槲皮素通过雌激素受体下调长非编码RNA MALAT-1并发挥抗乳腺癌的作用机制

目的探索槲皮素抑制乳腺癌细胞恶性生物学行为的分子机制。方法以乳腺癌细胞系MCF-7和MB231作为研究对象,用慢病毒LV-ERα、LV-MALAT-1转染乳腺癌MB231细胞和MCF7细胞,RT-qPCR检测MALAT-1表达,Western blot检测肿瘤细胞中ERα蛋白表达,CCK-8细胞实验、平板克隆形成实验检测细胞增殖能力,PI染色法检测细胞周期,通过mRFP-GFP-LC3荧光双标腺病毒转染检测自噬水平,观察槲皮素和雌二醇对乳腺癌细胞增殖能力的影响。结果17β-雌二醇(E2)可以促进乳腺癌细胞MCF-7的增殖,而5μmol·L^(-1)槲皮素可以明显逆转E2对增殖的促进作用(P<0.05)。槲皮素对不表达雌激素受体α(estrogen receptor-α,ERα)的乳腺癌细胞MB231不表现抑制作用;而过表达ERα后,槲皮素则抑制了E2对MB231-ERα的促进作用。同时槲皮素可以抑制E2激活的MALAT-1表达;并且其抑制作用被过表达MALAT-1所逆转,包括细胞增殖,细胞周期进展以及克隆形成能力。结论槲皮素依赖于ERα的表达对乳腺癌的增殖等恶性行为起抑制作用,并且很可能是通过抑制MALAT-1的表达来发挥作用。

MicroRNA-26b下调MALAT-1抑制乳腺癌MCF-7细胞恶性生物学行为的机制研究

目的 探索microRNA-26b(miR-26b)通过MALAT-1抑制乳腺癌MCF-7细胞恶性生物学行为的分子机制。方法 以乳腺癌细胞系MCF-7作为研究对象,采用慢病毒LV-miR-26b-ctrl和LV-miR-26b转染肿瘤细胞,逆转录聚合酶链反应检测MALAT-1、miR-26a和miR-26b的mRNA表达,平板克隆形成实验、CCK-8细胞增殖实验、软琼脂成瘤实验、细胞划痕实验、Transwell细胞侵袭实验分别检测肿瘤细胞的增殖、体外成瘤、迁移和侵袭能力。结果 E2组与Mock组MCF-7细胞24、48、72和96 h时吸光度值比较,经重复测量设计的方差分析,结果:(1)不同时间点吸光度值比较,差异有统计学意义(P <0.05);(2)两组吸光度值比较,差异有统计学意义(P <0.05),与Mock组比较,E2组72和96 h时细胞增殖能力较Mock组提高(P <0.05);(3)两组吸光度值变化趋势比较,差异有统计学意义(P <0.05)。与Mock组相比,E2组MALAT-1相对表达量升高(P <0.05),miR-26a、miR-26b mRNA相对表达量下降(P <0.05)。高表达miR-26b的乳腺癌患者的生存情况优于低表达miR-26b组,死亡风险更低(P <0.05),低表达miR-26a组患者的生存情况优于高表达miR-26a组(P <0.05),用Cox比例风险回归模型,将miR-26a作为一个独立的预后因素来比较,两组患者的死亡风险比较无差异(P>0.05)。与LV-miR-26b-ctrl组比较,LV-miR-26b-ctrl/E2组乳腺癌细胞的MALAT-1相对表达量升高(P <0.05),与LV-miR-26b-ctrl/E2组比较,LV-miR-26b/E2组乳腺癌细胞的MALAT-1相对表达量降低(P <0.05)。LV-miR-26b-ctrl组、LV-miR-26b-ctrl/E2组、LV-miR-26b/E2组细胞在24、48、72和96 h时吸光度值比较,经重复测量设计的方差分析,结果:(1)不同时间点吸光度值比较,差异有统计学意义(P <0.05);(2)各组吸光度值比较,差异有统计学意义(P <0.05),LV-miR-26b-ctrl/E2组72和96 h时细胞增殖能力明显较LV-miR-26b-ctrl组增强(P <0.05),LV-miR-26b/E2组72和96 h时细胞增殖能力较LV-miR-26b-ctrl/E2组降低(P <0.05);(3)各组吸光度值变化趋势比较,差异有统计学意义(P <0.05)。E2处理后的LV-miR-26b-ctrl肿瘤细胞增殖和体外成瘤能力增强。与LV-miR-26bctrl/E2组比较,LV-miR-26b/E2组肿瘤细胞的增殖和体外成瘤能力降低。在24 h时,LV-miR-26b-ctrl/E2组细胞划痕间隙较LV-miR-26b-ctrl组变窄,LV-miR-26b/E2组24 h时细胞的划痕间隙较LV-miR-26bctrl/E2组明显增宽。LV-miR-26b-ctrl/E2组Transwell小室下方的乳腺癌细胞数量较LV-miR-26b-ctrl组增多,LV-miR-26b/E2组的肿瘤细胞数量较LV-miR-26b-ctrl/E2组减少。结论 下调MALAT-1可能是miR-26b抑制乳腺癌恶性生物学行为的分子机制之一,miR-26b有望成为乳腺癌治疗的调控靶点。

血清Irisin、PTX3及MALAT1水平与糖尿病视网膜病变病情程度的关系及联合诊断价值

目的研究血清鸢尾素(Irisin)、长正五聚蛋白3(PTX3)、人肺腺癌转移相关转录本1(MALAT1)水平与糖尿病视网膜病变(DR)病情程度的关系及联合诊断的价值。方法选取2022年4月至2023年4月沧州市中心医院2型糖尿病(T2DM)合并DR患者85例设为DR组,85例单纯T2DM患者设为非DR组,同时期85例健康志愿者设为对照组。将DR组患者以是否处于增生型DR为标准分为增生型组(38例)与非增生型组(47例)。收集DR组患者病例临床资料,包括性别、舒张压、年龄、收缩压、病程、空腹血糖(FPG)、体质量指数、糖化血红蛋白(HbA1c)、吸烟史、甘油三酯(TG)、饮酒史、收缩期峰值流速、舒张末期峰值流速、阻力指数、空腹胰岛素(FINS)、糖尿病家族史、总胆固醇(TC)、胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)。酶联免疫吸附法检测各组患者血清Irisin、PTX3水平,实时荧光定量PCR法检测血清MALAT1水平。采用Pearson相关性分析检测血清Irisin、PTX3及MALAT1水平与DR患者病情程度的相关性。Logistic回归分析DR患者病情程度的影响因素。受者工作特征曲线(ROC曲线)分析血清Irisin、PTX3及MALAT1单独诊断DR的价值。ROC曲线、净重新分类指数(NRI)及综合判别改善指数(IDI)分析含与不含血清Irisin、PTX3及MALAT1方案诊断DR的价值。结果3组患者血清Irisin、PTX3、MALAT1水平比较,差异均有统计学意义(均为P<0.001)。增生型组患者病程长于非增生型组,收缩期峰值流速、舒张末期峰值流速、血清Irisin水平均低于非增生型组,阻力指数、FPG、HbA1c、TG、FINS、HOMA-IR及血清PTX3、MALAT1水平均高于非增生型组,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。DR患者血清Irisin水平与DR病情程度呈负相关(r=-0.512,P<0.001),PTX3、MALAT1水平与DR病情程度均呈正相关(r=0.497、0.573,均为P<0.05)。Logistic回归分析结果显示,病程、FPG、HbA1c、TG、FINS、HOMA-IR、收缩期峰值流速、舒张末期峰值流速、阻力指数及血清Irisin、PTX3、MALAT1水平均为DR病情程度加重的影响因素(均为P<0.05)。血清Irisin、PTX3、MALAT1诊断DR的曲线下面积(AUC)分别为0.743、0.811、0.773。与常规诊断方案比较,含有血清Irisin、PTX3、MALAT1水平的新诊断方案的AUC明显增大(Z=2.708,P=0.007),NRI、IDI分别为0.039(95%CI:0.022~0.069)、0.026(95%CI:0.014~0.047)(均为P<0.05)。结论DR患者血清Irisin水平降低,PTX3、MALAT1水平升高,且与患者DR病情程度密切相关,含有血清Irisin、PTX3、MALAT1指标的诊断方案具有较高的诊断价值。

lncRNA MALAT1调控GPx3去甲基化参与非小细胞肺癌的发生发展

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)MALAT1通过调控谷胱甘肽过氧化物酶3(GPx3)对非小细胞肺癌(NSCLC)增殖与侵袭的影响及其机制。方法通过TCGA数据库分析NSCLC患者的mRNA表达信息、甲基化数据及其临床信息,确定关键基因MALAT1与GPx3在NSCLC中的表达差异及其与患者预后之间的关系。采用免疫组织化学染色评估GPx3在肺腺癌组织中的表达水平,通过细胞培养、实时定量PCR、MTT法检测细胞增殖、细胞克隆形成以及迁移与侵袭能力来研究抑制MALAT1表达对A549细胞增殖与侵袭能力的影响。蛋白免疫印迹实验用于检测相关蛋白表达的变化。结果在NSCLC组织中,MALAT1的表达显著升高且与患者不良预后相关;GPx3的表达水平则显著降低,GPx3低表达患者的总生存率显著低于高表达组。其中MALAT1高甲基化水平与肺腺癌发生发展关系密切。沉默MALAT1可显著抑制肺癌细胞的增殖、克隆形成以及迁移和侵袭能力,同时促进GPx3的表达。蛋白表达分析进一步证实MALAT1的沉默减少了肿瘤干细胞标志物的表达,并抑制了上皮-间充质转化(EMT)过程。MALAT1通过募集LSD2调控GPx3的表达,从而在NSCLC的发展中发挥关键作用。结论lncRNA MALAT1通过抑制GPx3表达,促进NSCLC肿瘤细胞的增殖与侵袭能力。MALAT1高表达及高甲基化水平与NSCLC患者不良预后之间存在密切关联,为NSCLC的早期诊断、治疗及预后评估提供了新的生物标志物。

lncRNA MALAT1通过调控miR-181a促进氧化应激模型中的心肌细胞损伤

目的在心肌细胞氧化应激模型中探究长链非编码RNA(lncRNA)转移相关肺腺癌转录物1(MALAT1)与微小RNA-181a(miR-181a)的表达及作用机制。方法qRT-PCR检测30例急性心肌梗死患者(AMI组)和30例健康对照组(Normal组)外周血中MALAT1与miR-181a的表达,Pearson相关性分析明确MALAT1与miR-181a在AMI中的相关性;lncBase在线预测数据库预测MALAT1与miR-181a之间的结合位点,并利用双荧光素酶基因报告实验进行验证;采用过氧化氢(H_(2)O_(2))处理人心肌细胞株AC16建立心肌细胞氧化应激模型,将沉默MALAT表达的siRNA(si-MALAT)和阴性对照si-NC转染入AC16细胞中,并将细胞分为:H_(2)O_(2)处理(H_(2)O_(2))组,H_(2)O_(2)+si-NC组,H_(2)O_(2)+si-MALAT组;CCK-8法检测各组细胞的增殖活性,TUNEL法检测细胞凋亡情况,Western blot实验检测各组细胞中促凋亡蛋白裂解型半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(cleaved caspase-3)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)和凋亡抑制蛋白B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)的表达水平。结果与Normal组相比,AMI组患者MALAT1的表达水平升高,而miR-181a的表达水平降低(P<0.05),且MALAT1和miR-181a表达呈负相关。lncBase在线预测数据库预测和双荧光素酶基因报告实验表明MALAT1可靶向调控miR-181a表达。与H_(2)O_(2)组相比,H_(2)O_(2)+si-MALAT1组细胞活力升高(P<0.05),TUNEL阳性率降低(P<0.05),cleaved caspase-3和Bax表达水平降低(P<0.05),而Bcl-2的表达水平升高(P<0.05),H_(2)O_(2)+si-NC组均无明显改变(P>0.05)。结论LncRNA MALAT1在AMI患者中表达升高,可通过靶向抑制miR-181a促进氧化应激诱导的心肌细胞损伤。

丹参通络解毒汤含药血清调控MALAT1对缺氧/复氧大鼠心肌微血管内皮细胞的保护作用及机制研究

目的研究丹参通络解毒汤含药血清调控转移相关肺腺癌转录本1(MALAT1)对缺氧/复氧大鼠心肌微血管内皮细胞(CMECs)的保护作用及机制。方法体外培养大鼠CMECs,构建缺氧/复氧损伤细胞模型,转染过表达/沉默空白MALAT1慢病毒,将细胞分为过表达空白+中药组、过表达MALAT1+中药组、过表达MALAT1组、沉默空白+中药组、沉默MALAT1组、沉默MALAT1+中药组,分别予相应血清培养,免疫荧光染色检测Beclin-1蛋白表达,Western blot检测丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶1(SRPK1)、丝氨酸丰富剪接因子1(SRSF1)、血管内皮生长因子(VEGF)及Bax蛋白表达,RT-PCR检测MALAT1、SRPK1、SRSF1 mRNA表达。结果与过表达空白+中药组比较,过表达MALAT1+中药组Beclin-1蛋白表达升高,SRPK1、SRSF1、Bax蛋白表达显著升高(P<0.05,P<0.01),VEGF蛋白表达显著降低(P<0.01),MALAT1、SRPK1、SRSF1 mRNA表达显著升高(P<0.05,P<0.01);与过表达MALAT1组比较,过表达MALAT1+中药组Beclin-1蛋白表达降低,SRPK1、SRSF1、Bax蛋白表达显著降低(P<0.01,P<0.05),VEGF蛋白表达显著升高(P<0.01),MALAT1、SRPK1、SRSF1 mRNA表达显著降低(P<0.05);与沉默空白+中药组比较,沉默MALAT1+中药组Beclin-1蛋白表达降低,SRPK1、SRSF1、Bax蛋白表达显著降低(P<0.01),VEGF蛋白表达显著升高(P<0.01),MALAT1、SRPK1、SRSF1 mRNA表达显著降低(P<0.01);与沉默MALAT1组比较,沉默MALAT1+中药组Beclin-1蛋白表达降低,SRPK1、SRSF1、Bax蛋白表达显著降低(P<0.05),VEGF表达显著升高(P<0.01),MALAT1、SRPK1、SRSF1 mRNA表达显著降低(P<0.01,P<0.05)。结论上调MALAT1表达可促进缺氧/复氧损伤模型CMECs自噬,丹参通络解毒汤含药血清能通过抑制MALAT1表达抑制自噬、促进血管新生,其机制可能与下调SRPK1、SRSF1表达有关。

声门上型喉癌患者血清LncRNA MALAT1、miR-204-5p表达与预后的关系

目的探讨声门上型喉癌患者血清LncRNA MALAT1、miR-204-5p表达与预后的关系。方法分析2016年11月~2020年11月于保定市第一中心医院耳鼻咽喉科接受治疗的118例声门上型喉癌患者作为观察组,另选取同期体检的118名健康成年人作为对照组。观察组根据生存情况分为预后不良组(n=20例)与预后良好组(n=98例)。应用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)方法,对LncRNA MALAT1、miR-204-5p的表达量进行检测;Pearson法分析血清LncRNA MALAT1与miR-204-5p水平之间的关联性;构建受试者工作特征(ROC)曲线,评估血清LncRNA MALAT1及miR-204-5p水平对声门上型喉癌患者预后方面的预测价值。结果观察组的血清LncRNA MALAT1水平显著高于对照组(P<0.05),miR-204-5p水平显著低于对照组(P<0.05);血清LncRNA MALAT1与miR-204-5p表达水平呈负相关(r=-0.487,P<0.001);血清中LncRNA MALAT1与miR-204-5p表达水平与肿瘤T分级、淋巴结转移及分化程度间存在显著相关性(P<0.05);相较于预后良好组,预后不良组患者患者血清中LncRNA MALAT1的浓度明显升高(P<0.05),T1级、无淋巴结转移、高分化、临床Ⅰ~Ⅱ期及血清miR-204-5p水平显著降低(P<0.05)。通过ROC曲线分析,LncRNA MALAT1与miR-204-5p联合应用于预测声门上型喉癌患者预后,其曲线下面积(AUC)显著大于LncRNA MALAT1单独预测的AUC(Z=3.079,P=0.002)及miR-204-5p单独预测的AUC(Z=3.338,P=0.001)。结论声门上型喉癌患者血清LncRNA MALAT1水平升高,血清miR-204-5p水平降低,对预测声门上型喉癌患者的预后情况展现出一定价值。

长链非编码RNA-MALAT1在胶质瘤中的研究进展

胶质瘤是严重威胁人类健康的神经系统疾病之一,目前主要治疗方案为手术切除后联合放化疗,但是经过标准方案治疗的胶质瘤患者的临床预后结局依旧不理想。近年来,多项研究证实长链非编码RNA-MALAT1在胶质瘤的发生发展过程中有着重要的作用,包括促进胶质瘤细胞的增殖、抑制胶质瘤细胞凋亡、促进胶质瘤细胞迁移和侵袭、促进胶质瘤细胞的化疗耐药性。该文就MALAT1在胶质瘤中作用的研究进展进行综述。

LncRNA MALAT1对PCOS颗粒细胞凋亡、自噬和PI3K/Akt/mTOR通路的影响

目的探讨长链非编码RNA-肺腺癌转移相关转录子1(LncRNA MALAT1)对多囊卵巢综合征(PCOS)颗粒细胞的凋亡、自噬和磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)通路的影响。方法qRT-PCR检测PCOS卵巢组织、正常卵巢组织、人卵巢颗粒细胞KGN及正常卵巢上皮细胞IOSE80中LncRNA MALAT1的表达水平。体外培养KGN细胞,将KGN细胞分为control组、si-NC组、si-MALAT1组、pc-NC组、pc-MALAT1组、pc-MALAT1+740Y-P(PI3K激活剂)组。q RT-PCR检测各转染组细胞MALAT1 mRNA的表达水平;CCK-8检测细胞活力;流式细胞术检测细胞凋亡率;透射电镜观察KGN细胞中自噬小体;Western blot检测细胞B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)、Bcl-2关联X蛋白(Bax)、微管相关蛋白Ⅱ轻链3(LC3Ⅱ)、微管相关蛋白Ⅰ轻链3(LC3Ⅰ)、Beclin1、p-PI3K、PI3K、p-Akt、Akt、p-mTOR、mTOR蛋白表达水平。结果PCOS卵巢组织MALAT1 mRNA表达水平低于正常卵巢组织,KGN细胞中MALAT1 mRNA表达水平低于正常卵巢上皮IOSE80细胞;control组KGN细胞中可见少量的自噬小体;干扰MALAT1表达后KGN细胞OD_(450)值(24、48、72 h)、Bcl-2蛋白表达降低,细胞凋亡率、Bax、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、Beclin1、p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt、p-mTOR/mTOR增高(P<0.05),自噬小体数量增多;过表达MALAT1后上述指标变化均逆转(P<0.05);与pc-MALAT1组相比,pc-MALAT1+740Y-P组OD_(450)(24、48、72 h)值、Bcl-2蛋白表达降低,凋亡率、Bax、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、Beclin1、p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt、p-mTOR/mTOR升高(P<0.05),自噬小体数量增多。结论过表达MALAT1可能通过抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路,进而抑制PCOS颗粒细胞凋亡和自噬。

lncRNA MALAT1通过海绵吸附miRNA-141-3p调控Wnt/β-catenin促进卵巢癌的生长及转移

目的 研究长链非编码RNA MALAT1(lncRNA MALAT1)在卵巢癌中的作用及调控机制。方法 实时荧光定量聚合酶链反应(real-time quantitative polymerase chain reaction, RT-qPCR)检测MALAT1在人正常卵巢上皮细胞系IOSE80及人卵巢癌细胞系SKOV3、OVCA429和HO-8910PM中的表达,选取SKOV3及HO-8910PM细胞进行后续研究。利用siRNA干扰SKOV3和HO-8910PM细胞中MALAT1表达,CCK-8法检测细胞增殖,划痕及Transwell小室检测细胞迁移及侵袭能力,并通过Western blot法检测上皮-间充质转化(epithelial-mesenchymal transformation, EMT)相关指标E-cadherin、N-cadherin的表达。利用生物信息学分析MALAT1与miRNA-141-3p的靶向关系,并利用双荧光素报告基因验证。MALAT1敲低及miRNA-141-3p抑制剂共同作用细胞,检测其对SKOV3及HO-8910PM细胞增殖、侵袭及迁移的影响,并通过Western blot法分析其对Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白的表达调控。结果 与人正常卵巢上皮细胞系IOSE80比较,卵巢癌细胞系内MALAT1表达明显上调(P<0.05);而在SKOV3及HO-8910PM中下调MALAT1表达,细胞增殖、侵袭迁移及EMT均受到抑制,同时miRNA-141-3p表达上调(P<0.05)。双荧光素酶报告基因结果证明MALAT1和miRNA-141-3p具有靶向关系。而在下调MALAT1表达的同时使用miRNA-141-3p抑制剂,则可逆转下调MALAT1的所产生的抑制效应(P<0.05)。进一步的研究发现,MALAT1/miRNA-141-3p轴可能通过调控Wnt/β-catenin信号通路影响卵巢癌进展。结论 MALAT1可能通过海绵吸附miRNA-141-3从而调控Wnt/β-catenin影响卵巢癌的发生和发展。

MALAT1调控自噬参与异氟烷诱导老年大鼠POCD的机制研究

探究MALAT1调控自噬参与异氟烷诱导老年大鼠POCD的机制。 方法 40只SD大鼠分为4组,A组作为对照,B组作为模型,C组给予MALAT1 过表达干预:D组给予MALAT1 siRNA,比较各组血气分析、Morris水迷宫实验、BCL-2、LC3、ATG-5 mRNA和蛋白表达水平及清淀粉样前体蛋白(APP)、β-淀粉样蛋白(Aβ)、IL-1、IL-6和TNF-α水平。结果 四组大鼠血糖、pH、PaO2、PaCO2、SaO2 比较,差异均无统计学意义(P>0.05),与A组相比,B组大鼠大鼠逃避潜伏期时间延长,目标象限停留时间占比降低,穿越平台次数减少,与B组相比,C组逃避潜伏期时间缩短,目标象限停留时间占比增加,穿越平台次数增加,D组大鼠逃避潜伏期时间增加,目标象限停留时间占比减少,穿越平台次数减少,差异具有统计学意义(P<0.05)。与A组相比,B组大鼠海马组织BCL-2、LC3、ATG-5 mRNA和蛋白表达水平、血清APP、Aβ、IL-1、IL-6和TNF-α水平增加,差异具有统计学意义(P<0.05)。与B组相比,C组海马组织BCL-2、LC3、ATG-5 mRNA和蛋白表达水平及血清APP、Aβ、IL-1、IL-6和TNF-α水平均明显增加,D组海马组织BCL-2、LC3、ATG-5 mRNA和蛋白、血清APP、Aβ、IL-1、IL-6和TNF-α水平均明显减少,差异具有统计学意(P<0.05)。结论 降低MALAT1表达可通过减轻自噬缓解异氟烷诱导老年大鼠POCD。

乌头汤调控IncRNA MALAT1/miR-124途径抑制软骨细胞焦亡的机制研究

目的:探讨乌头汤是否通过调控Lnc RNA MALAT1/mi R-124途径抑制软骨细胞焦亡。方法:使用LPS(1μg/mL)24h+ATP(5.5mmol/L)4h诱导软骨细胞发生细胞焦亡反应;构建lncRNA MALAT1沉默细胞株;将软骨细胞随机分为空白对照组(Lenti-control组)、病毒沉默组(sh-MALAT1)、模型对照组(LPS+ATP+Lenti-control组)、模型沉默组(LPS+ATP+sh-MALAT1)。制备乌头汤含药血清,再将细胞再随机分为空白组、模型组(LPS+ATP)、乌头汤组(LPS+ATP+WTD含药血清)进行干预。Real-time PCR检测各组软骨细胞中的lncRNA MALAT1、miR-124基因水平变化;Western Blot检测各组软骨细胞中中NLRP3、caspase-1、GSDMD、IL-1β、IL-18的蛋白含量表达。结果:lncRNA MALAT1在LPS+ATP诱导的细胞焦亡软骨细胞核中表达增高。与空白对照组相比,模型沉默组中NLRP3、caspase-1、GSDMD、IL-1β、IL-18蛋白含量下降(P<0.05),而与模型对照组相比,病毒沉默组中上述指标蛋白含量下降(P<0.05)。与模型组相比,乌头汤组中lncRNA MALAT1及上述指标表达降低(P<0.05),miRNA-124 mRNA表达升高(P<0.05)。结论:乌头汤可通过调控lnc RNA MALAT1/miR-124途径抑制软骨细胞焦亡。

长链非编码RNA MALAT1对槟榔碱诱导的颊黏膜成纤维细胞活化能力影响的研究

目的:本研究旨在明确长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA) MALAT1对槟榔碱诱导的颊黏膜成纤维细胞(buccal mucosal fibroblasts, BMFs)活化能力影响的作用,为寻找新的口腔黏膜下纤维化(oral submucous fibrosis, OSF)治疗途径提供理论基础。方法:体外培养BMFs,采用不同浓度槟榔碱刺激BMFs,在细胞水平上构建OSF疾病模型。采用细胞计数试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)法检测细胞活力;Transwell法和胶原凝胶收缩法检测BMFs活化;实时荧光定量聚合酶链反应(quantitative real-time PCR, qRT-PCR)检测BMFs中平滑肌肌动蛋白-α(α-smooth muscle actin, α-SMA)和lncRNA MALAT1的表达情况;siRNA-MALAT1瞬时转染到BMFs中,评估槟榔碱刺激下BMFs迁移和收缩能力的变化。结果:10μg/mL槟榔碱是体外构建OSF疾病模型的最佳浓度,此时细胞内α-SMA和lncRNA MALAT1表达升高。Transwell实验和胶原凝胶收缩实验提示敲低lncRNA MALAT能抑制槟榔碱诱导的BMFs收缩和迁移。结论:lncRNA MALAT1对槟榔碱诱导的BMFs激活,细胞收缩和迁移有重要作用。

血清miR-499a、lnc RNA MALAT1在系统性红斑狼疮中表达及其与预后的关系

目的 检测系统性红斑狼疮(SLE)患者血清微RNA(miRNA)-499a、长链非编码RNA(lnc RNA)肺癌转移相关转录本1(MALAT1)表达情况,并分析其与患者临床预后的关系。方法 选取2018年1月至2020年1月北大荒集团总医院收治的SLE患者152例作为SLE组进行回顾性研究,另选取同期无自身免疫性疾病的健康体检者155名作为对照组。根据SLE疾病活动指数评分(SLEDAI),将SLE患者分为静止期组(SLEDAI 0~4分,n=43)、轻度活动期组(SLEDAI 5~9分,n=41)、中度活动期组(SLEDAI 10~15分,n=38)、重度活动期组(SLEDAI>15分,n=30);根据是否发生肾损伤,将SLE患者分为非肾损伤组(n=71)与肾损伤组(n=81);以SLE患者血清miR-499a、lnc RNA MALAT1均值为标准,将SLE患者分为miR-499a高表达组(n=77)和miR-499a低表达组(n=75),lnc RNA MALAT1高表达组(n=79)和lnc RNA MALAT1低表达组(n=73);根据预后情况分为预后良好组(n=115)与预后不良组(n=37)。比较SLE组与对照组、SLE患者不同分组(静止期组、轻度活动期组、中度活动期组、重度活动期组;非肾损伤与肾损伤组;预后良好与预后不良组;miR-499a高表达组和miR-499a低表达组;lnc RNA MALAT1高表达组和lnc RNA MALAT1低表达组)组间血清miR-499a、lnc RNA MALAT1表达差异;分析SLE患者血清miR-499a、lnc RNA MALAT1水平与临床病理特征的相关性;采用受试者操作特征(ROC)曲线分析血清miR-499a、lnc RNA MALAT1对SLE患者预后不良的预测价值。结果 SLE组患者血清miR-499a水平为0.24±0.07,低于对照组(1.01±0.18),lnc RNA MALAT1水平为3.75±0.82,高于对照组(1.02±0.19),差异均有统计学意义(P<0.05)。血清miR-499a水平在静止期组(0.52±0.11)、轻度活动期组(0.22±0.08)、中度活动期组(0.10±0.04)、重度活动期组(0.05±0.01)依次降低,lnc RNA MALAT1水平在静止期组(2.35±0.71)、轻度活动期组(3.72±0.83)、中度活动期组(4.44±0.85)、重度活动期组(4.95±0.95)依次升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。预后不良组SLE患者血清miR-499a水平为0.11±0.02,低于预后良好组(0.29±0.09),lnc RNA MALAT1水平为5.20±0.85,高于预后良好组(3.28±0.79),差异均有统计学意义(P<0.05)。miR-499a高表达组抗dsDNA阳性、抗ANA阳性SLE患者占比均低于miR-499a低表达组,SLEDAI评分低于miR-499a低表达组,差异均有统计学意义(P<0.05);lnc RNA MALAT1高表达组抗dsDNA阳性、抗ANA阳性SLE患者中占比均高于lnc RNA MALAT1低表达组,SLEDAI评分高于lnc RNA MALAT1低表达组,差异均有统计学意义(P<0.05)。SLE患者血清miR-499a、lnc RNA MALAT1呈负相关(r=-0.836,P<0.05);血清miR-499a水平预测SLE患者预后不良的曲线下面积(AUC)为0.815(灵敏度为86.5%,特异度为66.1%),血清lnc RNA MALAT1水平预测SLE患者预后不良的AUC为0.871(灵敏度为83.8%,特异度为74.8%)。结论 SLE患者血清miR-499a降低、lnc RNA MALAT1水平升高,二者可能共同参与SLE的进展,有望作为SLE预后不良的生物学标志物。

栀子醇提物下调lncRNA MALAT1影响帕金森病模型细胞增殖和凋亡

目的 探讨栀子醇提物对帕金森病进展的影响,并探讨其机制是否与调控长链非编码RNA(lncRNA)肺癌转移相关转录本(MALAT)1表达有关。方法 1-甲基-4-苯基吡啶离子(MPP~+)处理SK-N-SH构建模型帕金森病细胞模型。将SK-N-SH细胞分为对照组、模型组、实验1组(25μg/ml栀子醇提物)、实验2组(50μg/ml栀子醇提物)、实验3组(100μg/ml栀子醇提物)、si-NC组(转染si-NC)、si-MALAT1组(转染si-MALAT1)、实验3+pcDNA组(转染pcDNA联合100μg/ml栀子醇提物)、实验3+pcDNA-MALAT1组(转染pcDNA-MALAT1联合100μg/ml栀子醇提物)。细胞计数试剂盒(CCK-8)、流式细胞术和实时荧光定量PCR(RT-qPCR)用于检测细胞活力、凋亡及lncRNA MALAT1表达。结果 与对照组比较,模型组细胞活力显著降低,lncRNA MALAT1表达、凋亡率显著升高(P<0.05)。与模型组比较,实验2组、实验3组细胞活力显著升高,lncRNA MALAT1表达、凋亡率显著降低(P<0.05)。与si-NC组比较,si-MALAT1组细胞活力显著升高,凋亡率显著降低(P<0.05)。与实验3+pcDNA组比较,实验3+pcDNA-MALAT1组细胞活力显著降低,凋亡率显著升高(P<0.05)。结论 栀子醇提物可促进帕金森病模型细胞增殖,抑制细胞凋亡,其机制与下调lncRNA MALAT1表达有关。

血清LncRNA MALAT1、miR-146a表达水平与炎症性肠病患者Th1/Th2、Th17/Treg免疫细胞平衡的关系研究

目的探究血清长链非编码核糖核酸肺癌转移相关转录本1(LncRNA MALAT1)、微小核糖核酸-146a(miR-146a)表达水平与炎症性肠病(IBD)患者辅助性T细胞(Th)1/Th2、辅助性T细胞17(Th17)/调节性T细胞(Treg)免疫细胞平衡的关系。方法选取2021年6月至2023年6月我院诊治的IBD患者纳入观察组(n=151),根据疾病活动性将患者分为活动期组(n=78)和缓解期组(n=73),另选同期我院健康体检者纳入对照组(n=102)。采用实时荧光定量聚合酶链反应(QRT-PCR)法检测血清LncRNA MALAT1、miR-146a表达水平,流式细胞术检测外周血Th1、Th2、Th17、Treg细胞比例,并计算Th1/Th2比值、Th17/Treg比值,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测Th1/Th2、Th17/Treg相关细胞因子[白介素(IL)-6、肿瘤坏死因子-β(TNF-β)、干扰素-γ(IFN-γ)、白介素(IL)-10、白介素(IL)-17、白介素(IL)-22]。采用Pearson相关性分析LncRNA MALAT1、miR-146a表达水平与IBD患者Th1/Th2、Th17/Treg免疫细胞平衡的关系。结果三组血清LncRNA MALAT1、miR-146a表达水平、Th1、Th1/Th2、IFN-γ、IL-6、Th17、Th17/Treg、IL-17、IL-22比较,活动期组>缓解期组>对照组(P<0.05);三组Th2、TNF-β、Treg、IL-10比较,活动期组<缓解期组<对照组(P<0.05)。Pearson相关性分析显示:血清LncRNA MALAT1、miR-146a表达水平与Th1、Th1/Th2、IFN-γ、IL-6、Th17、Th17/Treg、IL-17、IL-22呈正相关(P<0.05),与Th2、TNF-β、Treg、IL-10呈负相关(P<0.05)。结论血清LncRNA MALAT1、miR-146a在IBD活动期患者中显著上调,且表达水平与Th1/Th2、Th17/Treg免疫细胞平衡密切相关,提示其可能通过调控免疫平衡影响IBD发生发展。

长非编码MALAT1基因在人鼻咽癌细胞株的表达及生物学意义

目的探讨MALAT1在鼻咽癌细胞细胞株中的表达及生物学功能。方法通过Real-time PCR检测MALAT1基因在鼻炎癌细胞株5-8F、C666-1、CNE-1、CNE-2、HONE-1、6-10B及永生化鼻咽上皮细胞NP69株中的表达;采用RNAi技术和RNA激活技术,构建MALAT1慢病毒干扰载体和激活载体载体并稳定转染鼻咽癌细胞株CNE-1,采用CCK8、平板克隆、划痕等试验分析MALAT1基因对CNE-1细胞生物学行为的影响。结果 MALAT1在高转移的鼻咽癌细胞株中高表达,在正常鼻咽上皮细胞低表达;经激活过表达MALAT1后,CNE-1细胞的上皮性标志物E-Cadherin的表达显著下调,间质细胞标志物Vimentin表达上调,侵袭转移能力明显增强(P<0.05)。结论 MALAT1基因上调能够促进鼻咽癌CNE-1细胞的增殖、侵袭和转移能力。

长链非编码RNA MALAT1的研究进展

长链非编码RNA(Long noncoding RNAs,lnc RNAs)是一类转录本长度超过200 nt的RNA分子,它们并不编码蛋白质,而是以RNA的形式在转录水平、转录后水平、表观遗传学修饰等多种层面上调控基因的表达。肺癌转移相关转录本1(Metastasis-associated lung adenocarcinoma transcript 1,MALAT1)首先在非小细胞肺癌被发现,并引起学者关注。MALAT1定位于染色体11q13.1,具有高度保守性。近年来,研究发现,MALAT1能特异性招募SR蛋白家族成员,并参与表观遗传调控以及细胞周期调控等;MALAT1高表达于多种肿瘤中,促进肿瘤细胞的增殖、转移和侵袭。此外,最近发现MALAT1在血管生成过程中发挥重要作用。主要对MALAT1的特性、作用机制,以及在肿瘤和血管系统的作用作一系统综述。

p53、malat1、ki-67和β-catenin基因mRNA检测在大肠癌分子诊断中的意义

目的:初步研究多个大肠癌相关基因p53、malat1、ki-67和β-catenin在大肠癌分子诊断中的意义.方法:收集手术切除的新鲜大肠癌组织标本47例、大肠腺瘤组织标本13例,以及分别和大肠癌、大肠腺瘤对应的正常大肠黏膜组织标本53例,用实时荧光定量RT-PCR方法检测各基因的Ct值.结果:p53、malat1在大肠癌组表达量均高于大肠腺瘤组(P=0.026,P=0.034),但是p53在正常大肠黏膜组、大肠腺瘤组和大肠癌组中表达依次增高,而malat1在大肠腺瘤组、正常大肠黏膜组和大肠癌组中表达量依次增高,大肠腺瘤组mRNA表达最低.ki-67在大肠癌组的表达量是正常黏膜组表达量的1.42倍(P=0.007).β-catenin基因在三组间的表达差异无统计学意义.各基因的表达量均和大肠癌的分期无关.经ROC曲线分析,p53的曲线下面积是0.755(P<0.05),在大肠腺瘤组和大肠癌组的最佳Cut-off值分别是2.585、3.215,malat1的曲线下面积是0.748(P<0.05),在大肠腺瘤组和大肠癌组的最佳Cut-off值分别是0.925、1.395;二元Logistic回归分析,p53和malat1进入回归模型(P<0.05).联合检测p53和malat1在大肠腺瘤组和大肠癌组的ROC曲线下面积为0.785(P=0.01),在大肠腺瘤组的和大肠癌组的最佳Cut-off值分别是0.750、0.790.p53和malat1联合检测的ROC曲线下面积均高于单独检测的ROC曲线下面积.结论:p53和malat1在大肠癌的分子诊断中有一定的应用价值,可为鉴别大肠腺瘤和大肠癌提供有效的参考;和单独检测相比,二者联和检测的准确性高于单独检测的准确性.

长链非编码RNA MALAT-1基因的敲除抑制人喉鳞状细胞癌Hep-2细胞的增殖和迁移

目的探讨敲除长链非编码RNA MALAT-1基因对人喉鳞状细胞癌Hep-2细胞的影响。方法使用实时聚合酶链反应(RTPCR)以永生化鼻咽上皮(NPE)细胞株NP-69作为参照检测Fa Du、Hep-2和鼻咽癌CNE-2Z细胞MALAT1的表达,使用shmalat1慢病毒转染Hep-2细胞,RT-PCR检测其MALAT1的表达。增殖速率分析,MTT法明确MALAT-1对细胞增殖的影响。流式细胞术分析细胞周期和细胞凋亡。采用Transwell小室检测Hep-2细胞的迁移。最后使用Matrigel侵袭实验评估shmalat1和sh Ctrl慢病毒转染的Hep-2细胞的侵袭能力。结果使用qPCR检测Fa Du、Hep-2和鼻咽癌CNE-2Z细胞MALAT1的表达,结果发现与NP-69细胞相比,Fa Du、Hep-2和鼻咽癌CNE-2Z细胞MALAT1的表达显著增加。敲除MALAT1明显抑制Hep-2细胞增殖。与MOCK和sh Ctrl细胞相比,MALAT1-sh RNA慢病毒转染细胞S期细胞数量显著增加(P<0.01)。此外,细胞在G2/M期的百分比下降(P<0.01)。下调MALAT1时,Hep-2细胞的侵袭和迁移都受到抑制。结论 MALAT1在喉鳞状细胞癌高表达。敲除长链非编码RNA MALAT-1基因对人喉鳞状细胞癌Hep-2细胞的增殖、凋亡、侵袭和迁移起抑制作用。