检测219例不同胃组织标本中MAD2的表达情况,所有标本均经病理证实。结果:MAD2在正常胃... 目的:研究MAD2在正常胃黏膜、胃病变黏膜组织中的表达,并探讨其与浅表性胃炎、萎缩性胃炎、不典型增生、胃癌之间的关系。方法:应用免疫组织化学SP法检测219例不同胃组织标本中MAD2的表达情况,所有标本均经病理证实。结果:MAD2在正常胃黏膜、浅表性胃炎、萎缩性胃炎、不典型增生、胃癌黏膜组织中的阳性表达率随病理学分类的不同而有差异。其中不典型增生、胃癌黏膜组织中MAD2的阳性表达率与其余各组MAD2的阳性表达率有明显的差异(P<0.05)。结论:胃病变组织中MAD2蛋白的异常高表达,对诊断不典型增生、胃癌有重要的参考意义。 展开更多
关键词 胃黏膜组织 mad2 有丝分裂检测点
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荧光定量PCR检测小鼠卵母细胞中Mad2 mRNA的表达
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作者 王建英 杭苏琴 李云龙 《畜牧与兽医》 北大核心 2006年第10期11-14,共4页
目的:应用SYBR G reen I染料法建立检测Mad2 mRNA表达的实时荧光定量PCR的方法,并探讨小鼠卵母细胞减数分裂成熟中Mad2 mRNA的表达。方法:采用实时荧光定量PCR的方法,以SYBR G reen I为荧光染料,梯度稀释的重组质粒为模板制作标准曲线,... 目的:应用SYBR G reen I染料法建立检测Mad2 mRNA表达的实时荧光定量PCR的方法,并探讨小鼠卵母细胞减数分裂成熟中Mad2 mRNA的表达。方法:采用实时荧光定量PCR的方法,以SYBR G reen I为荧光染料,梯度稀释的重组质粒为模板制作标准曲线,并以此方法分析了小鼠卵母细胞减数分裂成熟过程中Mad2 mRNA表达的动态变化。结果:建立了实时荧光定量检测方法分析小鼠卵母细胞中Mad2 mRNA的表达,该方法灵敏、特异,扩增效率接近100%。进行了标准曲线的制作,以及对目的基因Mad2转录水平的绝对定量。结论:实时荧光定量PCR是检测基因表达水平的理想选择,在小鼠卵母细胞减数分裂成熟过程中Mad2 mRNA表达存在动态变化。 展开更多
关键词 SYBR Green 实时荧光定量PCR 小鼠 卵母细胞 mad2
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