非小细胞肺癌MAGE-3抗原的表达

【目的】检测MAGE 3基因编码的抗原在非小细胞肺癌表达的情况 ,探讨利用MAGE 3抗原对非小细胞肺癌患者进行特异性免疫治疗的可能性。【方法】用免疫组化LSAB的方法对石蜡包埋的组织切片进行MAGE抗原的检测。【结果】 10 4例非小细胞肺癌原发灶肿瘤组织切片中 ,MAGE 3抗原阳性的有 31例 ,阳性率 2 9 8%。【结论】有相当部分非小细胞肺癌患者的肿瘤表达MAGE 3抗原 ,这些患者可能是进行MAGE 3基因编码的抗原介导的免疫治疗的合适人选。

MAGE-3抗原肽脉冲树突状细胞对小鼠胃癌移植瘤的免疫防护作用

目的观察MAGE3抗原肽脉冲的树突状细胞(DC/MAGE3)作为肿瘤疫苗抑制小鼠胃癌移植瘤生长的作用。方法检测了MAGE3抗原肽诱导出的细胞毒性T淋巴细胞(CTL)对小鼠前胃癌细胞株MFC细胞的杀伤活性。在免疫保护实验中先用DC/MAGE3(1×106个细胞/只)于小鼠皮下注射免疫两次,然后接种MFC细胞(5×105个细胞/只);在免疫治疗实验中先接种MFC细胞(5×105个细胞/只),然后在皮下注射DC/MAGE3(1×106个细胞/只)两次,并以感冒病毒核蛋白抗原肽脉冲的DC(DC/Nup)及空白DC作为对照,观察小鼠肿瘤的生长情况及其存活期并进行统计学处理。结果(1)MAGE3抗原肽诱导出的CTL细胞对MFC细胞有较高的杀伤活性;(2)在免疫保护实验和免疫治疗实验中DC/MAGE3可以明显地延缓肿瘤的生长,延长小鼠的生存时间(P<0.05)。结论MAGE3抗原肽脉冲的DC可通过加强抗原递呈激活肿瘤特异性CTL而具有明显的抗肿瘤活性。

MAGE-3抗原肽体外诱导肝癌患者免疫应答的研究

的 利用载有MAGE 3抗原肽的树突状细胞 (DC)活化原发性肝细胞癌 (HCC)患者T淋巴细胞 ,探讨是否可以体外诱导特异性细胞毒T淋巴细胞 (CTL)应答。方法 通过逆转录多聚酶链反应和测序分析MAGE 3多肽表位密集区的核苷酸变异状况 ;体外培养HLA A2表型的HCC患者及正常献血员外周血来源的DC ,并经孵育携带MAGE 3 HLA A2抗原肽FLWGPRALV ,用以活化T淋巴细胞 ,利用特异性杀伤实验检测CTL应答。结果 中国HCC患者表达的MAGE 3序列高度保守。用特定细胞因子和无血清培养基可成功培养HCC患者外周血来源的DC。经多肽冲击的DC诱导 ,3例HCC患者和 3例正常献血员中各有 2例产生CTL免疫应答。结论 载有MAGE 3抗原肽的DC可以体外诱导特异性的CTL免疫应答。提示HLA A2限制性的MAGE 3抗原肽经DC递呈可以作为有潜力的肝癌免疫治疗疫苗。

应用MAGE-3抗原肽诱导肝癌患者细胞毒T淋巴细胞反应的研究

目的研究MAGE 3抗原肽对肝细胞癌 (HCC)患者进行免疫治疗的可行性。方法微量细胞毒法检测HCC患者中HLA A2表达情况 ,RT PCR方法检测肝癌组织MAGE 3基因mRNA表达情况。用免疫磁珠从患者外周血单个核细胞 (PBMC)中分离出CD8阳性细胞作为效应细胞 ;将其余自体CD8阴性的PBMC与MAGE 3抗原肽 (FLWGPRALV)短暂孵育 ,经γ射线照射后作为抗原呈递细胞 (APC) ,与CD8阳性效应细胞进行混合淋巴细胞培养 ,作为实验组 ,7d后再加入APC刺激患者效应细胞 1次。每周计数效应细胞数量 ,培养第 15天时作为细胞毒T淋巴细胞 (CTL)检测其杀伤活性。以表达MAGE 3和HLA A2的肝癌细胞系HLE作为靶细胞 ,采用IFN γ细胞因子分泌法 ,通过流式细胞仪检测具有分泌γ 干扰素 (IFN γ)的CD8阳性细胞的频数来反映CTL的杀伤活性。另设不加APC刺激的CD8阳性细胞 ,加IL 2培养作为对照组。结果本组 2 5例HCC患者中 9例HLA A2阳性表达 ;9例中 3例MAGE 3基因mRNA阳性表达 ,6例阴性表达。培养开始时 ,效应细胞为 1 0× 10 6/孔 ,2周后细胞增殖 4～ 6倍。分泌IFN γ的CD8阳性细胞的频数 ,3例MAGE 3阳性患者平均为 2 2 0 % ,6例阴性患者为 0 5 % ,两组间差异有非常显著意义 (P <0 0 1)。结论本实验结果表明 ,应用MAGE 3抗原肽 。

人黑色素瘤抗原MAGE-3肿瘤疫苗的构建及其诱导HLA-A*0201转基因小鼠CTL活性的观察

目的通过基因工程的方法获得人黑色素瘤抗原MAGE-3的DNA和蛋白疫苗,并观察其对HLA-A*0201转基因小鼠的CTL活性的影响。方法用RT-PCR的方法,从人黑色素瘤细胞株A375中扩增MAGE-3的cDNA片段,分别将其插入到pcDNA3.1/V5-His真核和pET32a原核表达载体。将pcDNA-MAGE-3转染B16肿瘤细胞观察其是否能在真核细胞中表达;将pET32a-MAGE-3转化大肠杆菌BL21,经IPTG诱导,SDS-PAGE观察融合蛋白表达情况。并用镍柱亲和层析的方法纯化融合蛋白。然后,采用DNA疫苗初次免疫和蛋白疫苗加强的策略免疫HLA-A*0201转基因小鼠,LDH方法检测CTL活性。结果酶切结果证实,成功地构建了pcDNA-MAGE-3真核表达载体和pET32a-MAGE-3原核表达载体,并在真核细胞B16和原核细胞大肠杆菌中获稳定表达,原核表达产物为融合蛋白且分布于包涵体。用DNA疫苗进行初次免疫,镍柱纯化的融合蛋白加强免疫后,可成功地诱导HLA-A*0201转基因小鼠CTL活性。结论成功地获得了MAGE-3肿瘤抗原,为进一步完善MAGE-3肿瘤疫苗打下了基础。