槲皮素通过雌激素受体下调长非编码RNA MALAT-1并发挥抗乳腺癌的作用机制

目的探索槲皮素抑制乳腺癌细胞恶性生物学行为的分子机制。方法以乳腺癌细胞系MCF-7和MB231作为研究对象,用慢病毒LV-ERα、LV-MALAT-1转染乳腺癌MB231细胞和MCF7细胞,RT-qPCR检测MALAT-1表达,Western blot检测肿瘤细胞中ERα蛋白表达,CCK-8细胞实验、平板克隆形成实验检测细胞增殖能力,PI染色法检测细胞周期,通过mRFP-GFP-LC3荧光双标腺病毒转染检测自噬水平,观察槲皮素和雌二醇对乳腺癌细胞增殖能力的影响。结果17β-雌二醇(E2)可以促进乳腺癌细胞MCF-7的增殖,而5μmol·L^(-1)槲皮素可以明显逆转E2对增殖的促进作用(P<0.05)。槲皮素对不表达雌激素受体α(estrogen receptor-α,ERα)的乳腺癌细胞MB231不表现抑制作用;而过表达ERα后,槲皮素则抑制了E2对MB231-ERα的促进作用。同时槲皮素可以抑制E2激活的MALAT-1表达;并且其抑制作用被过表达MALAT-1所逆转,包括细胞增殖,细胞周期进展以及克隆形成能力。结论槲皮素依赖于ERα的表达对乳腺癌的增殖等恶性行为起抑制作用,并且很可能是通过抑制MALAT-1的表达来发挥作用。

血清Irisin、PTX3及MALAT1水平与糖尿病视网膜病变病情程度的关系及联合诊断价值

目的研究血清鸢尾素(Irisin)、长正五聚蛋白3(PTX3)、人肺腺癌转移相关转录本1(MALAT1)水平与糖尿病视网膜病变(DR)病情程度的关系及联合诊断的价值。方法选取2022年4月至2023年4月沧州市中心医院2型糖尿病(T2DM)合并DR患者85例设为DR组,85例单纯T2DM患者设为非DR组,同时期85例健康志愿者设为对照组。将DR组患者以是否处于增生型DR为标准分为增生型组(38例)与非增生型组(47例)。收集DR组患者病例临床资料,包括性别、舒张压、年龄、收缩压、病程、空腹血糖(FPG)、体质量指数、糖化血红蛋白(HbA1c)、吸烟史、甘油三酯(TG)、饮酒史、收缩期峰值流速、舒张末期峰值流速、阻力指数、空腹胰岛素(FINS)、糖尿病家族史、总胆固醇(TC)、胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)。酶联免疫吸附法检测各组患者血清Irisin、PTX3水平,实时荧光定量PCR法检测血清MALAT1水平。采用Pearson相关性分析检测血清Irisin、PTX3及MALAT1水平与DR患者病情程度的相关性。Logistic回归分析DR患者病情程度的影响因素。受者工作特征曲线(ROC曲线)分析血清Irisin、PTX3及MALAT1单独诊断DR的价值。ROC曲线、净重新分类指数(NRI)及综合判别改善指数(IDI)分析含与不含血清Irisin、PTX3及MALAT1方案诊断DR的价值。结果3组患者血清Irisin、PTX3、MALAT1水平比较,差异均有统计学意义(均为P<0.001)。增生型组患者病程长于非增生型组,收缩期峰值流速、舒张末期峰值流速、血清Irisin水平均低于非增生型组,阻力指数、FPG、HbA1c、TG、FINS、HOMA-IR及血清PTX3、MALAT1水平均高于非增生型组,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。DR患者血清Irisin水平与DR病情程度呈负相关(r=-0.512,P<0.001),PTX3、MALAT1水平与DR病情程度均呈正相关(r=0.497、0.573,均为P<0.05)。Logistic回归分析结果显示,病程、FPG、HbA1c、TG、FINS、HOMA-IR、收缩期峰值流速、舒张末期峰值流速、阻力指数及血清Irisin、PTX3、MALAT1水平均为DR病情程度加重的影响因素(均为P<0.05)。血清Irisin、PTX3、MALAT1诊断DR的曲线下面积(AUC)分别为0.743、0.811、0.773。与常规诊断方案比较,含有血清Irisin、PTX3、MALAT1水平的新诊断方案的AUC明显增大(Z=2.708,P=0.007),NRI、IDI分别为0.039(95%CI:0.022~0.069)、0.026(95%CI:0.014~0.047)(均为P<0.05)。结论DR患者血清Irisin水平降低,PTX3、MALAT1水平升高,且与患者DR病情程度密切相关,含有血清Irisin、PTX3、MALAT1指标的诊断方案具有较高的诊断价值。

lncRNA MALAT1调控GPx3去甲基化参与非小细胞肺癌的发生发展

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)MALAT1通过调控谷胱甘肽过氧化物酶3(GPx3)对非小细胞肺癌(NSCLC)增殖与侵袭的影响及其机制。方法通过TCGA数据库分析NSCLC患者的mRNA表达信息、甲基化数据及其临床信息,确定关键基因MALAT1与GPx3在NSCLC中的表达差异及其与患者预后之间的关系。采用免疫组织化学染色评估GPx3在肺腺癌组织中的表达水平,通过细胞培养、实时定量PCR、MTT法检测细胞增殖、细胞克隆形成以及迁移与侵袭能力来研究抑制MALAT1表达对A549细胞增殖与侵袭能力的影响。蛋白免疫印迹实验用于检测相关蛋白表达的变化。结果在NSCLC组织中,MALAT1的表达显著升高且与患者不良预后相关;GPx3的表达水平则显著降低,GPx3低表达患者的总生存率显著低于高表达组。其中MALAT1高甲基化水平与肺腺癌发生发展关系密切。沉默MALAT1可显著抑制肺癌细胞的增殖、克隆形成以及迁移和侵袭能力,同时促进GPx3的表达。蛋白表达分析进一步证实MALAT1的沉默减少了肿瘤干细胞标志物的表达,并抑制了上皮-间充质转化(EMT)过程。MALAT1通过募集LSD2调控GPx3的表达,从而在NSCLC的发展中发挥关键作用。结论lncRNA MALAT1通过抑制GPx3表达,促进NSCLC肿瘤细胞的增殖与侵袭能力。MALAT1高表达及高甲基化水平与NSCLC患者不良预后之间存在密切关联,为NSCLC的早期诊断、治疗及预后评估提供了新的生物标志物。

lncRNA MALAT1通过调控miR-181a促进氧化应激模型中的心肌细胞损伤

目的在心肌细胞氧化应激模型中探究长链非编码RNA(lncRNA)转移相关肺腺癌转录物1(MALAT1)与微小RNA-181a(miR-181a)的表达及作用机制。方法qRT-PCR检测30例急性心肌梗死患者(AMI组)和30例健康对照组(Normal组)外周血中MALAT1与miR-181a的表达,Pearson相关性分析明确MALAT1与miR-181a在AMI中的相关性;lncBase在线预测数据库预测MALAT1与miR-181a之间的结合位点,并利用双荧光素酶基因报告实验进行验证;采用过氧化氢(H_(2)O_(2))处理人心肌细胞株AC16建立心肌细胞氧化应激模型,将沉默MALAT表达的siRNA(si-MALAT)和阴性对照si-NC转染入AC16细胞中,并将细胞分为:H_(2)O_(2)处理(H_(2)O_(2))组,H_(2)O_(2)+si-NC组,H_(2)O_(2)+si-MALAT组;CCK-8法检测各组细胞的增殖活性,TUNEL法检测细胞凋亡情况,Western blot实验检测各组细胞中促凋亡蛋白裂解型半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(cleaved caspase-3)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)和凋亡抑制蛋白B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)的表达水平。结果与Normal组相比,AMI组患者MALAT1的表达水平升高,而miR-181a的表达水平降低(P<0.05),且MALAT1和miR-181a表达呈负相关。lncBase在线预测数据库预测和双荧光素酶基因报告实验表明MALAT1可靶向调控miR-181a表达。与H_(2)O_(2)组相比,H_(2)O_(2)+si-MALAT1组细胞活力升高(P<0.05),TUNEL阳性率降低(P<0.05),cleaved caspase-3和Bax表达水平降低(P<0.05),而Bcl-2的表达水平升高(P<0.05),H_(2)O_(2)+si-NC组均无明显改变(P>0.05)。结论LncRNA MALAT1在AMI患者中表达升高,可通过靶向抑制miR-181a促进氧化应激诱导的心肌细胞损伤。

丹参通络解毒汤含药血清调控MALAT1对缺氧/复氧大鼠心肌微血管内皮细胞的保护作用及机制研究

目的研究丹参通络解毒汤含药血清调控转移相关肺腺癌转录本1(MALAT1)对缺氧/复氧大鼠心肌微血管内皮细胞(CMECs)的保护作用及机制。方法体外培养大鼠CMECs,构建缺氧/复氧损伤细胞模型,转染过表达/沉默空白MALAT1慢病毒,将细胞分为过表达空白+中药组、过表达MALAT1+中药组、过表达MALAT1组、沉默空白+中药组、沉默MALAT1组、沉默MALAT1+中药组,分别予相应血清培养,免疫荧光染色检测Beclin-1蛋白表达,Western blot检测丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶1(SRPK1)、丝氨酸丰富剪接因子1(SRSF1)、血管内皮生长因子(VEGF)及Bax蛋白表达,RT-PCR检测MALAT1、SRPK1、SRSF1 mRNA表达。结果与过表达空白+中药组比较,过表达MALAT1+中药组Beclin-1蛋白表达升高,SRPK1、SRSF1、Bax蛋白表达显著升高(P<0.05,P<0.01),VEGF蛋白表达显著降低(P<0.01),MALAT1、SRPK1、SRSF1 mRNA表达显著升高(P<0.05,P<0.01);与过表达MALAT1组比较,过表达MALAT1+中药组Beclin-1蛋白表达降低,SRPK1、SRSF1、Bax蛋白表达显著降低(P<0.01,P<0.05),VEGF蛋白表达显著升高(P<0.01),MALAT1、SRPK1、SRSF1 mRNA表达显著降低(P<0.05);与沉默空白+中药组比较,沉默MALAT1+中药组Beclin-1蛋白表达降低,SRPK1、SRSF1、Bax蛋白表达显著降低(P<0.01),VEGF蛋白表达显著升高(P<0.01),MALAT1、SRPK1、SRSF1 mRNA表达显著降低(P<0.01);与沉默MALAT1组比较,沉默MALAT1+中药组Beclin-1蛋白表达降低,SRPK1、SRSF1、Bax蛋白表达显著降低(P<0.05),VEGF表达显著升高(P<0.01),MALAT1、SRPK1、SRSF1 mRNA表达显著降低(P<0.01,P<0.05)。结论上调MALAT1表达可促进缺氧/复氧损伤模型CMECs自噬,丹参通络解毒汤含药血清能通过抑制MALAT1表达抑制自噬、促进血管新生,其机制可能与下调SRPK1、SRSF1表达有关。

LncRNA MALAT1对PCOS颗粒细胞凋亡、自噬和PI3K/Akt/mTOR通路的影响

目的探讨长链非编码RNA-肺腺癌转移相关转录子1(LncRNA MALAT1)对多囊卵巢综合征(PCOS)颗粒细胞的凋亡、自噬和磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)通路的影响。方法qRT-PCR检测PCOS卵巢组织、正常卵巢组织、人卵巢颗粒细胞KGN及正常卵巢上皮细胞IOSE80中LncRNA MALAT1的表达水平。体外培养KGN细胞,将KGN细胞分为control组、si-NC组、si-MALAT1组、pc-NC组、pc-MALAT1组、pc-MALAT1+740Y-P(PI3K激活剂)组。q RT-PCR检测各转染组细胞MALAT1 mRNA的表达水平;CCK-8检测细胞活力;流式细胞术检测细胞凋亡率;透射电镜观察KGN细胞中自噬小体;Western blot检测细胞B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)、Bcl-2关联X蛋白(Bax)、微管相关蛋白Ⅱ轻链3(LC3Ⅱ)、微管相关蛋白Ⅰ轻链3(LC3Ⅰ)、Beclin1、p-PI3K、PI3K、p-Akt、Akt、p-mTOR、mTOR蛋白表达水平。结果PCOS卵巢组织MALAT1 mRNA表达水平低于正常卵巢组织,KGN细胞中MALAT1 mRNA表达水平低于正常卵巢上皮IOSE80细胞;control组KGN细胞中可见少量的自噬小体;干扰MALAT1表达后KGN细胞OD_(450)值(24、48、72 h)、Bcl-2蛋白表达降低,细胞凋亡率、Bax、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、Beclin1、p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt、p-mTOR/mTOR增高(P<0.05),自噬小体数量增多;过表达MALAT1后上述指标变化均逆转(P<0.05);与pc-MALAT1组相比,pc-MALAT1+740Y-P组OD_(450)(24、48、72 h)值、Bcl-2蛋白表达降低,凋亡率、Bax、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、Beclin1、p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt、p-mTOR/mTOR升高(P<0.05),自噬小体数量增多。结论过表达MALAT1可能通过抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路,进而抑制PCOS颗粒细胞凋亡和自噬。

MicroRNA-26b下调MALAT-1抑制乳腺癌MCF-7细胞恶性生物学行为的机制研究

目的 探索microRNA-26b(miR-26b)通过MALAT-1抑制乳腺癌MCF-7细胞恶性生物学行为的分子机制。方法 以乳腺癌细胞系MCF-7作为研究对象,采用慢病毒LV-miR-26b-ctrl和LV-miR-26b转染肿瘤细胞,逆转录聚合酶链反应检测MALAT-1、miR-26a和miR-26b的mRNA表达,平板克隆形成实验、CCK-8细胞增殖实验、软琼脂成瘤实验、细胞划痕实验、Transwell细胞侵袭实验分别检测肿瘤细胞的增殖、体外成瘤、迁移和侵袭能力。结果 E2组与Mock组MCF-7细胞24、48、72和96 h时吸光度值比较,经重复测量设计的方差分析,结果:(1)不同时间点吸光度值比较,差异有统计学意义(P <0.05);(2)两组吸光度值比较,差异有统计学意义(P <0.05),与Mock组比较,E2组72和96 h时细胞增殖能力较Mock组提高(P <0.05);(3)两组吸光度值变化趋势比较,差异有统计学意义(P <0.05)。与Mock组相比,E2组MALAT-1相对表达量升高(P <0.05),miR-26a、miR-26b mRNA相对表达量下降(P <0.05)。高表达miR-26b的乳腺癌患者的生存情况优于低表达miR-26b组,死亡风险更低(P <0.05),低表达miR-26a组患者的生存情况优于高表达miR-26a组(P <0.05),用Cox比例风险回归模型,将miR-26a作为一个独立的预后因素来比较,两组患者的死亡风险比较无差异(P>0.05)。与LV-miR-26b-ctrl组比较,LV-miR-26b-ctrl/E2组乳腺癌细胞的MALAT-1相对表达量升高(P <0.05),与LV-miR-26b-ctrl/E2组比较,LV-miR-26b/E2组乳腺癌细胞的MALAT-1相对表达量降低(P <0.05)。LV-miR-26b-ctrl组、LV-miR-26b-ctrl/E2组、LV-miR-26b/E2组细胞在24、48、72和96 h时吸光度值比较,经重复测量设计的方差分析,结果:(1)不同时间点吸光度值比较,差异有统计学意义(P <0.05);(2)各组吸光度值比较,差异有统计学意义(P <0.05),LV-miR-26b-ctrl/E2组72和96 h时细胞增殖能力明显较LV-miR-26b-ctrl组增强(P <0.05),LV-miR-26b/E2组72和96 h时细胞增殖能力较LV-miR-26b-ctrl/E2组降低(P <0.05);(3)各组吸光度值变化趋势比较,差异有统计学意义(P <0.05)。E2处理后的LV-miR-26b-ctrl肿瘤细胞增殖和体外成瘤能力增强。与LV-miR-26bctrl/E2组比较,LV-miR-26b/E2组肿瘤细胞的增殖和体外成瘤能力降低。在24 h时,LV-miR-26b-ctrl/E2组细胞划痕间隙较LV-miR-26b-ctrl组变窄,LV-miR-26b/E2组24 h时细胞的划痕间隙较LV-miR-26bctrl/E2组明显增宽。LV-miR-26b-ctrl/E2组Transwell小室下方的乳腺癌细胞数量较LV-miR-26b-ctrl组增多,LV-miR-26b/E2组的肿瘤细胞数量较LV-miR-26b-ctrl/E2组减少。结论 下调MALAT-1可能是miR-26b抑制乳腺癌恶性生物学行为的分子机制之一,miR-26b有望成为乳腺癌治疗的调控靶点。

长链非编码RNA-MALAT1在胶质瘤中的研究进展

胶质瘤是严重威胁人类健康的神经系统疾病之一,目前主要治疗方案为手术切除后联合放化疗,但是经过标准方案治疗的胶质瘤患者的临床预后结局依旧不理想。近年来,多项研究证实长链非编码RNA-MALAT1在胶质瘤的发生发展过程中有着重要的作用,包括促进胶质瘤细胞的增殖、抑制胶质瘤细胞凋亡、促进胶质瘤细胞迁移和侵袭、促进胶质瘤细胞的化疗耐药性。该文就MALAT1在胶质瘤中作用的研究进展进行综述。

lncRNA MALAT1通过海绵吸附miRNA-141-3p调控Wnt/β-catenin促进卵巢癌的生长及转移

目的 研究长链非编码RNA MALAT1(lncRNA MALAT1)在卵巢癌中的作用及调控机制。方法 实时荧光定量聚合酶链反应(real-time quantitative polymerase chain reaction, RT-qPCR)检测MALAT1在人正常卵巢上皮细胞系IOSE80及人卵巢癌细胞系SKOV3、OVCA429和HO-8910PM中的表达,选取SKOV3及HO-8910PM细胞进行后续研究。利用siRNA干扰SKOV3和HO-8910PM细胞中MALAT1表达,CCK-8法检测细胞增殖,划痕及Transwell小室检测细胞迁移及侵袭能力,并通过Western blot法检测上皮-间充质转化(epithelial-mesenchymal transformation, EMT)相关指标E-cadherin、N-cadherin的表达。利用生物信息学分析MALAT1与miRNA-141-3p的靶向关系,并利用双荧光素报告基因验证。MALAT1敲低及miRNA-141-3p抑制剂共同作用细胞,检测其对SKOV3及HO-8910PM细胞增殖、侵袭及迁移的影响,并通过Western blot法分析其对Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白的表达调控。结果 与人正常卵巢上皮细胞系IOSE80比较,卵巢癌细胞系内MALAT1表达明显上调(P<0.05);而在SKOV3及HO-8910PM中下调MALAT1表达,细胞增殖、侵袭迁移及EMT均受到抑制,同时miRNA-141-3p表达上调(P<0.05)。双荧光素酶报告基因结果证明MALAT1和miRNA-141-3p具有靶向关系。而在下调MALAT1表达的同时使用miRNA-141-3p抑制剂,则可逆转下调MALAT1的所产生的抑制效应(P<0.05)。进一步的研究发现,MALAT1/miRNA-141-3p轴可能通过调控Wnt/β-catenin信号通路影响卵巢癌进展。结论 MALAT1可能通过海绵吸附miRNA-141-3从而调控Wnt/β-catenin影响卵巢癌的发生和发展。

MALAT1调控自噬参与异氟烷诱导老年大鼠POCD的机制研究

探究MALAT1调控自噬参与异氟烷诱导老年大鼠POCD的机制。 方法 40只SD大鼠分为4组,A组作为对照,B组作为模型,C组给予MALAT1 过表达干预:D组给予MALAT1 siRNA,比较各组血气分析、Morris水迷宫实验、BCL-2、LC3、ATG-5 mRNA和蛋白表达水平及清淀粉样前体蛋白(APP)、β-淀粉样蛋白(Aβ)、IL-1、IL-6和TNF-α水平。结果 四组大鼠血糖、pH、PaO2、PaCO2、SaO2 比较,差异均无统计学意义(P>0.05),与A组相比,B组大鼠大鼠逃避潜伏期时间延长,目标象限停留时间占比降低,穿越平台次数减少,与B组相比,C组逃避潜伏期时间缩短,目标象限停留时间占比增加,穿越平台次数增加,D组大鼠逃避潜伏期时间增加,目标象限停留时间占比减少,穿越平台次数减少,差异具有统计学意义(P<0.05)。与A组相比,B组大鼠海马组织BCL-2、LC3、ATG-5 mRNA和蛋白表达水平、血清APP、Aβ、IL-1、IL-6和TNF-α水平增加,差异具有统计学意义(P<0.05)。与B组相比,C组海马组织BCL-2、LC3、ATG-5 mRNA和蛋白表达水平及血清APP、Aβ、IL-1、IL-6和TNF-α水平均明显增加,D组海马组织BCL-2、LC3、ATG-5 mRNA和蛋白、血清APP、Aβ、IL-1、IL-6和TNF-α水平均明显减少,差异具有统计学意(P<0.05)。结论 降低MALAT1表达可通过减轻自噬缓解异氟烷诱导老年大鼠POCD。

乌头汤调控IncRNA MALAT1/miR-124途径抑制软骨细胞焦亡的机制研究

目的:探讨乌头汤是否通过调控Lnc RNA MALAT1/mi R-124途径抑制软骨细胞焦亡。方法:使用LPS(1μg/mL)24h+ATP(5.5mmol/L)4h诱导软骨细胞发生细胞焦亡反应;构建lncRNA MALAT1沉默细胞株;将软骨细胞随机分为空白对照组(Lenti-control组)、病毒沉默组(sh-MALAT1)、模型对照组(LPS+ATP+Lenti-control组)、模型沉默组(LPS+ATP+sh-MALAT1)。制备乌头汤含药血清,再将细胞再随机分为空白组、模型组(LPS+ATP)、乌头汤组(LPS+ATP+WTD含药血清)进行干预。Real-time PCR检测各组软骨细胞中的lncRNA MALAT1、miR-124基因水平变化;Western Blot检测各组软骨细胞中中NLRP3、caspase-1、GSDMD、IL-1β、IL-18的蛋白含量表达。结果:lncRNA MALAT1在LPS+ATP诱导的细胞焦亡软骨细胞核中表达增高。与空白对照组相比,模型沉默组中NLRP3、caspase-1、GSDMD、IL-1β、IL-18蛋白含量下降(P<0.05),而与模型对照组相比,病毒沉默组中上述指标蛋白含量下降(P<0.05)。与模型组相比,乌头汤组中lncRNA MALAT1及上述指标表达降低(P<0.05),miRNA-124 mRNA表达升高(P<0.05)。结论:乌头汤可通过调控lnc RNA MALAT1/miR-124途径抑制软骨细胞焦亡。

长链非编码RNA MALAT1对槟榔碱诱导的颊黏膜成纤维细胞活化能力影响的研究

目的:本研究旨在明确长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA) MALAT1对槟榔碱诱导的颊黏膜成纤维细胞(buccal mucosal fibroblasts, BMFs)活化能力影响的作用,为寻找新的口腔黏膜下纤维化(oral submucous fibrosis, OSF)治疗途径提供理论基础。方法:体外培养BMFs,采用不同浓度槟榔碱刺激BMFs,在细胞水平上构建OSF疾病模型。采用细胞计数试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)法检测细胞活力;Transwell法和胶原凝胶收缩法检测BMFs活化;实时荧光定量聚合酶链反应(quantitative real-time PCR, qRT-PCR)检测BMFs中平滑肌肌动蛋白-α(α-smooth muscle actin, α-SMA)和lncRNA MALAT1的表达情况;siRNA-MALAT1瞬时转染到BMFs中,评估槟榔碱刺激下BMFs迁移和收缩能力的变化。结果:10μg/mL槟榔碱是体外构建OSF疾病模型的最佳浓度,此时细胞内α-SMA和lncRNA MALAT1表达升高。Transwell实验和胶原凝胶收缩实验提示敲低lncRNA MALAT能抑制槟榔碱诱导的BMFs收缩和迁移。结论:lncRNA MALAT1对槟榔碱诱导的BMFs激活,细胞收缩和迁移有重要作用。

血清miR-499a、lnc RNA MALAT1在系统性红斑狼疮中表达及其与预后的关系

目的 检测系统性红斑狼疮(SLE)患者血清微RNA(miRNA)-499a、长链非编码RNA(lnc RNA)肺癌转移相关转录本1(MALAT1)表达情况,并分析其与患者临床预后的关系。方法 选取2018年1月至2020年1月北大荒集团总医院收治的SLE患者152例作为SLE组进行回顾性研究,另选取同期无自身免疫性疾病的健康体检者155名作为对照组。根据SLE疾病活动指数评分(SLEDAI),将SLE患者分为静止期组(SLEDAI 0~4分,n=43)、轻度活动期组(SLEDAI 5~9分,n=41)、中度活动期组(SLEDAI 10~15分,n=38)、重度活动期组(SLEDAI>15分,n=30);根据是否发生肾损伤,将SLE患者分为非肾损伤组(n=71)与肾损伤组(n=81);以SLE患者血清miR-499a、lnc RNA MALAT1均值为标准,将SLE患者分为miR-499a高表达组(n=77)和miR-499a低表达组(n=75),lnc RNA MALAT1高表达组(n=79)和lnc RNA MALAT1低表达组(n=73);根据预后情况分为预后良好组(n=115)与预后不良组(n=37)。比较SLE组与对照组、SLE患者不同分组(静止期组、轻度活动期组、中度活动期组、重度活动期组;非肾损伤与肾损伤组;预后良好与预后不良组;miR-499a高表达组和miR-499a低表达组;lnc RNA MALAT1高表达组和lnc RNA MALAT1低表达组)组间血清miR-499a、lnc RNA MALAT1表达差异;分析SLE患者血清miR-499a、lnc RNA MALAT1水平与临床病理特征的相关性;采用受试者操作特征(ROC)曲线分析血清miR-499a、lnc RNA MALAT1对SLE患者预后不良的预测价值。结果 SLE组患者血清miR-499a水平为0.24±0.07,低于对照组(1.01±0.18),lnc RNA MALAT1水平为3.75±0.82,高于对照组(1.02±0.19),差异均有统计学意义(P<0.05)。血清miR-499a水平在静止期组(0.52±0.11)、轻度活动期组(0.22±0.08)、中度活动期组(0.10±0.04)、重度活动期组(0.05±0.01)依次降低,lnc RNA MALAT1水平在静止期组(2.35±0.71)、轻度活动期组(3.72±0.83)、中度活动期组(4.44±0.85)、重度活动期组(4.95±0.95)依次升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。预后不良组SLE患者血清miR-499a水平为0.11±0.02,低于预后良好组(0.29±0.09),lnc RNA MALAT1水平为5.20±0.85,高于预后良好组(3.28±0.79),差异均有统计学意义(P<0.05)。miR-499a高表达组抗dsDNA阳性、抗ANA阳性SLE患者占比均低于miR-499a低表达组,SLEDAI评分低于miR-499a低表达组,差异均有统计学意义(P<0.05);lnc RNA MALAT1高表达组抗dsDNA阳性、抗ANA阳性SLE患者中占比均高于lnc RNA MALAT1低表达组,SLEDAI评分高于lnc RNA MALAT1低表达组,差异均有统计学意义(P<0.05)。SLE患者血清miR-499a、lnc RNA MALAT1呈负相关(r=-0.836,P<0.05);血清miR-499a水平预测SLE患者预后不良的曲线下面积(AUC)为0.815(灵敏度为86.5%,特异度为66.1%),血清lnc RNA MALAT1水平预测SLE患者预后不良的AUC为0.871(灵敏度为83.8%,特异度为74.8%)。结论 SLE患者血清miR-499a降低、lnc RNA MALAT1水平升高,二者可能共同参与SLE的进展,有望作为SLE预后不良的生物学标志物。

栀子醇提物下调lncRNA MALAT1影响帕金森病模型细胞增殖和凋亡

目的 探讨栀子醇提物对帕金森病进展的影响,并探讨其机制是否与调控长链非编码RNA(lncRNA)肺癌转移相关转录本(MALAT)1表达有关。方法 1-甲基-4-苯基吡啶离子(MPP~+)处理SK-N-SH构建模型帕金森病细胞模型。将SK-N-SH细胞分为对照组、模型组、实验1组(25μg/ml栀子醇提物)、实验2组(50μg/ml栀子醇提物)、实验3组(100μg/ml栀子醇提物)、si-NC组(转染si-NC)、si-MALAT1组(转染si-MALAT1)、实验3+pcDNA组(转染pcDNA联合100μg/ml栀子醇提物)、实验3+pcDNA-MALAT1组(转染pcDNA-MALAT1联合100μg/ml栀子醇提物)。细胞计数试剂盒(CCK-8)、流式细胞术和实时荧光定量PCR(RT-qPCR)用于检测细胞活力、凋亡及lncRNA MALAT1表达。结果 与对照组比较,模型组细胞活力显著降低,lncRNA MALAT1表达、凋亡率显著升高(P<0.05)。与模型组比较,实验2组、实验3组细胞活力显著升高,lncRNA MALAT1表达、凋亡率显著降低(P<0.05)。与si-NC组比较,si-MALAT1组细胞活力显著升高,凋亡率显著降低(P<0.05)。与实验3+pcDNA组比较,实验3+pcDNA-MALAT1组细胞活力显著降低,凋亡率显著升高(P<0.05)。结论 栀子醇提物可促进帕金森病模型细胞增殖,抑制细胞凋亡,其机制与下调lncRNA MALAT1表达有关。

康柏西普对糖尿病性黄斑水肿患者血清中lncRNA MALAT1水平及黄斑中央区厚度的影响

目的:探讨康柏西普对糖尿病性黄斑水肿(DME)患者血清lncRNA MALAT1水平、黄斑中央区厚度(CMT)及最佳矫正视力(BCVA)的影响,观察其治疗的有效性与安全性。方法:纳入DME患者300例300眼,均为单眼病变。按照随机数字表法进行分组:非注射组100例100眼,对照组100例100眼给予雷珠单抗治疗,研究组100例100眼给予康柏西普治疗。结果:治疗前与治疗后1、2、3mo测定患者BCVA、血清lncRNA MALAT1水平及CMT,同时对比临床疗效,并对患者进行随访,记录不良反应发生情况。非注射组患者的BCVA(LogMAR)、血清lncRNA MALAT1水平与CMT均无明显变化(P>0.05)。对照组、研究组患者治疗后1、2、3mo的BCVA(LogMAR)与治疗前相比明显提高(均P<0.05),但研究组与对照组相比,差异无统计学意义。对照组患者治疗后1、2、3mo血清lncRNA MALAT1水平降低,研究组患者治疗后1、2、3mo血清lncRNA MALAT1水平降低更明显,研究组治疗后血清lncRNA MALAT1水平明显低于对照组(均P<0.05)。对照组患者治疗后1、2、3mo CMT降低,研究组患者治疗后1、2、3mo CMT降低更明显,研究组治疗后CMT明显低于对照组(均P<0.05)。研究组不良反应发生率(2.0%)明显低于对照组(11.0%)。结论:康柏西普能够显著降低DME患者血清lncRNA MALAT1水平,降低CMT、减轻黄斑水肿,改善视力,其治疗有效性与安全性明显优于雷珠单抗。

长链非编码RNA MALAT1靶向miR-218对卵巢癌细胞增殖、侵袭及凋亡的影响及其作用机制

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)MALAT1靶向miR-218对卵巢癌细胞系OVCAR3增殖、侵袭及凋亡的影响及作用机制。方法应用实时PCR检测lncRNA MALAT1和miR-218在人卵巢癌细胞系(OVCAR3)和正常人卵巢上皮细胞系(HOSE)中的表达。利用脂质体转染法将无意义序列阴性对照(si-NC)组、MALAT1干扰序列(si-MALAT1)组以及si-MALAT1+miR-218抑制剂组分别转染卵巢癌细胞,MTT法检测各组细胞增殖情况,流式细胞仪检测各组细胞凋亡情况,Transwell实验检测各组细胞侵袭情况。生物信息学分析及双荧光素酶报告基因实验验证MALAT1和miR-218的靶向关系。实时PCR检测各组OVCAR3细胞中MALAT1、miR-218的表达;Western blotting检测各组OVCAR3细胞中Runx2的表达。结果与人正常卵巢上皮细胞比较,卵巢癌OVCAR3细胞中MALAT1表达升高(P<0.05),miR-218表达下降(P<0.05)。与si-NC组比较,si-MALAT1组OVCAR3细胞的增殖和侵袭能力下降,凋亡率升高(均P<0.05)。与si-MALAT组比较,si-MALAT1+miR-218抑制剂组OVCAR3细胞的增殖和侵袭能力升高,凋亡率下降(均P<0.05)。与si-NC组比较,si-MALAT1组OVCAR3细胞中miR-218表达升高(P<0.05)。生物信息学分析和双荧光素酶报告基因实验结果显示MALAT1可以靶向调控miR-218。Western blotting结果显示,与si-NC组比较,si-MALAT1组Runx2蛋白表达降低(P<0.05),与si-MALAT1组比较,si-MALAT1+miR-218抑制剂组Runx2蛋白表达水平升高(P<0.05)。结论lncRNA MALAT1在卵巢癌细胞中高表达,抑制MALAT1表达能够抑制卵巢癌OVCAR3细胞的增殖和侵袭,并促进OVCAR3细胞凋亡,其机制可能与通过miR-218调控Runx2蛋白表达有关。

LncRNA MALAT1在衰老大鼠心肌缺血后处理自噬水平降低中的作用

背景:缺血后处理可缓解心肌缺血再灌注损伤,但是其具体机制尚不清楚。目的:探讨lncRNA MALAT1在缺血后处理所引起衰老心肌自噬水平降低中的作用。方法:(1)27只22-24月龄SD大鼠随机分为3组:假手术组、缺血再灌注组和缺血后处理组,每组9只,采用苏木精-伊红染色和Masson染色观察心肌组织形态学变化;(2)体外使用8 mg/mL D-半乳糖诱导大鼠心肌(H9C2)细胞9 d后,分为正常氧组、缺氧复氧组和缺氧后处理组。Western blot检测衰老心肌组织及衰老心肌细胞中LC3Ⅱ/Ⅰ和p62蛋白的表达;采用qRT-PCR检测衰老心肌组织和衰老心肌细胞中MALAT1相对表达;转染自噬双标腺病毒(RFP-GFP-LC3)观察衰老心肌细胞自噬流的变化;衰老心肌细胞转染MALAT1干扰片段和过表达质粒,Western blot检测各组细胞中LC3Ⅱ/Ⅰ和p62蛋白的表达。结果与结论:(1)与缺血再灌注组比较,缺血后处理组心肌组织结构基本清晰,细胞核完整,心肌组织间蓝色胶原纤维沉积减少;(2)与缺血再灌注组比较,缺血后处理组LC3Ⅱ/Ⅰ表达降低且p62表达增高(P<0.05);(3)与缺氧复氧组比较,缺氧后处理组LC3Ⅱ/Ⅰ表达降低(P<0.01)且p62表达增加(P<0.05),细胞内自噬体和自噬溶酶体数量均减少(P<0.01);(4)与缺血再灌注组比较,缺血后处理组衰老心肌组织的MALAT1表达降低(P<0.01);与缺氧复氧组比较,缺氧后处理组衰老心肌细胞的MALAT1表达降低(P<0.01);(5)衰老心肌细胞转染MALAT1干扰片段和过表达质粒后,与缺氧复氧+si-NC组比较,缺氧复氧+si-MALAT1组LC3Ⅱ/Ⅰ表达降低且p62表达增加(P<0.01);与缺氧后处理+ad-NC组比较,缺氧后处理+ad-MALAT1组LC3Ⅱ/Ⅰ表达增加且p62表达降低(P<0.01);(6)结果表明:lncRNA MALAT1介导的自噬水平降低是衰老大鼠心肌缺血后处理发挥保护作用的重要机制。

lncRNA MALAT1对哮喘小鼠Th17/Treg细胞平衡的影响

目的:检测长链非编码RNA(lncRNA)肺腺癌转移相关转录本1(metastasis associated in lung denocarcinoma transcript 1,MALAT1)对哮喘小鼠Th17/Treg细胞平衡的影响。方法:将6~8周龄雄性BALB/c小鼠随机分成对照组和哮喘组,每组10只。用卵清蛋白诱导小鼠支气管哮喘模型,HE染色和PAS染色观察小鼠肺组织病理改变,流式细胞术检测小鼠脾细胞中的Th17细胞和Treg细胞,qRT-PCR检测脾组织中lncRNA MALAT1及Rorc/Foxp3的表达水平。结果:与对照组相比,哮喘组小鼠气道炎症变化明显,支气管周围存在明显的炎性细胞浸润,管壁增厚,气道上皮细胞破坏或不规则。哮喘组小鼠脾组织中Th17细胞比例显著升高(P<0.01),Th17细胞的关键转录因子维甲酸相关孤儿核受体C(retinoic acid receptor related orphan C,Rorc)表达上调(P<0.05),而Treg细胞比例显著下降(P<0.01),其关键转录因子叉状头/翼状螺旋转录因子P3(forkhead/winged helix transcriptional factor P3,Foxp3)表达下调(P<0.05);脾组织lncRNA MALAT1相对表达量显著上升(P<0.01),与Th17细胞比例呈正相关(r=0.64,P<0.05),与Treg细胞呈负相关(r=-0.73,P<0.05);而且MALAT1的表达与Rorc表达呈正相关(r=0.65,P<0.05),与Foxp3表达呈负相关(r=-0.60,P<0.05)。结论:MALAT1与哮喘小鼠Th17/Treg细胞的失衡密切相关,靶向于MALAT1可能有助于改善哮喘小鼠Th17/Treg平衡。

LncRNA MALAT1在冠心病患者中应用价值的Meta分析

目的:系统评价lncRNA MALAT1与冠心病(CAD)发病风险的相关性,同时探讨lncRNA MALAT1表达水平与CAD患者Gensini评分、hs-CRP、NT-proBNP、IL-6、CK-MB、TC、LDL-C水平的相关性以及lncRNA MALAT1高表达诊断CAD事件的准确性。方法:计算机检索PubMed、Web of Science、EMbase、Cochrane Library、中国知网、万方数据库、维普数据库和中国生物医学文献数据库,收集关于lncRNA MALAT1与CAD发病、Gensini评分、hs-CRP、NT-proBNP、IL-6、CK-MB、TC、LDL-C水平的相关性以及lncRNA MALAT1高表达对CAD诊断价值的研究,检索时间均为建库至2022年8月。采用RevMan5.4版、Stata 15.0软件进行Meta分析。结果:共纳入15项回顾性研究,包括5 830例患者。Meta分析结果显示,lncRNA MALAT1高表达人群CAD发生风险是低表达人群的2.11倍[OR=2.11,95%CI(1.40, 3.18),P=0.000 4],并且lncRNA MALAT1表达水平能反映心肌受损程度以及脂代谢水平,lncRNA MALAT1表达水平越高,hs-CRP、NT-proBNP、IL-6、TC、LDL-C水平越高。此外,lncRNA MALAT1高表达在诊断CAD时具有较高的准确性[SEN=0.73,SPE=0.73,SROC AUC=0.81]。结论:lncRNA MALAT1表达水平可作为CAD发病风险预测的标志物,lncRNA MALAT1高表达人群CAD发病风险较大,lncRNA MALAT1表达水平可以在一定程度上反映心肌受损程度以及脂代谢水平,并且lncRNA MALAT1高表达对于诊断CAD具有较高的准确性。

JAG1影响单核-巨噬细胞重塑三阴性乳腺癌转移前微环境:基于外泌体中的LncRNA MALAT1

目的探讨JAG1对单核-巨噬细胞在三阴性乳腺癌(TNBC)中肿瘤转移前微环境(PMN)中作用的影响及其可能的调控机制,以期为TNBC诊疗提供新的思路和靶点。方法人TNBC细胞MDA-MB-231,MDA-MB-231B体外培养,qRT-PCR检测JAG1的表达。动物实验将雌性裸鼠分为MDA-MB-231组和MDA-MB-231B组,5只/组,分别往乳腺脂肪垫注射细胞5×10^(6),6周取肿瘤组织进行免疫组化分析。人源单核细胞THP-1为研究对象,分别经人源JAG1重组蛋白(rhJAG1)直接处理或经TNBC条件培养基(CM)处理,通过单核-内皮粘附、Transwell、qRT-PCR和Western blot实验检测JAG1对单核细胞的直接作用和在PMN中的影响。实验分为5组:Control组:THP-1正常培养;231-CM组:THP-1+231-CM;231-JAG1-CM组:THP-1+rhJAG1处理后231-CM;231B-CM组:THP-1+231B-CM;231-DAPT-CM组:THP-1+DAPT处理后231-CM。透射电镜(TEM)、纳米颗粒跟踪分析(NTA)检测JAG1对TNBC外泌体分泌影响。生物信息学筛选与LncRNA MALAT1相互作用的miRNA并行qRT-PCR验证。结果与MDA-MB-231相比,侵袭株MDA-MB-231B的JAG1表达更高(P<0.01),肝转移面积更大;rhJAG1直接处理和TNBC条件培养基处理均能促进单核细胞的黏附、迁移,并影响其分化(均P<0.05);透射电镜和NTA检测显示JAG1能促进MDA-MB-231外泌体分泌数量增多(P<0.01),外泌体中LncRNAMALAT1含量升高(P<0.0001)。生物信息学分析得到与LncRNA MALAT1和JAG1相关的5个候选miRNA,实验证实miR-26a-5p在TMN中的单核-巨噬细胞中受到MALAT1的靶向调控(P<0.0001)。结论JAG1能促进TNBC的外泌体分泌并影响其中Lnc MALAT1的表达,从而靶向PMN中单核-巨噬细胞miR-26a-5p的表达,从而使单核-巨噬细胞中JAG1表达升高,进而影响单核-巨噬细胞在PMN中的黏附、迁移和破骨分化作用。