MADLI-TOF MS自建库在马尔尼菲篮状菌快速鉴定中的应用

目的评价基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MADLI-TOF MS)自建库对临床分离马尔尼菲篮状菌快速鉴定的能力。方法收集广州、玉林、防城港3个地区临床分离的马尔尼菲篮状菌,通过ITS区扩增测序进行菌种准确鉴定。菌株通过微型玻璃珠研磨结合甲酸/乙腈提取法预处理。通过采集建库菌株不同时间点、不同平板上菌丝相和酵母相菌落的质谱数据,建立包含马尔尼菲篮状菌超级图谱的自建库;并用非建库的马尔尼菲篮状菌及临床常见的真菌评估建立的自建库。结果建立了包含具有39个特征峰的马尔尼菲篮状菌超级图谱的自建库;用于评估的菌株均被鉴定到种,准确率为100%。结论MADLI-TOF MS建立的马尔尼菲篮状菌自建库能够对于临床马尔尼菲篮状菌进行快速、准确的鉴定。

MADLI-TOF MS和PhoenixTM-100两种分析仪鉴定肠杆菌科细菌一致性评价

目的评价德国Bruker公司的基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)和美国BD公司的菲尼克斯100(PhoenixTM-100)细菌鉴定仪对临床分离肠杆菌科细菌鉴定的一致性。方法回顾性分析2017年1月~2019年8月苏州大学附属第三医院从临床各类标本中分离出的肠杆菌科细菌1 242株,MALDI-TOF MS和PhoenixTM-100细菌鉴定仪对这些菌株进行鉴定,运用统计学方法分析并评估两种仪器的鉴定结果的一致性。结果在两台仪器均能鉴定到属水平的1 242株细菌中,鉴定到菌种水平的一致率达85.1%(1057株)。在8株肺克鼻臭亚种菌种的鉴定上,PhoenixTM-100鉴定出6株,MALDI-TOF MS鉴定出2株,两组间的鉴定比较差异有统计学意义(χ^2=4.00,P=0.046),在其他种水平上的鉴定结果差异无统计学意义(χ^2=0.207~4.000,均P> 0.05)。沙门菌属均未能鉴定到种水平。结论两种仪器都能准确鉴定肠杆菌科细菌到属水平,可用于临床微生物实验室对临床标本的常规鉴定,但对肺克鼻臭亚种和沙门菌属并不能精准的鉴定到种水平。

半乳糖基牛血清白蛋白的制备和测定

为了实现肝靶向给药的目的 ,同时避免使用价格昂贵 ,且来源有限的内源性配体 ,我们用还原胺化法合成了半乳糖基牛血清白蛋白 (Galn BSA) .对得到的产物 ,分别用苯酚 硫酸比色法和MADLI TOF质谱法测定了糖化比率 ,在糖化比率较低时 ,两种方法的结果一致 ,糖化比率较高时 ,苯酚

毕赤酵母分泌表达华根霉脂肪酶(r27RCLC)的糖基化鉴定

研究了毕赤酵母GS115中能够高效分泌表达的华根霉脂肪酶(r27RCLC)的糖基化情况。运用糖基化抑制剂衣霉素处理表达目的蛋白的毕赤酵母细胞,通过SDS-PAGE比较分析经衣霉素处理后的脂肪酶r27RCLC分泌表达量的变化,结果显示酶的分泌表达受到很大的抑制,说明脂肪酶r27RCLC在表达时候很可能发生了糖基化,且糖基化对其有重要影响。通过生物化学方法,利用内切糖苷酶PNGase F和Endo Hf酶切处理脂肪酶r27RCLC,SDS-PAGE和Western Blot,结果显示r27RCLC未发生糖基化。将样品r27RCLC通过胰蛋白酶酶解等步骤处理,进行MADLI-TOF-MS质谱分析,结果发现MADLI-TOF-MS鉴定结果与内切糖苷酶酶切处理结果一致,进一步证明毕赤酵母分泌表达的华根霉脂肪酶r27RCLC未发生糖基化。

光温敏核不育水稻幼穗育性转换期蛋白质组的初步分析

为找寻光温敏核不育水稻幼穗与育性调控有关的蛋白质,采用固相pH梯度-SDS聚丙烯酰胺双向凝胶电泳对光温敏核不育水稻(培矮64S)育性转换期幼穗总蛋白进行了分离,获取凝胶图像并进行重复性分析,通过微量测序-Edman降解方法和原位酶解及MALDI-TOF质谱的方法鉴定了60个蛋白质点。结果表明:本方法可得取分辨率和重复性较好的凝胶图谱。蛋白质点在2D胶上的重复性为:沿等电聚焦方向偏差为1.49±0.22 mm,沿SDS-PAGE方向偏差为1.24±0.18 mm。37个蛋白质点得到了准确的鉴定结果,其中16个是差异蛋白质点。在不育变化为可育的过程中,明显表达上调的蛋白质点包括几丁质酶,丙酮酸脱氢酶等;明显下调的蛋白质包括超氧化物歧化酶,硝酸还原酶脱辅基酶蛋白等;金属硫蛋白RicMT只在可育中存在。