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MAGE-D4a融合蛋白的原核表达、纯化及鉴定 被引量:3
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作者 贺菽嘉 肖绍文 +4 位作者 罗彬 蓝秀万 林文珍 林永达 谢小薰 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期432-435,440,共5页
目的:构建肿瘤相关抗原MAGE-D4a的原核重组体系,表达、纯化融合蛋白。方法:PCR法从胶质瘤组织cDNA中扩增MAGE-D4a基因全长编码区,连接入原核表达载体pMAL-c2,筛选、鉴定阳性克隆并测序。将重组质粒转化至大肠杆菌Rosetta(DE3)诱导表达,... 目的:构建肿瘤相关抗原MAGE-D4a的原核重组体系,表达、纯化融合蛋白。方法:PCR法从胶质瘤组织cDNA中扩增MAGE-D4a基因全长编码区,连接入原核表达载体pMAL-c2,筛选、鉴定阳性克隆并测序。将重组质粒转化至大肠杆菌Rosetta(DE3)诱导表达,表达产物经AmyloseResin亲和层析分离纯化,并且对纯化的融合蛋白进行质谱鉴定。结果:成功扩增了MAGE-D4a基因;重组质粒在Rosetta大肠杆菌中诱导表达出MBP/MAGE-D4a融合蛋白;优化了MAGE-D4a原核表达体系的最适条件;蛋白质谱分析结果显示表达的基因重组蛋白与目的蛋白相符。结论:获得了高效表达、可溶性的MAGE-D4a重组蛋白,为抗体的制备及血清学分析奠定了基础。 展开更多
关键词 黑色素瘤相关抗原-D4a 原核表达 纯化 融合蛋白
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黑素瘤相关抗原D4(MAGE-D4)多克隆抗体的制备和应用 被引量:5
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作者 贺菽嘉 顾永耀 +5 位作者 肖绍文 张庆梅 陈芳 罗彬 付骏 谢小薰 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第1期104-108,共5页
目的制备兔抗人黑素瘤相关抗原D4(MAGE-D4)多克隆抗体,鉴定其免疫学特性,并进行初步应用。方法对构建的p MAL-C2/MAGE-D4重组质粒进行原核表达及纯化,获得MBP/MAGE-D4融合蛋白,并以此蛋白免疫新西兰兔制备多克隆抗体。抗体经蛋白A凝胶... 目的制备兔抗人黑素瘤相关抗原D4(MAGE-D4)多克隆抗体,鉴定其免疫学特性,并进行初步应用。方法对构建的p MAL-C2/MAGE-D4重组质粒进行原核表达及纯化,获得MBP/MAGE-D4融合蛋白,并以此蛋白免疫新西兰兔制备多克隆抗体。抗体经蛋白A凝胶柱亲和层析法纯化后,通过SDS-PAGE检测其纯度;间接ELISA、Western blot法检测抗体的效价及特异性;免疫组织化学染色法检测肺癌组织中MAGE-D4的表达及定位。结果获得纯度较高的抗MAGE-D4多克隆抗体,ELISA检测抗体的效价为1∶256 000,Western blot法分析显示MAGE-D4多克隆抗体可特异性识别MAGE-D4重组蛋白,免疫组织化学结果表明,该抗体能识别肺癌组织中的内源性MAGE-D4蛋白,表达的阳性率为69.6%(17/23)。结论制备的MAGE-D4多克隆抗体具有较高的特异性和灵敏度。 展开更多
关键词 黑素瘤相关抗原D4(mage-d4) 多克隆抗体 肿瘤相关抗原
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MAGE-D4在人脑膜瘤组织中的表达及其意义 被引量:2
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作者 付骏 闭水清 +6 位作者 张庆梅 罗彬 陈芳 农蔚霞 石蕾 肖绍文 谢小薰 《中国癌症防治杂志》 CAS 2015年第3期192-195,共4页
目的检测人脑膜瘤组织中黑色素瘤相关抗原MAGE-D4 m RNA的表达并分析其临床意义。方法采用逆转录-聚合酶链反应(reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)方法,检测36例脑膜瘤组织和8例正常人脑组织中MAGE-D4 m RNA的表... 目的检测人脑膜瘤组织中黑色素瘤相关抗原MAGE-D4 m RNA的表达并分析其临床意义。方法采用逆转录-聚合酶链反应(reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)方法,检测36例脑膜瘤组织和8例正常人脑组织中MAGE-D4 m RNA的表达,分析MAGE-D4 m RNA的表达与脑膜瘤患者临床病理特征的关系。结果 MAGE-D4 m RNA在脑膜瘤组织中的阳性表达率为58.33%(21/36),明显高于正常人脑组织中的阳性表达率12.50%(1/8)(P<0.05);脑膜瘤组织中MAGE-D4 m RNA的表达与性别、年龄、肿瘤大小和病理类型等临床病理特征无关(P>0.05)。结论在脑膜瘤组织中MAGE-D4的表达率较高,提示MAGE-D4可能成为脑膜瘤免疫治疗的靶抗原。 展开更多
关键词 脑膜瘤 黑色素瘤相关抗原 肿瘤免疫治疗 mage-d4 MRNA
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胶质瘤MAGE-D4剪接变体ab和c的表达及临床意义
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作者 张庆梅 罗鑫 +7 位作者 刘畅 闭水清 葛盈盈 罗彬 谢小薰 肖绍文 赵文婧 沈宁 《华中科技大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2021年第5期603-608,共6页
目的检测肿瘤相关抗原MAGE-D4剪接变体ab和c在胶质瘤和非肿瘤脑组织中的表达情况,分析其临床意义,探讨MAGE-D4选择性剪接与胶质瘤的相关性。方法采用RT-PCR技术进行检测,首先以Primerpremier5.0和Oligo6.0软件设计和评价引物,对引物进... 目的检测肿瘤相关抗原MAGE-D4剪接变体ab和c在胶质瘤和非肿瘤脑组织中的表达情况,分析其临床意义,探讨MAGE-D4选择性剪接与胶质瘤的相关性。方法采用RT-PCR技术进行检测,首先以Primerpremier5.0和Oligo6.0软件设计和评价引物,对引物进行特异性检测和扩增产物测序验证,然后检测89例不同病理类型胶质瘤组织和24例非肿瘤脑组织中MAGE-D4ab和MAGE-D4c的表达,并结合胶质瘤患者临床病理参数进行统计分析。结果所设计的引物可特异性扩增MAGE-D4ab和MAGE-D4c。所检测的组织中,MAGE-D4ab的表达普遍较MAGE-D4c丰富,其中胶质瘤组织中MAGE-D4ab的表达率明显高于非肿瘤脑组织(P<0.05),而MAGE-D4c的表达率与非肿瘤脑组织比较差异无统计学意义(P>0.05);胶质瘤组织和非肿瘤脑组织中均存在MAGE-D4ab-c和MAGE-D4ab+c两种表达形式,其中胶质瘤中MAGE-D4ab-c的表达率高于非肿瘤脑组织(P<0.05),而MAGE-D4ab+c的表达率则与非肿瘤脑组织差异无统计学意义(P>0.05);此外,MAGE-D4ab、MAGE-D4c、MAGE-D4ab-c和MAGE-D4ab+c的表达率均与性别、年龄、肿瘤直径和WHO分级等胶质瘤临床资料无显著性关联。结论MAGE-D4ab及MAGE-D4ab-c形式在胶质瘤中异常表达,可能与胶质瘤的发生相关。 展开更多
关键词 胶质瘤 mage-d4 剪接变体
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肿瘤相关抗原MAGE-D4在肝细胞癌中的表达及其意义 被引量:4
5
作者 罗鑫 沈宁 +7 位作者 刘畅 张沅 林丽娜 李枫 李冰滢 肖绍文 陈芳 张庆梅 《中国临床新医学》 2021年第6期594-599,共6页
目的探讨肿瘤相关抗原MAGE-D4在肝细胞癌(HCC)中的表达情况,并分析其临床意义。方法基于癌症基因组图谱(TCGA)数据库,获取371例HCC组织和50例正常肝组织的转录数据。应用数据挖掘工具UALCAN分析HCC组织中MAGE-D4 mRNA的表达情况,并筛选... 目的探讨肿瘤相关抗原MAGE-D4在肝细胞癌(HCC)中的表达情况,并分析其临床意义。方法基于癌症基因组图谱(TCGA)数据库,获取371例HCC组织和50例正常肝组织的转录数据。应用数据挖掘工具UALCAN分析HCC组织中MAGE-D4 mRNA的表达情况,并筛选与其表达相关的基因。应用Kaplan-Meier Plotter分析MAGE-D4 mRNA表达水平与患者生存预后的关系。另收集于广西医科大学第一附属医院2009年6月至2011年8月经手术获取的HCC标本70例,癌旁组织标本30例,采用免疫组织化学法(IHC)检测MAGE-D4蛋白的表达情况,并分析其与患者临床指标的关联性。结果基于TCGA数据库数据的分析结果显示,MAGE-D4 mRNA在HCC组织中的表达水平显著高于正常肝组织(P<0.05),且与甲胎蛋白(AFP)mRNA表达呈正相关(r=0.556,P=0.000)。生存分析结果显示,MAGE-D4 mRNA高表达与黄种人HCC患者不良生存预后具有显著关联(HR=1.860,P=0.037)。基于临床获取标本的分析结果显示,MAGE-D4蛋白主要定位于细胞质和细胞核,HCC组织的MAGE-D4高表达率显著大于癌旁组织(48.57%vs 23.33%;χ^(2)=5.530,P=0.019)。MAGE-D4高表达组HCC患者血清AFP浓度≥400μg/L的人数比例显著大于低表达组(P<0.05),但两组在性别、年龄、肿瘤级别、肿瘤分期、肿瘤直径、癌栓和乙型肝炎病毒(HBV)感染等方面比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论MAGE-D4在HCC组织中高表达,其可能在HCC的发生和发展过程中发挥重要作用,有望成为HCC的潜在治疗靶点和预后标志物。 展开更多
关键词 肝细胞癌 mage-d4 癌症基因组图谱数据库 临床特征 预后
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人脑胶质瘤MAGE-D4和CDC25A的表达及其相关性 被引量:2
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作者 张之碧 张庆梅 +7 位作者 刘畅 罗鑫 罗彬 葛盈盈 陈芳 沈宁 肖绍文 谢小薰 《广西医科大学学报》 CAS 2020年第4期640-644,共5页
目的:研究黑色素瘤相关抗原基因-D4(MAGE-D4)和细胞分裂周期蛋白25A(CDC25A)在人脑胶质瘤(胶质瘤)中的表达水平和临床意义,并探究二者的关系。方法:利用GEPIA在线数据库分析胶质瘤组织中MAGE-D4和CDC25A的表达情况,然后收集47例胶质瘤组... 目的:研究黑色素瘤相关抗原基因-D4(MAGE-D4)和细胞分裂周期蛋白25A(CDC25A)在人脑胶质瘤(胶质瘤)中的表达水平和临床意义,并探究二者的关系。方法:利用GEPIA在线数据库分析胶质瘤组织中MAGE-D4和CDC25A的表达情况,然后收集47例胶质瘤组织,逆转录实时荧光定量聚合酶链反应(PT-qPCR)验证MAGE-D4和CDC25A的表达,并进一步统计分析其与临床病理指标的关系及二者表达相关性。结果:GEPIA数据库显示MAGE-D4与CDC25A在胶质瘤组织中均高表达(P<0.05);PT-qPCR结果显示所检测的胶质瘤组织MAGE-D4 mRNA和CDC25A mRNA的表达水平均明显高于正常脑组织,且二者表达呈明显正相关关系(r=0.3174,P<0.05);此外,MAGE-D4 mRNA的表达与WHO分级和Ki-67表达相关,而CDC25A mRNA表达仅与WHO分级相关(P<0.05)。结论:CDC25A与MAGE-D4在胶质瘤组织中呈正相关关系,提示二者可能共同在胶质瘤的发生发展中发挥重要作用,可能成为胶质瘤生物治疗的潜在靶点。 展开更多
关键词 mage-d4 CDC25A 胶质瘤
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MAGE-D4在非小细胞肺癌组织中的表达及其意义 被引量:2
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作者 李晓英 方文 +6 位作者 杨梅 游云 杨玉涛 葛正行 尹超 夏志鸿 张航 《贵州医药》 CAS 2019年第9期1366-1367,F0003,共3页
目的探讨黑色素瘤相关抗原MAGE-D4在非小细胞肺癌中的表达情况及其对临床治疗的意义。方法收集30例非小细胞肺癌及其癌旁组织,运用ELISA方法检测各组中MAGE-D4的表达情况;同时运用免疫组化技术检测非小细胞肺癌及其癌旁组织中MAGE-D4的... 目的探讨黑色素瘤相关抗原MAGE-D4在非小细胞肺癌中的表达情况及其对临床治疗的意义。方法收集30例非小细胞肺癌及其癌旁组织,运用ELISA方法检测各组中MAGE-D4的表达情况;同时运用免疫组化技术检测非小细胞肺癌及其癌旁组织中MAGE-D4的表达水平。结果ELISA方法与免疫组化检测的非小细胞肺癌组织中的MAGE-D4均呈高表达状态,其与癌旁组织的表达情况相比较,差异具有统计学意义(P<0.01)。结论在非小细胞肺癌中MAGE-D4表达升高,其可能作为临床治疗非小细胞肺癌的靶点之一。 展开更多
关键词 非小细胞肺癌 mage-d4
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非小细胞肺癌患者外周血中MAGE-D4抗体的表达及意义 被引量:1
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作者 李晓英 方文 +8 位作者 杨梅 游云 周洁 莫阳 崔丽丽 杜枢 宋婷 葛正行 尹超 《贵州医药》 CAS 2018年第12期1420-1421,共2页
目的探讨MAGE-D4抗体在非小细胞肺癌(NSCLC)患者血清中的表达,分析其作为检测标志物对诊断NSCLC的可行性。方法采用ELISA检测50名非小细胞肺癌患者,20例BLD(肺良性疾病)患者及20例健康人外周血中MAGE-D4抗体的表达。结果 NSCLC患者外周... 目的探讨MAGE-D4抗体在非小细胞肺癌(NSCLC)患者血清中的表达,分析其作为检测标志物对诊断NSCLC的可行性。方法采用ELISA检测50名非小细胞肺癌患者,20例BLD(肺良性疾病)患者及20例健康人外周血中MAGE-D4抗体的表达。结果 NSCLC患者外周血MAGE-D4抗体的表达显著高于BLD患者和健康人,且差异具有统计学意义(P<0.05);BLD患者MAGE-D4抗体表达略高于健康人,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论 NSCLC患者外周血MAGE-D4抗体的高表达与NSCLC的发生发展密切相关,对NSCLC的诊疗具有重要价值,抗MAGE-D4抗体有望成为NSCLC免疫诊断的候选靶点。 展开更多
关键词 mage-d4 抗体 ELISA 非小细胞肺癌
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黑素瘤相关抗原D4(MAGE-D4)的生物信息学分析及真核表达载体的构建 被引量:1
9
作者 李霞琼 邓芸婷 +5 位作者 顾永耀 高精洧 罗育 林文珍 谢小薰 贺菽嘉 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第10期884-889,共6页
目的分析黑素瘤相关抗原D4(MAGE-D4)蛋白的理化性质、结构和功能,构建MAGE-D4真核表达载体。方法通过生物信息学软件分析MAGE-D4蛋白的理化性质、结构和功能。以MAGE-D4/pMAL-C2原核重组质粒为模板,经PCR扩增、酶切后与pEGFP-C1真核表... 目的分析黑素瘤相关抗原D4(MAGE-D4)蛋白的理化性质、结构和功能,构建MAGE-D4真核表达载体。方法通过生物信息学软件分析MAGE-D4蛋白的理化性质、结构和功能。以MAGE-D4/pMAL-C2原核重组质粒为模板,经PCR扩增、酶切后与pEGFP-C1真核表达质粒连接,转化大肠杆菌。连接产物经抗生素筛选、酶切、测序鉴定后,通过脂质体转染A549肺癌细胞。结果MAGE-D4蛋白为不稳定亲水性蛋白,无跨膜结构和信号肽,二级结构以α螺旋为主,具有多个功能性修饰位点,主要定位在细胞核。SLLLVILGV可能为MAGE-D4来源的HLA-A*0201限制性T细胞表位。与MAGE-D4存在潜在相互作用的前3位蛋白依次是染色体成分4非结构维持蛋白同源物A(NSMCE4A)、T细胞识别的黑素瘤抗原1(MLANA/MART-1)、黑素瘤B抗原5(BAGE5)。测序结果证实重组质粒含有MAGE-D4的全长编码序列(CDS),能成功转染A549肺癌细胞。结论MAGE-D4蛋白为不稳定核蛋白,可通过与多种黑素瘤相关蛋白相互作用而发挥功能,其来源的短肽可能具有较强的免疫原性,并构建了MAGE-D4真核表达载体。 展开更多
关键词 黑素瘤相关抗原D4(mage-d4) 生物信息学分析 PEGFP-C1
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非小细胞肺癌中MAGE-D4表达的初步研究
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作者 何晓娟 景红 +1 位作者 孔晓煌 孙媛媛 《医学理论与实践》 2022年第3期374-376,383,共4页
目的:检测黑色素瘤相关抗原D4(MAGE-D4)在非小细胞肺癌(NSCLC)肿瘤组织及癌旁正常组织中的表达,探讨MAGE-D4在NSCLC组织中的表达及其与临床病理因素之间的关系。方法:收集2017年1月—2020年12月河南大学淮河医院病理科存档的242例NSCLC... 目的:检测黑色素瘤相关抗原D4(MAGE-D4)在非小细胞肺癌(NSCLC)肿瘤组织及癌旁正常组织中的表达,探讨MAGE-D4在NSCLC组织中的表达及其与临床病理因素之间的关系。方法:收集2017年1月—2020年12月河南大学淮河医院病理科存档的242例NSCLC肿瘤组织蜡块及相应101例癌旁正常组织蜡块制成组织芯片。通过免疫组织化学法(SP法)检测MAGE-D4在242例NSCLC肿瘤组织及101例癌旁正常组织中的表达。结果:去除切片时损坏及漏切的肿瘤5例及周边组织1例,剩余肿瘤组织237例,癌旁正常组织100例的样本进行统计。MAGE-D4在肺癌组织中的表达阳性率为80.2%,明显高于癌旁组织49.0%(P<0.05)。通过χ^(2)检验得出MAGE-D4阳性表达与患者的年龄、肿瘤的大小、分期及分化程度呈正相关(P<0.05),而与性别、有无肺被膜侵犯、淋巴结转移及家族史、吸烟史等无明显关联性(P>0.05)。结论:非小细胞肺癌中存在MAGE-D4的异常表达,MAGE-D4阳性可能提示患者预后差。 展开更多
关键词 非小细胞肺癌 mage-d4 免疫组织化学 免疫治疗
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胶质瘤中MAGE基因的生物信息学筛选分析及实验初步验证 被引量:1
11
作者 张鹏博 刘畅 +5 位作者 张庆梅 陈芳 李枫 李冰滢 农蔚霞 肖绍文 《基层医学论坛》 2021年第1期1-4,共4页
目的筛选和验证与人脑胶质瘤相关的黑色素瘤抗原基因(Melanoma associated antigen genes,MAGE)家族成员。方法利用TCGA(The Cancer Genome Atlas)数据库筛选显著差异表达且预后相关的MAGE基因,进而通过LinkedOmics、STRING、GO和KEGG... 目的筛选和验证与人脑胶质瘤相关的黑色素瘤抗原基因(Melanoma associated antigen genes,MAGE)家族成员。方法利用TCGA(The Cancer Genome Atlas)数据库筛选显著差异表达且预后相关的MAGE基因,进而通过LinkedOmics、STRING、GO和KEGG等相关生物信息学方法对其中差异表达最显著的基因进行表达相关基因及其蛋白互作和功能富集分析,最后收集30例胶质瘤组织,通过实时逆转录定量PCR(Reverse-transcription quantitative PCR,RT-qPCR)进行初步验证。结果从TCGA数据库共筛出MAGED4B和MAGEE1共2个差异表达且预后相关的MAGE基因,其中MAGED4B差异表达更加显著,故选择MAGED4B进行后续深入分析。Linkedomics中以相关系数≥0.3为标准,共获得527个MAGED4B表达相关基因,而STRING蛋白互作分析则显示SRC、SNRNP200、CHERP、DDX23、FYN、SF3A2、SETD1A、NRXN1、HNRNPM、DHX38、NOTCH1、SF1和FUS与MAGED4B相关度较高,进一步GO和KEGG富集结果表明MAGED4B的功能主要与微管蛋白定位,参与细胞分裂及细胞转录有关;最后qRT-PCR证实MAGED4B在胶质瘤中高表达。结论人脑胶质瘤组织高表达MAGED4B,其可能在胶质瘤的发生发展中发挥重要作用,可能成为胶质瘤预后和分子靶向治疗的靶点。 展开更多
关键词 脑胶质瘤 MAGE家族mage-d4B TCGA QRT-PCR
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表达黑色素瘤相关抗原D4a重组腺病毒的构建及鉴定 被引量:1
12
作者 胡世颉 费舟 +5 位作者 李兵 林伟 李侠 胡学安 王冰 韩林章 《肿瘤研究与临床》 CAS 2013年第8期509-512,共4页
目的 构建表达人黑色素瘤相关抗原D4a(MAGE-D4a)基因的重组腺病毒载体并进行鉴定。方法 从胶质瘤细胞系中用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法得到MAGE-D4a基因全长片段,将其导入T载体进行测序,得到准确的序列后再导入腺病毒穿梭... 目的 构建表达人黑色素瘤相关抗原D4a(MAGE-D4a)基因的重组腺病毒载体并进行鉴定。方法 从胶质瘤细胞系中用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法得到MAGE-D4a基因全长片段,将其导入T载体进行测序,得到准确的序列后再导入腺病毒穿梭质粒中。将穿梭质粒和病毒骨架通过电穿孔导入细菌内进行重组,挑选阳性克隆,提取重组后的质粒,用脂质体法将其在体外转染入HEK293细胞,并在细胞内部包装。扩增收集重组腺病毒Ad-MAGE-D4a,RT-PCR方法检测其体外表达,并用倍比稀释感染法测定腺病毒的滴度。结果 MAGE-D4a基因被导入带有绿色荧光的腺病毒载体中,PCR 检测证实其在转染后的HEK293细胞中表达,病毒滴度为2×108 pfu/ml。结论 成功构建表达人MAGE-D4a基因的重组腺病毒载体,有效转染HEK293细胞并进行基因表达。 展开更多
关键词 基因 mage-d4a 重组腺病毒 细胞 HEK293
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