肺癌组织和外周血中p53、PGP9.5、SOX2、GAGE7、GBU4-5和MAGE A1蛋白水平检测及其临床价值探讨

背景与目的:肺癌发病机制具有多样性,但一经确认,往往已错过最佳治疗时机,本文通过探讨肺癌组织和外周血中抑癌基因(p53)、蛋白基因产物(PGP9.5)、转录因子(SOX2)、肿瘤相关基因编码蛋白(GAGE7)、解旋酶(GBU4-5)和黑色素瘤抗原(MAGE A1)蛋白水平的相关性,同时分析其在肺癌诊疗中的应用价值。方法:回顾并分析2018年5月—2020年5月在复旦大学附属肿瘤医院确诊的100例肺癌患者的病历资料,临床TNM分期Ⅰ期25例,Ⅱ期45例,Ⅲa期30例;非小细胞肺癌80例,小细胞肺癌20例;取手术切除的肿瘤组织和癌旁组织,采用免疫组织化学染色法检测上述6种蛋白的水平,采用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR)法检测其基因表达,采用酶联免疫吸附实验(enzyme-linkedimmunosorbentassay,ELISA)检测外周血中6种蛋白的抗体阳性情况。结果:肿瘤组织中p53、PGP9.5、SOX2、GAGE7、GBU4-5和MAGE A1蛋白的阳性率和基因表达水平均明显高于癌旁组织(P<0.05);将其与肿瘤的临床病理学特征进行相关分析发现,肿瘤组织和外周血中的p53、PGP9.5、SOX2、GAGE7、GBU4-5和MAGE A1蛋白的阳性率和基因表达水平与肿瘤TNM分期和分化级别有关(P<0.05),而与患者性别、年龄、肿瘤直径、病理学类型无关(P>0.05)。肿瘤组织中6种蛋白的表达水平与外周血清表达具有较好的一致性(P>0.05)。结论:肺癌肿瘤组织和外周血中p53、PGP9.5、SOX2、GAGE7、GBU4-5和MAGE A1蛋白表达阳性与肿瘤TNM分期及分化级别密切相关。

膀胱癌肿瘤/睾丸抗原相关基因的表达

目的:检测多种肿瘤/睾丸抗原相关基因在膀胱癌中的表达状况.方法:用逆转录聚合酶链反应(RTPCR)方法对33例膀胱癌患者癌组织和癌旁正常膀胱组织进行MAGEA1,SSX2,NYESO1,MAGEC1,MAGEE1和HAGE的mRNA表达检测.随机抽取每种CTA基因的3例阳性RTPCR扩增产物的目的片段进行DNA序列测定.结果:33例膀胱癌标本中MAGEA1,SSX2,NY-ESO-1,MAGEC1,MAGEE1和HAGE的表达频率分别为21.2%(7/33),39.4%(13/33),69.7%(23/33),42.4%(14/33),36.4%(12/33)和24.2%(8/33).正常膀胱组织中6种CTA基本无表达.肿瘤组织中6种基因至少有1种表达的频率是75.8%(25/33),两种或两种以上同时表达几率是69.7%(23/33).测序结果表明RTPCR产物确为CTA目的基因序列.结论:CTA在膀胱癌主动免疫治疗中是一种合适的、有前景的攻击靶点.同时,多种CTA的联合表达为多效价CTA疫苗在膀胱癌免疫治疗中的应用提供了理论基础.

NE(MHS)纳米乳剂疫苗的抗肿瘤免疫学效应研究

目的:制备包裹有MAGE1-Hsp70和SEA的复合抗原的纳米乳剂疫苗NE(MHS)(nanoemulsion-encapsulated MAGE1-Hsp70/SEA),评价其抗肿瘤免疫学特性。方法:采用磁力超声法制备纳米疫苗NE(MHS),评价其粒径、包裹率及稳定性;NE(MHS)免疫动物,IFN-γ ELISPOT和LDH杀伤实验检测疫苗激活机体特异性细胞免疫反应情况;肿瘤攻击实验检测纳米乳剂疫苗的抗肿瘤效应。结果:(1)成功制备出粒径为(20±5)nm的NE(MHS),其药物包裹率为87%,于4℃放置6个月后或3000r/min10min离心后无分层;(2)与其他组相比,NE(MHS)组小鼠脾淋巴细胞中分泌IFN-γ的T细胞数量明显增多(P<0.05),CTL对B16-MAGE-1的特异性杀伤作用明显增强;NE(MHS)组B16-MAGE-1肿瘤成瘤时间长、成瘤率低。结论:NE(MHS)纳米乳剂疫苗具有良好的理化性质,能够刺激机体产生强烈的MAGE-1特异性的细胞免疫,能有效预防表达MAGE-1的肿瘤细胞攻击,是一种很有希望的新型抗肿瘤疫苗。

RNA干扰基因敲除MAGE-1在恶性胶质瘤U87细胞中的初步研究

目的:通过构建抑制MAGE-1的短片段双链核糖核酸(siRNA)表达载体,鉴定其在人恶性胶质瘤细胞U87细胞中对MAGE1基因表达的干涉作用。方法:化学合成2对编码短发夹RNA序列的靶向MAGE1基因核苷酸链,克隆至经BglⅡ、HindⅢ双酶切的pSUPER载体上,重组构建核糖核酸干扰(RNAi)质粒载体。利RTPCR、流式细胞术和荧光显微镜,检测经稳定转染后胶质瘤U87细胞中MAGE-1的表达,以了解siRNA的干效果。结果:重组构建的pSUPERMAGE1载体经双酶切、电泳及插入基因片段序列分析,表明寡核苷酸链成地插入至预计位点,且序列与预期完全一致。稳定转染后G418筛选出的U87多克隆细胞MAGE-1的表达RTPCR、流式细胞术和荧光显微镜检测,2对siRNA均有较明显的干扰作用。结论:载体的成功构建并能对U细胞中的MAGE1分子进行RNAi,为进一步研究MAGE1在肿瘤中的作用,分析基因功能,展开肿瘤基因治疗奠了基础。

真核表达载体pcDNA3.1-MAGE-1的构建

目的:构建含MAGE-1基因的重组真核表达质粒。方法:用RT-PCR方法从人肝细胞肝癌组织中扩增出MAGE-1基因cDNA序列,克隆至pGEM-T载体,测序证实基因碱基序列无误后,再克隆至真核表达载体pcDNA3.1(+),构建了pcDNA3.1-MAGE-1重组质粒。结果与结论:RT-PCR获得长度为927bp的阳性产物,经T载体和pcDNA3.1(+)真核表达载体克隆、酶切鉴定及序列分析后,证实真核表达质粒pcDNA3.1-MAGE-1构建成功。

有氧运动调节肝癌患者MAGED1水平、炎症反应及脂代谢

目的探讨肝癌患者有氧运动后黑色素瘤相关抗原D1(MAGED1)表达与机体炎症反应及脂质代谢的关系。方法选取2018年1月至2019年12月肝癌患者167例,运动组82人,对照组85人。采用QPCR和Western blot检测外周血单核细胞MAGED1基因和蛋白表达;ELISA法检测血浆TNF-α、IL-6和IL-10含量,FACs检测CD4+和CD8+T细胞比例;血生化仪检测高密度脂蛋白(HDL-C)、低密度脂蛋白(LDL-C)、总胆固醇(TC)和甘油三酯(TG)含量;统计各项指标差异,分析MAGED1与炎症因子和脂代谢指标相关性。结果运动组患者单核细胞MAGED1表达为0.36±0.08,显著低于对照组0.52±0.09(P<0.001);运动组TNF-α和IL-6含量为(16.32±5.62)和(71.84±8.27)pg/ml,显著低于对照组(23.86±7.50)和(86.97±10.28)pg/ml,IL-10含量(98.37±26.88)pg/ml,显著高于对照组(61.25±18.39)pg/ml;运动组TG、TC、LDL-C和HDL-C含量为(1.19±0.40)、(4.00±0.98)、(2.06±0.65)、(1.48±0.34)mmol/L,与对照组相比差异显著[(1.49±0.54)、(4.32±0.86)、(2.40±0.68)和(1.26±0.26)mmol/L];MAGED1表达与TNF-α(r=0.395)、IL-6(r=0.592)呈正相关,与IL-10呈负相关(r=-0.683),与TG、TC和LDL-C呈正相关(r=0.432、0.556、0.369),与HDL-C为负相关(r=-0.519),与CD4+T的百分比和NK的百分比呈负相关(r=-0.546、-0.368),与CD8+T的百分比为正相关(r=0.279)。结论MAGED1在有氧运动改善肝癌患者脂质代谢和炎症反应中具有一定的作用。

黑素瘤抗原-1基因在非小细胞肺癌中的表达

目的 :检测黑素瘤抗原 - 1(MAGE- 1) m RNA及其编码的肿瘤抗原在非小细胞肺癌 (NSCL C)中的表达 ,探讨以该抗原作为疫苗对 NSCL C患者进行免疫治疗的可能性。方法 :用 RT- PCR方法和流式细胞术 (FCM)对 3种人肺癌细胞系、5 6例NSCL C标本和相邻正常肺组织标本 MAGE- 1m RNA及蛋白的表达情况进行检测。结果 :MAGE- 1m RNA及蛋白在 3种人肺癌细胞系均表达 ;5 6例 NSCL C标本中 ,2 7例表达 MAGE- 1m RNA ,2 2例表达 MAGE- 1蛋白 ,而在相邻正常肺组织中均不表达。 结论 :MAGE- 1m RNA及蛋白在 NSCL C中具有较高的表达频率 ,提示该抗原有望成为对 NSCL C患者进行免疫治疗的适宜靶点。

MAGE1纳米蛋白疫苗的研制及其抗肿瘤效应

目的制备纳米乳剂包裹基因工程MAGE1(melanoma antigen1)抗原,研究其生物学特性及抗肿瘤免疫效应。方法采用界面聚合法,制备包裹MAGE1抗原的纳米乳剂(NEMAGE1),测量粒径、包裹率、载药量。检测乳剂包裹对小鼠DC摄取抗原能力的影响。用NEMAGE1免疫小鼠,运用酶联免疫斑点法(ELISPOT)和细胞毒性杀伤实验(LDH)检测NEMAGE1激活机体细胞免疫反应的状况,并观察纳米蛋白疫苗对荷瘤小鼠的治疗作用。结果成功制备粒径为(15±5)nm的纳米乳剂,包裹率为91%,载药量0.091gPL,4℃放置6个月后性质稳定。DC摄取NEMAGE1的能力明显强于对游离蛋白抗原的摄取。ELISPOT和细胞毒性杀伤实验显示,NEMAGE1可以诱导机体产生针对MAGE1的CTL,特异性杀伤表达MAGE1的肿瘤细胞。荷瘤小鼠的治疗实验显示,NEMAGE1对表达MAGE1的肿瘤有明显疗效,其效果优于单独使用游离MAGE1蛋白。结论纳米乳剂具有较高包裹率和稳定性。纳米乳剂包裹的肿瘤特异性抗原可以有效激活机体产生抗肿瘤免疫效应,是具有临床应用前景的新型抗肿瘤疫苗。

应用巢式RT-PCR联合检测原发性肝癌病人外周血AFPmRNA和MAGE-1mRNA的表达

目的 寻找一种敏感的方法以早期发现原发性肝癌的复发与转移。方法 应用逆转录聚合酶链反应分别在术前、术后 1周和术后 2个月检测 37例行根治性切除的原发性肝癌病人外周血中MAGE 1mRNA和AFPmRNA的表达 ,并随访所有病人 1年。结果 外周血中MAGE 1mRNA和AF PmRNA的阳性率和肿瘤的病理分期相关 ;肿瘤病期越晚 ,外周血中微转移灶的检出率越高。 1年的随访中 ,有 9例病人出现复发 ,MAGE 1和 (或 )AFPmRNA的阳性率为 77 8% (7/9) ,其中 6例外周血中MAGE 1mRNA和 (或 )AFPmRNA持续阳性 ,2例由阴性转为阳性。另有 10例病人MAGE 1mRNA和(或 )AFPmRNA由术前阳性术后转为阴性 ,随访 1年中无复发。结论 联合检测外周血MAGE 1和AFPmRNA的表达是早期发现肝癌术后复发、评估预后一项敏感可信的指标。

Mage-D1的结构与生物学功能

Mage-D1是黑素瘤相关抗原MAGE家族Ⅱ类的一个成员,不仅具有该家族所共有的MAGE保守序列MHD结构域,其N端还包含MHD2结构域和WQXPXX多肽重复结构域。与MAGEⅠ类成员不同的是,Mage-D1的功能并不限于胚胎发育、生殖细胞发育和肿瘤发生上。近年研究表明,Mage-D1是p75NTR,UNC5H1,XIAP,Dlx/Msx,Ror2等分子的相互作用蛋白,它在细胞存活、凋亡以及细胞周期和分化中发挥重要调节功能。更为重要的是,MAGE家族Ⅱ类另一个主要成员源自神经分化EC细胞蛋白necdin促进神经元和肌细胞分化的功能,是通过Mage-D1调节Dlx/Msx家族成员的转录活性实现的。本文主要就近年关于Mage-D1结构和生物学功能的研究进行综述和分析。