黑色素瘤抗原MAGE-B亚家族基因在肝细胞癌中的表达

目的 检测黑色素瘤抗原MAGE B基因 (MAGE B1,MAGE B2 )在肝细胞癌 (HCC)中的表达 ,以期找到可用于HCC免疫治疗的新靶位。方法 用逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)方法检测MAGE B1、B2、A1和A3在 47例HCC患者癌组织和相应癌旁组织、3 0例肝硬化和正常肝组织中的表达 ,随机选择 4例RT PCR阳性扩增产物直接进行DNA序列测定 ,并将其表达结果与临床指标之间的关系进行分析。结果 47例HCC组织中 ,MAGE B1和MAGE B2基因阳性率分别为 44.7% (2 1/47)和61.7% (2 9/47) ,而相应癌旁组织、肝硬化组织和正常肝组织中均为阴性。测序结果证实 ,RT PCR产物确为这两种基因。MAGE A1和MAGE A3的阳性率分别为 74.5% (3 5/47)和 44.7% (2 1/47)。MAGE B和MAGE A的表达之间有显著相关性 (P <0 .0 5) ,但其中 12例不表达MAGE A1和 (或 )A3的病例中 ,有 5例表达MAGE B1和 (或 )B2。同时检测这 4种基因的表达 ,发现至少表达其中 1种、2种、3种和4种均表达者分别为 83 .0 % (3 9/47)、55.3 % (2 6/47)、48.9% (2 3 /47)和 3 8.3 % (18/47)。MAGE B基因的表达与年龄、性别、肿瘤大小、分化程度、血清甲胎球蛋白 (AFP)水平、HBV和HCV感染之间无显著相关性 (P >0 .0 5)。结论 MAGE B基因家族在HCC中呈相对高比例、高特异表达 。

肿瘤抗原MAGE-12的B细胞表位4分支多重抗原肽的合成及鉴定

目的 设计合成肿瘤抗原MAGE 12的B细胞表位抗原肽并对其进行鉴定。方法 在预测MAGE 12的B细胞表位序列为QSDEGSSNEEQE(82 -93 )的基础上 ,采用 4分支多重抗原肽结构合成抗原肽 ,免疫C 5 7BL 6小鼠 ,产生多克隆抗体 ,应用ELISA实验及免疫组化实验检测多克隆抗体是否为人的抗原肽的特异性抗体。结果 免疫C 5 7BL 6小鼠后可产生MAGE 12的抗原特异性的多克隆抗体 ,抗体滴度可达 1∶64。结论 证明所预测的表位为MAGE 12的B细胞表位。

肿瘤抗原MAGE-A亚家族共同B细胞表位预测及分析

目的预测肿瘤抗原MAGE-A亚家族的B细胞表位,为基于多靶点的肿瘤疫苗设计提供依据。方法基于MAGE亚家族各成员蛋白质序列,采用Kyte-Doolittle的亲水性方案,Emini方案,Karplus方案和Jameson-wolf抗原指数方案,并辅以MAGE蛋白的二级结构柔性区域分析,预测MAGE基因家族的B细胞共同表位。结果共预测出了5条共同表位,且部分B细胞表位高度相似或一致。结论二级结构与B细胞表位相结合的预测方法为一种高效、准确的表位预测方法,可为肿瘤治疗性疫苗的设计提供实验依据。

MAGE-12 B细胞表位联合应用的免疫原性研究

目的设计合成肿瘤抗原MAGE-12的B细胞表位并研究其表位联合应用的免疫原性。方法在MAGE-12的B细胞表位序列MAGE-123-14(LEQRSQHCKPEE)、MAGE-1282-93(QSDEGSSNEEQE)的基础上,采用4分枝多重抗原肽结构设计合成抗原肽后分MAGE-123-14组、MAGE-1282-93组、MAGE-123-14联合MAGE-1282-93组,分别以MAGE-123-14、MAGE-1282-93、MAGE-123-14联合MAGE-1282-93抗原肽免疫C-57BL/6小鼠,产生多克隆抗体,应用ELISA和免疫组化实验检测多克隆抗体是否为抗原肽的特异性抗体。结果免疫C-57BL/6小鼠后可产生MAGE-12的抗原特异性的多克隆抗体,且多表位抗原肽联合使用组抗体效价高于单表位抗原肽组产生的抗体效价。结论证明MAGE-12的B细胞多表位抗原肽联合使用的免疫原性强于单个B细胞表位抗原肽的免疫原性。

肿瘤抗原MAGE-12的B细胞新表位多重抗原肽的免疫原作用研究

目的 在已设计合成肿瘤抗原MAGE-12的B细胞新表位多重抗原肽基础上对其进行免疫原作用研究.方法 在预测MAGE-12的B细胞表位序列为LEQRSQHCKPEE（3～14）的基础上,采用4分支多重抗原肽（MAP）结构设计合成抗原肽,免疫C-57BL/6小鼠,产生多克隆抗体,应用ELISA实验及免疫组化实验检测多克隆抗体是否为人的抗原肽的特异性抗体.结果 免疫C-57BL/6小鼠后可产生MAGE-12的抗原特异性的多克隆抗体,抗体效价最高达1：256,免疫组化实验阳性证明为人MAGE-12抗原肽的特异性抗体.结论 MAGE-12的B细胞新表位多重抗原肽有免疫原作用.

MAGE-A家族抗原共同B细胞表位预测分析

目的：预测和筛选黑色素瘤抗原A（MAGE-A）家族抗原的共同B细胞表位。方法：以MAGE-A1的全长氨基酸序列为基础,利用生物信息学软件,采用Hopp＆Woods的亲水性方案、Zimmerman极性参数和Jameson-Wolf抗原指数方案和Emini表面可及性方案等,结合MAGE-A1的二级结构与其柔性区域及跨膜区域对MAGE-A1的优势B表位区段进行综合分析,进一步运用抗原指数分析预测MAGE-A1的B细胞表位,并将其与MAGE-A家族中其他成员（MAGE-A2至A12）进行比对,以预测MAGE-A家族抗原的共同B细胞表位。结果：MAGE-A1的全长为309个氨基酸,相对分子质量为46 kDa,为可溶性蛋白。经综合分析,其B细胞优势表位可能存在于氨基酸序列N端的9~14,84~88,118~124,160~165,208~214,233~240区段;经与MAGE-A家族中其他成员的氨基酸序列比对,MAGE-A1的9~14,84~88,118~124及233~240区段,即HCKPEE,EEEGP,RAREPVTK,GEPRKLLT肽段可能为MAGE-A家族抗原共同B细胞优势表位。结论：利用生物信息学预测发现MAGE-A1的优势B细胞表位中,9~14,84~88,118~124及233~240区段可能为MAGE-A家族抗原的共同B细胞表位,可为表位疫苗的研制等提供理论依据。

MAGE-12的新B细胞表位抗原性研究

目的:在已设计合成肿瘤抗原MAGE-12的B细胞表位基础上对其进行鉴定。方法:在预测MAGE-12的B细胞表位序列为LEQRSQHCKPEE(3～14)的基础上,采用4分枝多重抗原肽结构设计合成抗原肽,免疫C-57BL/6小鼠,产生多克隆抗体,应用ELISA实验检测多克隆抗体是否为人的抗原肽的特异性抗体。结果:免疫C-57BL/6小鼠后可产生MAGE-12的抗原特异性的多克隆抗体,抗体效价最高达1:256,证明为MAGE-12抗原肽的特异性抗体。结论:证明所预测的表位LEQRSQHCKPEE(3～14)为MAGE-12的B细胞新表位,具有抗原特异性。