黑色素瘤相关抗原MAGE-D研究进展

黑色素瘤相关抗原-D(MAGE-D)基因位于X染色体,具有MAGE家族共有的同源结构域(MHD);MAGE-D由4个成员组成,各成员的表达及功能各异;目前已发现一些成员表达于多种肿瘤组织,限制性表达于正常组织;其抗原肽可被特异性细胞毒性T淋巴细胞识别,在体外诱导出抗肿瘤免疫效应,在一些肿瘤患者体内产生相应的抗体。MAGE-D家族的一些成员有望成为胶质瘤免疫治疗的候选靶点。

表达黑色素瘤相关抗原D4a重组腺病毒的构建及鉴定

目的 构建表达人黑色素瘤相关抗原D4a（MAGE-D4a）基因的重组腺病毒载体并进行鉴定。方法 从胶质瘤细胞系中用反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）方法得到MAGE-D4a基因全长片段，将其导入T载体进行测序，得到准确的序列后再导入腺病毒穿梭质粒中。将穿梭质粒和病毒骨架通过电穿孔导入细菌内进行重组，挑选阳性克隆，提取重组后的质粒，用脂质体法将其在体外转染入HEK293细胞，并在细胞内部包装。扩增收集重组腺病毒Ad-MAGE-D4a，RT-PCR方法检测其体外表达，并用倍比稀释感染法测定腺病毒的滴度。结果 MAGE-D4a基因被导入带有绿色荧光的腺病毒载体中，PCR 检测证实其在转染后的HEK293细胞中表达，病毒滴度为2×108 pfu／ml。结论 成功构建表达人MAGE-D4a基因的重组腺病毒载体，有效转染HEK293细胞并进行基因表达。