3种捕鸟蛛粗毒的HPLC和MALDI-TOF质谱分析

对我国南方3种个体大小形态相似,颜色分别为黑色,棕褐色及金黄色的捕鸟蛛的粗毒进行了反相高效液相色谱(HPLC)及基质辅助激光解吸电离飞行时间(MALDI TOF)质谱分析,测定了由反相高效液相色谱分离的每一个肽峰的质量,分析了3种蜘蛛粗毒反相色谱行为的相似与不同之处以及分离肽片段的质量分布范围.讨论了由反相高效液相色谱结合MALDI TOF质谱进行捕鸟蛛化学分类与种属鉴定的可能性.

适合于MALDI-TOF质谱分析蛋白质及亚基的SDS-PAGE技术

介绍适合于MALDI TOF质谱分析蛋白质及亚基的SDS PAGE技术,其主要特点是采用铜染色法在凝胶板上直接显色且采用有机溶剂萃取电泳纯的蛋白质和亚基,并用MALDI TOF质谱技术直接分析它们的分子量.本技术具有简便、快速和损失率小等优点,尤其适合于蛋白质组学、利用数据库分析蛋白质同源性和确定蛋白质种类等结构信息的研究,是一种较为理想的SDS PAGE和MALDI TOF质谱非在线联用分析技术.

长白山白眉蝮蛇蛇毒酶的基质辅助激光解吸质谱分析

用基质辅助激光解吸飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)法对长白山眉蝮蛇蛇毒所含4种主要酶:磷脂酶A_2、精氨酸酯酶、纤溶酶及L-氨基酸氧化酶进行了纯度鉴定和分子量测定,结果表明WALDI-TO-FMS具有灵敏度高、分辨能力强、分析时间短及样品用量少等优点.用MALDI-TOFMS法分析蛇毒酶的纯度和分子量简捷、快速且重现性好,是SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳所无法比拟的.

SYNAPT G2-S为质谱分析开启新篇章

1996年Waters公司推出商品化Q—TOF质谱，从那时起Waters就成为引领Q-TOF质谱发展的旗手。2007年Waters创造。创造性将行波离子淌度（T-Wave）嵌入质谱中，推出SYNAPTHDMS——获得当年PITTCON金奖。质谱不仅可提供质量信息，而且可以根据离子的形态进行分离、分辨。SYNAPT已帮助科学家在复合体结构、单体变化及聚合物分析等领域，在Cell、Nature等期刊发表论文。

温敏核不育水稻花药蛋白质组初步分析

采用固相pH梯度 SDS聚丙烯酰胺双向凝胶电泳对温敏核不育水稻 96 4 2S可育与不育条件下减数分裂期花药总蛋白进行了分离 ,通过银染显色 ,获得了分辨率和重复性较好的双向电泳图谱 .PDQuest 2DE图像分析软件可识别约 10 0 0个蛋白质点 .蛋白质点在 2D胶上的重复性为 :沿等电聚焦方向偏差为 1 4 5± 0 2 3mm(n =8) ,沿SDS PAGE方向偏差为 :1 15± 0 17mm(n =8) .对两种育性不同样品的 2D胶上部分共有的蛋白质点 ,采用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱 (matrixassistedlaserdesorption ionizationtimeofflightmassspctrometry ,MALDI TOF MS)进行了肽质谱指纹图分析 .通过采用PeptIdent软件对SWISS PROT数据库的查询 ,有 5 0个蛋白质点在数据库得到归属鉴定 .对育性不同的2种样品 2D较上明显差异的蛋白质点进行了分析鉴定 .在不育变化为可育的过程中 ,明显表达上调的蛋白质点包括几丁质酶 ,酸性磷酸酶 ,胞浆激酶 ,谷蛋白前体 ,以及ESTSC72 61蛋白 ,明显下调的蛋白质包括β expansin前体 ,谷氨酸氨甲酰转移酶和

3株水产动物病原弧菌主要分泌性蛋白的鉴定及其分泌性序列的分析

从3株水产动物病原菌鳗弧菌MN、鳗弧菌3101、费氏弧菌培养液中分别获取了分泌性蛋白,进行SDS-PAGE,对表达量较高的5条蛋白区带进行MALDI-TOF/TOF质谱鉴定表明,它们分别是鳗弧菌MN金属蛋白酶(empA-MN)、鳗弧菌3101金属蛋白酶(empA-3101)、锌金属蛋白酶(zinc empA)、费氏弧菌VFMJ11_1094蛋白(VFMJ11_1094)和费氏弧菌ES114的外膜蛋白(OMP)。根据所鉴定的序列设计引物,分别从鳗弧菌MN、鳗弧菌3101和费氏弧菌中扩增出相应基因,克隆后测定emp-MN、empA-3101、zinc empA、VFMJ11-1094和OMP相应基因的序列,经在线软件SignaIP 3.0分析,确定emp-MN、empA-3101、zincempA、VFMJ11-1094和OMP均存在不同的分泌性信号肽序列angMN-35、ang3101-35、ang3101-25、vf-38和vf-23,通过在线软件PSORT分析表明,所有信号肽均定位在细胞的周质空间或细胞外膜上。

绍兴黄酒混浊蛋白的分离鉴定及其氨基酸组成、二级结构分析

采用双向电泳及基质辅助激光解析电离飞行时间串联质谱法分析了绍兴黄酒混浊蛋白的主要组成及来源,结果表明:绍兴黄酒混浊中的蛋白质主要包括来源于小麦类燕麦蛋白b1、类燕麦蛋白、二聚-α淀粉酶抑制剂、病程相关蛋白、病程相关蛋白-4、几丁质酶II,以及来源于水稻的类燕麦蛋白和β-淀粉酶。高效液相色谱与傅里叶变换红外线光谱分析法分析绍兴黄酒上清蛋白质和混浊蛋白质的氨基酸组成与二级结构发现,绍兴黄酒混浊蛋白中谷氨酸含量最高,占总氨基酸含量的20.48%,疏水性的氨基酸含量比酒体蛋白高24.2%。高α-螺旋含量、低β-折叠和无规则卷曲是黄酒混浊中蛋白质的主要结构特征。

高分化星形细胞瘤的蛋白质组学研究

目的研究高分化星形细胞瘤差异蛋白质表达,为星形细胞瘤的治疗及预后的判断提供依据。方法取经病理证实的29例正常脑组织及36例高分化的星形细胞瘤(KernohanⅡ级),经蛋白电泳、染色,采用PDQUEST和2-DE分析系统软件进行分析。以MALDI-TFO质谱或MALDI-TOF/TOF串联质谱技术结合数据库检索对蛋白质进行鉴定。结果通过双向电泳得到正常脑组织和高分化星形细胞瘤标本的双向凝胶电泳图谱;生物质谱技术鉴定了24个差异蛋白质点,与正常脑组织相比,高分化星形细胞瘤有9个蛋白质下调,15个蛋白质上调。结论以蛋白质组学技术鉴定了正常脑组织和高分化星形细胞瘤的差异蛋白质,其中部分蛋白质有助于深入研究星形细胞瘤的发生、发展机制并对进一步发现肿瘤标记物及治疗靶点有重要的参考价值。

家蚕蛾触角蛋白的双向电泳分析

为探讨家蚕Bombyxmori蛾触角发生发育、结构与功能的分子基础和调控机制,我们采用双向电泳结合基质辅助质量飞行时间质谱（MALDI-TOF/MS）技术初步探讨了家蚕蛾触角蛋白及其雌雄表达差异。采用ImageMast 6.0软件分析电泳图谱,在家蚕蛾触角中检测到约550个蛋白点,主要集中在分子量14~70 kD,等电点4~8之间。从雌雄蛾触角电泳图谱中分别检测到419和489个蛋白点,其中雌雄匹配蛋白点有326对,匹配率为71.81%。雌雄间表达差异点有34个,雌雄分别所特有的特异蛋白点分别为9和20个。对特异和差异点进行MALDI-TOF/MS鉴定获得其中5种蛋白——成虫原基生长因子（imaginal disk growth factor）、表皮蛋白RR-1基序15（cuticular protein RR-1 motif15）、硫醇过氧化还原酶（thiol peroxiredoxin）、空泡ATP酶B亚基（vacuolar ATPase B subunit）以及gasp前体（gaspprecursor）,它们在雄蛾触角中表达量都比雌蛾高。这为家蚕触角蛋白的进一步研究提供了基本信息。

基质辅助激光解吸电离-串联飞行时间质谱鉴定鲨鱼硒结合蛋白

利用基质辅助激光解吸电离-串联飞行时间质谱(MALDI-TOF/TOF)高置信度地鉴定了原核表达的白鳍鲨硒结合蛋白。实验表明,硒结合蛋白肽段之一被错误指认为胰酶自水解峰和混合谱是影响其未进行串联质谱分析或不能被数据库搜索匹配的主要原因,同时还发现,虽然赖氨酸结尾肽段在MALDI源中信号强度普遍很低,但对它们进行串联质谱分析也可获得较好的谱图质量,部分数据可用于从头测序。考虑以上因素后,硒结合蛋白鉴定覆盖率由35%增至51%。

铝胁迫下不同桉树无性系叶差异蛋白表达分析

为了研究桉树不同无性系在铝处理下的叶片蛋白表达的差异,并从分子生物学角度预测与阐释桉树耐铝性机制,以巨尾桉(Eucalyptus grandis×E.urophylla)9号、巨尾桉(E.grandis×E.urophylla)12号、韦赤桉(E.wetarensis×E.camaldulensis)3号和尾叶桉(E.urophylla)4号苗木为材料,并对其进行铝处理。结果表明:从4种无性系叶所得蛋白有明显的上调或下调表达。通过丰度计算,共得蛋白点(P<0.05)98个,巨尾桉9号为14个、巨尾桉12号为38个、尾叶桉4号为33个、韦赤桉3号为13个。经质谱分析,有11个蛋白成功鉴定,包括1个Ru Bis CO、3个Ru Bis CO LSU、1个放氧增强蛋白、1个叶绿素a/b结合蛋白、3个2-半胱氨酸过氧化物酶、1个质体谷氨酰胺合成酶、1个3-磷酸甘油醛脱氢酶,其主要功能与植物自身N和能量代谢以及抗氧化和光合作用等有关。4种不同的桉树无性系应对铝胁迫时有不同的应答机制,差异蛋白质呈现不同的表达量,并且从该角度分析耐铝性最强的是巨尾桉9号,而较弱的是尾叶桉4号。

SNPs的质谱分析及应用前景展望

由于其固有的质量高准确性、灵敏性和可重复性，基于MALDI-TOF MS的SNPs分析有望替代传统的实验手段，是常规电泳和色谱技术以外的另一种选择。

气体绝缘开关设备电缆终端绝缘硅油老化问题试验研究

气体绝缘开关设备（GIS）高压充油电缆终端绝缘硅油随运行时间的增加会逐渐老化,从而造成电缆终端的绝缘性能大大降低。为了进行硅油老化状态的判定,首先研究了热老化对硅油电气性能的影响,然后采用针板电极对硅油进行了放电老化试验,通过不同放电形式下击穿电压、介质损耗角正切（简称介损值）、体积电阻率等电气参数的变化规律以及MALDI-TOF质谱分析的结果来评价硅油的老化状态。综合以上分析,证明了单纯的热老化对硅油电气性能的影响较小且非常缓慢,并且初步形成了硅油老化状态的评价标准：若击穿电压U≥40 kV,介损值tanδ≤0.6%,体积电阻率ρ≥5×1012Ω·m,质谱分析表明没有明显低分子量聚硅氧烷生成,则硅油处于轻微老化状态;若击穿电压U为30~35 kV,介损值tanδ为1%~1.5%,体积电阻率ρ为1011~1012Ω·m,质谱分析表明分子量在1 400~2 400范围内时出现稳定间隔吸收峰,则硅油处于中度老化状态;若击穿电压U≤25 kV,介损值tanδ≥5%,体积电阻率ρ≤1010Ω·m,质谱分析表明分子量在550~750甚至更低范围内时出现稳定间隔吸收峰,则硅油处于严重老化状态。

分子筛分步催化降解碱木素制备芳香化学品

本研究采用分步催化的方式对碱木素进行降解,即先利用氢型β分子筛(H-BEA)催化液化碱木素,再采用氢型超稳Y分子筛(H-USY)对液化后的产物进行催化降解。结果表明,相较于非催化条件下的直接降解,分步催化降解将产物中芳香化学品含量从30.6%提升到51.2%。质谱分析(MALDI-TOF)结果表明,降解途径是碱木素中的芳香五聚体被液化为三聚体再进一步降解为芳香二聚体和单体。1H NMR结果表明,第1步催化液化过程破坏了大部分C—O键,而第2步催化降解过程主要以破坏C—C键为主。气相色谱检测到的芳香单体占芳香化学品的16.2%。其中,H-BEA分子筛在液化阶段催化部分酚类烷基化,使得酚羟基的邻位或对位活性降低,防止酚类在第2步催化过程中发生缩合。

AB SCIEX发布Triple TOF 5600

AB SCIEX TripleTOFTM5600系统的问世，它是一项开创性的质谱分析技术，是史上最快速且最灵敏的高分辨定性、定量分析质谱仪。此系统代表着质谱领域一个重要的革命，即它是世界上第一台将三重四级杆定量分析能力以及高分辨定性能力整合在一个平台上的精准质谱系统。

坚强芽胞杆菌主要分泌蛋白的鉴定及其分泌性序列

【目的】坚强芽胞杆菌是一种在自然界普遍存在的益生菌,在对虾养殖中应用较为广泛.为了研究其分泌性蛋白从而为分泌性载体的构建提供理论依据,本文对坚强芽胞杆菌的主要分泌蛋白进行质谱鉴定及分泌性序列的分析。【方法】从本实验室分离保存的1株来自对虾肠道的坚强芽胞杆菌(Bacillus firmus)培养液中获取了分泌性蛋白,进行SDS-PAGE,并对表达量较高的3条蛋白区带进行MALDI-TOF/TOF质谱鉴定及克隆测序,进行生物信息学分析。【结果】鉴定出的蛋白分别是坚强芽胞杆菌几丁质酶(chitinase)、坚强芽胞杆菌肠毒素A(enterotoxin A)和坚强芽胞杆菌BCG9842蛋白(hypothetical protein BCG9842)。经在线软件SignaIP 3.0分析,确定chitinase、enterotoxin和BCG9842均存在不同的分泌性信号肽序列bf-43、bf-37和bf-16,通过在线软件PSORT分析表明,bf-43定位于细胞的外膜上,bf-37和bf-16定位于细胞的胞外。【结论】本研究鉴定出了坚强芽胞杆菌的3个主要分泌性蛋白,分析筛选出了3条分泌性序列,为分泌性载体的构建提供理论依据。