肝癌细胞线粒体蛋白的MALDI-TOF质谱鉴定方法研究

目的:探索胶上蛋白原位酶切、肽质量指纹图(PMF)分析以及数据库检索方法的优化条件,建立适合于亚细胞比较蛋白质组学研究的质谱鉴定策略。方法:从考马斯亮蓝染色的2-DE胶上取下牛血清白蛋白(BSA)标准蛋白进行胶内原位酶切,与基质(CHCA)混匀后进行MALDI-TOF MS分析;对来源于人肝细胞癌细胞株QGY-7703线粒体的差异表达的候选蛋白点L9,按照通过BSA标准蛋白优化的条件进行MALDI-TOF质谱鉴定;其肽质量指纹图(PMF)经MS-Fit检索。结果:经数据库检索,BSA的肽质量指纹图(PMF)匹配肽质量数为10/11,序列覆盖率为19%,说明实验条件完全可信。候选蛋白点L9的PMF数据经数据库检索后,排名前两位的蛋白均为OXCT(3-oxoacid CoA transferase 1 precursor),其匹配肽段为9/13,序列覆盖率为24%;且OXCT的理论分子量(56kda),理论等电点(7.1),与胶上L9蛋白的位置相符。故候选蛋白点L9确认为OXCT(3-oxoacid CoA transferase 1 precursor)。结论:本文所确定的鉴定策略适用于线粒体比较蛋白质组学的研究。

基于液相色谱-串联质谱肽组学技术鉴定地龙制剂中的多肽及含量检测

建立了液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)肽组学鉴定多肽地龙蛋白压片糖果中多肽及高效液相色谱(HPLC)检测多肽含量新方法。本文联用LC-MS/MS与De novo分离初步鉴定多肽地龙蛋白压片糖果中多肽成分,采用化学合成法制备多肽,进一步利用HPLC验证并测定其多肽含量。总共鉴定出482个多肽序列,对相对强度和评分较高的10条多肽进行化学合成,成功在多肽地龙蛋白压片糖果实际样品中验证到氨基酸序列为LAPVNKPGRF(LF-10)的多肽,实验测得LF-10的含量为0.00182%。LC-MS/MS与De novo的联用为地龙多肽类成分的鉴定分析提供有力的支持,建立的LF-10多肽HPLC定量分析方法简便易行、准确可靠,有助于多肽地龙蛋白压片糖果的质量控制及地龙多肽的进一步研究。

基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱在食源性致病菌鉴定中的应用

基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(matrix assisted laser desorption ionization time of flight mass spectrometry,MALDI-TOF MS)作为近年来发展的新型食源性致病菌鉴定技术,具有灵敏、准确、检测速度快等优点,该技术为食品病原微生物靶标性监测和食品安全事件应急检验提供了一种高效的鉴别技术参考,在保障民众生命健康和经济社会发展上发挥了重要作用。本文检索了近年来国内外MALDI-TOF MS技术在食源性致病菌检测中的相关研究案例,简要综述了MALDI-TOF MS检测原理、工作流程,影响鉴定结果的主要因素,介绍了MALDI-TOF MS技术应用于食源性致病菌检测中的实际案例,在此基础上分别从参考菌株数据库建设、标准化程序规范等方面对MALDI-TOF MS技术在食源性致病菌检测领域的未来研究方向进行展望,以期为后续食品安全检测及快速监管食源性致病菌污染提供技术支持。

MALDI-TOF MS法快速鉴定散装即食食品中3种食源性致病菌

本研究旨在利用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱法(Matrix-Assisted Laser Desorption Ionization-Time of Flight Mass Spectrometry,MALDI-TOF MS)快速检测并鉴定散装即食食品中的沙门氏菌、金黄色葡萄球菌和蜡样芽孢杆菌3种食源性致病菌。通过对点样方式、前处理方式、不同培养基及培养时间等各项实验条件的优化筛选确定最佳方法,并考察其检测限和稳定性,同时用所建立的方法与多重PCR法、VITEK 2等生化鉴定法进行结果比对,比较三者鉴定结果的一致性,最后进行批量食品样本检测来探寻MALDI-TOF MS鉴定法在散装即食食品中的适用性。结果表明,三种目标菌同一批次及不同传代次数的鉴定得分均大于95%,变异系数均小于2%,所建立的方法重复性和稳定性良好,且检测限为10^(5)CFU/mL,MALDI-TOF MS菌株鉴定结果与多重PCR法、生化鉴定法结果高度一致,且比二者检测用时更短,更加特异高效;在点样方式上,相较于夹心法与混合干滴法,三种覆盖法点样平均鉴定得分更高,均为99.9%,其中1μL+1μL覆盖法点样可获得的平均峰数目更多,特征峰更复杂且强度更高;而在前处理方式上,甲酸乙腈法与其他两种菌体处理方法相比可获得更多的出峰量和更高的峰强度,平均鉴定得分均在98%以上,且与数据库中图谱匹配度更高。综上所述,MALDI-TOF MS法在致病菌鉴定方面不仅灵敏特异、准确快速,且操作简便、结果直观,作为国标法的有力补充,为食源性致病菌的分析鉴定与分型溯源提供了新思路。

基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱仪微生物鉴定准确度快速评价参考品的研制

基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight massspectrometry,MALDI-TOF MS)技术,简称飞行质谱技术,可在短时间内完成对微生物种属水平的鉴定[1]。基本原理是使用已知菌种的蛋白质图谱建立数据库,利用不同菌种核糖体蛋白(2~20 kD)大小的差异,将未知样本的检测图谱与数据库中的微生物参考图谱进行比对,鉴定结果[2-3]。与传统的微生物表型和生理生化检测方法相比,质谱鉴定的分子量范围大、扫描速度快、操作通量高,且对样品纯度要求不高[4]。除了可鉴定常见细菌和真菌,对临床厌氧菌、苛养菌、丝状真菌以及分枝杆菌等疑难微生物和相对复杂样品的鉴定能力也更强,同时对耐药微生物的鉴定准确性相对较好[5]。

微生物培养体系预处理在MALDI-TOF MS快速鉴定血培养阳性病原菌的应用价值

目的分析微生物培养仪(HB&L)微生物培养体系预处理在基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱技术(MALDI-TOF MS)快速鉴定血培养阳性样本病原菌的临床应用价值。方法收集2022年1月至2022年12月安阳市人民医院实验室常规方法鉴定的120份血培养报警后单一细菌感染的阳性样本,所有样本均接受HB&L微生物培养体系预处理、分离胶促凝管法预处理,将传统方法的鉴定结果作为“金标准”对照,运用MALDI-TOF MS鉴定。对比HB&L微生物培养体系预处理、分离胶促凝管法预处理下MALDI-TOF MS快速鉴定的鉴定率;另外对比HB&L微生物培养体系预处理、分离胶促凝管法在不同分值下MALDI-TOF MS样本细菌菌属快速鉴定结果。结果HB&L微生物培养体系预处理下MALDI-TOF MS快速鉴定例数为116例,鉴定率为96.67%;分离胶促凝管法预处理下MALDI-TOF MS快速鉴定例数为92例,鉴定率为76.67%,两种预处理方法鉴定率对比差异有统计学意义(P<0.05);在3.000~2.300分值下HB&L微生物培养体系MALDI-TOF MS样本细菌菌属快速鉴定率均高于分离胶促凝管法,差异有统计学意义(P<0.05);在2.299~2.000、1.999~1.700、<1.700分值下两种预处理方法菌属鉴定率对比差异无统计学意义(P>0.05)。结论HB&L微生物培养体系是MALDI-TOF MS快速鉴定血培养阳性样本病原菌优质的预处理方法,可大幅提升鉴定率,值得应用。

串联质谱技术在法医毒物鉴定中的优势

串联质谱技术可同时分析原体及代谢物,不仅适用于分析强极性、热不稳定性、非挥发性及大分子化合物,还可直接分析结合型代谢物,具有样品前处理简便、快速、不需要衍生化等优点。

基于质谱技术的药物成分鉴定与检测方法的标准化发展与改进

文章深入探讨了质谱技术在药物分析领域的应用及其发展趋势。阐述了质谱技术的基本原理与分类,并分析了其在药物分析中的优势与局限性。详细论述了质谱技术在药物成分鉴定中的应用,包括药物成分的质谱特征、药物代谢产物的鉴定及药物杂质与残留物的检测。讨论了检测方法标准化的发展,包括标准化流程与方法体系的建立及标准化过程中面临的挑战与应对策略。探讨了检测方法的改进与创新,涉及新型质谱技术的应用、多技术联用策略及自动化与智能化的发展趋势。通过文章的研究,旨在为药物分析领域提供更为准确、高效和可靠的质谱检测手段。

基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱在流感嗜血杆菌鉴定中的应用

目的分析基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOP MS)在流感嗜血杆菌鉴定中的应用。方法收集2022年1—12月南京艾迪康医学检验所有限公司实验室接收的1300份呼吸道感染患者的痰液或咽拭子样本培养和分离的嗜血杆菌,经16SrDNA序列测定检出50株为流感嗜血杆菌;分别使用MALDI-TOP MS检测系统、Analytic Products INC(API)生化细菌鉴定系统以及纸片法卫星试验对流感嗜血杆菌进行鉴定,比较并分析3种方法对流感嗜血杆菌的检出率、检测时间、检测成本及读取方式。结果MALDI-TOP MS检测系统对流感嗜血杆菌的检出率为98.0%,API生化细菌鉴定系统的检出率为90.0%,纸片法卫星试验的检出率为74.0%。MALDI-TOP MS对流感嗜血杆菌的检出率明显高于纸片法卫星试验,差异有统计学意义(P<0.05),而与API生化细菌鉴定系统比较检出率差异无统计学意义(P>0.05)。MALDI-TOP MS检测所用时间为5~10 min,API生化细菌鉴定检测所用时间为4~24 h,纸片法卫星试验检测所用时间为24~48 h。采用MALDI-TOP MS鉴定流感嗜血杆菌的成本更低,传统API生化细菌鉴定方法价格昂贵,而纸片法卫星试验操作比较繁琐。结论MALDI-TOP MS检测系统对流感嗜血杆菌鉴定的准确率较高,鉴定周期较短,成本较低,且使用方便,在临床上对流感嗜血杆菌的检出具有重要价值。

基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)在食品药品中微生物检测的应用进展

MALDI-TOFMS是一种微生物鉴定和分型的技术,它相较于传统方法展现出了显著的优势。通过分析国内外的研究现状,指出MALDI-TOFMS在临床病原微生物、食源性微生物及环境微生物的鉴定中具有较大优势。该技术不仅加快了微生物鉴定的进程,还提高了鉴定的效率和准确性,有助于更迅速地确定微生物感染的病因。此外,还探讨了MALDI-TOFMS在新领域的应用进展和所面临的挑战,展望了其在微生物学领域的广泛应用前景,为我国相关技术的发展提供了重要参考。

基于质谱技术的食品中有害物质检测与鉴定

1.引言食品安全一直是人们关注的焦点,因为食品中可能存在各种潜在的有害物质,如农药残留、毒素、重金属元素等,它们会对人体健康构成威胁。因此,对食品中的有害物质进行准确检测与鉴定显得尤为重要。近年来,质谱技术作为一种高度敏感、精确的分析方法,在食品安全领域取得了巨大的突破。

MALDI-TOF MS在血流感染快速鉴定病原菌中的应用

目的探讨基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(matrix-assisted laser desorption/ionization time of flight mass spectrometry,MALDI-TOF MS)结合短时培养在快速鉴定血流感染病原菌中的应用。方法对南京医科大学附属淮安第一医院微生物室2020年11月至2021年12月血培养报告阳性的标本进行革兰染色分类,并采用4h和6h短时培养法及MALDI-TOF MS技术快速鉴定感染病原菌并实时报送病区单元。结果4h短时培养革兰阴性菌共351株,339株(96.6%)细菌鉴定到种属,与24h鉴定结果相同,11株无鉴定结果,1株鉴定错误;6h短时培养革兰阳性菌共216株,212株(98.1%)鉴定到种属,与24h鉴定结果相同,3株无鉴定结果,1株鉴定错误。跟踪321株革兰阴性菌的临床反馈,287例(89.4%)给予临床关注,89例(27.7%)进行药物调整,238例(74.1%)临床疗效良好;跟踪183株革兰阳性菌的临床反馈,其中150例(82.0%)给予临床关注,49例(26.8%)进行药物调整,131例(71.6%)临床疗效良好。结论MALDI-TOF MS技术结合短时培养方法可有效提高血流感染病原菌鉴定准确率,改善血流感染患者抗菌药物治疗时机。

基于MALDI-TOF-MS质谱技术对蜂蜜中芽孢杆菌的鉴定与分型

[目的]对分离自不同产地和品种的蜂蜜中的芽孢杆菌属进行鉴定分型,探索利用蜂蜜中芽孢杆菌特征指纹图谱对蜂蜜产地和品种进行溯源的可行性。[方法]从44种不同产地和品种蜂蜜中分离出44株芽孢杆菌,3株铜绿假单胞菌。采用基质辅助激光解析-电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)条件对分离的芽孢杆菌进行鉴定分型和聚类分析。[结果]44株芽孢杆菌中鉴定出蜡样芽孢杆菌(B.cereus)31株,短小芽孢杆菌(B.pumilus)5株,枯草芽孢杆菌(B.subtilis)3株,地衣芽孢杆菌(B.licheniformis)2株,炭疽芽孢杆菌(B.anthracis)1株,土壤短芽孢杆菌(Brevibacillus agri.)2株。通过多次重复试验,表明从同一份样品或同一品牌蜂蜜样品中能稳定分离到芽孢杆菌,获得的蛋白指纹图谱具有极好的稳定性。[结论]MALDI-TOF-MS可根据获得的芽孢杆菌蛋白指纹图谱将芽孢杆菌划分为不同类型,可作为一种新的根据蜂蜜中芽孢杆菌的特征指纹图谱进行溯源的方法。

基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱快速检测无菌体液分离病原菌的研究

目的探讨基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(matrix-assisted laser desorption ionization-time of flight mass spectrometry,MALDI-TOF MS)快速检测增菌报阳后无菌液体病原菌的临床应用价值。方法收集河北省人民医院肉汤增菌培养阳性的无菌体液标本412份。报阳后的标本进行涂片革兰染色镜检,同时接种固体培养基进行培养,35℃培养4~6 h长出菌膜,35℃培养18~24 h长出单个菌落,应用质谱仪VITEK MS分别对菌膜和菌落进行鉴定,以质谱鉴定菌落的结果作为参考标准,分析菌膜的鉴定符合率。结果VITEK MS(菌落)共鉴定出412株病原菌,包括革兰阳性球菌212株(51.45%)、革兰阴性杆菌172株(41.75%)和真菌28株(6.80%)。与VITEK MS(菌落)鉴定结果相比,VITEK MS(菌膜)总体鉴定符合率为91.50%(377/412),革兰阳性球菌鉴定符合率为89.15%(189/212),革兰阴性杆菌鉴定符合率为94.19%(162/172),差异均有统计学意义(χ^(2)=36.553、24.319、10.299,均P<0.05);真菌鉴定,VITEK MS(菌膜)鉴定符合率为92.86%(26/28),差异无统计学意义(χ^(2)=2.074,P=0.150)。结论应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱技术对报阳后的无菌体液标本进行4~6 h菌膜鉴定,可进一步缩短病原菌鉴定时间,快速准确提供鉴定结果,为临床侵袭性感染疾病的诊疗提供早期依据。

白肋烟中糖酯类化合物的分离与鉴定

烟草中糖酯类化合物是重要的致香前体物,对烟叶的品质具有重要影响。但目前还未见关于白肋烟烟叶中糖酯类化合物的分离分析研究。本实验利用高分辨液相色谱-串联质谱(LC-MSn)技术,从白肋烟叶提取物中共分离鉴定出4类蔗糖酯和2类葡萄糖酯,每类均包含多种同系物。其中,4种蔗糖酯为首次发现,8种葡萄糖酯的结构鉴定在栽培烟草中为首次报道。本研究丰富了烟草中糖酯类化合物的种类,对烟草中不同类型蔗糖酯和葡萄糖酯的分析鉴定和代谢研究具有参考意义。

基质辅助激光解析电离飞行时间质谱技术对非结核分枝杆菌的鉴定与分型

应用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱技术(MALDI-TOF MS),对非结核分枝杆菌菌株实施鉴定并对其分型。方法 通过收集2018-2023年从临床分离不同感染部分的菌株展开分析,提前需要确认培养物自身的抗酸阳性,然后开始培养可疑样本,采用 MALDI-TOF MS对罗氏培养基上的新鲜菌落进行鉴定。结果 在本次通过应PCR鉴定结果作为金标准,其中经鉴定能力进行显示,本次通过对鉴定结果进行比较中,其中对NTM鉴定符合成功率为90%,鉴定失败率为10%。通过对数据库进行不同分枝杆菌鉴定菌种率的变化比较,DB-164-Mycobacteria Library 5.0平均分值,经比较,和Bruker MBT-DB5989平均分值具有统计学差异(p<0.05)。结论 对NTM鉴定中采用DB-164-Mycobacteria Library 5.0能够进行快速鉴定,同时也是不可或缺的实验方法,同时也需要其他方法进行辅助鉴别。

基于高分辨质谱的中药学本科实验课程教学探索

中药制剂是由多种中药配伍组成的,是一个复杂的分子体系,其分析鉴定工作存在较大难度。高效液相色谱与高分辨质谱联用系统(HPLC-HRMS)在中药复方的定性研究中发挥着重要作用。本论文通过探索将高分辨液相色谱质谱联用系统应用到中药学本科生实验教学实践中,建立了对中药制剂参松养心胶囊中5种特征性成分进行鉴定的实验教学方法。使学生了解高分辨质谱在中药制剂分析和鉴定中的重要应用,开阔了本校中药学专业本科生的科研视野,提高了学生对仪器分析的理解,对培养高素质高水平的药学本科生起到了积极作用。

黄芪注射液中初生成分的鉴定及氨基酸类成分的含量测定

目的 鉴定黄芪注射液中的初生成分,并以氨基酸类成分含量为指标,评价不同来源黄芪注射液的质量差异。方法 采用液相二级质谱(LC-MS/MS)法,以0.1%甲酸乙腈-0.1%甲酸水为流动相,采用梯度洗脱检测黄芪注射液中初生成分。采用LC-MS/MS法,以10%甲醇水(含0.1%甲酸)和50%甲醇水(含0.1%甲酸)为流动相,采用梯度洗脱测定黄芪注射液中各氨基酸的含量,并采用主成分分析评价不同厂家黄芪注射液中氨基酸的含量差别。结果 不同厂家黄芪注射液中均检测到255个初生成分,主要为氨基酸类、有机酸类、糖类和含N类化合物。4个厂家黄芪注射液中氨基酸含量得分分别为-0.23,-1.77,-0.35,2.36。结论 不同厂家黄芪注射液中初生成分的种类一样,但含量不同;不同厂家黄芪注射液中氨基酸的含量差异较大。

基于MALDI-TOF-MS技术筛选及鉴定大曲中芽孢杆菌

该研究对基质辅助激光解吸电离-飞行时间-质谱(MALDI-TOF-MS)技术体系进行改进与优化,创新性地引入浓香型大曲中芽孢杆菌(Bacillus)的筛选及鉴定,并结合分子生物学技术对该技术鉴定结果进行验证。结果表明,采用传统微生物培养分离法从大曲中分离得到126株菌株,其中125株通过MALDI-TOF-MS技术筛选鉴定获得9.0以上可信度分值,其中目标菌株枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)及地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)的鉴定结果与分子生物学鉴定结果一致,说明该技术历经5~6 d可以准确地完成大曲样品中目标菌株的筛选鉴定,比传统微生物筛选鉴定方法至少节约1~2周时间。因此,基于MALDI-TOF-MS技术参与复杂样品中目标菌株的筛选与鉴定是一条高效的、可行的路径。

MALDI-TOF MS在NTM临床分离株快速鉴定中的应用研究

目的 建立临床非结核分枝杆菌(NTM)分离株的快速鉴定方法,为临床NTM病的诊断和治疗提供参考。方法 收集2018-2020年泉州某三甲医院的临床疑似NTM感染患者的痰液、肺泡灌洗液、胸部穿刺液和脑脊液等标本,借助基质辅助激光解析/电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)技术,通过改良前处理方法(甲酸提取法),摸索上机检测条件,建立临床NTM分离株的快速鉴定方法,并以16S rRNA测序为金标准,验证鉴定的准确性。结果 收集的50株临床NTM菌株,采用传统(常规)处理方法进行质谱鉴定,仅鉴定出4株,检出率为8.0%,而采用甲酸提取法共鉴定出24株,检出率为48.0%,两种方法检出率比较,差异有统计学意义(P<0.01),且改良处理后鉴定出的24株鉴定结果与PCR测序结果完全一致,符合率为100.0%。结论 初步建立的NTM甲酸提取前处理的质谱鉴定方法检出率明显提高,具有一定的临床应用价值。