LncRNA MAGI2-AS3通过靶向调控miR-1269a/PTEN/AKT通路增强非小细胞肺癌对顺铂化疗的敏感性

目的研究lncRNA MAGI2-AS3对非小细胞肺癌顺铂耐药的影响及其分子机制。方法采用qRT-PCR检测MAGI2-AS3和miR-1269a在顺铂敏感细胞(A549,H1299)和顺铂耐药细胞(A549/DDP,H1299/DDP)中的表达差异。采用慢病毒敲低A549和H1299中的MAGI2-AS3的表达,过表达A549/DDP和H1299/DDP中的MAGI2-AS3并加入20μmol/L顺铂(DDP)处理。A549/DDP和H1299/DDP细胞实验分组为:OE-NC组,OE-MAGI2-AS3组,OE-NC+DDP组,OE-MAGI2-AS3+DDP组,A549和H1299细胞实验分组为:sh-NC组,sh-MAGI2-AS3组,sh-NC+DDP组,sh-MAGI2-AS3+DDP组。CCK-8和细胞克隆形成实验检测细胞存活率,流式细胞术和Western blotting分别检测细胞凋亡率和蛋白表达量,划痕实验和Transwell检测细胞EMT变化。通过网站GEPIA、StarBase和miRDB预测MAGI2-AS3、miR-1269a和PTEN之间的靶向关系,并采用荧光素酶报告基因实验和RIP实验验证。采用miR-1269a mimic和pcDNA3.1-PTEN进行Rescue实验。结果MAGI2-AS3在肺癌组织中的表达显著低于正常癌旁组织(P<0.05)且与患者不良预后相关(P<0.05)。A549/DDP和H1299/DDP中的MAGI2-AS3表达量显著低于A549和H1299(P<0.01)。干扰MAGI2-AS3可以显著促进顺铂处理前、后A549和H1299细胞的存活及EMT进程(P<0.01),同时降低顺铂诱导的细胞凋亡(P<0.005)。过表达MAGI2-AS3可以显著抑制顺铂处理前、后A549/DDP和H1299/DDP细胞存活与EMT进程(P<0.01),同时提升顺铂诱导的细胞凋亡(P<0.005)。MAGI2-AS3与miR-1269a结合在一起,miR-1269a与PTEN 3'UTR结合。在A549/DDP细胞内MAGI2-AS3通过靶向吸附miR-1269a促进PTEN的表达并下调AKT磷酸化从而抑制顺铂刺激下细胞的EMT进程(P<0.01)、促进顺铂诱导的A549/DDP细胞凋亡(P<0.01)。结论LncRNA MAGI2-AS3通过靶向调控miR-1269a/PTEN/AKT信号轴增强非小细胞肺癌对顺铂化疗的敏感性。

膀胱癌患者尿液外泌体中miR-494-3p,LncRNA MAGI2-AS3表达水平及临床价值研究

目的探讨膀胱癌患者尿液外泌体中微小核糖核酸(microRNA,miR)-494-3p,长链非编码RNA(long noncoding RNA,LncRNA)MAGI2-反义RNA 3(MAGI2-antisense RNA 3,MAGI2-AS3)表达水平及临床应用价值。方法选取重庆两江新区第一人民医院2021年7月~2023年6月收治的105例膀胱癌患者为癌变组,另选取同期膀胱良性疾病患者101例作为良性组。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测尿液外泌体miR-494-3p和LncRNA MAGI2-AS3水平。Kappa检验分析尿液外泌体miR-494-3p和LncRNA MAGI2-AS3与病理活检诊断膀胱癌的一致性;受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线分析尿液外泌体miR-494-3p和LncRNA MAGI2-AS3水平对膀胱癌的诊断价值。结果癌变组尿液外泌体miR-494-3p水平(1.41±0.32)高于良性组(1.02±0.24),LncRNA MAGI2-AS3水平(0.79±0.19)低于良性组(1.05±0.22),差异具有统计学意义(t=9.866,9.089,均P<0.05)。miR-494-3p高表达组肿瘤直径>3 cm,T3~T4期以及淋巴结转移的占比显著高于miR-494-3p低表达组,差异具有统计学意义(χ^(2)=5.806,6.999,8.289,均P<0.05)。LncRNA MAGI2-AS3低表达组T3~T4期及发生淋巴结转移的比例明显高于LncRNA MAGI2-AS3高表达组,差异具有统计学意义(χ^(2)=9.244,7.795,均P<0.05)。尿液外泌体miR-494-3p和LncRNA MAGI2-AS3联合与病理活检诊断膀胱癌的一致性较高(Kappa值=0.718,P<0.05)。ROC曲线显示,尿液外泌体miR-494-3p和LncRNA MAGI2-AS3水平单独诊断膀胱癌的AUC(95%CI)分别为0.812(0.752~0.863)和0.779(0.716~0.833),尿液外泌体miR-494-3p和LncRNA MAGI2-AS3水平联合诊断膀胱癌的AUC(95%CI)[0.877,(0.824~0.918)]显著高于两者分别单独诊断(Z=2.053,2.647,P=0.040,0.008)。结论膀胱癌患者尿液外泌体中miR-494-3p水平升高,LncRNA MAGI2-AS3水平下降,二者联合对膀胱癌的诊断价值较高。

lncRNA MAGI2-AS3靶向调控miR-130a-5p对柯萨奇病毒B3诱导的大鼠心肌细胞H9C2损伤的影响

目的:探讨lncRNA MAGI2-AS3靶向miR-130a-5p调控柯萨奇病毒B3(CVB3)诱导的大鼠心肌细胞H9C2损伤的分子机制。方法:对照组,用不含药物、病毒的DMEM处理H9C2细胞48 h。CVB3组,用含有100倍半数组织培养感染剂量CVB3的DMEM处理H9C2细胞48 h(感染)。CVB3+sh-NC组,H9C2细胞转染sh-NC慢病毒后感染CVB3。CVB3+sh-MAGI2-AS3组,H9C2细胞转染sh-MAGI2-AS3慢病毒后感染CVB3。CVB3+miR-NC组,H9C2细胞转染miR-NC后感染CVB3。CVB3+miR-130a-5p组,H9C2细胞转染miR-130a-5p mimic后感染CVB3。sh-MAGI2-AS3+抗miR-NC组,sh-MAGI2-AS3、抗miR-NC共转染H9C2细胞后感染CVB3。sh-MAGI2-AS3+抗miR-130a-5p组,sh-MAGI2-AS3、抗miR-130a-5p共转染H9C2细胞后感染CVB3。qRT-PCR检测MAGI2-AS3、miR-130a-5p相对表达量;Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡率;ELISA法检测TNF-α、IL-6分泌水平;双荧光素酶报告实验验证MAGI2-AS3与miR-130a-5p靶向关系;Western blot检测Bcl-2、Cleaved-Caspase-3蛋白相对表达量。结果:与对照组比较,CVB3组MAGI2-AS3相对表达量、细胞凋亡率、Cleaved-Caspase-3蛋白表达水平及TNF-α、IL-6分泌水平升高,而miR-130a-5p相对表达量、Bcl-2蛋白表达水平降低(P<0.05)。分别与CVB3+sh-NC组、CVB3+miR-NC组相比,CVB3+sh-MAGI2-AS3组、CVB3+miR-130a-5p组细胞凋亡率、Cleaved-Caspase-3蛋白表达水平及TNF-α、IL-6分泌水平降低,Bcl-2蛋白表达水平升高(P<0.05)。MAGI2-AS3可靶向调控miR-130a-5p表达。与sh-MAGI2-AS3+抗miR-NC组比较,sh-MAGI2-AS3+抗miR-130a-5p组细胞凋亡率、Cleaved-Caspase-3蛋白表达水平及TNF-α、IL-6分泌水平升高,Bcl-2蛋白表达水平降低(P<0.05)。结论:沉默MAGI2-AS3可通过上调miR-130a-5p而抑制细胞凋亡、炎症反应,进而减轻CVB3诱导的H9C2细胞损伤。

长链非编码RNA MAGI2-AS3在喉鳞状细胞癌中的表达及临床意义

目的探究长链非编码MAGI2反义链RNA3(MAGI2-AS3)在喉鳞状细胞癌中的表达情况及临床意义。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)技术检测喉鳞状细胞癌组织及相应癌旁正常黏膜组织中MAGI2-AS3表达情况,分析MAGI2-AS3表达与患者临床特征的关系;同时在喉鳞癌细胞Hep-2中过表达MAGI2-AS3,体外检测细胞的迁移及侵袭能力的变化。结果与癌旁正常黏膜组织相比,喉鳞状细胞癌组织中MAGI2-AS3的相对表达量明显降低,差异有统计学意义(P﹤0.01);声门上型、声门型、声门下型喉鳞状细胞癌患者的MAGI2-AS3表达水平比较,差异无统计学意义(P﹥0.05);低分化喉鳞状细胞癌患者与高、中分化喉鳞状细胞癌患者的MAGI2-AS3表达水平比较,差异无统计学意义(P﹥0.05);T_1+T_2期、无淋巴结转移的喉鳞状细胞癌患者的MAGI2-AS3相对表达量均高于T_3+T_4期、有淋巴结转移的患者,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。Hep-2细胞过表达MAGI2-AS3后的迁移、侵袭能力是空载Hep-2细胞的(0.403±0.181)倍和(0.502±0.090)倍,差异均有统计学意义(P﹤0.01)。TCGA公共数据库分析发现MAGI2-AS3在头颈部鳞癌组织中的相对转录水平低于癌旁正常黏膜组织,差异有统计学意义(P﹤0.05);MAGI2-AS3高表达患者的中位生存时间略长于MAGI2-AS3低表达患者,但差异无统计学意义(P﹥0.05)。结论 MAGI2-AS3表达与喉鳞状细胞癌的发生发展相关;体外过表达MAGI2-AS3不仅可明显抑制Hep-2迁移及侵袭能力,还可明显改变上皮细胞-间充质转化(EMT)相关标志物的表达水平,在喉鳞状细胞癌侵袭转移过程中可能发挥重要的生物学作用,有望成为新的分子治疗靶点。

沉默MAGI2基因对乳癌耐药细胞增殖与凋亡影响

目的探讨膜相关鸟苷酸激酶转化蛋白2(MAGI2)对乳癌耐药细胞增殖、凋亡的影响。方法采用荧光定量PCR(qPCR)检测MAGI2在人乳癌细胞MCF-7与阿霉素耐药细胞MCF-7/ADR中的表达量。在Lipofectamine 2000介导下将siRNA NC、siRNA MAGI2质粒转染入MCF-7/ADR细胞。以细胞计数(CCK-8)检测细胞增殖,流式细胞术实验检测凋亡。应用蛋白质印迹法(Western blot)检测MAGI2、磷脂酰肌醇-3激酶/丝苏氨酸蛋白激酶(PI3K/AKT)信号通路相关蛋白表达。结果与MCF-7细胞相比,MAGI2在MCF-7/ADR细胞中表达量明显增加(t=19.902,P<0.05)。si-MAGI2可抑制MCF-7/ADR细胞增殖,促进其凋亡(t=4.027~24.651,P<0.05),降低p-PI3K、p-AKT蛋白水平(t=18.266、19.117,P<0.05)。结论 MAGI2可能通过调控PI3K/AKT信号通路促进MCF-7/ADR细胞增殖,抑制其凋亡。

lncRNA MAGI2-AS3调控Fas/FasL通路抑制神经母细胞瘤的生长

目的:探讨lncRNA MAGI2-AS3在神经母细胞瘤中的表达及对Fas/FasL通路的调控作用。方法:本研究选用2016年1月至2018年6月在本院接受治疗的23例神经母细胞瘤患者为研究对象,手术采集患者瘤组织和瘤旁正常组织进行qRT-PCR实验检测lncRNA MAGI2-AS3、Fas、FasL的mRNA的表达水平,并分析lncRNA MAGI2-AS3的表达与患者临床病理参数的关系;培养SH-SY5Y、SK-N-SH神经母细胞瘤细胞系,将其分为对照组(control)、LV-NC组、LV-MAGI2-AS3组,过表达lncRNA MAGI2-AS3,荧光显微镜检测慢病毒转染效率,qRT-PCR检测过表达后lncRNA MAGI2-AS3、Fas、FasL的mRNA的表达水平,CCK-8方法检测细胞增殖情况,流式细胞仪检测细胞凋亡情况。结果:神经母细胞瘤患者组织中lncRNA MAGI2-AS3、Fas、FasL mRNA表达水平均显著低于正常组织(P<0.05);与神经母细胞瘤患者临床病理参数比较结果显示lncRNA MAGI2-AS3与临床分期、组织分化程度有关(P<0.05);荧光显微镜观察SK-N-SH、SH-SY5Y细胞的转染效率,结果发现LV-MAGI2-AS3组显著高于LV-NC组(P<0.05),qRT-PCR检测lncRNA MAGI2-AS3 mRNA表达水平显著高于LV-NC组和control组(P<0.05);过表达LncRNA MAGI2-AS3后,两个细胞系中Fas、FasL mRNA表达水平显著高于LV-NC组和control(P<0.05);CCK-8检测结果显示,感染LV-MAGI2-AS3后,两个细胞系增殖率均显著低于LV-NC组和control组(P<0.05),LV-NC组和control组无显著变化;细胞凋亡检测结果显示,过表达LV-MAGI2-AS3z细胞凋亡率显著高于LV-NC组和control组(P<0.05),LV-NC组和control组凋亡率比较无显著差异。结论:lncRNA MAGI2-AS3在神经母细胞瘤组织和细胞中表达减少,且调控细胞凋亡通路中Fas、FasL的表达,其可能是通过调控Fas/FasL通路抑制神经母细胞瘤的生长。

lncRNA MAGI2-AS3在非小细胞肺癌组织中的表达及生物学作用

目的:评价lncRNA MAGI2-AS3在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)组织中的表达及生物学作用。方法:收集63例非小细胞肺癌患者癌组织及其癌旁组织,检测lncRNA MAGI2-AS3在癌与癌旁组织中的相对表达量并分析其与患者临床特征的关系;在A549细胞中过表达lncRNA MAGI2-AS3,分析其与NSCLC细胞增殖、凋亡、侵袭及迁移能力之间的关系。结果:lncRNA MAGI2-AS3在NSCLC组织中呈现低表达状态,与正常肺组织相比,差异具有统计学意义;lncRNA MAGI2-AS3在NSCLC组织中低表达,与患者的年龄、病理类型、肿瘤大小、临床分期、吸烟指数有关;lncRNA MAGI2-AS3能够抑制肺癌细胞的增殖、侵袭和迁移。结论:检测lncRNA MAGI2-AS3与NSCLC病理类型、临床分期有一定的相关性,可以作为一种潜在的肺癌标志物指导临床诊断。lncRNA MAGI2-AS3能够抑制肺癌细胞的增殖、侵袭和迁移,有可能成为肺癌治疗的潜在靶点用于临床。

LncRNA MAGI2-AS3靶向调控miR-1277-5p对帕金森病细胞模型损伤的影响

目的探讨LncRNA MAGI2-AS3对帕金森病细胞模型损伤的影响及其对miR-1277-5p的调控作用。方法用1-甲基-4-苯基自由基离子(MPP+)诱导的SK-N-SH细胞建立帕金森病细胞模型,实验分组:MPP++si-NC组、MPP++si-MAGI2-AS3组、MPP++miR-NC组、MPP++miR-1277-5p组、MPP++si-MAGI2-AS3+anti-miR-NC组、MPP++si-MAGI2-AS3+anti-miR-1277-5p组;qRT-PCR检测MAGI2-AS3与miR-1277-5p的表达量;根据试剂盒检测LDH、MDA、GSH的含量;CCK-8、流式细胞术分别检测细胞增殖及凋亡;双荧光素酶报告基因实验检测MAGI2-AS3与miR-1277-5p的靶向关系。结果MPP+诱导的SK-N-SH细胞中MAGI2-AS3表达量升高(P<0.05),miR-1277-5p表达量降低(P<0.05),LDH、MDA水平和凋亡率升高(P<0.05),细胞存活率和GSH水平降低(P<0.05);转染si-MAGI2-AS3或转染miR-1277-5p mimics可抑制MPP+诱导的SK-N-SH细胞凋亡及氧化应激,并可促进细胞增殖;MAGI2-AS3可靶向调控miR-1277-5p;共转染si-MAGI2-AS3与anti-miR-1277-5p能够逆转干扰MAGI2-AS3表达对MPP+诱导的SK-N-SH细胞氧化应激、增殖及凋亡作用。结论干扰MAGI2-AS3表达可通过上调miR-1277-5p而抑制SK-N-SH细胞氧化应激反应、凋亡及促进细胞增殖进而减轻帕金森病细胞模型损伤。

LncRNA MAGI2-AS3调控miR-374b-5p/HOXB7信号通路对脓毒症相关脑损伤的影响

目的探讨MAGI2-AS3/miR-374b-5p/HOXB7轴在脓毒症相关脑损伤(SE)发病中的作用。方法通过盲肠结扎穿孔(CLP)手术在成年C57BL/6 J雄性小鼠中诱导脓毒症。随机选择CLP小鼠用针对MAGI2-AS3的短干扰RNA(siRNA)或miR-374b-5p模拟物及相关对照转染。在术后8~12 d通过Morris水迷宫试验检测小鼠的空间学习能力和记忆能力。然后检测CLP小鼠的海马神经元凋亡指标。体外建立LPS诱导海马神经元损伤模型,分别用si-MAGI2-AS3或miR-374b-5p模拟物转染神经元,以确定海马神经元的增殖抑制和凋亡。使用双荧光素酶报告基因测定评估MAGI2-AS3、miR-374b-5p、HOXB7之间的相互作用。结果CLP小鼠在CLP手术后第3、7和14天显示MAGI2-AS3水平逐渐增加和miR-374b-5p水平逐渐降低,并伴有认知功能受损。MAGI2-AS3沉默和miR-374b-5p升高提高了CLP小鼠的空间学习能力和记忆能力,抑制了神经元凋亡。MAGI2-AS3沉默和miR-374b-5p升高增加了LPS处理的海马神经元的活力并减少了凋亡。MAGI2-AS3特异性结合miR-374b-5p,而miR-374b-5p靶向HOXB7。结论MAGI2-AS3沉默可能通过上调miR-374b-5p和下调HOXB7来抑制CLP小鼠海马神经元的凋亡。

LncRNA MAGI2-AS3表达对肺癌细胞增殖、凋亡、侵袭的影响

目的探讨lncRNA MAGI2-AS3与肺癌进展的关系。方法EdU细胞增殖实验检测肿瘤细胞增殖情况,细胞凋亡/坏死检测试剂盒检测肿瘤细胞凋亡情况,transwell侵袭实验检测细胞侵袭情况。过表达MAGI2-AS3,qRT-PCR检测MAGI2-AS3 mRNA表达。采用BALB/C裸鼠,构建肺癌细胞移植瘤模型,观察肿瘤体内生长情况。结果过表达MAGI2-AS3后,PG49细胞中MAGI2-AS3相对表达量明显增加(t=1.91,P<0.01)。EdU细胞增殖实验,显示过表达MAGI2-AS3抑制肺癌细胞增殖(t=1.77,P<0.01)。细胞凋亡/坏死检测显示过表达MAGI2-AS3促进肺癌细胞凋亡(t=1.30,P<0.05)。Transwell侵袭实验显示过表达MAGI2-AS3抑制肺癌细胞侵袭能力(t=2.49,P<0.01)。在肺癌荷瘤体内模型中,过表达MAGI2-AS3小鼠移植瘤组织体积和重量明显下降(sh-RACGAP1组vs sh-NC组P<0.05;oe-MAGI2-AS3组vs oe-NC组P<0.05)。结论LncRNA MAGI2-AS3抑制肺癌细胞增殖和侵袭,促进肺癌细胞凋亡。

加权重基因共表达网络分析识别慢性肾脏病足细胞损伤关键节点基因MAGI2

目的通过加权基因共表达网络分析(WGCNA)识别慢性肾脏病(CKD)足细胞损伤相关的基因模块与关键基因。方法从基因表达综合数据库(GEO)中下载包含足细胞损伤体外模型及CKD患者肾小球组份的表达谱GSE66107、GSE93798、GSE30528、GSE32591 4个数据集。利用R软件包做数据预处理并选取错误发现率(FDR)<0.05及差异倍数≥1.5作为差异表达基因(DEG);结合数据集GSE993395(133例CKD患者肾小球样本)用WGCNA进行模块化分析并对模块内基因进行功能注释(GO),根据GO结果和含有文献报道的足细胞标准基因(PSG)情况确定足细胞损伤相关模块,根据模块内基因连接度(Kwithin)挑选枢纽(hub)基因;利用Cytoscape软件及插件Cluego构建足细胞损伤相关模块基因的加权共表达网络。结果 4个数据集共得到趋势一致的DEG 7 957个,其中15个DEG在4个数据集中均有差异(co DEG)。GSE993395中包含的4 031个DEG被用于WGCNA分析;最终得到12个基因模块,其中green模块包含最多的co DEG和PSG,进一步通过Kwithin发现其中同时作为co DEG和PSG的MAGI2基因是其hub基因之一。结论WGCNA表达网络分析方法是一个高效的系统生物学方法,应用该方法发现CKD时关键节点基因MAGI2在足细胞损伤中可能起到重要作用。

lncRNA MAGI2-AS3调节miR-218-5p/KDM2A轴对宫颈癌细胞活性和上皮间质转化的影响

目的探讨lncRNA MAGI2-AS3调节miR-218-5p/赖氨酸去甲基化酶2A(KDM2A)轴对宫颈癌(CC细胞活性)和上皮间质转化(EMT)的影响。方法将体外培养的CaSki细胞分为NC组、si-NC组、si-MAGI2-AS3组、miR-NC组、miR-218-5p mimic组、si-MAGI2-AS3+inhibitor NC组、si-MAGI2-AS3+miR-218-5p inhibitor组。检测MAGI2-AS3、miR-218-5p、KDM2AmRNA在CC组织、不同细胞及各组CaSki细胞中的表达水平;检测CaSki细胞增殖、迁移、侵袭、凋亡、Bax、Bcl-2及EMT相关蛋白表达;双荧光素酶实验验证miR-218-5p与MAGI2-AS3、KDM2A的关系。结果CC组织中MAGI2-AS3、KDM2AmRNA表达高于癌旁组织,miR-218-5p低于癌旁组织(P<0.05)。HcerEpic细胞、C-33A细胞、CaSki细胞中MAGI2-AS3、KDM2A mRNA表达均依次升高,miR-218-5p依次降低(P<0.05)。si-MAGI2-AS3组MAGI2-AS3、KDM2AmRNA表达、CaSki细胞增殖率、迁移率、侵袭细胞数、Bcl-2、Vimentin表达均低于NC组和si-NC组,miR-218-5p表达、CaSki细胞凋亡率、Bax、E-cadherin表达均高于NC组和si-NC组(P<0.05);miR-218-5pmimic组KDM2AmRNA表达、CaSki细胞增殖率、迁移率、侵袭细胞数、Bcl-2、Vimentin表达均低于miR-NC组,miR-218-5p表达、CaSki细胞凋亡率、Bax、E-cadherin表达均高于miR-NC组(P<0.05)。双荧光素酶报告基因实验显示miR-218-5p和MAGI2-AS3、KDM2A均存在靶向调控关系(P<0.05)。结论MAGI2-AS3在CC细胞中呈高表达,下调MAGI2-AS3可调节miR-218-5p/KDM2A轴抑制CaSki细胞恶性生物学行为,诱导其凋亡。

MAGI2-AS3在肿瘤发生发展中的调控机制研究进展

长链非编码RNA (lncRNA)与肿瘤的发病机制密切相关,是近年来肿瘤病因学研究的热门领域。MAGI2-AS3作为肿瘤相关lncRNA,可从表观遗传学、转录及转录后调控等多层面发挥作用,参与肿瘤发生发展的多个阶段,对于肿瘤诊断、治疗和预后具有潜在应用价值。本文主要就MAGI2-AS3在常见恶性肿瘤中的表达、调控机制及临床应用价值进行综述,为肿瘤防治提供参考。

lncRNA MAGI2-AS3下调miR-31-5p抑制肺腺癌细胞的增殖、迁移、侵袭并促进凋亡

目的研究lncRNA MAGI2-AS3对肺癌A549细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响和潜在的分子机制。方法根据转染载体不同将A549细胞分为pcDNA3.1组(转染pcDNA3.1)、pcDNA3.1-MAGI2-AS3组(转染pcDNA3.1-MAGI2-AS3)、anti-miR-NC组(转染anti-miR-NC)、anti-miR-31-5p组(转染anti-miR-31-5p)、pcDNA3.1-MAGI2-AS3+miR-NC组(共转染pcDNA3.1-MAGI2-AS3和miR-NC)、pcDNA3.1-MAGI2-AS3+miR-31-5p组(共转染pcDNA3.1-MAGI2-AS3和miR-31-5p mimics)。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测miR-31-5p和MAGI2-AS3 RNA的表达,四氮唑蓝(MTT)法测定A549细胞增殖活性,Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力,双荧光素酶报告系统验证MAGI2-AS3与miR-31-5p的调控关系,流式细胞术检测细胞凋亡与周期。两组间比较采用独立样本t检验进行分析;多组间比较采用单因素方差分析,组内多重比较采用SNK-q检验。结果与人正常肺细胞HBE相比,肺癌细胞A549中的MAGI2-AS3表达量(0.48±0.03比1.29±0.06)降低,miR-31-5p表达量(1.01±0.05比0.25±0.02)升高;与pcDNA3.1组比较,pcDNA3.1-MAGI2-AS3组A549细胞活力(0.48±0.04比0.77±0.06)、迁移[(81.33±2.87)个比(124.33±3.09)个]和侵袭[(32.00±2.83)个比(53.00±3.27)个]细胞数、S期细胞所占比例(23.01﹪±1.00﹪比32.95﹪±1.06﹪)均降低,凋亡率(19.95﹪±1.25﹪比7.23﹪±0.51﹪)、G0-G1期细胞所占比例(43.58﹪±2.15﹪比33.56﹪±1.23﹪)均升高;与anti-miR-NC组比较,anti-miR-31-5p组A549细胞活力(0.53±0.04比0.78±0.06)、迁移[(76.00±3.74)个比(108.33±2.87)个]和侵袭[(30.00±1.63)个比(42.33±2.05)个]细胞数、S期细胞所占比例(24.43﹪±1.13﹪比32.91﹪±1.08﹪)降低,凋亡率(18.21﹪±1.24﹪比7.29﹪±0.51﹪)、G0-G1期细胞所占比例(41.56﹪±2.19﹪比33.53﹪±1.27﹪)升高,差异有统计学意义(P均<0.05);双荧光素酶报告系统结果显示,MAGI2-AS3靶向负调控miR-31-5p的表达。与pcDNA3.1-MAGI2-AS3+miR-NC组比较,pcDNA3.1-MAGI2-AS3+miR-31-5p组A549细胞活力(0.68±0.06比0.50±0.04)、迁移[(91.00±1.63)个比(52.67±2.62)个]和侵袭[(62.67±2.49)个比(31.67±4.03个)]细胞数升高,凋亡率(10.59﹪±1.0﹪比21.11﹪±1.14﹪)降低,差异有统计学意义(P均<0.05)。结论lncRNA MAGI2-AS3通过靶向miR-31-5p抑制A549细胞的增殖、迁移和侵袭,促进细胞凋亡。lncRNA MAGI2-AS3是肺癌潜在分子治疗靶点。

大菱鲆高温胁迫应答主效QTL候选基因的表达特性分析

为研究大菱鲆高温胁迫下相关应激基因的表达影响,采用Real-time PCR对本课题组已定位到的大菱鲆高温胁迫应答主效QTL中的4个候选基因(p53、UBE2H、ZNF469和MAGI2基因)在不同温度胁迫下的肝脏、鳃、脾脏、皮肤4个组织中的表达量进行检测。以大菱鲆正常生活水温14℃为对照组,20℃、23℃、25℃和28℃为实验组,进行数据分析。结果显示,4个基因在各个组织中均有表达,且表达量具有组织和温度特异性。其中UBE2H的表达量在4个组织中均呈现出先上升后下降的趋势,在肝脏、脾脏、皮肤组织中20℃时急剧上升并达到峰值且差异显著;在鳃组织中23℃时达峰值,差异显著。p53在4个组织中的表达量均有先上升后下降的趋势,但在鳃和皮肤组织中28℃时表达量急剧升高达到峰值且差异显著。ZNF469和MAGI2在4个组织中均在20℃时大量表达,并远高于其他温度。研究表明,在大菱鲆高温胁迫应答过程中p53基因与DNA修复和细胞凋亡密切相关,而UBE2H基因参与的泛素-蛋白酶体途径对p53基因具有反馈调节作用,是维持细胞稳态的关键基因;ZNF469和MAGI2在作为鱼类应答高温胁迫的生物标志物方面具有重要研究价值。

基于lncRNA/GABAA受体探讨产后抑郁的发病及干预机制

目的探讨lncRNA MAGI2-AS3/miR-330/γ-氨基丁酸A(GABAA)在产后抑郁症(PPD)发病中的作用。方法建立激素模拟妊娠诱导的PPD小鼠模型,进行蔗糖偏好测试(SPT)、尾悬试验(TST)和强迫游泳测试(FST)以评估小鼠抑郁样行为。通过微阵列分析筛选出PPD小鼠海马组织中异常表达的lncRNAs/miRNAs。通过基因转染改变MAGI2-AS3和GABAA的表达,以探索它们在PPD小鼠神经元恢复中的作用以及在神经细胞中相互作用关系。通过荧光素酶测定进一步验证MAGI2-AS3/miR-330/GABAA三者间的关系。结果在行为测试中,PPD模型小鼠表现出明显的抑郁样行为。基于PPD小鼠和假手术组小鼠的海马组织进行lncRNA微阵列分析,发现在PPD小鼠中MAGI2-AS3显著上调,而miR-330显著下调(P<0.05)。RT-qPCR验证发现,PPD小鼠海马中MAGI2-AS3表达相对于假手术小鼠显著上调(P<0.05),而miR-330表达降低(P<0.05)。通过荧光素酶测定进一步验证了MAGI2-AS3和miR-330之间的结合关系,并确定了GABAA作为miR-330的下游分子。功能实验分析显示,上调PC12细胞中MAGI2-AS3表达导致GABAA表达增加(P<0.05),但转染miR-330模拟物使细胞中GABAA表达降低(P<0.05)。向PPD小鼠海马中注射sh-MAGI2-AS3或sh-GABAA后,海马组织中神经元损伤减少(P<0.05)。结论MAGI2-AS3通过miR-330/GABAA网络参与神经元损伤并增加PPD模型中的神经元丢失。