肿瘤抗原MAGEA4表达及其长肽疫苗的免疫活性

目的 设计针对黑色素瘤相关抗原(MAGEA)4的长肽,体外验证长肽的免疫原性。方法 使用在线数据库验证MAGEA4在不同肿瘤之间的表达情况及在不同肿瘤病理组织之间的表达情况。使用The Kaplan Meier plotter分析MAGEA4的表达情况对预后的影响。使用免疫表位数据库(IEDB)筛选已经鉴定过的MAGEA4 CD8^(+)T细胞表位,对细胞毒性T淋巴细胞(CTL)表位集中区域选取合适长度的长肽,通过体外活性实验验证长肽是否具有免疫活性。酶联免疫斑点实验(ELISPOT)检测树突细胞(DC)荷长肽诱导的PBMCs中干扰素(IFN)-γ的释放;胞内因子染色检测表位肽诱导CTL的能力;CFSE细胞毒活性实验检测CTL对靶细胞的杀伤活性。结果 MAGEA4在结直肠癌、肺癌、皮肤癌、宫颈癌、乳腺癌中都高表达。在乳腺癌、卵巢癌、肺癌、胃癌、头颈鳞状细胞癌、子宫内膜癌中高表达MAGEA4的患者有较差的预后。ELISPOT和胞内因子染色实验结果显示长肽P102-121和P280-294诱导的CTL具有分泌IFN-γ的能力。CFSE细胞毒实验结果显示表位P102-121和P280-294对靶细胞有一定的杀伤作用。结论 成功筛选出针对肿瘤抗原MAGEA4的两条长肽,可用作肿瘤免疫治疗的候选疫苗。

MAGEA4在非小细胞肺癌中的表达以及与患者预后的关系

目的探讨MAGEA4基因在非小细胞肺癌(NSCLC)患者中的表达、相关生物学功能及其与患者生存期的关系。方法检索肿瘤基因表达谱数据库(TCGA)中MAGEA4基因在NSCLC患者癌组织和癌旁组织中的表达情况;应用STRING数据构建MAGEA4基因编码蛋白-蛋白相互作用网络,并对网络中的蛋白进行基因本体论(GO)和KEGG信号通路富集;应用linkedomics在线分析软件,分析TCGA数据中与MAGEA4正负相关表达基因。同时回顾性分析我院手术治疗的68例NSCLC患者组织标本,采用免疫组织化学法(IHC)检测患者癌和癌旁组织中MAGEA4蛋白表达水平并分析其与患者临床病理特征的关系,对前述生物信息分析结果进行验证。结果 MAGEA4基因mRNA在NSCLC患者癌组织中的表达水平明显高于癌旁组织(P<0.05);与MAGEA4蛋白相互作用网络中,区域聚类指数为0.90,蛋白相互作用网络富集明显(P<0.05);与MAGEA4正相关表达最为显著的基因为MAGEA410(r=0.80,P<0.05),而负相关表达最为显著的基因为DE4D (r=-0.37,P<0.05);功能富集分析显示,MAGEA4生物学过程、细胞成分及分子功能分别主要富集于磷脂酰肌醇3激酶结合、细胞粘附的蛋白质复合物和核苷酸受体活性;KEGG信号通路富集显示,MAGEA4及相关共表达基因主要富集于Notch信号通路、维生素代谢信号通路和DNA复制相关信号通路等。生存分析显示,MAGEA4基因mRNA高表NSCLC患者总生存低于低表达患者(HR=1.3,95%CI:1.04~3.21,P<0.05);而高低表达组无疾病进展生存无统计学差异(HR=0.82,95%CI:0.36~1.94,P>0.05);IHC分析显示,MAGEA4蛋白表达水平与NSCLC患者肿瘤分化程度(P<0.05)和淋巴结转移(P<0.05)存在相关性,MAGEA4蛋白高表达者肿瘤分化程度较低,淋巴结转移率较高。结论 MAGEA4在NSCLC癌组织中表达明显增强,MAGEA4高表达与患者的预后不良有关。抑制MAGEA4基因表达有望成为NSCLC治疗的新靶点。

MAGEA4和EB1蛋白在肺癌组织中的表达及其与临床病理特征及预后的相关性分析

目的探讨MAGEA4和EB1蛋白在肺癌组织中的表达及其与临床病理特征及预后的相关性。方法选取2010年3月-2012年5月在我院胸外科行手术切除并经病理证实的肺癌患者136例为研究对象,采用实时荧光逆转录法及免疫组织化学法测定MAGEA4、EB1 mRNA及蛋白的表达水平,采用χ~2检验及Cox回归分析探讨其与患者临床病理特征及预后的相关性。结果肺癌组织中MAGEA4、EB1 mRNA表达水平高于癌旁组织(P<0.05);肺癌组织中MAGEA4、EB1阳性率高于癌旁组织(P<0.05);肺癌组织中MAGEA4、EB1蛋白表达高于癌旁组织(P<0.05);MAGEA4、EB1蛋白阳性表达率与年龄无关(P>0.05),与肿瘤最大径、病理学分级、TNM分期、浸润深度、淋巴血管间隙浸润、淋巴结转移、复发有关(P<0.05)。MAGEA4、EB1阴性组3年生存率及总生存期均明显高于MAGEA4、EB1阳性组(P<0.05)。淋巴血管间隙浸润、淋巴结转移、MAGEA4阳性、EB阳性是肺癌患者预后的独立危险因素(P<0.05)。结论 MAGEA4和EB1蛋白在肺癌组织中阳性表达率增高,其高表达可能与肺癌的发生发展相关;MAGEA4、EB1蛋白阴性表达的肺癌患者能获得较好的预后。